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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
-20
- 保质期:
2年
- 英文名:
Plasmid#1490
- 库存:
100
- 供应商:
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格:
干粉/液体
名称:pPD95_67①线虫表达质粒
别称: Plasmid#1490
| 复制子: | pUC |
|---|---|
| 原核抗性: | Amp |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
质粒属性
| 载体宿主: | 昆虫细胞 |
|---|---|
| 载体用途: | |
| 基因种属: | |
| 基因类型: | |
| 原核抗性: | Amp |
| 筛选标记: |
质粒简介
pPD95_67①质粒由上海烜雅生物科技有限公司提供
质粒图谱
质粒序列:详询
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后,请先根据产品管壁标签来判断产品形式,并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉(常温运输,存于-20度,90天保质期,请务必转化挑单克隆培养,不要直接使用和测序)
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒;
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min,加入2μl质粒,再冰浴30min后,42℃热激60s,不要搅动,再冰浴2min;(从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作)
③加入900μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡37℃培养45min;
④6000rpm离心5min,仅留100μl上清液重悬细菌沉淀,并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;(可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布,可以比传统涂布方法获得更多转化子)
⑤将平板正向培养1h,再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h;
(菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态,要先转克隆感受态,重提质粒后再导入表达感受态)
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中,加入对应抗生素,220rpm震荡培养14h,根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种(冰袋运输,存于-80℃,保质期90天,请务必划线挑单克隆培养)
四区划线后挑单菌落培养,酵母菌需要先液体复苏再四区划线,再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种(冰袋运输,存于4℃,保质期7天)
穿刺接种,液体培养后四区划线,再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板(冰袋运输,存于4℃,保质期7天)
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒(冰袋运输,存于-20℃,保质期90天)
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒(常温运输,存于-20度,90天保质期,请务必转化挑单克隆培养,不要直接使用和测序)
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中,加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min,吸取5ul质粒转化,离心全涂。
二、转化图片
| P3958/pCMV-SPORT6-EEF1G(1同义突变)人源基因质粒 |
| P3959/pCMV-SPORT6-MRPL10(点突变)人源基因质粒 |
| P3960/pCMV-SPORT6-MATR3人源基因质粒 |
| P3961/pCMV-SPORT6-PIGT(2同义突变)人源基因质粒 |
| P3962/pCMV-SPORT6-CENPQ人源基因质粒 |
| P3963/pCMV-SPORT6-PAIP1(1点突变)人源基因质粒 |
| P3964/pCMV-SPORT6-TRIM63(1-975bpA709G)人源基因质粒 |
| P3965/pCMV-SPORT6-GALT(1点突变)人源基因质粒 |
| P3966/pCMV-SPORT6-SPSB1人源基因质粒 |
| P3967/pCMV-SPORT6-ZNF408人源基因质粒 |
| P3968/pCMV-SPORT6-ARHGDIA人源基因质粒 |
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文献和实验检测。 5)Genomic DNA 与 Genomewalker Adaptor 连接 (1)于0.5ml 离心管中加入 (2)16℃过夜 (3)70℃保育5min (4)加入TE 72 μl (TE 10/1 pH7.5) (5)轻弹5-10s6)PCR (1)1st PCR ① 配制PCR反应液 ② 反应条件: 94℃ 25s,72℃ 3min ×7;94℃ 25s,67℃ 3min ×32;67℃7min。 (2)2nd PCR 1)取1 μl 1st PCR 产物49 μl ddH
江苏师大肺结核暴发:22 名学生休学,43 名隔离,竟已延续 1 年!
正式声明,敦促各国禁止使用血清学检测方法(抗原、抗体、蛋白芯片等)用于肺结核和肺外结核的诊断,建议采用 WHO 推荐的准确的微生物或分子检测方法。3. 结核菌素试验(PPD 实验)结核菌素是结核杆菌的菌体成分,包括纯蛋白衍生物(PPD)和旧结核菌素。PPD 试验是指将标准剂量5 结核菌素单位(0.1毫升)进行皮内注射,并在 48-72 小时后根据注射部位的皮肤状况诊断结核杆菌感染所致 Ⅳ 型超敏反应的皮内试验。图片来源:维基百科结素试验阴性的临床意义:①提示未感染结核菌;②结核菌感染后需 4-
7.5) (5)轻弹5-10s 6)PCR (1)1st PCR ① 配制PCR反应液 ② 反应条件: 94℃ 25s,72℃ 3min ×7;94℃ 25s,67℃ 3min ×32;67℃7min。 (2)2nd PCR 1)取1 μl 1st PCR 产物49 μl ddH2O 中,稀释50 倍 ① 配制PCR反应液 ② 反应条件: 94℃ 25s,72℃ 3min ×5;94℃ 25s,67℃ 3min ×20;67℃7min。 (3)取5μl 第二轮PCR










