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- Xybio
- 上海
- P1219
- 2025年07月12日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
pAC5.1b-EGFP-V5-6×His
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
名称：pAC5.1b-EGFP-V5-6×His昆虫胞内质粒
别称: pAC5.1b-EGFP-V5-6×His
| 启动子: | Ac5 |
|---|---|
| 复制子: | pUC |
| 原核抗性: | Amp |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
质粒属性
| 载体宿主： | 昆虫细胞 |
|---|---|
| 载体用途： | 蛋白表达 |
| 基因种属： | 空载体 |
| 基因类型： | ORF |
| 原核抗性： | Amp |
| 筛选标记： | |
| 荧光蛋白： | 绿色 |
质粒简介
pAC5.1b-EGFP-V5-6×His质粒由上海烜雅生物科技有限公司提供
质粒图谱
质粒序列：详询
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P4319/pCMV-SPORT6-NTF4人源基因质粒 |
| P4320/pCMV-SPORT6-MZT2A人源基因质粒 |
| P4321/pCMV-SPORT6-GOLT1B人源基因质粒 |
| P4322/pCMV-SPORT6-WRB人源基因质粒 |
| P4323/pCMV-SPORT6-ACYP2人源基因质粒 |
| P4324/pCMV-SPORT6-UPK1B(1点突变）人源基因质粒 |
| P4325/pCMV-SPORT6-PDCD6人源基因质粒 |
| P4326/pCMV-SPORT6-CCDC126人源基因质粒 |
| P4327/pCMV-SPORT6-MAL2人源基因质粒 |
| P4328/pCMV-SPORT6-NMU（1同义突变）人源基因质粒 |
| P4329/pCMV-SPORT6-SLC25A26人源基因质粒 |
| P4330/pCMV-SPORT6-TPRKB人源基因质粒 |
| P4331/pCMV-SPORT6-COX7B人源基因质粒 |
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文献和实验可进入细胞内对 DNA 进行染色，与 Annexin V 搭配使用，可区分处于不同凋亡时期的细胞。 Q：Annexin V 凋亡检测结果如何看？ A： Annexin V-PI- —真正的活细胞，Annexin V 和 PI 都无法染上； Annexin V+PI- —细胞只有PS外翻，细胞膜完整，PI 无法染上，此时的细胞为早期凋亡细胞，如果撤走凋亡诱导条件，凋亡可能逆转； Annexin V+PI+ —PS外翻，细胞膜已经受损，PI 染料可以进入细胞内与 DNA 结合，此时细胞为晚期
，例如细菌的质粒、噬菌体、病毒等，常用的载体一般为质粒；根据需要可直接从公司购买合适的载体，也可以自己构建。（3）连接：目的 DNA 片段和适当载体的连接, 一般采用核酸内切酶分别消化 DNA 片段和载体，使它们的末端能够连接到一起构成重组 DNA 分子。由于所用内切酶的切割特点不同，产生三种连接方式：粘端连接、平端连接和不相配的连接。（4）转化：将连接的重组 DNA 产物导入合适的宿主细胞，使其在宿主细胞内复制扩增或表达，赋予宿主细胞新的生物特征。（5）克隆化：重组 DNA 分子转化大肠杆菌后，在平板
-dUTP 0.5μl Nick Translation Enzyme 10μl DNA (1μg) X μl H2O 18-X μl in total 50μl 以上为标记1μg DNA的缺口平移体系，若标记更多量的DNA，则试剂量和反应体系相应等倍扩大。各成分混匀后短时离心。对于≤10kb的质粒，于15 ℃ 反应3.5小时；对于BAC/PAC，于15 ℃ 反应9小时。 1.3 凝胶电泳判断探针大小
