pGreenII-62-SK荧光素酶质粒

基本信息
名称：pGreenII-62-SK荧光素酶质粒
别称: pGreenII-62-SK

启动子:	35s
复制子:	pSa
质粒分类:	植物系列，蛋白过表达载体
质粒大小:	3347bp
原核抗性:	Kan
克隆菌株:	DH5a
培养条件:	37度
表达宿主:	植物细胞
5'测序引物:	35S:GACGCACAATCCCACTATCC
3'测序引物:	根据序列设计引物

质粒属性

载体宿主：	植物
载体用途：	蛋白表达
基因种属：	空载体
基因类型：	ORF
原核抗性：	Kan
筛选标记：
荧光蛋白：

质粒简介


质粒图谱


质粒序列
LOCUS       Exported                3347 bp ds-DNA     circular SYN 14-SEP-2016
DEFINITION  synthetic circular DNA
ACCESSION   .
VERSION     .
KEYWORDS    Untitled 10
SOURCE      synthetic DNA construct
  ORGANISM  synthetic DNA construct
REFERENCE   1  (bases 1 to 3347)
  AUTHORS   .
  TITLE     Direct Submission
  JOURNAL   Exported Wednesday, September 14, 2016 from SnapGene Viewer 3.2.1
            http://www.miaolingbio.com
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..3347
                     /organism="synthetic DNA construct"
                     /mol_type="other DNA"
     misc_feature    542..564
                     /note="LB T-DNA repeat"
                     /note="left border repeat from nopaline C58 T-DNA 
                     (truncated)"
     promoter        638..982
                     /note="CaMV 35S promoter"
                     /note="strong constitutive promoter from cauliflower mosaic
                     virus"
     misc_feature    992..1099
                     /note="MCS"
                     /note="pBluescript multiple cloning site"
     primer_bind     1016..1032
                     /note="SK primer"
                     /note="common sequencing primer, one of multiple similar 
                     variants"
     primer_bind     complement(1066..1082)
                     /note="KS primer"
                     /note="common sequencing primer, one of multiple similar 
                     variants"
     polyA_signal    1153..1329
                     /note="CaMV poly(A) signal"
                     /note="cauliflower mosaic virus polyadenylation signal"
     misc_feature    1339..1363
                     /note="RB T-DNA repeat"
                     /note="right border repeat from nopaline C58 T-DNA"
     rep_origin      complement(1454..2042)
                     /direction=LEFT
                     /note="ori"
                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 
                     replication"
     CDS             complement(2213..3028)
                     /codon_start=1
                     /gene="aph(3')-Ia"
                     /product="aminoglycoside phosphotransferase"
                     /note="KanR"
                     /note="confers resistance to kanamycin in bacteria or G418 
                     (Geneticin(R)) in eukaryotes"
                     /translation="MSHIQRETSCSRPRLNSNMDADLYGYKWARDNVGQSGATIYRLYG
                     KPDAPELFLKHGKGSVANVVTDEMVRLNWLTEFMPLPTIKHFIRTPDDAWLLTTAIPGK
                     TAFQVLEEYPDSGENIVDALAVFLRRLHSIPVCNCPFNSDRVFRLAQAQSRMNNGLVDA
                     SDFDDERNGWPVEQVWKEMHKLLPFSPDSVVTHGDFSLDNLIFDEGKLIGCIDVGRVGI
                     ADRYQDLAILWNCLGEFSPSLQKRLFQKYGIDNPDMNKLQFHLMLDEFF"
     rep_origin      3319..407
                     /note="pSa ori"
                     /note="origin of replication from bacterial plasmid pSa"
ORIGIN
        1 tttttatccc cggaagcctg tggatagagg gtagttatcc acgtgaaacc gctaatgccc
       61 cgcaaagcct tgattcacgg ggctttccgg cccgctccaa aaactatcca cgtgaaatcg
      121 ctaatcaggg tacgtgaaat cgctaatcgg agtacgtgaa atcgctaata aggtcacgtg
      181 aaatcgctaa tcaaaaaggc acgtgagaac gctaatagcc ctttcagatc aacagcttgc
      241 aaacacccct cgctccggca agtagttaca gcaagtagta tgttcaatta gcttttcaat
      301 tatgaatata tatatcaatt attggtcgcc cttggcttgt ggacaatgcg ctacgcgcac
      361 cggctccgcc cgtggacaac cgcaagcggt tgcccaccgt cgagcgccag cgcctttgcc
      421 cacaacccgg cggccggccg caacagatcg ttttataaat tttttttttt gaaaaagaaa
      481 aagcccgaaa ggcggcaacc tctcgggctt ctggatttcc gatccccgga attagagatc
      541 ttggcaggat atattgtggt gtaacgttat cagcttggta cgtacccccc tactccaaaa
      601 atgtcaaaga tacagtctca gaagaccaaa gggctattga gacttttcaa caaagggtaa
      661 tttcgggaaa cctcctcgga ttccattgcc cagctatctg tcacttcatc gaaaggacag
      721 tagaaaagga aggtggctcc tacaaatgcc atcattgcga taaaggaaag gctatcattc
      781 aagatgcctc tgccgacagt ggtcccaaag atggaccccc acccacgagg agcatcgtgg
      841 aaaaagaaga cgttccaacc acgtcttcaa agcaagtgga ttgatgtgac atctccactg
      901 acgtaaggga tgacgcacaa tcccactatc cttcgcaaga cccttcctct atataaggaa
      961 gtcatttcat ttggagagga cagcccaagc tgagctccac cgcggtggcg gccgctctag
     1021 aactagtgga tcccccgggc tgcaggaatt cgatatcaag cttatcgata ccgtcgacct
     1081 cgaggggggg cccggtacca attcggtacg ctgaaatcac cagtctctct ctacaaatct
     1141 atctctctct attttctcca taaataatgt gtgagtagtt tcccgataag ggaaattagg
     1201 gttcttatag ggtttcgctc atgtgttgag catataagaa acccttagta tgtatttgta
     1261 tttgtaaaat acttctatca ataaaatttc taattcctaa aaccaaaatc cagtactaaa
     1321 atccagatcc actagccttg acaggatata ttggcgggta aactaagtcg ctgtatgtgt
     1381 ttgtttgaga tctcatgtga gcaaaaggcc agcaaaaggc caggaaccgt aaaaaggccg
     1441 cgttgctggc gtttttccat aggctccgcc cccctgacga gcatcacaaa aatcgacgct
     1501 caagtcagag gtggcgaaac ccgacaggac tataaagata ccaggcgttt ccccctggaa
     1561 gctccctcgt gcgctctcct gttccgaccc tgccgcttac cggatacctg tccgcctttc
     1621 tcccttcggg aagcgtggcg ctttctcata gctcacgctg taggtatctc agttcggtgt
     1681 aggtcgttcg ctccaagctg ggctgtgtgc acgaaccccc cgttcagccc gaccgctgcg
     1741 ccttatccgg taactatcgt cttgagtcca acccggtaag acacgactta tcgccactgg
     1801 cagcagccac tggtaacagg attagcagag cgaggtatgt aggcggtgct acagagttct
     1861 tgaagtggtg gcctaactac ggctacacta gaagaacagt atttggtatc tgcgctctgc
     1921 tgaagccagt taccttcgga agaagagttg gtagctcttg atccggcaaa caaaccaccg
     1981 ctggtagcgg tggttttttt gtttgcaagc agcagattac gcgcagaaaa aaaggatctc
     2041 aagaagatcc tttgatcttt tctacggggt ctgacgctca gtggaacgaa aactcacgtt
     2101 aagggatttt ggtcatgaga ttatcaaaaa ggatcttcac ctagatcctt ttaaattaaa
     2161 aatgaagttt taaatcaatc taaagtatat atgtgtaaca ttggtctagt gattagaaaa
     2221 actcatcgag catcaaatga aactgcaatt tattcatatc aggattatca ataccatatt
     2281 tttgaaaaag ccgtttctgt aatgaaggag aaaactcacc gaggcagttc cataggatgg
     2341 caagatcctg gtatcggtct gcgattccga ctcgtccaac atcaatacaa cctattaatt
     2401 tcccctcgtc aaaaataagg ttatcaagtg agaaatcacc atgagtgacg actgaatccg
     2461 gtgagaatgg caaaagttta tgcatttctt tccagacttg ttcaacaggc cagccattac
     2521 gctcgtcatc aaaatcactc gcatcaacca aaccgttatt cattcgtgat tgcgcctgag
     2581 cgagacgaaa tacgcgatcg ctgttaaaag gacaattaca aacaggaatc gaatgcaacc
     2641 ggcgcaggaa cactgccagc gcatcaacaa tattttcacc tgaatcagga tattcttcta
     2701 atacctggaa tgctgttttc cctgggatcg cagtggtgag taaccatgca tcatcaggag
     2761 tacggataaa atgcttgatg gtcggaagag gcataaattc cgtcagccag tttagtctga
     2821 ccatctcatc tgtaacaaca ttggcaacgc tacctttgcc atgtttcaga aacaactctg
     2881 gcgcatcggg cttcccatac aatcggtaga ttgtcgcacc tgattgcccg acattatcgc
     2941 gagcccattt atacccatat aaatcagcat ccatgttgga atttaatcgc ggccttgagc
     3001 aagacgtttc ccgttgaata tggctcataa caccccttgt attactgttt atgtaagcag
     3061 acagttttat tgttcatgat gatatatttt tatcttgtgc aatgtaacat cagagatttt
     3121 gagacacaac gtggctttgt tgaataaatc gaacttttgc tgagttgaag gatcagatca
     3181 cgcatcttcc cgacaacgca gaccgttccg tggcaaagca aaagttcaaa atcaccaact
     3241 ggtccaccta caacaaagct ctcatcaacc gtggctccct cactttctgg ctggatgatg
     3301 gggcgattca ggcgatcccc atccaacagc ccgccgtcga gcgggct
//

质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
         收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
         1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              ①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
              ②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
              ③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
              ④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
              ⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
              ⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
        2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
              四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
        3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
        4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              直接挑取单菌落至液体培养基中。
        5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
              单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
        6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。

二、转化图片

P1100/pCold-ProS2大肠表达质粒

P0337/pCold-GST大肠表达质粒

P0694/pCold-MBP大肠表达质粒

P0812/pBAD/Myc-HisA大肠表达质粒

P0411/pBAD/Myc-HisB大肠表达质粒

P0079/pBAD/His A大肠表达质粒

P0080/pBAD/His B大肠表达质粒

P0081/pBAD/His C大肠表达质粒

P0865/pBAD/His/LacZ大肠表达质粒

P1214/pBAD18大肠表达质粒

P0082/pBAD24大肠表达质粒

P0390/pBAD30大肠表达质粒