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- P0128
- 2025年07月11日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
pAX01
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pAX01枯草胞内质粒
别称: pAX01
质粒属性
质粒简介 pAX01 质粒无致病性、安全,无明显的密码子偏嗜性，加入信号肽可直接将表达蛋白分泌到培养基中（目前，大约60％的市售酶由芽孢杆菌表达生产），表达产物可溶，表达产物与胞内蛋白分离，无需破碎细胞，有利于分离纯化,对枯草芽孢杆菌的转录、翻译、蛋白质折叠、分泌等机制背景清楚，有利于遗传操作和大规模发酵。基于大肠杆菌-枯草芽孢杆菌穿梭质粒的表达载体pAX01可以在枯草芽孢杆菌中高效表达重组外源蛋白。pAX01质粒全长7781bp，载体基于强σA-依赖性启动子的枯草杆菌groE操纵子，通过添加操纵子改造成为一种高效可控的启动子。pCDNA3.0-HA-p53质粒由上海烜雅生物科技有限公司提供
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported File 7781 bp ds-DNA circular SYN 18-4-2015
KEYWORDS pAX01
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 7781)
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported 2015-4-18 from MiaoLingPlasmid
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..7781
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
terminator 660..687
/note="rrnB T2 terminator"
/note="transcription terminator T2 from the E. coli rrnB
gene"
terminator 706..792
/gene="Escherichia coli rrnB"
/note="rrnB T1 terminator"
/note="transcription terminator T1 from the E. coli rrnB
gene"
promoter 2078..2182
/gene="bla"
/note="AmpR promoter"
promoter 4352..4456
/gene="bla"
/note="AmpR promoter"
CDS 4457..5317
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/note="AmpR"
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRVDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPAAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
rep_origin 5488..6076
/direction=RIGHT
/note="ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
misc_feature 6262..6402
/note="bom"
/note="basis of mobility region from pBR322"
CDS complement(6504..6695)
/codon_start=1
/gene="rop"
/product="Rop protein, which maintains plasmids at low copy
number"
/note="rop"
/translation="MTKQEKTALNMARFIRSQTLTLLEKLNELDADEQADICESLHDHA
DELYRSCLARFGDDGENL"
ORIGIN
1 ggggtgatgt caaagcttga aaaaacgcac gtaacaaaag caaaatttat gctccatggg
61 ggagactaca accccgatca gtggctggat cggcccgata ttttagctga cgatatcaaa
121 ctgatgaagc tttctcatac gaatacgttt tctgtcggca tttttgcatg gagcgcactt
181 gagccggagg agggcgtata tcaatttgaa tggctggatg atatttttga gcggattcac
241 agtataggcg gccgggtcat attagcaacg ccgagcggag cccgtccggc ctggctgtcg
301 caaacctatc cggaagtttt gcgcgtcaat gcctcccgcg tcaaacagct gcacggcgga
361 aggcacaacc actgcctcac atctaaagtc taccgagaaa aaacacggca catcaaccgc
421 ttattagcag aacgatacgg acatcacccg gcgctgttaa tgtggcacat ttcaaacgaa
481 tacgggggag attgccactg tgaatcgatg cggccgctct agagcaacgt tcttgccatt
541 gctgcataaa aaacgcccgg cggcaaccga gcgttctgaa ttaattaatc atcgggaaga
601 tcttcatcac cgaaacgcgg caggcagctc tagagttaac aagagtttgt agaaacgcaa
661 aaaggccatc cgtcaggatg gccttctgct tagctagagc ggcggatttg tcctactcag
721 gagagcgttc accgacaaac aacagataaa acgaaaggcc cagtctttcg actgagcctt
781 tcgttttatt tgatgcctca agctagagag tcattaccag atctcactgc agagatcccc
841 gggtctagag tctagggacc tctttagctc cttggaagct gtcagtagta tacctaataa
901 tttatctaca ttccctttag taacgtgtaa ctttccaaat ttacaaaagc gactcataga
961 attatttcct cccgttaaat aatagataac tattaaaaat agacaatact tgctcataag
1021 taacggtact taaattgttt actttggcgt gtttcattgc ttgatgaaac tgatttttag
1081 taaacagttg acgatattct cgattgaccc attttgaaac aaagtacgta tatagcttcc
1141 aatatttatc tggaacatct gtggtatggc gggtaagttt tattaagaca ctgtttactt
1201 ttggtttagg atgaaagcat tccgctggca gcttaagcaa ttgctgaatc gagacttgag
1261 tgtgcaagag caaccctagt gttcggtgaa tatccaaggt acgcttgtag aatccttctt
1321 caacaatcag atagatgtca gacgcatggc tttcaaaaac cactttttta ataatttgtg
1381 tgcttaaatg gtaaggaata ctcccaacaa ttttatacct ctgtttgtta gggaattgaa
1441 actgtagaat atcttggtga attaaagtga cacgagtatt cagttttaat ttttctgacg
1501 ataagttgaa tagatgactg tctaattcaa tagacgttac ctgtttactt attttagcca
1561 gtttcgtcgt taaatgccct ttacctgttc caatttcgta aacggtatcg gtttctttta
1621 aattcaattg ttttattatt tggttgagta ctttttcact cgttaaaaag ttttgagaat
1681 attttatatt tttgttcatg taatcactcc ttcttaatta caaattttta gcatctaatt
1741 taacttcaat tcctattata caaaatttta agatactgca ctatcaacac actcttaagt
1801 ttgcttctaa gtcttatttc cataacttct tttacgtttc cgccattctt tgctgtttcg
1861 atttttatga tatggtgcaa gtcagcacga acacgaaccg tcttatctcc cattatatct
1921 ttttttgcac tgattggtgt atcatttcgt ttttcttttg tgctagagga tcaattcttg
1981 aagacgaaag ggcctcgtga tacgcctatt tttataggtt aatgtcatga taataatggt
2041 ttcttagacg tcaggtggca cttttcgggg aaatgtgcgc ggaaccccta tttgtttatt
2101 tttctaaata cattcaaata tgtatccgct catgagacaa taaccctgat aaatgcttca
2161 ataatattga aaaaggaaga gtgcggccgc ccgcgggagc tcggatccca tttccccctt
2221 tgatttttag atatcactag tttggaccat ttgtcatttc cccctttgat ttaagtgaac
2281 aagtttatcc atcaactatc ttaattgagt tagtttgttt atccaataaa ctaactttat
2341 ctcatcatat acaaaataaa tgtttatttc aatgtttttt ttagaaaatt tagttataat
2401 attagatatg atacttttaa atatctaatt caagcttcaa aaaacaccaa cttagttcgg
2461 tggataaaca aaggagtggt tattattcaa attgcagatc aagctttagt aaaaaaaatg
2521 aatcaaaaat taatattaga tgaaattttg aagaactccc ctgtctccag ggcaactctc
2581 tctgagatta caggattaaa caagtctact gtctcctctc aagtaaatac actgcttgaa
2641 aaagatttta tttttgaaat tggggcaggg caatctagag gcggcagaag acctgtaatg
2701 cttgttttta ataagaatgc aggctactcg attggtattg atataggagt cgactatctt
2761 aacggaattc taaccgactt agaaggaaat attattctcg agaagacttc tgacttgtct
2821 agttcttccg ctagtgaagt aaaagagatt ttatttgcac ttattcatgg ttttgtaacc
2881 catatgcctg agtcccctta tggtctagtc ggaataggaa tttgtgttcc aggccttgta
2941 gatcgtcatc agcaaattat tttcatgcct aacttaaatt ggaatatcaa agatttgcag
3001 tttttaattg agagtgagtt taatgttccg gtttttgttg aaaatgaagc taatgcagga
3061 gcatacggtg aaaaagtatt tggtatgaca aaaaactatg aaaacatcgt ttacatcagt
3121 attaatatcg gaattggaac tggacttgtt attaacaacg aattgtataa aggtgttcag
3181 ggtttttctg gggaaatggg tcatatgacg atagatttta atggacccaa atgcagctgt
3241 ggaaatcgag gctgttggga attatatgct tctgaaaaag cgttactggc ttcgctctct
3301 aaagaagaaa agaatatttc tcgaaaagag attgtggaac gcgcaaataa aaatgatgta
3361 gaaatgttaa atgcacttca aaactttggc ttttatatcg gaattggatt aaccaatatc
3421 cttaatacat ttgatataga agctgttatc ttgagaaatc atataattga atctcatccc
3481 attgttttaa atacgattaa aaacgaagtt tcttctagag tccattctca tttagacaat
3541 aaatgtgaac tattgccttc ttcgttagga aaaaatgcac ctgctttagg agcggtttct
3601 atcgttattg attctttttt aagtgttacc cctataagtt aggagctccc cgggacgttc
3661 ttgccattgc tgcataaaaa acgcccggcg gcaaccgagc gttctgaatt aattaatcat
3721 cgcgactgca gagatatcga tttcaagcta tatttggagt tgagcctctt gaaacggaca
3781 ccctgtatcc gaaggatcga aacgctgtca gctaccgcag ccaaatatat gaaatgaagg
3841 attatgcaac cgtgattgat gtaaagacag cttcagtgga agcggtgtat caagaagatt
3901 tttatgcgcg cacgccagcg gtcacaagcc atgagtatca gcagggcaag gcgtatttta
3961 tcggcgcgcg tttggaggat caatttcagc gtgatttcta tgagggtctg atcacagacc
4021 tgtctctctc tccagttttt ccggttcggc acggaaaagg cgtctccgta caagcgaggc
4081 aggatcagga caatgattat atttttgtca tgaatttcac ggaagaaaaa cagctggtca
4141 cgtttgatca gagtgtgaag gacataatga caggagacat attgtcaggc gacctgacga
4201 tggaaaagta tgaagtgaga attgtcgtaa acacacatta gcccatcatt cttgaagacg
4261 aaagggcctc gtgatacgcc tatttttata ggttaatgtc atgataataa tggtttctta
4321 gacgtcaggt ggcacttttc ggggaaatgt gcgcggaacc cctatttgtt tatttttcta
4381 aatacattca aatatgtatc cgctcatgag acaataaccc tgataaatgc ttcaataata
4441 ttgaaaaagg aagagtatga gtattcaaca tttccgtgtc gcccttattc ccttttttgc
4501 ggcattttgc cttcctgttt ttgctcaccc agaaacgctg gtgaaagtaa aagatgctga
4561 agatcagttg ggtgcacgag tgggttacat cgaactggat ctcaacagcg gtaagatcct
4621 tgagagtttt cgccccgaag aacgttttcc aatgatgagc acttttaaag ttctgctatg
4681 tggcgcggta ttatcccgtg ttgacgccgg gcaagagcaa ctcggtcgcc gcatacacta
4741 ttctcagaat gacttggttg agtactcacc agtcacagaa aagcatctta cggatggcat
4801 gacagtaaga gaattatgca gtgctgccat aaccatgagt gataacactg cggccaactt
4861 acttctgaca acgatcggag gaccgaagga gctaaccgct tttttgcaca acatggggga
4921 tcatgtaact cgccttgatc gttgggaacc ggagctgaat gaagccatac caaacgacga
4981 gcgtgacacc acgatgcctg cagcaatggc aacaacgttg cgcaaactat taactggcga
5041 actacttact ctagcttccc ggcaacaatt aatagactgg atggaggcgg ataaagttgc
5101 aggaccactt ctgcgctcgg cccttccggc tggctggttt attgctgata aatctggagc
5161 cggtgagcgt gggtctcgcg gtatcattgc agcactgggg ccagatggta agccctcccg
5221 tatcgtagtt atctacacga cggggagtca ggcaactatg gatgaacgaa atagacagat
5281 cgctgagata ggtgcctcac tgattaagca ttggtaactg tcagaccaag tttactcata
5341 tatactttag attgatttaa aacttcattt ttaatttaaa aggatctagg tgaagatcct
5401 ttttgataat ctcatgacca aaatccctta acgtgagttt tcgttccact gagcgtcaga
5461 ccccgtagaa aagatcaaag gatcttcttg agatcctttt tttctgcgcg taatctgctg
5521 cttgcaaaca aaaaaaccac cgctaccagc ggtggtttgt ttgccggatc aagagctacc
5581 aactcttttt ccgaaggtaa ctggcttcag cagagcgcag ataccaaata ctgtccttct
5641 agtgtagccg tagttaggcc accacttcaa gaactctgta gcaccgccta catacctcgc
5701 tctgctaatc ctgttaccag tggctgctgc cagtggcgat aagtcgtgtc ttaccgggtt
5761 ggactcaaga cgatagttac cggataaggc gcagcggtcg ggctgaacgg ggggttcgtg
5821 cacacagccc agcttggagc gaacgaccta caccgaactg agatacctac agcgtgagca
5881 ttgagaaagc gccacgcttc ccgaagggag aaaggcggac aggtatccgg taagcggcag
5941 ggtcggaaca ggagagcgca cgagggagct tccaggggga aacgcctggt atctttatag
6001 tcctgtcggg tttcgccacc tctgacttga gcgtcgattt ttgtgatgct cgtcaggggg
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7261 cagttctccg caagaattga ttggctccaa ttcttggagt ggtgaatccg ttagcgaggt
7321 gccgccggct tccattcagg tcgaggtggc ccggctccat gcaccgcgac gcaacgcggg
7381 gaggcagaca aggtataggg cggcgcctac aatccatgcc aacccgttcc atgtgctcgc
7441 cgaggcggca taaatcgccg tgacgatcag cggtccagtg atcgaagtta ggctggtaag
7501 agccgcgagc gatccttgaa gctgtccctg atggtcgtca tctacctgcc tggacagcat
7561 ggcctgcaac gcgggcatcc cgatgccgcc ggaagcgaga agaatcataa tggggaaggc
7621 catccagcct cgcgtcgcga ctaagaaaat gccgtcaaat ccgctcgcca tgacttcact
7681 aacgatgcct ttgaaaatct tcaagttctt ttctactaat tcaaggcgtg tctcaccagg
7741 tttttggttt gctccggcgc aaatgcagac aatatcagga t
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pAX01枯草胞内质粒
别称: pAX01
| 启动子: | xylA |
|---|---|
| 复制子: | repB |
| 终止子: | T1 terminator，T2 terminator |
| 质粒分类: | 枯草系列质粒；枯草整合质粒；枯草胞内质粒 |
| 质粒大小: | 7781bp |
| 原核抗性: | Amp |
| 筛选标记: | Erm |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
| 表达宿主: | BS168等枯草芽孢杆菌 |
| 诱导方式: | 木糖诱导 |
| 5'测序引物: | pAX-F (GTTGCCCTGGAGACAGGGG) |
| 3'测序引物: | pAX-R(GATATGGTGCAAGTCAGCACG) |
质粒属性
| 载体宿主： | 枯草杆菌 |
|---|---|
| 载体用途： | 蛋白表达 |
| 基因种属： | 空载体 |
| 基因类型： | ORF |
| 原核抗性： | Amp |
| 筛选标记： | |
| 荧光蛋白： |
质粒简介 pAX01 质粒无致病性、安全,无明显的密码子偏嗜性，加入信号肽可直接将表达蛋白分泌到培养基中（目前，大约60％的市售酶由芽孢杆菌表达生产），表达产物可溶，表达产物与胞内蛋白分离，无需破碎细胞，有利于分离纯化,对枯草芽孢杆菌的转录、翻译、蛋白质折叠、分泌等机制背景清楚，有利于遗传操作和大规模发酵。基于大肠杆菌-枯草芽孢杆菌穿梭质粒的表达载体pAX01可以在枯草芽孢杆菌中高效表达重组外源蛋白。pAX01质粒全长7781bp，载体基于强σA-依赖性启动子的枯草杆菌groE操纵子，通过添加操纵子改造成为一种高效可控的启动子。pCDNA3.0-HA-p53质粒由上海烜雅生物科技有限公司提供
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported File 7781 bp ds-DNA circular SYN 18-4-2015
KEYWORDS pAX01
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 7781)
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported 2015-4-18 from MiaoLingPlasmid
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..7781
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
terminator 660..687
/note="rrnB T2 terminator"
/note="transcription terminator T2 from the E. coli rrnB
gene"
terminator 706..792
/gene="Escherichia coli rrnB"
/note="rrnB T1 terminator"
/note="transcription terminator T1 from the E. coli rrnB
gene"
promoter 2078..2182
/gene="bla"
/note="AmpR promoter"
promoter 4352..4456
/gene="bla"
/note="AmpR promoter"
CDS 4457..5317
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
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related antibiotics"
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ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRVDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
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replication"
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number"
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ORIGIN
1 ggggtgatgt caaagcttga aaaaacgcac gtaacaaaag caaaatttat gctccatggg
61 ggagactaca accccgatca gtggctggat cggcccgata ttttagctga cgatatcaaa
121 ctgatgaagc tttctcatac gaatacgttt tctgtcggca tttttgcatg gagcgcactt
181 gagccggagg agggcgtata tcaatttgaa tggctggatg atatttttga gcggattcac
241 agtataggcg gccgggtcat attagcaacg ccgagcggag cccgtccggc ctggctgtcg
301 caaacctatc cggaagtttt gcgcgtcaat gcctcccgcg tcaaacagct gcacggcgga
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541 gctgcataaa aaacgcccgg cggcaaccga gcgttctgaa ttaattaatc atcgggaaga
601 tcttcatcac cgaaacgcgg caggcagctc tagagttaac aagagtttgt agaaacgcaa
661 aaaggccatc cgtcaggatg gccttctgct tagctagagc ggcggatttg tcctactcag
721 gagagcgttc accgacaaac aacagataaa acgaaaggcc cagtctttcg actgagcctt
781 tcgttttatt tgatgcctca agctagagag tcattaccag atctcactgc agagatcccc
841 gggtctagag tctagggacc tctttagctc cttggaagct gtcagtagta tacctaataa
901 tttatctaca ttccctttag taacgtgtaa ctttccaaat ttacaaaagc gactcataga
961 attatttcct cccgttaaat aatagataac tattaaaaat agacaatact tgctcataag
1021 taacggtact taaattgttt actttggcgt gtttcattgc ttgatgaaac tgatttttag
1081 taaacagttg acgatattct cgattgaccc attttgaaac aaagtacgta tatagcttcc
1141 aatatttatc tggaacatct gtggtatggc gggtaagttt tattaagaca ctgtttactt
1201 ttggtttagg atgaaagcat tccgctggca gcttaagcaa ttgctgaatc gagacttgag
1261 tgtgcaagag caaccctagt gttcggtgaa tatccaaggt acgcttgtag aatccttctt
1321 caacaatcag atagatgtca gacgcatggc tttcaaaaac cactttttta ataatttgtg
1381 tgcttaaatg gtaaggaata ctcccaacaa ttttatacct ctgtttgtta gggaattgaa
1441 actgtagaat atcttggtga attaaagtga cacgagtatt cagttttaat ttttctgacg
1501 ataagttgaa tagatgactg tctaattcaa tagacgttac ctgtttactt attttagcca
1561 gtttcgtcgt taaatgccct ttacctgttc caatttcgta aacggtatcg gtttctttta
1621 aattcaattg ttttattatt tggttgagta ctttttcact cgttaaaaag ttttgagaat
1681 attttatatt tttgttcatg taatcactcc ttcttaatta caaattttta gcatctaatt
1741 taacttcaat tcctattata caaaatttta agatactgca ctatcaacac actcttaagt
1801 ttgcttctaa gtcttatttc cataacttct tttacgtttc cgccattctt tgctgtttcg
1861 atttttatga tatggtgcaa gtcagcacga acacgaaccg tcttatctcc cattatatct
1921 ttttttgcac tgattggtgt atcatttcgt ttttcttttg tgctagagga tcaattcttg
1981 aagacgaaag ggcctcgtga tacgcctatt tttataggtt aatgtcatga taataatggt
2041 ttcttagacg tcaggtggca cttttcgggg aaatgtgcgc ggaaccccta tttgtttatt
2101 tttctaaata cattcaaata tgtatccgct catgagacaa taaccctgat aaatgcttca
2161 ataatattga aaaaggaaga gtgcggccgc ccgcgggagc tcggatccca tttccccctt
2221 tgatttttag atatcactag tttggaccat ttgtcatttc cccctttgat ttaagtgaac
2281 aagtttatcc atcaactatc ttaattgagt tagtttgttt atccaataaa ctaactttat
2341 ctcatcatat acaaaataaa tgtttatttc aatgtttttt ttagaaaatt tagttataat
2401 attagatatg atacttttaa atatctaatt caagcttcaa aaaacaccaa cttagttcgg
2461 tggataaaca aaggagtggt tattattcaa attgcagatc aagctttagt aaaaaaaatg
2521 aatcaaaaat taatattaga tgaaattttg aagaactccc ctgtctccag ggcaactctc
2581 tctgagatta caggattaaa caagtctact gtctcctctc aagtaaatac actgcttgaa
2641 aaagatttta tttttgaaat tggggcaggg caatctagag gcggcagaag acctgtaatg
2701 cttgttttta ataagaatgc aggctactcg attggtattg atataggagt cgactatctt
2761 aacggaattc taaccgactt agaaggaaat attattctcg agaagacttc tgacttgtct
2821 agttcttccg ctagtgaagt aaaagagatt ttatttgcac ttattcatgg ttttgtaacc
2881 catatgcctg agtcccctta tggtctagtc ggaataggaa tttgtgttcc aggccttgta
2941 gatcgtcatc agcaaattat tttcatgcct aacttaaatt ggaatatcaa agatttgcag
3001 tttttaattg agagtgagtt taatgttccg gtttttgttg aaaatgaagc taatgcagga
3061 gcatacggtg aaaaagtatt tggtatgaca aaaaactatg aaaacatcgt ttacatcagt
3121 attaatatcg gaattggaac tggacttgtt attaacaacg aattgtataa aggtgttcag
3181 ggtttttctg gggaaatggg tcatatgacg atagatttta atggacccaa atgcagctgt
3241 ggaaatcgag gctgttggga attatatgct tctgaaaaag cgttactggc ttcgctctct
3301 aaagaagaaa agaatatttc tcgaaaagag attgtggaac gcgcaaataa aaatgatgta
3361 gaaatgttaa atgcacttca aaactttggc ttttatatcg gaattggatt aaccaatatc
3421 cttaatacat ttgatataga agctgttatc ttgagaaatc atataattga atctcatccc
3481 attgttttaa atacgattaa aaacgaagtt tcttctagag tccattctca tttagacaat
3541 aaatgtgaac tattgccttc ttcgttagga aaaaatgcac ctgctttagg agcggtttct
3601 atcgttattg attctttttt aagtgttacc cctataagtt aggagctccc cgggacgttc
3661 ttgccattgc tgcataaaaa acgcccggcg gcaaccgagc gttctgaatt aattaatcat
3721 cgcgactgca gagatatcga tttcaagcta tatttggagt tgagcctctt gaaacggaca
3781 ccctgtatcc gaaggatcga aacgctgtca gctaccgcag ccaaatatat gaaatgaagg
3841 attatgcaac cgtgattgat gtaaagacag cttcagtgga agcggtgtat caagaagatt
3901 tttatgcgcg cacgccagcg gtcacaagcc atgagtatca gcagggcaag gcgtatttta
3961 tcggcgcgcg tttggaggat caatttcagc gtgatttcta tgagggtctg atcacagacc
4021 tgtctctctc tccagttttt ccggttcggc acggaaaagg cgtctccgta caagcgaggc
4081 aggatcagga caatgattat atttttgtca tgaatttcac ggaagaaaaa cagctggtca
4141 cgtttgatca gagtgtgaag gacataatga caggagacat attgtcaggc gacctgacga
4201 tggaaaagta tgaagtgaga attgtcgtaa acacacatta gcccatcatt cttgaagacg
4261 aaagggcctc gtgatacgcc tatttttata ggttaatgtc atgataataa tggtttctta
4321 gacgtcaggt ggcacttttc ggggaaatgt gcgcggaacc cctatttgtt tatttttcta
4381 aatacattca aatatgtatc cgctcatgag acaataaccc tgataaatgc ttcaataata
4441 ttgaaaaagg aagagtatga gtattcaaca tttccgtgtc gcccttattc ccttttttgc
4501 ggcattttgc cttcctgttt ttgctcaccc agaaacgctg gtgaaagtaa aagatgctga
4561 agatcagttg ggtgcacgag tgggttacat cgaactggat ctcaacagcg gtaagatcct
4621 tgagagtttt cgccccgaag aacgttttcc aatgatgagc acttttaaag ttctgctatg
4681 tggcgcggta ttatcccgtg ttgacgccgg gcaagagcaa ctcggtcgcc gcatacacta
4741 ttctcagaat gacttggttg agtactcacc agtcacagaa aagcatctta cggatggcat
4801 gacagtaaga gaattatgca gtgctgccat aaccatgagt gataacactg cggccaactt
4861 acttctgaca acgatcggag gaccgaagga gctaaccgct tttttgcaca acatggggga
4921 tcatgtaact cgccttgatc gttgggaacc ggagctgaat gaagccatac caaacgacga
4981 gcgtgacacc acgatgcctg cagcaatggc aacaacgttg cgcaaactat taactggcga
5041 actacttact ctagcttccc ggcaacaatt aatagactgg atggaggcgg ataaagttgc
5101 aggaccactt ctgcgctcgg cccttccggc tggctggttt attgctgata aatctggagc
5161 cggtgagcgt gggtctcgcg gtatcattgc agcactgggg ccagatggta agccctcccg
5221 tatcgtagtt atctacacga cggggagtca ggcaactatg gatgaacgaa atagacagat
5281 cgctgagata ggtgcctcac tgattaagca ttggtaactg tcagaccaag tttactcata
5341 tatactttag attgatttaa aacttcattt ttaatttaaa aggatctagg tgaagatcct
5401 ttttgataat ctcatgacca aaatccctta acgtgagttt tcgttccact gagcgtcaga
5461 ccccgtagaa aagatcaaag gatcttcttg agatcctttt tttctgcgcg taatctgctg
5521 cttgcaaaca aaaaaaccac cgctaccagc ggtggtttgt ttgccggatc aagagctacc
5581 aactcttttt ccgaaggtaa ctggcttcag cagagcgcag ataccaaata ctgtccttct
5641 agtgtagccg tagttaggcc accacttcaa gaactctgta gcaccgccta catacctcgc
5701 tctgctaatc ctgttaccag tggctgctgc cagtggcgat aagtcgtgtc ttaccgggtt
5761 ggactcaaga cgatagttac cggataaggc gcagcggtcg ggctgaacgg ggggttcgtg
5821 cacacagccc agcttggagc gaacgaccta caccgaactg agatacctac agcgtgagca
5881 ttgagaaagc gccacgcttc ccgaagggag aaaggcggac aggtatccgg taagcggcag
5941 ggtcggaaca ggagagcgca cgagggagct tccaggggga aacgcctggt atctttatag
6001 tcctgtcggg tttcgccacc tctgacttga gcgtcgattt ttgtgatgct cgtcaggggg
6061 gcggagccta tggaaaaacg ccagcaacgc ggccttttta cggttcctgg ccttttgctg
6121 gccttttgct cacatgttct ttcctgcgtt atcccctgat tctgtggata accgtattac
6181 cgcctttgag tgagctgata ccgctcgccg cagccgaacg accgagcgca gcgagtcagt
6241 gagcgaggaa gcggaagagc gcctgatgcg gtattttctc cttacgcatc tgtgcggtat
6301 ttcacaccgc atatggtgca ctctcagtac aatctgctct gatgccgcat agttaagcca
6361 gtatacactc cgctatcgct acgtgactgg gtcatggctg cgccccgaca cccgccaaca
6421 cccgctgacg cgccctgacg ggcttgtctg ctcccggcat ccgcttacag acaagctgtg
6481 accgtctccg ggagctgcat gtgtcagagg ttttcaccgt catcaccgaa acgcgcgagg
6541 cagctgcggt aaagctcatc agcgtggtcg tgaagcgatt cacagatgtc tgcctgttca
6601 tccgcgtcca gctcgttgag tttctccaga agcgttaatg tctggcttct gataaagcgg
6661 gccatgttaa gggcggtttt ttcctgtttg gtcacttgat gcctccgtgt aagggggaat
6721 ttctgttcat gggggtaatg ataccgatga aacgagagag gatgctcacg atacgggtta
6781 ctgatgatga acatgcccgg ttactggaac gttgtgaggg taaacaactg gcggtatgga
6841 tgcggcggga ccagagaaaa atcactcagg gtcaatgcca gcgcttcgtt aatacagatg
6901 taggtgttcc acagggtagc cagcagcatc ctgcgatgca gatccggaac ataatggtgc
6961 agggcgctga cttccgcgtt tccagacttt acgaaacacg gaaaccgaag accattcatg
7021 ttgttgctca ggtcgcagac gttttgcagc agcagtcgct tcacgttcgc tcgcgtatcg
7081 gtgattcatt ctgctaacca gtaaggcaac cccgccagcc tagccgggtc ctcaacgaca
7141 ggagcacgat catgcgcacc cgtggccagg acccaacgct gcccgagatg cgccgcgtgc
7201 ggctgctgga gatggcggac gcgatggata tgttctgcca agggttggtt tgcgcattca
7261 cagttctccg caagaattga ttggctccaa ttcttggagt ggtgaatccg ttagcgaggt
7321 gccgccggct tccattcagg tcgaggtggc ccggctccat gcaccgcgac gcaacgcggg
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7501 agccgcgagc gatccttgaa gctgtccctg atggtcgtca tctacctgcc tggacagcat
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7621 catccagcct cgcgtcgcga ctaagaaaat gccgtcaaat ccgctcgcca tgacttcact
7681 aacgatgcct ttgaaaatct tcaagttctt ttctactaat tcaaggcgtg tctcaccagg
7741 tttttggttt gctccggcgc aaatgcagac aatatcagga t
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质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P4776/pCMV-SPORT6-A4GALT人源基因质粒 |
| P4777/pCMV-SPORT6-HBP1人源基因质粒 |
| P4778/pCMV-SPORT6-CTR9人源基因质粒 |
| P4779/pCMV-SPORT6-C16orf95人源基因质粒 |
| P4780/pCMV-SPORT6-RNF11人源基因质粒 |
| P4781/pCMV-SPORT6-MEOX2人源基因质粒 |
| P4782/pCMV-SPORT6-VPS33B（点突变）人源基因质粒 |
| P4783/pCMV-SPORT6-SDF4（1同义突变）人源基因质粒 |
| P4784/pCMV-SPORT6-SEMA3B人源基因质粒 |
| P4785/pCMV-SPORT6-STAR人源基因质粒 |
| P4786/pCMV-SPORT6-SCAPER人源基因质粒 |
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文献和实验相关实验
Marburg遗传背景清楚，是研究枯草芽孢杆菌的标准菌株；AS1作为胞内表达的备用菌株，常用于表达外源蛋白。而胞外蛋白酶缺陷菌株WB800N能有效解决由于枯草芽孢杆菌丰富的蛋白酶导致的蛋白表达产物降解问题。 2 给力的表达载体 大部分的枯草芽孢杆菌不含内源性质粒，并且一般不能识别大肠杆菌中的启动子。最初的枯草芽孢杆菌载体源于金黄色葡萄球菌，其结构不稳定并易丢失。现在普遍使用的质粒载体是由枯草芽孢杆菌隐性质粒与大肠杆菌质粒构成的穿梭载体，可在大肠杆菌中完成基因片段的连接克隆
等）。上述方法中，实验室最常用的方法当属是脂质体转染（质粒转染）。 质粒转染操作简单，分为瞬时转染和稳定转染。针对不同属性细胞系，选择转让方式时要做足功课，千万不要图方便，否则转染效率简直崩溃。影响转染效率的因素有很多，比如准备不充分、转染条件不佳；再比如细胞株本身的特性和活性、细胞污染，转染的DNA/RNA的质量，转染方法，转染试剂的选择等，小编总结了这11个注意事项，一起来学习吧！ 01血清条件下的细胞转染 转染可以使用血清，前提是DNA-阳离子脂质体复合物形成时不含血清，否则会降低转染
Werner综合症由编码DNA解旋酶和外切核酸酶的WRN基因突变引起，我们提出了一个可以用来研究Werner综合症核酸代谢过程中某些定义不清的基因功能的酵母模型。0:00 酵母模式遗传研究人类DNA修复蛋白0 0:21 内容订阅21 1:15 内容简介75 3:01 构建质粒DNA 181 4:04 划线分析WRN转化Sgs1-Top3菌株缓慢生长物表型恢复情况244 6:00 WRN转化酵母羟基脲(HU)和甲基磺酸甲酯(MMS)敏感度的遗传分析360
pAX01枯草胞内质粒
￥100 - 1000
