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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
pBE2R
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pBE2R枯草分泌质粒
别称: pBE2R
质粒属性
质粒简介
pBE2R穿梭表达载体是以pBE2为根本骨架，引入来自pWB980质粒的P43强启动子，并在其下流引入嗜碱芽孢杆菌碱性卵白酶信号肽和前肽构建而成。质粒拷贝数测定显示，pBE2R在大肠杆菌、枯草芽孢杆菌每一个细胞中约含有1个拷贝。质粒稳固性试验显示：该质粒在大肠杆菌和枯草芽孢杆菌中各传30代而不产生丧失，可以在大肠杆菌和枯草芽孢杆菌中稳固存在。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 7014 bp ds-DNA circular SYN 29-SEP-2017
DEFINITION synthetic circular DNA
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS pBE2R
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 7014)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported Sep 29, 2017 from MiaoLingPlasmid
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..7014
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
promoter 803..907
/gene="bla"
/label=AmpR promoter
CDS 908..1768
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/label=AmpR
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
rep_origin 1939..2527
/direction=RIGHT
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(3930..4700)
/codon_start=1
/label=KanR/NeoR
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QTDGPYSDIEMMCVMSTEEAEFSHEWTTGEWKVEVNFDSEEILLDYASQVESDWPLTHG
QFFSILPIYDSGGYLEKVYQTAKSVEAQTFHDAICALIVEELFEYAGKWRNIRVQGPTT
FLPSLTVQVAMAGAMLIGLHHRICYTTSASVLTEAVKQSDLPSGYDHLCQFVMSGQL-SD
SEKLLESLENFWNGIQEWTERHGYIVDVSKRIPF"
CDS complement(4860..5864)
/codon_start=1
/gene="repB"
/product="RepB replication protein"
/label=repB
/note="from Enterococcus faecalis plasmid pAM-alpha-1"
/db_xref="GI:22652809"
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YGGLLKEIHKKLNLDDTEEGDLIHTDDDEKADEDGFSIIAMWNWERKNYFIKE"
misc_feature 6283..6587
/label=P43 promoter
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/label=Apr sp+pro
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/product="6xHis affinity tag"
/label=6xHis
/translation="HHHHHH"
ORIGIN
1 tatagtgtca cctaaatcgt atgtgtatga tacataaggt tatgtattaa ttgtagccgc
61 gttctaacga caatatgtac aagcctaatt gtgtagcatc tggcttactg aagcagaccc
121 tatcatctct ctcgtaaact gccgtcagag tcggtttggt tggacgaacc ttctgagttt
181 ctggtaacgc cgttccgcac cccggaaatg gtcagcgaac caatcagcag ggtcatcgct
241 agccagatcc tctacgccgg acgcatcgtg gccggcatca ccggcgccac aggtgcggtt
301 gctggcgcct atatcgccga catcaccgat ggggaagatc gggctcgcca cttcgggctc
361 atgagcgctt gtttcggcgt gggtatggtg gcaggccccg tggccggggg actgttgggc
421 gccatctcct tgcaccattc cttgcggcgg cggtgctcaa cggcctcaac ctactactgg
481 gctgcttcct aatgcaggag tcgcataagg gagagcgtcg atatggtgca ctctcagtac
541 aatctgctct gatgccgcat agttaagcca gccccgacac ccgccaacac ccgctgacgc
601 gccctgacgg gcttgtctgc tcccggcatc cgcttacaga caagctgtga ccgtctccgg
661 gagctgcatg tgtcagaggt tttcaccgtc atcaccgaaa cgcgcgagac gaaagggcct
721 cgtgatacgc ctatttttat aggttaatgt catgataata atggtttctt agacgtcagg
781 tggcactttt cggggaaatg tgcgcggaac ccctatttgt ttatttttct aaatacattc
841 aaatatgtat ccgctcatga gacaataacc ctgataaatg cttcaataat attgaaaaag
901 gaagagtatg agtattcaac atttccgtgt cgcccttatt cccttttttg cggcattttg
961 ccttcctgtt tttgctcacc cagaaacgct ggtgaaagta aaagatgctg aagatcagtt
1021 gggtgcacga gtgggttaca tcgaactgga tctcaacagc ggtaagatcc ttgagagttt
1081 tcgccccgaa gaacgttttc caatgatgag cacttttaaa gttctgctat gtggcgcggt
1141 attatcccgt attgacgccg ggcaagagca actcggtcgc cgcatacact attctcagaa
1201 tgacttggtt gagtactcac cagtcacaga aaagcatctt acggatggca tgacagtaag
1261 agaattatgc agtgctgcca taaccatgag tgataacact gcggccaact tacttctgac
1321 aacgatcgga ggaccgaagg agctaaccgc ttttttgcac aacatggggg atcatgtaac
1381 tcgccttgat cgttgggaac cggagctgaa tgaagccata ccaaacgacg agcgtgacac
1441 cacgatgcct gtagcaatgg caacaacgtt gcgcaaacta ttaactggcg aactacttac
1501 tctagcttcc cggcaacaat taatagactg gatggaggcg gataaagttg caggaccact
1561 tctgcgctcg gcccttccgg ctggctggtt tattgctgat aaatctggag ccggtgagcg
1621 tgggtctcgc ggtatcattg cagcactggg gccagatggt aagccctccc gtatcgtagt
1681 tatctacacg acggggagtc aggcaactat ggatgaacga aatagacaga tcgctgagat
1741 aggtgcctca ctgattaagc attggtaact gtcagaccaa gtttactcat atatacttta
1801 gattgattta aaacttcatt tttaatttaa aaggatctag gtgaagatcc tttttgataa
1861 tctcatgacc aaaatccctt aacgtgagtt ttcgttccac tgagcgtcag accccgtaga
1921 aaagatcaaa ggatcttctt gagatccttt ttttctgcgc gtaatctgct gcttgcaaac
1981 aaaaaaacca ccgctaccag cggtggtttg tttgccggat caagagctac caactctttt
2041 tccgaaggta actggcttca gcagagcgca gataccaaat actgtccttc tagtgtagcc
2101 gtagttaggc caccacttca agaactctgt agcaccgcct acatacctcg ctctgctaat
2161 cctgttacca gtggctgctg ccagtggcga taagtcgtgt cttaccgggt tggactcaag
2221 acgatagtta ccggataagg cgcagcggtc gggctgaacg gggggttcgt gcacacagcc
2281 cagcttggag cgaacgacct acaccgaact gagataccta cagcgtgagc tatgagaaag
2341 cgccacgctt cccgaaggga gaaaggcgga caggtatccg gtaagcggca gggtcggaac
2401 aggagagcgc acgagggagc ttccaggggg aaacgcctgg tatctttata gtcctgtcgg
2461 gtttcgccac ctctgacttg agcgtcgatt tttgtgatgc tcgtcagggg ggcggagcct
2521 atggaaaaac gccagcaacg cggccttttt acggttcctg gccttttgct ggccttttgc
2581 tcacatgttc tttcctgcgt tatcccctga ttctgtggat aaccgtatta ccgcctttga
2641 gtgagctgat accgctcgcc gcagccgaac gaccgagcgc agcgagtcag tgagcgagga
2701 agcggaagag cgcccaatac gcaaaccgcc tctccccgcg cgttggccga ttcattaatg
2761 cagctgattt cactttttgc attctacaaa ctgcataact catatgtaaa tcgctccttt
2821 ttaggtggca caaatgtgag gcattttcgc tctttccggc aaccacttcc aagtaaagta
2881 taacacacta tactttatat tcataaagtg tgtgctctgc gaggctgtcg gcagtgccga
2941 ccaaaaccat aaaaccttta agacctttct tttttttacg agaaaaaaga aacaaaaaaa
3001 cctgccctct gccacctcag caaagggggg ttttgctctc gtgctcgttt aaaaatcagc
3061 aagggacagg tagtattttt tgagaagatc actcaaaaaa tctccacctt taaacccttg
3121 ccaattttta ttttgtccgt tttgtctagc ttaccgaaag ccagactcag caagaataaa
3181 atttttattg tctttcggtt ttctagtgta acggacaaaa ccactcaaaa taaaaaagat
3241 acaagagagg tctctcgtat cttttattca gcaatcgcgc ccgattgctg aacagattaa
3301 taatagattt tagcttttta tttgttgaaa aaagctaatc aaattgttgt cgggatcaat
3361 tactgcaaag tctcgttcat cccaccactg atcttttaat gatgtattgg ggtgcaaaat
3421 gcccaaaggc ttaatatgtt gatataattc atcaattccc tctacttcaa tgcggcaact
3481 agcagtacca gcaataaacg actccgcacc tgtacaaacc ggtgaatcat tactacgaga
3541 gcgccagctt catcacttgc ctcccataga tgaatccgaa cctcattaca cattagaact
3601 gcgaatccat cttcatggtg aaccaaagtg aaacctagtt tatcgcaata aaaacctata
3661 ctctttttaa tatccccgac tggcaatgcc gggatagact gtaacattct cacgcataaa
3721 atcccctttc attttctaat gtaaatctat taccttatta ttaattcaat tcgctcataa
3781 ttaatccttt ttcttattac gcaaaatggc ccgatttaag cacacccttt attccgttaa
3841 tgcgccatga cagccatgat aattactaat actaggagaa gttaataaat acgtaaccaa
3901 catgattaac aattattaga ggtcatcgtt caaaatggta tgcgttttga cacatccact
3961 atatatccgt gtcgttctgt ccactcctga atcccattcc agaaattctc tagcgattcc
4021 agaagtttct cagagtcgga aagttgacca gacattacga actggcacag atggtcataa
4081 cctgaaggaa gatctgattg cttaactgct tcagttaaga ccgaagcgct cgtcgtataa
4141 cagatgcgat gatgcagacc aatcaacatg gcacctgcca ttgctacctg tacagtcaag
4201 gatggtagaa atgttgtcgg tccttgcaca cgaatattac gccatttgcc tgcatattca
4261 aacagctctt ctacgataag ggcacaaatc gcatcgtgga acgtttgggc ttctaccgat
4321 ttagcagttt gatacacttt ctctaagtat ccacctgaat cataaatcgg caaaatagag
4381 aaaaattgac catgtgtaag cggccaatct gattccacct gagatgcata atctagtaga
4441 atctcttcgc tatcaaaatt cacttccacc ttccactcac cggttgtcca ttcatggctg
4501 aactctgctt cctctgttga catgacacac atcatctcaa tatccgaata gggcccatca
4561 gtctgacgac caagagagcc ataaacacca atagccttaa catcatcccc atatttatcc
4621 aatattcgtt ccttaatttc atgaacaatc ttcattcttt cttctctagt cattattatt
4681 ggtccattca ctattctcat tcccttttca gataatttta gatttgcttt tctaaataag
4741 aatatttgga gagcaccgtt cttattcagc tattaataac tcgtcttcct aagcatcctt
4801 caatcctttt aataacaatt atagcatcta atcttcaaca aactggcccg tttgttgaac
4861 tactctttaa taaaataatt tttccgttcc caattccaca ttgcaataat agaaaatcca
4921 tcttcatcgg ctttttcgtc atcatctgta tgaatcaaat cgccttcttc tgtgtcatca
4981 aggtttaatt ttttatgtat ttcttttaac aaaccaccat aggagattaa ccttttacgg
5041 tgtaaacctt cctccaaatc agacaaacgt ttcaaattct tttcttcatc atcggtcata
5101 aaatccgtat cctttacagg atattttgca gtttcgtcaa ttgccgattg tatatccgat
5161 ttatatttat ttttcggtcg aatcatttga acttttacat ttggatcata gtctaatttc
5221 attgcctttt tccaaaattg aatccattgt ttttgattca cgtagttttc tgtattctta
5281 aaataagttg gttccacaca taccaataca tgcatgtgct gattataaga attatcttta
5341 ttatttattg tcacttccgt tgcacgcata aaaccaacaa gatttttatt aattttttta
5401 tattgcatca ttcggcgaaa tccttgagcc atatctgaca aactcttatt taattcttcg
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5521 ttaataactt cagcaacaac cttttgtgac tgaatgccat gtttcattgc tctcctccag
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6961 tagagtcgac ctgcagctcg agcaccacca ccaccaccac aagcttgtat tcta
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pBE2R枯草分泌质粒
别称: pBE2R
| 启动子: | P43 |
|---|---|
| 复制子: | ori |
| 质粒分类: | 枯草杆菌质粒；枯草游离质粒；枯草分泌质粒 |
| 质粒大小: | 7014bp |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
| 表达宿主: | 枯草芽孢杆菌 |
| 5'测序引物: | 根据序列设计引物 |
| 3'测序引物: | 根据序列设计引物 |
质粒属性
| 质粒宿主： | 枯草杆菌 |
|---|---|
| 质粒用途： | 蛋白表达 |
| 片段类型： | |
| 片段物种： | |
| 原核抗性： | Amp |
| 筛选标记： | |
| 荧光标记： |
质粒简介
pBE2R穿梭表达载体是以pBE2为根本骨架，引入来自pWB980质粒的P43强启动子，并在其下流引入嗜碱芽孢杆菌碱性卵白酶信号肽和前肽构建而成。质粒拷贝数测定显示，pBE2R在大肠杆菌、枯草芽孢杆菌每一个细胞中约含有1个拷贝。质粒稳固性试验显示：该质粒在大肠杆菌和枯草芽孢杆菌中各传30代而不产生丧失，可以在大肠杆菌和枯草芽孢杆菌中稳固存在。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 7014 bp ds-DNA circular SYN 29-SEP-2017
DEFINITION synthetic circular DNA
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS pBE2R
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 7014)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported Sep 29, 2017 from MiaoLingPlasmid
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..7014
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
promoter 803..907
/gene="bla"
/label=AmpR promoter
CDS 908..1768
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/gene="bla"
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/label=AmpR
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related antibiotics"
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CDS complement(4860..5864)
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CDS 6983..7000
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ORIGIN
1 tatagtgtca cctaaatcgt atgtgtatga tacataaggt tatgtattaa ttgtagccgc
61 gttctaacga caatatgtac aagcctaatt gtgtagcatc tggcttactg aagcagaccc
121 tatcatctct ctcgtaaact gccgtcagag tcggtttggt tggacgaacc ttctgagttt
181 ctggtaacgc cgttccgcac cccggaaatg gtcagcgaac caatcagcag ggtcatcgct
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301 gctggcgcct atatcgccga catcaccgat ggggaagatc gggctcgcca cttcgggctc
361 atgagcgctt gtttcggcgt gggtatggtg gcaggccccg tggccggggg actgttgggc
421 gccatctcct tgcaccattc cttgcggcgg cggtgctcaa cggcctcaac ctactactgg
481 gctgcttcct aatgcaggag tcgcataagg gagagcgtcg atatggtgca ctctcagtac
541 aatctgctct gatgccgcat agttaagcca gccccgacac ccgccaacac ccgctgacgc
601 gccctgacgg gcttgtctgc tcccggcatc cgcttacaga caagctgtga ccgtctccgg
661 gagctgcatg tgtcagaggt tttcaccgtc atcaccgaaa cgcgcgagac gaaagggcct
721 cgtgatacgc ctatttttat aggttaatgt catgataata atggtttctt agacgtcagg
781 tggcactttt cggggaaatg tgcgcggaac ccctatttgt ttatttttct aaatacattc
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961 ccttcctgtt tttgctcacc cagaaacgct ggtgaaagta aaagatgctg aagatcagtt
1021 gggtgcacga gtgggttaca tcgaactgga tctcaacagc ggtaagatcc ttgagagttt
1081 tcgccccgaa gaacgttttc caatgatgag cacttttaaa gttctgctat gtggcgcggt
1141 attatcccgt attgacgccg ggcaagagca actcggtcgc cgcatacact attctcagaa
1201 tgacttggtt gagtactcac cagtcacaga aaagcatctt acggatggca tgacagtaag
1261 agaattatgc agtgctgcca taaccatgag tgataacact gcggccaact tacttctgac
1321 aacgatcgga ggaccgaagg agctaaccgc ttttttgcac aacatggggg atcatgtaac
1381 tcgccttgat cgttgggaac cggagctgaa tgaagccata ccaaacgacg agcgtgacac
1441 cacgatgcct gtagcaatgg caacaacgtt gcgcaaacta ttaactggcg aactacttac
1501 tctagcttcc cggcaacaat taatagactg gatggaggcg gataaagttg caggaccact
1561 tctgcgctcg gcccttccgg ctggctggtt tattgctgat aaatctggag ccggtgagcg
1621 tgggtctcgc ggtatcattg cagcactggg gccagatggt aagccctccc gtatcgtagt
1681 tatctacacg acggggagtc aggcaactat ggatgaacga aatagacaga tcgctgagat
1741 aggtgcctca ctgattaagc attggtaact gtcagaccaa gtttactcat atatacttta
1801 gattgattta aaacttcatt tttaatttaa aaggatctag gtgaagatcc tttttgataa
1861 tctcatgacc aaaatccctt aacgtgagtt ttcgttccac tgagcgtcag accccgtaga
1921 aaagatcaaa ggatcttctt gagatccttt ttttctgcgc gtaatctgct gcttgcaaac
1981 aaaaaaacca ccgctaccag cggtggtttg tttgccggat caagagctac caactctttt
2041 tccgaaggta actggcttca gcagagcgca gataccaaat actgtccttc tagtgtagcc
2101 gtagttaggc caccacttca agaactctgt agcaccgcct acatacctcg ctctgctaat
2161 cctgttacca gtggctgctg ccagtggcga taagtcgtgt cttaccgggt tggactcaag
2221 acgatagtta ccggataagg cgcagcggtc gggctgaacg gggggttcgt gcacacagcc
2281 cagcttggag cgaacgacct acaccgaact gagataccta cagcgtgagc tatgagaaag
2341 cgccacgctt cccgaaggga gaaaggcgga caggtatccg gtaagcggca gggtcggaac
2401 aggagagcgc acgagggagc ttccaggggg aaacgcctgg tatctttata gtcctgtcgg
2461 gtttcgccac ctctgacttg agcgtcgatt tttgtgatgc tcgtcagggg ggcggagcct
2521 atggaaaaac gccagcaacg cggccttttt acggttcctg gccttttgct ggccttttgc
2581 tcacatgttc tttcctgcgt tatcccctga ttctgtggat aaccgtatta ccgcctttga
2641 gtgagctgat accgctcgcc gcagccgaac gaccgagcgc agcgagtcag tgagcgagga
2701 agcggaagag cgcccaatac gcaaaccgcc tctccccgcg cgttggccga ttcattaatg
2761 cagctgattt cactttttgc attctacaaa ctgcataact catatgtaaa tcgctccttt
2821 ttaggtggca caaatgtgag gcattttcgc tctttccggc aaccacttcc aagtaaagta
2881 taacacacta tactttatat tcataaagtg tgtgctctgc gaggctgtcg gcagtgccga
2941 ccaaaaccat aaaaccttta agacctttct tttttttacg agaaaaaaga aacaaaaaaa
3001 cctgccctct gccacctcag caaagggggg ttttgctctc gtgctcgttt aaaaatcagc
3061 aagggacagg tagtattttt tgagaagatc actcaaaaaa tctccacctt taaacccttg
3121 ccaattttta ttttgtccgt tttgtctagc ttaccgaaag ccagactcag caagaataaa
3181 atttttattg tctttcggtt ttctagtgta acggacaaaa ccactcaaaa taaaaaagat
3241 acaagagagg tctctcgtat cttttattca gcaatcgcgc ccgattgctg aacagattaa
3301 taatagattt tagcttttta tttgttgaaa aaagctaatc aaattgttgt cgggatcaat
3361 tactgcaaag tctcgttcat cccaccactg atcttttaat gatgtattgg ggtgcaaaat
3421 gcccaaaggc ttaatatgtt gatataattc atcaattccc tctacttcaa tgcggcaact
3481 agcagtacca gcaataaacg actccgcacc tgtacaaacc ggtgaatcat tactacgaga
3541 gcgccagctt catcacttgc ctcccataga tgaatccgaa cctcattaca cattagaact
3601 gcgaatccat cttcatggtg aaccaaagtg aaacctagtt tatcgcaata aaaacctata
3661 ctctttttaa tatccccgac tggcaatgcc gggatagact gtaacattct cacgcataaa
3721 atcccctttc attttctaat gtaaatctat taccttatta ttaattcaat tcgctcataa
3781 ttaatccttt ttcttattac gcaaaatggc ccgatttaag cacacccttt attccgttaa
3841 tgcgccatga cagccatgat aattactaat actaggagaa gttaataaat acgtaaccaa
3901 catgattaac aattattaga ggtcatcgtt caaaatggta tgcgttttga cacatccact
3961 atatatccgt gtcgttctgt ccactcctga atcccattcc agaaattctc tagcgattcc
4021 agaagtttct cagagtcgga aagttgacca gacattacga actggcacag atggtcataa
4081 cctgaaggaa gatctgattg cttaactgct tcagttaaga ccgaagcgct cgtcgtataa
4141 cagatgcgat gatgcagacc aatcaacatg gcacctgcca ttgctacctg tacagtcaag
4201 gatggtagaa atgttgtcgg tccttgcaca cgaatattac gccatttgcc tgcatattca
4261 aacagctctt ctacgataag ggcacaaatc gcatcgtgga acgtttgggc ttctaccgat
4321 ttagcagttt gatacacttt ctctaagtat ccacctgaat cataaatcgg caaaatagag
4381 aaaaattgac catgtgtaag cggccaatct gattccacct gagatgcata atctagtaga
4441 atctcttcgc tatcaaaatt cacttccacc ttccactcac cggttgtcca ttcatggctg
4501 aactctgctt cctctgttga catgacacac atcatctcaa tatccgaata gggcccatca
4561 gtctgacgac caagagagcc ataaacacca atagccttaa catcatcccc atatttatcc
4621 aatattcgtt ccttaatttc atgaacaatc ttcattcttt cttctctagt cattattatt
4681 ggtccattca ctattctcat tcccttttca gataatttta gatttgcttt tctaaataag
4741 aatatttgga gagcaccgtt cttattcagc tattaataac tcgtcttcct aagcatcctt
4801 caatcctttt aataacaatt atagcatcta atcttcaaca aactggcccg tttgttgaac
4861 tactctttaa taaaataatt tttccgttcc caattccaca ttgcaataat agaaaatcca
4921 tcttcatcgg ctttttcgtc atcatctgta tgaatcaaat cgccttcttc tgtgtcatca
4981 aggtttaatt ttttatgtat ttcttttaac aaaccaccat aggagattaa ccttttacgg
5041 tgtaaacctt cctccaaatc agacaaacgt ttcaaattct tttcttcatc atcggtcata
5101 aaatccgtat cctttacagg atattttgca gtttcgtcaa ttgccgattg tatatccgat
5161 ttatatttat ttttcggtcg aatcatttga acttttacat ttggatcata gtctaatttc
5221 attgcctttt tccaaaattg aatccattgt ttttgattca cgtagttttc tgtattctta
5281 aaataagttg gttccacaca taccaataca tgcatgtgct gattataaga attatcttta
5341 ttatttattg tcacttccgt tgcacgcata aaaccaacaa gatttttatt aattttttta
5401 tattgcatca ttcggcgaaa tccttgagcc atatctgaca aactcttatt taattcttcg
5461 ccatcataaa catttttaac tgttaatgtg agaaacaacc aacgaactgt tggcttttgt
5521 ttaataactt cagcaacaac cttttgtgac tgaatgccat gtttcattgc tctcctccag
5581 ttgcacattg gacaaagcct ggatttacaa aaccacactc gatacaactt tctttcgcct
5641 gtttcacgat tttgtttata ctctaatatt tcagcacaat cttttactct ttcagccttt
5701 ttaaattcaa gaatatgcag aagttcaaag taatcaacat tagcgatttt cttttctctc
5761 catggtctca cttttccact ttttgtcttg tccactaaaa cccttgattt ttcatctgaa
5821 taaatgctac tattaggaca cataatatta aaagaaaccc ccatctattt agttatttgt
5881 ttagtcactt ataactttaa cagatggggt ttttctgtgc aaccaatttt aagggttttc
5941 aatactttaa aacacataca taccaacact tcaacgcacc tttcagcaac taaaataaaa
6001 atgacgttat ttctatatgt atcaagataa gaaagaacaa gttcaaaacc atcaaaaaaa
6061 gacacctttt caggtgcttt ttttatttta taaactcatt ccctgatctc gacttcgttc
6121 tttttttacc tctcggttat gagttagttc aaattcgttc tttttaggtt ctaaatcgtg
6181 tttttcttgg aattgtgctg ttttatcctt taccttgtct acaaacccct taaaaacgtt
6241 tttaaaggct tttaagccgt ctgtacgttc cttaaggaat tcgagctcag ctttattgag
6301 tggatgatta tattcctttt gataggtggt atgttttcgc ttgaactttt aaatacagcc
6361 attgaacata cggttgattt aataactgac aaacatcacc ctcttgctaa agcggccaag
6421 gacgctgccg ccggggctgt ttgcgttttt gccgtgattt cgtgtattat tggtttactt
6481 atttttttgc caaagctgta atggctgaaa attcttacat ttattttaca tttttagaaa
6541 tgggcgtgaa aaaaagcgcg cgattatgta aaatataaag tgatagcggt accattatag
6601 gtaagagagg aatgtacaca tgaagaaacc gttggggaaa attgtcgcaa gcaccgcact
6661 actcatttct gttgctttta gttcatcgat cgcatcggct gctgaagaag caaaagaaaa
6721 atatttaatt ggctttaatg agcaggaagc tgtcagtgag tttgtagaac aagtagaggc
6781 aaatgacgag gtcgccattc tctctgagga agaggaagtc gaaattgaat tgcttcatga
6841 atttgaaacg attcctgttt tatccgttga gttaagccca gaagatgtgg acgcgcttga
6901 actcgatcca gcgatttctt atattgaaga ggatgcagaa gtaacgacaa tgggatcctc
6961 tagagtcgac ctgcagctcg agcaccacca ccaccaccac aagcttgtat tcta
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质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P4741/pCMV-SPORT6-HPCAL1人源基因质粒 |
| P4742/pCMV-SPORT6-UQCRH人源基因质粒 |
| P4743/pCMV-SPORT6-ZNF639人源基因质粒 |
| P4744/pCMV-SPORT6-UCHL5人源基因质粒 |
| P4745/pCMV-SPORT6-C1orf109人源基因质粒 |
| P4746/pCMV-SPORT6-MYO9B人源基因质粒 |
| P4747/pCMV-SPORT6-COPG1人源基因质粒 |
| P4748/pCMV-SPORT6-RPIA人源基因质粒 |
| P4749/pCMV-SPORT6-CC2D1B人源基因质粒 |
| P4750/pCMV-SPORT6-RCSD1人源基因质粒 |
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文献和实验相关实验
枯草芽孢杆菌，学名Bacillus subtilis，是一种被广泛应用于工业生产的革兰氏阳性细菌。与大肠杆菌不同，枯草芽孢杆菌没有外层膜，分泌的蛋白能直接释放到培养基中，是一种理想的原核蛋白分泌表达菌株。那么作为一种潜能巨大的原核表达系统，它究竟强在哪些方面呢？且让AtaGenix为您一一道来。 1 安全可靠 枯草芽孢杆菌的安全性是食品级的，收录于FDA的GRAS菌中，欧洲食品安全局认为枯草芽孢杆菌可用于食品发酵。很多常用食品
，或是感受态污染（二）筛选标记二、园友们的经验与建议1、一般不需要有能诱导表达的重组酶基因来进行有效地同源重组。除非你的菌株是重组缺限型的，这另当别论。当然，在做自杀性质粒是需要考虑交换臂的长度，臂越长突变菌株越容易得到，筛先的工作量越少。一般，在交换的双臂保证有1kb左右的同源序列，可提高其交换效率。2、Q:如果我想构建枯草芽胞杆菌的某个基因的突变株,(1)在体外将该基因进行突变;(2)在该突变因两端接上与染色体上该基因两端相同的核苷酸序列;(3)将该DNA片段重组入某大肠杆菌的质粒中;(4)将重组质粒
差别以及蛋白质对宿主的潜在毒性等等。但知识的大量积累还是有助于为表达方面某些特定的困难提供一般的解决方法。 大肠杆菌作为表达系统的主要障碍包括：不能象真核蛋白那样进行翻译后修饰、缺乏将蛋白质有效释放到培养基中的分泌机制和充分形成二硫键的能力。 另一方面，许多真核蛋白在非糖基化的形式下能保留其生物学活性，因而也就可以用大肠杆菌来表达。 如何实现外源基因在原核细胞中的有效表达，自60年代以来，对影响外源基因在其表达体系中表达效率的各个因素作了大量实验研究，并有多篇归纳性综述
pBE2R枯草分泌质粒
￥100 - 1000
