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-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
pHT-43
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pHT43枯草分泌质粒
别称: pHT-43
质粒属性
质粒简介
所有在枯草芽孢杆菌的groESL操纵子之前使强启动子与lac操纵子融合的载体都可通过加入IPTG进行诱导。尽管当未添加诱导物时表达组件的背景表达水平很低，还是成功从约1300种诱导因子中筛选出一种来使用bgaB报道基因（Phan等，2005）。当分别将htpG和pbpE基因融合到groE启动子时，加入IPTG后，表达的重组蛋白可能分别占细胞总蛋白的10%和13%（Phan等，2005）。热纤梭菌的amyQα-淀粉酶和纤维素酶A、B的高水平表达实验证实。该载体还插入了一个高效SD序列以及一个多克隆位点（BamH I, Xba I, Aat II, Sma I）。编码α-淀粉酶的amyQ基因的信号肽编码区域与pHT01的SD序列融合，构成了pHT43，以此获得分泌的重组蛋白。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported File 8057 bp ds-DNA circular SYN 07-2-2015
DEFINITION .
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS pHT43
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 8057)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported 2015-2-7 from MLCC
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..8057
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
primer_bind 1238..1254
/note="M13 fwd"
/note="common sequencing primer, one of multiple similar
variants"
CDS complement(1297..2379)
/codon_start=1
/gene="lacI"
/product="lac repressor"
/note="lacI"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
/translation="MKPVTLYDVAEYAGVSYQTVSRVVNQASHVSAKTREKVEAAMAEL
NYIPNRVAQQLAGKQSLLIGVATSSLALHAPSQIVAAIKSRADQLGASVVVSMVERSGV
EACKAAVHNLLAQRVSGLIINYPLDDQDAIAVEAACTNVPALFLDVSDQTPINSIIFSH
EDGTRLGVEHLVALGHQQIALLAGPLSSVSARLRLAGWHKYLTRNQIQPIAEREGDWSA
MSGFQQTMQMLNEGIVPTAMLVANDQMALGAMRAITESGLRVGADISVVGYDDTEDSSC
YIPPSTTIKQDFRLLGQTSVDRLLQLSQGQAVKGNQLLPVSLVKRKTTLAPNTQTASPR
ALADSLMQLARQVSRLESGQ"
protein_bind 2763..2787
/bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
/note="lac operator"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
promoter 6134..6238
/gene="bla"
/note="AmpR promoter"
CDS 6239..7099
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/note="AmpR"
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
rep_origin 7270..7858
/direction=RIGHT
/note="ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
ORIGIN
1 ttaagttatt ggtatgactg gttttaagcg caaaaaaagt tgctttttcg tacctattaa
61 tgtatcgttt tagaaaaccg actgtaaaaa gtacagtcgg cattatctca tattataaaa
121 gccagtcatt aggcctatct gacaattcct gaatagagtt cataaacaat cctgcatgat
181 aaccatcaca aacagaatga tgtacctgta aagatagcgg taaatatatt gaattacctt
241 tattaatgaa ttttcctgct gtaataatgg gtagaaggta attactatta ttattgatat
301 ttaagttaaa cccagtaaat gaagtccatg gaataataga aagagaaaaa gcattttcag
361 gtataggtgt tttgggaaac aatttccccg aaccattata tttctctaca tcagaaaggt
421 ataaatcata aaactctttg aagtcattct ttacaggagt ccaaatacca gagaatgttt
481 tagatacacc atcaaaaatt gtataaagtg gctctaactt atcccaataa cctaactctc
541 cgtcgctatt gtaaccagtt ctaaaagctg tatttgagtt tatcaccctt gtcactaaga
601 aaataaatgc agggtaaaat ttatatcctt cttgttttat gtttcggtat aaaacactaa
661 tatcaatttc tgtggttata ctaaaagtcg tttgttggtt caaataatga ttaaatatct
721 cttttctctt ccaattgtct aaatcaattt tattaaagtt catttgatat gcctcctaaa
781 tttttatcta aagtgaattt aggaggctta cttgtctgct ttcttcatta gaatcaatcc
841 ttttttaaaa gtcaatatta ctgtaacata aatatatatt ttaaaaatat cccactttat
901 ccaattttcg tttgttgaac taatgggtgc tttagttgaa gaataaagac cacattaaaa
961 aatgtggtct tttgtgtttt tttaaaggat ttgagcgtag cgaaaaatcc ttttctttct
1021 tatcttgata ataagggtaa ctattgccga tcgtccattc cgacagcatc gccagtcact
1081 atggcgtgct gctagcgcca ttcgccattc aggctgcgca actgttggga agggcgatcg
1141 gtgcgggcct cttcgctatt acgccagctg gcgaaagggg gatgtgctgc aaggcgatta
1201 agttgggtaa cgccagggtt ttcccagtca cgacgttgta aaacgacggc cagtgaattc
1261 gagctcaggc cttaactcac attaattgcg ttgcgctcac tgcccgcttt ccagtcggga
1321 aacctgtcgt gccagctgca ttaatgaatc ggccaacgcg cggggagagg cggtttgcgt
1381 attgggcgcc agggtggttt ttcttttcac cagtgagacg ggcaacagct gattgccctt
1441 caccgcctgg ccctgagaga gttgcagcaa gcggtccacg ctggtttgcc ccagcaggcg
1501 aaaatcctgt ttgatggtgg ttgacggcgg gatataacat gagctgtctt cggtatcgtc
1561 gtatcccact accgagatat ccgcaccaac gcgcagcccg gactcggtaa tggcgcgcat
1621 tgcgcccagc gccatctgat cgttggcaac cagcatcgca gtgggaacga tgccctcatt
1681 cagcatttgc atggtttgtt gaaaaccgga catggcactc cagtcgcctt cccgttccgc
1741 tatcggctga atttgattgc gagtgagata tttatgccag ccagccagac gcagacgcgc
1801 cgagacagaa cttaatgggc ccgctaacag cgcgatttgc tggtgaccca atgcgaccag
1861 atgctccacg cccagtcgcg taccgtcttc atgggagaaa ataatactgt tgatgggtgt
1921 ctggtcagag acatcaagaa ataacgccgg aacattagtg caggcagctt ccacagcaat
1981 ggcatcctgg tcatccagcg gatagttaat gatcagccca ctgacgcgtt gcgcgagaag
2041 attgtgcacc gccgctttac aggcttcgac gccgcttcgt tctaccatcg acaccaccac
2101 gctggcaccc agttgatcgg cgcgagattt aatcgccgcg acaatttgcg acggcgcgtg
2161 cagggccaga ctggaggtgg caacgccaat cagcaacgac tgtttgcccg ccagttgttg
2221 tgccacgcgg ttgggaatgt aattcagctc cgccatcgcc gcttccactt tttcccgcgt
2281 tttcgcagaa acgtggctgg cctggttcac cacgcgggaa acggtctgat aagagacacc
2341 ggcatactct gcgacatcgt ataacgttac tggtttcatc aaaatcgtct ccctccgttt
2401 gaatatttga ttgatcgtaa ccagatgaag cactctttcc actatcccta cagtgttatg
2461 gcttgaacaa tcacgaaaca ataattggta cgtacgatct ttcagccgac tcaaacatca
2521 aatcttacaa atgtagtctt tgaaagtatt acatatgtaa gatttaaatg caaccgtttt
2581 ttcggaagga aatgatgacc tcgtttccac cggaattagc ttggtaccag ctattgtaac
2641 ataatcggta cgggggtgaa aaagctaacg gaaaagggag cggaaaagaa tgatgtaagc
2701 gtgaaaaatt ttttatctta tcacttgaaa ttggaaggga gattctttat tataagaatt
2761 gtggaattgt gagcggataa caattcccaa ttaaaggagg aaggatcaat gattcaaaaa
2821 cgaaagcgga cagtttcgtt cagacttgtg cttatgtgca cgctgttatt tgtcagtttg
2881 ccgattacaa aaacatcagc cgtaggatcc tctagagtcg acgtccccgg ggcagcccgc
2941 ctaatgagcg ggcttttttc acgtcacgcg tccatggaga tctttgtctg caactgaaaa
3001 gtttatacct tacctggaac aaatggttga aacatacgag gctaatatcg gcttattagg
3061 aatagtccct gtactaataa aatcaggtgg atcagttgat cagtatattt tggacgaagc
3121 tcggaaagaa tttggagatg acttgcttaa ttccacaatt aaattaaggg aaagaataaa
3181 gcgatttgat gttcaaggaa tcacggaaga agatactcat gataaagaag ctctaaaact
3241 attcaataac cttacaatgg aattgatcga aagggtggaa ggttaatggt acgaaaatta
3301 ggggatctac ctagaaagcc acaaggcgat aggtcaagct taaagaaccc ttacatggat
3361 cttacagatt ctgaaagtaa agaaacaaca gaggttaaac aaacagaacc aaaaagaaaa
3421 aaagcattgt tgaaaacaat gaaagttgat gtttcaatcc ataataagat taaatcgctg
3481 cacgaaattc tggcagcatc cgaagggaat tcatattact tagaggatac tattgagaga
3541 gctattgata agatggttga gacattacct gagagccaaa aaacttttta tgaatatgaa
3601 ttaaaaaaaa gaaccaacaa aggctgagac agactccaaa cgagtctgtt tttttaaaaa
3661 aaatattagg agcattgaat atatattaga gaattaagaa agacatggga ataaaaatat
3721 tttaaatcca gtaaaaatat gataagatta tttcagaata tgaagaactc tgtttgtttt
3781 tgatgaaaaa acaaacaaaa aaaatccacc taacggaatc tcaatttaac taacagcggc
3841 caaactgaga agttaaattt gagaagggga aaaggcggat ttatacttgt atttaactat
3901 ctccatttta acattttatt aaaccccata caagtgaaaa tcctctttta cactgttcct
3961 ttaggtgatc gcggagggac attatgagtg aagtaaacct aaaaggaaat acagatgaat
4021 tagtgtatta tcgacagcaa accactggaa ataaaatcgc caggaagaga atcaaaaaag
4081 ggaaagaaga agtttattat gttgctgaaa cggaagagaa gatatggaca gaagagcaaa
4141 taaaaaactt ttctttagac aaatttggta cgcatatacc ttacatagaa ggtcattata
4201 caatcttaaa taattacttc tttgattttt ggggctattt tttaggtgct gaaggaattg
4261 cgctctatgc tcacctaact cgttatgcat acggcagcaa agacttttgc tttcctagtc
4321 tacaaacaat cgctaaaaaa atggacaaga ctcctgttac agttagaggc tacttgaaac
4381 tgcttgaaag gtacggtttt atttggaagg taaacgtccg taataaaacc aaggataaca
4441 cagaggaatc cccgattttt aagattagac gtaaggttcc tttgctttca gaagaacttt
4501 taaatggaaa ccctaatatt gaaattccag atgacgagga agcacatgta aagaaggctt
4561 taaaaaagga aaaagagggt cttccaaagg ttttgaaaaa agagcacgat gaatttgtta
4621 aaaaaatgat ggatgagtca gaaacaatta atattccaga ggccttacaa tatgacacaa
4681 tgtatgaaga tatactcagt aaaggagaaa ttcgaaaaga aatcaaaaaa caaataccta
4741 atcctacaac atcttttgag agtatatcaa tgacaactga agaggaaaaa gtcgacagta
4801 ctttaaaaag cgaaatgcaa aatcgtgtct ctaagccttc ttttgatacc tggtttaaaa
4861 acactaagat caaaattgaa aataaaaatt gtttattact tgtaccgagt gaatttgcat
4921 ttgaatggat taagaaaaga tatttagaaa caattaaaac agtccttgaa gaagctggat
4981 atgttttcga aaaaatcgaa ctaagaaaag tgcaataaac tgctgaagta tttcagcagt
5041 tttttttatt tagaaatagt gaaaaaaata taatcaggga ggtatcaata tttaatgagt
5101 actgatttaa atttatttag actggaatta ataattaaca cgtagactaa ttaaaattta
5161 atgagggata aagaggatac aaaaatatta atttcaatcc ctattaaatt ttaacaaggg
5221 ggggattaaa atttaattag aggtttatcc acaagaaaag accctaataa aatttttact
5281 agggttataa cactgattaa tttcttaatg ggggagggat taaaatttaa tgacaaagaa
5341 aacaatcttt taagaaaagc ttttaaaaga taataataaa aagagctttg cgattaagca
5401 aaactcttta ctttttcatt gacattatca aattcatcga tttcaaattg ttgttgtatc
5461 ataaagttaa ttctgttttg cacaaccttt tcaggaatat aaaacacatc tgaggcttgt
5521 tttataaact cagggtcgct aaagtcaatg taacgtagca tatgatatgg tatagcttcc
5581 acccaagtta gcctttctgc ttcttctgaa tgtttttcat atacttccat gggtatctct
5641 aaatgatttt cctcatgtag caaggtatga gcaaaaagtt tatggaattg atagttcctc
5701 tctttttctt caactttttt atctaaaaca aacactttaa catctgagtc aatgtaagca
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5821 aaatcttttg gtgaaagaat ttttttatgt agcaatatat ccgatacagc accttctaaa
5881 agcgttggtg aatagggcat tttacctatc tcctctcatt ttgtggaata aaaatagtca
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7561 accggataag gcgcagcggt cgggctgaac ggggggttcg tgcacacagc ccagcttgga
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7681 tcccgaaggg agaaaggcgg acaggtatcc ggtaagcggc agggtcggaa caggagagcg
7741 cacgagggag cttccagggg gaaacgcctg gtatctttat agtcctgtcg ggtttcgcca
7801 cctctgactt gagcgtcgat ttttgtgatg ctcgtcaggg gggcggagcc tatggaaaaa
7861 cgccagcaac gcggcctttt tacggttcct ggccttttgc tggccttttg ctcacatgtt
7921 ctttcctgcg ttatcccctg attctgtgga taaccgtatt accgcctttg agtgagctga
7981 taccgctcgc cgcagccgaa cgaccgagcg cagcgagtca gtgagcgagg aagcggaaga
8041 gcgcccaata cgcatgc
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pHT43枯草分泌质粒
别称: pHT-43
| 启动子: | Pgrac |
|---|---|
| 复制子: | pUC |
| 质粒分类: | 广宿主系列，枯草杆菌载体 |
| 质粒大小: | 8057bp |
| 原核抗性: | Amp |
| 筛选标记: | Chl |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
| 表达宿主: | 枯草芽孢杆菌 |
| 诱导方式: | IPTG诱导 |
| 5'测序引物: | 根据序列设计引物 |
| 3'测序引物: | 根据序列设计引物 |
质粒属性
| 载体宿主： | 枯草杆菌 |
|---|---|
| 载体用途： | 蛋白表达,分泌表达 |
| 基因种属： | 空载体 |
| 基因类型： | ORF |
| 原核抗性： | Amp |
| 筛选标记： | |
| 荧光蛋白： |
质粒简介
所有在枯草芽孢杆菌的groESL操纵子之前使强启动子与lac操纵子融合的载体都可通过加入IPTG进行诱导。尽管当未添加诱导物时表达组件的背景表达水平很低，还是成功从约1300种诱导因子中筛选出一种来使用bgaB报道基因（Phan等，2005）。当分别将htpG和pbpE基因融合到groE启动子时，加入IPTG后，表达的重组蛋白可能分别占细胞总蛋白的10%和13%（Phan等，2005）。热纤梭菌的amyQα-淀粉酶和纤维素酶A、B的高水平表达实验证实。该载体还插入了一个高效SD序列以及一个多克隆位点（BamH I, Xba I, Aat II, Sma I）。编码α-淀粉酶的amyQ基因的信号肽编码区域与pHT01的SD序列融合，构成了pHT43，以此获得分泌的重组蛋白。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported File 8057 bp ds-DNA circular SYN 07-2-2015
DEFINITION .
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS pHT43
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 8057)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported 2015-2-7 from MLCC
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..8057
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/note="common sequencing primer, one of multiple similar
variants"
CDS complement(1297..2379)
/codon_start=1
/gene="lacI"
/product="lac repressor"
/note="lacI"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
/translation="MKPVTLYDVAEYAGVSYQTVSRVVNQASHVSAKTREKVEAAMAEL
NYIPNRVAQQLAGKQSLLIGVATSSLALHAPSQIVAAIKSRADQLGASVVVSMVERSGV
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EDGTRLGVEHLVALGHQQIALLAGPLSSVSARLRLAGWHKYLTRNQIQPIAEREGDWSA
MSGFQQTMQMLNEGIVPTAMLVANDQMALGAMRAITESGLRVGADISVVGYDDTEDSSC
YIPPSTTIKQDFRLLGQTSVDRLLQLSQGQAVKGNQLLPVSLVKRKTTLAPNTQTASPR
ALADSLMQLARQVSRLESGQ"
protein_bind 2763..2787
/bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
/note="lac operator"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
promoter 6134..6238
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related antibiotics"
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replication"
ORIGIN
1 ttaagttatt ggtatgactg gttttaagcg caaaaaaagt tgctttttcg tacctattaa
61 tgtatcgttt tagaaaaccg actgtaaaaa gtacagtcgg cattatctca tattataaaa
121 gccagtcatt aggcctatct gacaattcct gaatagagtt cataaacaat cctgcatgat
181 aaccatcaca aacagaatga tgtacctgta aagatagcgg taaatatatt gaattacctt
241 tattaatgaa ttttcctgct gtaataatgg gtagaaggta attactatta ttattgatat
301 ttaagttaaa cccagtaaat gaagtccatg gaataataga aagagaaaaa gcattttcag
361 gtataggtgt tttgggaaac aatttccccg aaccattata tttctctaca tcagaaaggt
421 ataaatcata aaactctttg aagtcattct ttacaggagt ccaaatacca gagaatgttt
481 tagatacacc atcaaaaatt gtataaagtg gctctaactt atcccaataa cctaactctc
541 cgtcgctatt gtaaccagtt ctaaaagctg tatttgagtt tatcaccctt gtcactaaga
601 aaataaatgc agggtaaaat ttatatcctt cttgttttat gtttcggtat aaaacactaa
661 tatcaatttc tgtggttata ctaaaagtcg tttgttggtt caaataatga ttaaatatct
721 cttttctctt ccaattgtct aaatcaattt tattaaagtt catttgatat gcctcctaaa
781 tttttatcta aagtgaattt aggaggctta cttgtctgct ttcttcatta gaatcaatcc
841 ttttttaaaa gtcaatatta ctgtaacata aatatatatt ttaaaaatat cccactttat
901 ccaattttcg tttgttgaac taatgggtgc tttagttgaa gaataaagac cacattaaaa
961 aatgtggtct tttgtgtttt tttaaaggat ttgagcgtag cgaaaaatcc ttttctttct
1021 tatcttgata ataagggtaa ctattgccga tcgtccattc cgacagcatc gccagtcact
1081 atggcgtgct gctagcgcca ttcgccattc aggctgcgca actgttggga agggcgatcg
1141 gtgcgggcct cttcgctatt acgccagctg gcgaaagggg gatgtgctgc aaggcgatta
1201 agttgggtaa cgccagggtt ttcccagtca cgacgttgta aaacgacggc cagtgaattc
1261 gagctcaggc cttaactcac attaattgcg ttgcgctcac tgcccgcttt ccagtcggga
1321 aacctgtcgt gccagctgca ttaatgaatc ggccaacgcg cggggagagg cggtttgcgt
1381 attgggcgcc agggtggttt ttcttttcac cagtgagacg ggcaacagct gattgccctt
1441 caccgcctgg ccctgagaga gttgcagcaa gcggtccacg ctggtttgcc ccagcaggcg
1501 aaaatcctgt ttgatggtgg ttgacggcgg gatataacat gagctgtctt cggtatcgtc
1561 gtatcccact accgagatat ccgcaccaac gcgcagcccg gactcggtaa tggcgcgcat
1621 tgcgcccagc gccatctgat cgttggcaac cagcatcgca gtgggaacga tgccctcatt
1681 cagcatttgc atggtttgtt gaaaaccgga catggcactc cagtcgcctt cccgttccgc
1741 tatcggctga atttgattgc gagtgagata tttatgccag ccagccagac gcagacgcgc
1801 cgagacagaa cttaatgggc ccgctaacag cgcgatttgc tggtgaccca atgcgaccag
1861 atgctccacg cccagtcgcg taccgtcttc atgggagaaa ataatactgt tgatgggtgt
1921 ctggtcagag acatcaagaa ataacgccgg aacattagtg caggcagctt ccacagcaat
1981 ggcatcctgg tcatccagcg gatagttaat gatcagccca ctgacgcgtt gcgcgagaag
2041 attgtgcacc gccgctttac aggcttcgac gccgcttcgt tctaccatcg acaccaccac
2101 gctggcaccc agttgatcgg cgcgagattt aatcgccgcg acaatttgcg acggcgcgtg
2161 cagggccaga ctggaggtgg caacgccaat cagcaacgac tgtttgcccg ccagttgttg
2221 tgccacgcgg ttgggaatgt aattcagctc cgccatcgcc gcttccactt tttcccgcgt
2281 tttcgcagaa acgtggctgg cctggttcac cacgcgggaa acggtctgat aagagacacc
2341 ggcatactct gcgacatcgt ataacgttac tggtttcatc aaaatcgtct ccctccgttt
2401 gaatatttga ttgatcgtaa ccagatgaag cactctttcc actatcccta cagtgttatg
2461 gcttgaacaa tcacgaaaca ataattggta cgtacgatct ttcagccgac tcaaacatca
2521 aatcttacaa atgtagtctt tgaaagtatt acatatgtaa gatttaaatg caaccgtttt
2581 ttcggaagga aatgatgacc tcgtttccac cggaattagc ttggtaccag ctattgtaac
2641 ataatcggta cgggggtgaa aaagctaacg gaaaagggag cggaaaagaa tgatgtaagc
2701 gtgaaaaatt ttttatctta tcacttgaaa ttggaaggga gattctttat tataagaatt
2761 gtggaattgt gagcggataa caattcccaa ttaaaggagg aaggatcaat gattcaaaaa
2821 cgaaagcgga cagtttcgtt cagacttgtg cttatgtgca cgctgttatt tgtcagtttg
2881 ccgattacaa aaacatcagc cgtaggatcc tctagagtcg acgtccccgg ggcagcccgc
2941 ctaatgagcg ggcttttttc acgtcacgcg tccatggaga tctttgtctg caactgaaaa
3001 gtttatacct tacctggaac aaatggttga aacatacgag gctaatatcg gcttattagg
3061 aatagtccct gtactaataa aatcaggtgg atcagttgat cagtatattt tggacgaagc
3121 tcggaaagaa tttggagatg acttgcttaa ttccacaatt aaattaaggg aaagaataaa
3181 gcgatttgat gttcaaggaa tcacggaaga agatactcat gataaagaag ctctaaaact
3241 attcaataac cttacaatgg aattgatcga aagggtggaa ggttaatggt acgaaaatta
3301 ggggatctac ctagaaagcc acaaggcgat aggtcaagct taaagaaccc ttacatggat
3361 cttacagatt ctgaaagtaa agaaacaaca gaggttaaac aaacagaacc aaaaagaaaa
3421 aaagcattgt tgaaaacaat gaaagttgat gtttcaatcc ataataagat taaatcgctg
3481 cacgaaattc tggcagcatc cgaagggaat tcatattact tagaggatac tattgagaga
3541 gctattgata agatggttga gacattacct gagagccaaa aaacttttta tgaatatgaa
3601 ttaaaaaaaa gaaccaacaa aggctgagac agactccaaa cgagtctgtt tttttaaaaa
3661 aaatattagg agcattgaat atatattaga gaattaagaa agacatggga ataaaaatat
3721 tttaaatcca gtaaaaatat gataagatta tttcagaata tgaagaactc tgtttgtttt
3781 tgatgaaaaa acaaacaaaa aaaatccacc taacggaatc tcaatttaac taacagcggc
3841 caaactgaga agttaaattt gagaagggga aaaggcggat ttatacttgt atttaactat
3901 ctccatttta acattttatt aaaccccata caagtgaaaa tcctctttta cactgttcct
3961 ttaggtgatc gcggagggac attatgagtg aagtaaacct aaaaggaaat acagatgaat
4021 tagtgtatta tcgacagcaa accactggaa ataaaatcgc caggaagaga atcaaaaaag
4081 ggaaagaaga agtttattat gttgctgaaa cggaagagaa gatatggaca gaagagcaaa
4141 taaaaaactt ttctttagac aaatttggta cgcatatacc ttacatagaa ggtcattata
4201 caatcttaaa taattacttc tttgattttt ggggctattt tttaggtgct gaaggaattg
4261 cgctctatgc tcacctaact cgttatgcat acggcagcaa agacttttgc tttcctagtc
4321 tacaaacaat cgctaaaaaa atggacaaga ctcctgttac agttagaggc tacttgaaac
4381 tgcttgaaag gtacggtttt atttggaagg taaacgtccg taataaaacc aaggataaca
4441 cagaggaatc cccgattttt aagattagac gtaaggttcc tttgctttca gaagaacttt
4501 taaatggaaa ccctaatatt gaaattccag atgacgagga agcacatgta aagaaggctt
4561 taaaaaagga aaaagagggt cttccaaagg ttttgaaaaa agagcacgat gaatttgtta
4621 aaaaaatgat ggatgagtca gaaacaatta atattccaga ggccttacaa tatgacacaa
4681 tgtatgaaga tatactcagt aaaggagaaa ttcgaaaaga aatcaaaaaa caaataccta
4741 atcctacaac atcttttgag agtatatcaa tgacaactga agaggaaaaa gtcgacagta
4801 ctttaaaaag cgaaatgcaa aatcgtgtct ctaagccttc ttttgatacc tggtttaaaa
4861 acactaagat caaaattgaa aataaaaatt gtttattact tgtaccgagt gaatttgcat
4921 ttgaatggat taagaaaaga tatttagaaa caattaaaac agtccttgaa gaagctggat
4981 atgttttcga aaaaatcgaa ctaagaaaag tgcaataaac tgctgaagta tttcagcagt
5041 tttttttatt tagaaatagt gaaaaaaata taatcaggga ggtatcaata tttaatgagt
5101 actgatttaa atttatttag actggaatta ataattaaca cgtagactaa ttaaaattta
5161 atgagggata aagaggatac aaaaatatta atttcaatcc ctattaaatt ttaacaaggg
5221 ggggattaaa atttaattag aggtttatcc acaagaaaag accctaataa aatttttact
5281 agggttataa cactgattaa tttcttaatg ggggagggat taaaatttaa tgacaaagaa
5341 aacaatcttt taagaaaagc ttttaaaaga taataataaa aagagctttg cgattaagca
5401 aaactcttta ctttttcatt gacattatca aattcatcga tttcaaattg ttgttgtatc
5461 ataaagttaa ttctgttttg cacaaccttt tcaggaatat aaaacacatc tgaggcttgt
5521 tttataaact cagggtcgct aaagtcaatg taacgtagca tatgatatgg tatagcttcc
5581 acccaagtta gcctttctgc ttcttctgaa tgtttttcat atacttccat gggtatctct
5641 aaatgatttt cctcatgtag caaggtatga gcaaaaagtt tatggaattg atagttcctc
5701 tctttttctt caactttttt atctaaaaca aacactttaa catctgagtc aatgtaagca
5761 taagatgttt ttccagtcat aatttcaatc ccaaatcttt tagacagaaa ttctggacgt
5821 aaatcttttg gtgaaagaat ttttttatgt agcaatatat ccgatacagc accttctaaa
5881 agcgttggtg aatagggcat tttacctatc tcctctcatt ttgtggaata aaaatagtca
5941 tattcgtcca tctacctatc ctattatcga acagttgaac tttttaatca aggatcagtc
6001 ctttttttca ttattcttaa actgtgctct taactttaac aactcgattt gtttttccag
6061 atctcgaggg taactagcct cgccgatccc gcaagaggcc cggcagtcag gtggcacttt
6121 tcggggaaat gtgcgcggaa cccctatttg tttatttttc taaatacatt caaatatgta
6181 tccgctcatg agacaataac cctgataaat gcttcaataa tattgaaaaa ggaagagtat
6241 gagtattcaa catttccgtg tcgcccttat tccctttttt gcggcatttt gccttcctgt
6301 ttttgctcac ccagaaacgc tggtgaaagt aaaagatgct gaagatcagt tgggtgcacg
6361 agtgggttac atcgaactgg atctcaacag cggtaagatc cttgagagtt ttcgccccga
6421 agaacgtttt ccaatgatga gcacttttaa agttctgcta tgtggcgcgg tattatcccg
6481 tattgacgcc gggcaagagc aactcggtcg ccgcatacac tattctcaga atgacttggt
6541 tgagtactca ccagtcacag aaaagcatct tacggatggc atgacagtaa gagaattatg
6601 cagtgctgcc ataaccatga gtgataacac tgcggccaac ttacttctga caacgatcgg
6661 aggaccgaag gagctaaccg cttttttgca caacatgggg gatcatgtaa ctcgccttga
6721 tcgttgggaa ccggagctga atgaagccat accaaacgac gagcgtgaca ccacgatgcc
6781 tgtagcaatg gcaacaacgt tgcgcaaact attaactggc gaactactta ctctagcttc
6841 ccggcaacaa ttaatagact ggatggaggc ggataaagtt gcaggaccac ttctgcgctc
6901 ggcccttccg gctggctggt ttattgctga taaatctgga gccggtgagc gtgggtctcg
6961 cggtatcatt gcagcactgg ggccagatgg taagccctcc cgtatcgtag ttatctacac
7021 gacggggagt caggcaacta tggatgaacg aaatagacag atcgctgaga taggtgcctc
7081 actgattaag cattggtaac tgtcagacca agtttactca tatatacttt agattgattt
7141 aaaacttcat ttttaattta aaaggatcta ggtgaagatc ctttttgata atctcatgac
7201 caaaatccct taacgtgagt tttcgttcca ctgagcgtca gaccccgtag aaaagatcaa
7261 aggatcttct tgagatcctt tttttctgcg cgtaatctgc tgcttgcaaa caaaaaaacc
7321 accgctacca gcggtggttt gtttgccgga tcaagagcta ccaactcttt ttccgaaggt
7381 aactggcttc agcagagcgc agataccaaa tactgtcctt ctagtgtagc cgtagttagg
7441 ccaccacttc aagaactctg tagcaccgcc tacatacctc gctctgctaa tcctgttacc
7501 agtggctgct gccagtggcg ataagtcgtg tcttaccggg ttggactcaa gacgatagtt
7561 accggataag gcgcagcggt cgggctgaac ggggggttcg tgcacacagc ccagcttgga
7621 gcgaacgacc tacaccgaac tgagatacct acagcgtgag ctatgagaaa gcgccacgct
7681 tcccgaaggg agaaaggcgg acaggtatcc ggtaagcggc agggtcggaa caggagagcg
7741 cacgagggag cttccagggg gaaacgcctg gtatctttat agtcctgtcg ggtttcgcca
7801 cctctgactt gagcgtcgat ttttgtgatg ctcgtcaggg gggcggagcc tatggaaaaa
7861 cgccagcaac gcggcctttt tacggttcct ggccttttgc tggccttttg ctcacatgtt
7921 ctttcctgcg ttatcccctg attctgtgga taaccgtatt accgcctttg agtgagctga
7981 taccgctcgc cgcagccgaa cgaccgagcg cagcgagtca gtgagcgagg aagcggaaga
8041 gcgcccaata cgcatgc
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质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P4714/pCMV-SPORT6-SAPS3人源基因质粒 |
| P4715/pCMV-SPORT6-YWHAG人源基因质粒 |
| P4716/pCMV-SPORT6-GNPDA2人源基因质粒 |
| P4717/pCMV-SPORT6-TMEM99人源基因质粒 |
| P4718/pCMV-SPORT6-PNRC1人源基因质粒 |
| P4719/pCMV-SPORT6-MAP3K7人源基因质粒 |
| P4720/pCMV-SPORT6-HHIPL2人源基因质粒 |
| P4721/pCMV-SPORT6-UBE2Q2人源基因质粒 |
| P4722/pCMV-SPORT6-STRBP人源基因质粒 |
| P4723/pCMV-SPORT6-PEX3人源基因质粒 |
| P4724/pCMV-SPORT6-DGAT2人源基因质粒 |
| P4725/pCMV-SPORT6-GLYCTK人源基因质粒 |
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文献和实验相关实验
等遗传操作，然后转入枯草芽孢杆菌进行外源基因的表达。AtaGenix使用的pHT系列载体拥有枯草芽孢杆菌的σA-依赖性的强启动子，配以groE启动子和lac操纵子，能够通过IPTG诱导来启动外源基因的表达。通过添加枯草芽孢杆菌中编码α-淀粉酶的amyQ基因的信号肽编码区域，构成了能够将目标蛋白有效分泌至胞外的表达载体，如pHT43。 3 有效的转化手段 枯草芽孢杆菌早期比较通用的转化方法是Spizizen转化法（接合转化），但在枯草芽孢杆菌的生长周期中能自发
pHT01 枯草杆菌质粒 Amp，Chl http://www.addgene.org/vector-database/5885/ pHT43 枯草杆菌质粒 Amp，Chl http://www.biofeng.com/zaiti/qita/pHT43.html pHT304
差别以及蛋白质对宿主的潜在毒性等等。但知识的大量积累还是有助于为表达方面某些特定的困难提供一般的解决方法。 大肠杆菌作为表达系统的主要障碍包括：不能象真核蛋白那样进行翻译后修饰、缺乏将蛋白质有效释放到培养基中的分泌机制和充分形成二硫键的能力。 另一方面，许多真核蛋白在非糖基化的形式下能保留其生物学活性，因而也就可以用大肠杆菌来表达。 如何实现外源基因在原核细胞中的有效表达，自60年代以来，对影响外源基因在其表达体系中表达效率的各个因素作了大量实验研究，并有多篇归纳性综述
pHT43枯草分泌质粒
￥100 - 1000
