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- 2025年07月12日
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-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
pMA5
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pMA5枯草胞内质粒
别称: pMA5
质粒属性
质粒简介
pMA5质粒是一个枯草芽孢杆菌表达载体，HpaII promoter驱动目的基因的表达。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 7202 bp ds-DNA circular SYN 08-九月-2017
KEYWORDS pMA5
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 7202)
TITLE Direct Submission
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..7202
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
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/direction=RIGHT
/note="f1 ori"
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
promoter 1006..1110
/gene="bla"
/note="AmpR promoter"
CDS 1111..1971
/codon_start=1
/note="Amp"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRVDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPAAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
rep_origin 2142..2733
/direction=RIGHT
/note="ori"
/note="high-copy-number colE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
misc_feature 5317..6078
/note="Kan"
misc_feature 6934..3
/note="HpaII promoter"
ORIGIN
1 catatgagtt atgcagtttg tagaatgcaa aaagtgaaat cagggggatc ctctagagtc
61 gagctcaagc tagcttggta cgtaccagat ctgagatcac gcgttctaga ggtcgaaatt
121 cacctcgaaa gcaagctgat aaaccgatac aattaaaggc tccttttgga gccttttttt
181 ttggagattt tcaacgtgaa aaaattatta ttcgcaattc caagctaatt cacctcgaaa
241 gcaagctgat aaaccgatac aattaaaggc tccttttgga gccttttttt ttggagattt
301 tcaacgtgaa aaaattatta ttcgcaattc caagctctgc ctcgcgcgtt tcggtgatga
361 cggtgaaaac ctctgacaca tgcagctccc ggagacggtc acagcttgtc tgtaagcgga
421 tgcagatcac gcgccctgta gcggcgcatt aagcgcggcg ggtgtggtgg ttacgcgcag
481 cgtgaccgct acacttgcca gcgccctagc gcccgctcct ttcgctttct tcccttcctt
541 tctcgccacg ttcgccggct ttccccgtca agctctaaat cgggggctcc ctttagggtt
601 ccgatttagt gctttacggc acctcgaccc caaaaaactt gattagggtg atggttcacg
661 tagtgggcca tcgccctgat agacggtttt tcgccctttg acgttggagt ccacgttctt
721 taatagtgga ctcttgttcc aaactggaac aacactcaac cctatctcgg tctattcttt
781 tgatttataa gggattttgc cgatttcggc ctattggtta aaaaatgagc tgatttaaca
841 aaaatttaac gcgaatttta acaaaatatt aacgcttaca atttgatctg cgctcggtcg
901 ttcggctgcg gcgagcggta tcagctcact caaagcggta atacggttat cccagaatcc
961 ggggataacg caggaaagac aggtggcact tttcggggaa atgtgcgcgg aacccctatt
1021 tgtttatttt tctaaataca ttcaaatatg tatccgctca tgagacaata accctgataa
1081 atgcttcaat aatattgaaa aaggaagagt atgagtattc aacatttccg tgtcgccctt
1141 attccctttt ttgcggcatt ttgccttcct gtttttgctc acccagaaac gctggtgaaa
1201 gtaaaagatg ctgaagatca gttgggtgca cgagtgggtt acatcgaact ggatctcaac
1261 agcggtaaga tccttgagag ttttcgcccc gaagaacgtt ttccaatgat gagcactttt
1321 aaagttctgc tatgtggcgc ggtattatcc cgtgttgacg ccgggcaaga gcaactcggt
1381 cgccgcatac actattctca gaatgacttg gttgagtact caccagtcac agaaaagcat
1441 cttacggatg gcatgacagt aagagaatta tgcagtgctg ccataaccat gagtgataac
1501 actgcggcca acttacttct gacaacgatc ggaggaccga aggagctaac cgcttttttg
1561 cacaacatgg gggatcatgt aactcgcctt gatcgttggg aaccggagct gaatgaagcc
1621 ataccaaacg acgagcgtga caccacgatg cctgcagcaa tggcaacaac gttgcgcaaa
1681 ctattaactg gcgaactact tactctagct tcccggcaac aattaataga ctggatggag
1741 gcggataaag ttgcaggacc acttctgcgc tcggcccttc cggctggctg gtttattgct
1801 gataaatctg gagccggtga gcgtgggtct cgcggtatca ttgcagcact ggggccagat
1861 ggtaagccct cccgtatcgt agttatctac acgacgggga gtcaggcaac tatggatgaa
1921 cgaaatagac agatcgctga gataggtgcc tcactgatta agcattggta actgtcagac
1981 caagtttact catatatact ttagattgat ttaaaacttc atttttaatt taaaaggatc
2041 taggtgaaga tcctttttga taatctcatg accaaaatcc cttaacgtga gttttcgttc
2101 cactgagcgt cagaccccgt agaaaagatc aaaggatctt cttgagatcc tttttttctg
2161 cgcgtaatct gctgcttgca aacaaaaaaa ccaccgctac cagcggtggt ttgtttgccg
2221 gatcaagagc taccaactct ttttccgaag gtaactggct tcagcagagc gcagatacca
2281 aatactgtcc ttctagtgta gccgtagtta ggccaccact tcaagaactc tgtagcaccg
2341 cctacatacc tcgctctgct aatcctgtta ccagtggctg ctgccagtgg cgataagtcg
2401 tgtcttaccg ggttggactc aagacgatag ttaccggata aggcgcagcg gtcgggctga
2461 acggggggtt cgtgcacaca gcccagcttg gagcgaacga cctacaccga agtactgaga
2521 tacctacagc gtgagctatg agaaagcgcc acgcttcccg aagggagaaa ggcggacagg
2581 tatccggtaa gcggcagggt cggaacagga gagcgcacga gggagcttcc agggggaaac
2641 gcctggtatc tttatagtcc tgtcgggttt cgccacctct gacttgagcg tcgatttttg
2701 tgatgctcgt caggggggcg gagcctatgg aaaaacgcca gcaacgcggc ctttttacgg
2761 ttcctggcct tttgctggcc ttttgctcac atgttctttc ctgcgttatc ccctgattct
2821 gtggataacc gtattaccgc ctttgagtga gctgataccg ctcgccgcag ccgaacgacc
2881 gagcgcagcg agtcagtgag cgaggaagcg gaagagcgcc caatacgcaa accgcctctc
2941 cccgcgcgtt ggccgattca ttaatgcagc tggcacgaca ggtttcccga ctggaaagcg
3001 ggcagtgagc gcaacgcaat taatgtgagt tagctcactc attaggcacc ccaggcttta
3061 cactttatgc ttccggcata ttctcaataa accctttagg gaaataggcc aggttttcac
3121 cgtaacacgc cacatcttgc gaatatatgt gtagaaactg ccggaaatcg tcgtggtatt
3181 cactccagag cgatgaaaac gtttcagttt gctcatggaa aacggtgtaa caagggtgaa
3241 cactatccca tatcaccagc tcaccgtctt tcattgccat acgaaattcc ggatgagcat
3301 tcatcaggcg ggcaagaatg tgaataaagg ccggataaaa cttgtgctta tttttcttta
3361 cggtctttaa aaaggccgta atatccagct aaacggtctg gttataggta cattgagcaa
3421 ctgactgaaa tgcctcaaaa tgttctttac gatgccattg ggatatatca acggtggtat
3481 atccagtgat ttttttctcc attttagctt ccttagctcc tgaaaatctc gataactcaa
3541 aaaatacgcc cggtagtgat cttatttcat tatggtgaaa gttggaacct cttacgtgcc
3601 gatcaacgtc tcattttcgc caaaagttgg cccagggctt cccggtatca acagggacac
3661 caggatttat ttattctgcg aagtgatctt ccgtcacagg tatttattcg aagacgaaag
3721 ggcatcgcgc gcggggaatt cccgggagag ctcgatatcg catgcggtac ctctagaaga
3781 agcttggaga caaggtaaag gataaaacag cacaattcca agaaaaacac gatttagaac
3841 ctaaaaagaa cgaatttgaa ctaactcata accgagaggt aaaaaaagaa cgaagtcgag
3901 atcagggaat gagtttataa aataaaaaaa gcacctgaaa aggtgtcttt ttttgatggt
3961 tttgaacttg ttctttctta tcttgataca tatagaaata acgtcatttt tattttagtt
4021 gctgaaaggt gcgttgaagt gttggtatgt atgtgtttta aagtattgaa aacccttaaa
4081 attggttgca cagaaaaacc ccatctgtta aagttataag tgactaaaca aataactaaa
4141 tagatggggg tttcttttaa tattatgtgt cctaatagta gcatttattc agatgaaaaa
4201 tcaagggttt tagtggacaa gacaaaaagt ggaaaagtga gaccatggag agaaaagaaa
4261 atcgctaatg ttgattactt tgaacttctg catattcttg aatttaaaaa ggctgaaaga
4321 gtaaaagatt gtgctgaaat attagagtat aaacaaaatc gtgaaacagg cgaaagaaag
4381 ttgtatcgag tgtggttttg taaatccagg ctttgtccaa tgtgcaactg gaggagagca
4441 atgaaacatg gcattcagtc acaaaaggtt gttgctgaag ttattaaaca aaagccaaca
4501 gttcgttggt tgtttctcac attaacagtt aaaaatgttt atgatggcga agaattaaat
4561 aagagtttgt cagatatggc tcaaggattt cgccgaatga tgcaatataa aaaaattaat
4621 aaaaatcttg ttggttttat gcgtgcaacg gaagtgacaa taaataataa agataattct
4681 tataatcagc acatgcatgt attggtatgt gtggaaccaa cttattttaa gaatacagaa
4741 aactacgtga atcaaaaaca atggattcaa ttttggaaaa aggcaatgaa attagactat
4801 gatccaaatg taaaagttca aatgattcga ccgaaaaata aatataaatc ggatatacaa
4861 tcggcaattg acgaaactgc aaaatatcct gtaaaggata cggattttat gaccgatgat
4921 gaagaaaaga atttgaaacg tttgtctgat ttggaggaag gtttacaccg taaaaggtta
4981 atctcctatg gtggtttgtt aaaagaaata cataaaaaat taaaccttga tgacacagaa
5041 gaaggcgatt tgattcatac agatgatgac gaaaaagccg atgaagatgg attttctatt
5101 attgcaatgt ggaattggga acggaaaaat tattttatta aagagtagtt caacaaacgg
5161 gccagtttgt tgaagattag atgctataat tgttattaaa aggattgaag gatgcttagg
5221 aagacgagtt attaatagct gaataagaac ggtgctctcc aaatattctt atttagaaaa
5281 gcaaatctaa aattatctga aaagggaatg agaatagtga atggaccaat aataatgact
5341 agagaagaaa gaatgaagat tgttcatgaa attaaggaac gaatattgga taaatatggg
5401 gatgatgtta aggctattgg tgtttatggc tctcttggtc gtcagactga tgggccctat
5461 tcggatattg agatgatgtg tgtcatgtca acagaggaag cagagttcag ccatgaatgg
5521 acaaccggtg agtggaaggt ggaagtgaat tttgatagcg aagagattct actagattat
5581 gcatctcagg tggaatcaga ttggccgctt acacatggtc aatttttctc tattttgccg
5641 atttatgatt caggtggata cttagagaaa gtgtatcaaa ctgctaaatc ggtagaagcc
5701 caaacgttcc acgatgcgat ttgtgccctt atcgtagaag agctgtttga atatgcaggc
5761 aaatggcgta atattcgtgt gcaaggaccg acaacatttc taccatcctt gactgtacag
5821 gtagcaatgg caggtgccat gttgattggt ctgcatcatc gcatctgtta tacgacgagc
5881 gcttcggtct taactgaagc agttaagcaa tcagatcttc cttcaggtta tgaccatctg
5941 tgccagttcg taatgtctgg tcaactttcc gactctgaga aacttctgga atcgctagag
6001 aatttctgga atgggattca ggagtggaca gaacgacacg gatatatagt ggatgtgtca
6061 aaacgcatac cattttgaac gatgacctct aataattgtt aatcatgttg gttacgtatt
6121 tattaacttc tcctagtatt agtaattatc atggctgtca tggcgcatta acggaataaa
6181 gggtgtgctt aaatcgggcc attttgcgta ataagaaaaa ggattaatta tgagcgaatt
6241 gaattaataa taaggtaata gatttacatt agaaaatgaa aggggatttt atgcgtgaga
6301 atgttacagt ctatcccggc attgccagtc ggggatatta aaaagagtat aggtttttat
6361 tgcgataaac taggtttcac tttggttcac catgaagatg gattcgcagt tctaatgtgt
6421 aatgaggttc ggattcatct atgggaggca agtgatgaag gctggcgctc tcgtagtaat
6481 gattcaccgg tttgtacagg tgcggagtcg tttattgctg gtactgctag ttgccgcatt
6541 gaagtagagg gaattgatga attatatcaa catattaagc ctttgggcat tttgcacccc
6601 aatacatcat taaaagatca gtggtgggat gaacgagact ttgcagtaat tgatcccgac
6661 aacaatttga ttagcttttt tcaacaaata aaaagctaaa atctattatt aatctgttca
6721 gcaatcgggc gcgattgctg aataaaagat acgagagacc tctcttgtat cttttttatt
6781 ttgagtggtt ttgtccgtta cactagaaaa ccgaaagaca ataaaaattt tattcttgct
6841 gagtctggct ttcggtaagc tagacaaaac ggacaaaata aaaattggca agggtttaaa
6901 ggtggagatt ttttgagtga tcttctcaaa aaatactacc tgtcccttgc tgatttttaa
6961 acgagcacga gagcaaaacc cccctttgct gaggtggcag agggcaggtt tttttgtttc
7021 ttttttctcg taaaaaaaag aaaggtctta aaggttttat ggttttggtc ggcactgccg
7081 acagcctcgc agagcacaca ctttatgaat ataaagtata gtgtgttata ctttacttgg
7141 aagtggttgc cggaaagagc gaaaatgcct cacatttgtg ccacctaaaa aggagcgatt
7201 ta
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pMA5枯草胞内质粒
别称: pMA5
| 启动子: | HpaII promoter |
|---|---|
| 复制子: | ColE1 Ori，F1 Ori |
| 质粒分类: | 枯草杆菌质粒；枯草游离质粒；枯草胞内质粒 |
| 质粒大小: | 7202bp |
| 原核抗性: | Amp |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
质粒属性
| 载体宿主： | 枯草杆菌 |
|---|---|
| 载体用途： | 蛋白表达 |
| 基因种属： | |
| 基因类型： | |
| 原核抗性： | Amp |
| 真核抗性： | |
| 荧光蛋白： |
质粒简介
pMA5质粒是一个枯草芽孢杆菌表达载体，HpaII promoter驱动目的基因的表达。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 7202 bp ds-DNA circular SYN 08-九月-2017
KEYWORDS pMA5
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 7202)
TITLE Direct Submission
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..7202
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
rep_origin 429..884
/direction=RIGHT
/note="f1 ori"
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
promoter 1006..1110
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/note="AmpR promoter"
CDS 1111..1971
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ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRVDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPAAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
rep_origin 2142..2733
/direction=RIGHT
/note="ori"
/note="high-copy-number colE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
misc_feature 5317..6078
/note="Kan"
misc_feature 6934..3
/note="HpaII promoter"
ORIGIN
1 catatgagtt atgcagtttg tagaatgcaa aaagtgaaat cagggggatc ctctagagtc
61 gagctcaagc tagcttggta cgtaccagat ctgagatcac gcgttctaga ggtcgaaatt
121 cacctcgaaa gcaagctgat aaaccgatac aattaaaggc tccttttgga gccttttttt
181 ttggagattt tcaacgtgaa aaaattatta ttcgcaattc caagctaatt cacctcgaaa
241 gcaagctgat aaaccgatac aattaaaggc tccttttgga gccttttttt ttggagattt
301 tcaacgtgaa aaaattatta ttcgcaattc caagctctgc ctcgcgcgtt tcggtgatga
361 cggtgaaaac ctctgacaca tgcagctccc ggagacggtc acagcttgtc tgtaagcgga
421 tgcagatcac gcgccctgta gcggcgcatt aagcgcggcg ggtgtggtgg ttacgcgcag
481 cgtgaccgct acacttgcca gcgccctagc gcccgctcct ttcgctttct tcccttcctt
541 tctcgccacg ttcgccggct ttccccgtca agctctaaat cgggggctcc ctttagggtt
601 ccgatttagt gctttacggc acctcgaccc caaaaaactt gattagggtg atggttcacg
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721 taatagtgga ctcttgttcc aaactggaac aacactcaac cctatctcgg tctattcttt
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961 ggggataacg caggaaagac aggtggcact tttcggggaa atgtgcgcgg aacccctatt
1021 tgtttatttt tctaaataca ttcaaatatg tatccgctca tgagacaata accctgataa
1081 atgcttcaat aatattgaaa aaggaagagt atgagtattc aacatttccg tgtcgccctt
1141 attccctttt ttgcggcatt ttgccttcct gtttttgctc acccagaaac gctggtgaaa
1201 gtaaaagatg ctgaagatca gttgggtgca cgagtgggtt acatcgaact ggatctcaac
1261 agcggtaaga tccttgagag ttttcgcccc gaagaacgtt ttccaatgat gagcactttt
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1441 cttacggatg gcatgacagt aagagaatta tgcagtgctg ccataaccat gagtgataac
1501 actgcggcca acttacttct gacaacgatc ggaggaccga aggagctaac cgcttttttg
1561 cacaacatgg gggatcatgt aactcgcctt gatcgttggg aaccggagct gaatgaagcc
1621 ataccaaacg acgagcgtga caccacgatg cctgcagcaa tggcaacaac gttgcgcaaa
1681 ctattaactg gcgaactact tactctagct tcccggcaac aattaataga ctggatggag
1741 gcggataaag ttgcaggacc acttctgcgc tcggcccttc cggctggctg gtttattgct
1801 gataaatctg gagccggtga gcgtgggtct cgcggtatca ttgcagcact ggggccagat
1861 ggtaagccct cccgtatcgt agttatctac acgacgggga gtcaggcaac tatggatgaa
1921 cgaaatagac agatcgctga gataggtgcc tcactgatta agcattggta actgtcagac
1981 caagtttact catatatact ttagattgat ttaaaacttc atttttaatt taaaaggatc
2041 taggtgaaga tcctttttga taatctcatg accaaaatcc cttaacgtga gttttcgttc
2101 cactgagcgt cagaccccgt agaaaagatc aaaggatctt cttgagatcc tttttttctg
2161 cgcgtaatct gctgcttgca aacaaaaaaa ccaccgctac cagcggtggt ttgtttgccg
2221 gatcaagagc taccaactct ttttccgaag gtaactggct tcagcagagc gcagatacca
2281 aatactgtcc ttctagtgta gccgtagtta ggccaccact tcaagaactc tgtagcaccg
2341 cctacatacc tcgctctgct aatcctgtta ccagtggctg ctgccagtgg cgataagtcg
2401 tgtcttaccg ggttggactc aagacgatag ttaccggata aggcgcagcg gtcgggctga
2461 acggggggtt cgtgcacaca gcccagcttg gagcgaacga cctacaccga agtactgaga
2521 tacctacagc gtgagctatg agaaagcgcc acgcttcccg aagggagaaa ggcggacagg
2581 tatccggtaa gcggcagggt cggaacagga gagcgcacga gggagcttcc agggggaaac
2641 gcctggtatc tttatagtcc tgtcgggttt cgccacctct gacttgagcg tcgatttttg
2701 tgatgctcgt caggggggcg gagcctatgg aaaaacgcca gcaacgcggc ctttttacgg
2761 ttcctggcct tttgctggcc ttttgctcac atgttctttc ctgcgttatc ccctgattct
2821 gtggataacc gtattaccgc ctttgagtga gctgataccg ctcgccgcag ccgaacgacc
2881 gagcgcagcg agtcagtgag cgaggaagcg gaagagcgcc caatacgcaa accgcctctc
2941 cccgcgcgtt ggccgattca ttaatgcagc tggcacgaca ggtttcccga ctggaaagcg
3001 ggcagtgagc gcaacgcaat taatgtgagt tagctcactc attaggcacc ccaggcttta
3061 cactttatgc ttccggcata ttctcaataa accctttagg gaaataggcc aggttttcac
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3181 cactccagag cgatgaaaac gtttcagttt gctcatggaa aacggtgtaa caagggtgaa
3241 cactatccca tatcaccagc tcaccgtctt tcattgccat acgaaattcc ggatgagcat
3301 tcatcaggcg ggcaagaatg tgaataaagg ccggataaaa cttgtgctta tttttcttta
3361 cggtctttaa aaaggccgta atatccagct aaacggtctg gttataggta cattgagcaa
3421 ctgactgaaa tgcctcaaaa tgttctttac gatgccattg ggatatatca acggtggtat
3481 atccagtgat ttttttctcc attttagctt ccttagctcc tgaaaatctc gataactcaa
3541 aaaatacgcc cggtagtgat cttatttcat tatggtgaaa gttggaacct cttacgtgcc
3601 gatcaacgtc tcattttcgc caaaagttgg cccagggctt cccggtatca acagggacac
3661 caggatttat ttattctgcg aagtgatctt ccgtcacagg tatttattcg aagacgaaag
3721 ggcatcgcgc gcggggaatt cccgggagag ctcgatatcg catgcggtac ctctagaaga
3781 agcttggaga caaggtaaag gataaaacag cacaattcca agaaaaacac gatttagaac
3841 ctaaaaagaa cgaatttgaa ctaactcata accgagaggt aaaaaaagaa cgaagtcgag
3901 atcagggaat gagtttataa aataaaaaaa gcacctgaaa aggtgtcttt ttttgatggt
3961 tttgaacttg ttctttctta tcttgataca tatagaaata acgtcatttt tattttagtt
4021 gctgaaaggt gcgttgaagt gttggtatgt atgtgtttta aagtattgaa aacccttaaa
4081 attggttgca cagaaaaacc ccatctgtta aagttataag tgactaaaca aataactaaa
4141 tagatggggg tttcttttaa tattatgtgt cctaatagta gcatttattc agatgaaaaa
4201 tcaagggttt tagtggacaa gacaaaaagt ggaaaagtga gaccatggag agaaaagaaa
4261 atcgctaatg ttgattactt tgaacttctg catattcttg aatttaaaaa ggctgaaaga
4321 gtaaaagatt gtgctgaaat attagagtat aaacaaaatc gtgaaacagg cgaaagaaag
4381 ttgtatcgag tgtggttttg taaatccagg ctttgtccaa tgtgcaactg gaggagagca
4441 atgaaacatg gcattcagtc acaaaaggtt gttgctgaag ttattaaaca aaagccaaca
4501 gttcgttggt tgtttctcac attaacagtt aaaaatgttt atgatggcga agaattaaat
4561 aagagtttgt cagatatggc tcaaggattt cgccgaatga tgcaatataa aaaaattaat
4621 aaaaatcttg ttggttttat gcgtgcaacg gaagtgacaa taaataataa agataattct
4681 tataatcagc acatgcatgt attggtatgt gtggaaccaa cttattttaa gaatacagaa
4741 aactacgtga atcaaaaaca atggattcaa ttttggaaaa aggcaatgaa attagactat
4801 gatccaaatg taaaagttca aatgattcga ccgaaaaata aatataaatc ggatatacaa
4861 tcggcaattg acgaaactgc aaaatatcct gtaaaggata cggattttat gaccgatgat
4921 gaagaaaaga atttgaaacg tttgtctgat ttggaggaag gtttacaccg taaaaggtta
4981 atctcctatg gtggtttgtt aaaagaaata cataaaaaat taaaccttga tgacacagaa
5041 gaaggcgatt tgattcatac agatgatgac gaaaaagccg atgaagatgg attttctatt
5101 attgcaatgt ggaattggga acggaaaaat tattttatta aagagtagtt caacaaacgg
5161 gccagtttgt tgaagattag atgctataat tgttattaaa aggattgaag gatgcttagg
5221 aagacgagtt attaatagct gaataagaac ggtgctctcc aaatattctt atttagaaaa
5281 gcaaatctaa aattatctga aaagggaatg agaatagtga atggaccaat aataatgact
5341 agagaagaaa gaatgaagat tgttcatgaa attaaggaac gaatattgga taaatatggg
5401 gatgatgtta aggctattgg tgtttatggc tctcttggtc gtcagactga tgggccctat
5461 tcggatattg agatgatgtg tgtcatgtca acagaggaag cagagttcag ccatgaatgg
5521 acaaccggtg agtggaaggt ggaagtgaat tttgatagcg aagagattct actagattat
5581 gcatctcagg tggaatcaga ttggccgctt acacatggtc aatttttctc tattttgccg
5641 atttatgatt caggtggata cttagagaaa gtgtatcaaa ctgctaaatc ggtagaagcc
5701 caaacgttcc acgatgcgat ttgtgccctt atcgtagaag agctgtttga atatgcaggc
5761 aaatggcgta atattcgtgt gcaaggaccg acaacatttc taccatcctt gactgtacag
5821 gtagcaatgg caggtgccat gttgattggt ctgcatcatc gcatctgtta tacgacgagc
5881 gcttcggtct taactgaagc agttaagcaa tcagatcttc cttcaggtta tgaccatctg
5941 tgccagttcg taatgtctgg tcaactttcc gactctgaga aacttctgga atcgctagag
6001 aatttctgga atgggattca ggagtggaca gaacgacacg gatatatagt ggatgtgtca
6061 aaacgcatac cattttgaac gatgacctct aataattgtt aatcatgttg gttacgtatt
6121 tattaacttc tcctagtatt agtaattatc atggctgtca tggcgcatta acggaataaa
6181 gggtgtgctt aaatcgggcc attttgcgta ataagaaaaa ggattaatta tgagcgaatt
6241 gaattaataa taaggtaata gatttacatt agaaaatgaa aggggatttt atgcgtgaga
6301 atgttacagt ctatcccggc attgccagtc ggggatatta aaaagagtat aggtttttat
6361 tgcgataaac taggtttcac tttggttcac catgaagatg gattcgcagt tctaatgtgt
6421 aatgaggttc ggattcatct atgggaggca agtgatgaag gctggcgctc tcgtagtaat
6481 gattcaccgg tttgtacagg tgcggagtcg tttattgctg gtactgctag ttgccgcatt
6541 gaagtagagg gaattgatga attatatcaa catattaagc ctttgggcat tttgcacccc
6601 aatacatcat taaaagatca gtggtgggat gaacgagact ttgcagtaat tgatcccgac
6661 aacaatttga ttagcttttt tcaacaaata aaaagctaaa atctattatt aatctgttca
6721 gcaatcgggc gcgattgctg aataaaagat acgagagacc tctcttgtat cttttttatt
6781 ttgagtggtt ttgtccgtta cactagaaaa ccgaaagaca ataaaaattt tattcttgct
6841 gagtctggct ttcggtaagc tagacaaaac ggacaaaata aaaattggca agggtttaaa
6901 ggtggagatt ttttgagtga tcttctcaaa aaatactacc tgtcccttgc tgatttttaa
6961 acgagcacga gagcaaaacc cccctttgct gaggtggcag agggcaggtt tttttgtttc
7021 ttttttctcg taaaaaaaag aaaggtctta aaggttttat ggttttggtc ggcactgccg
7081 acagcctcgc agagcacaca ctttatgaat ataaagtata gtgtgttata ctttacttgg
7141 aagtggttgc cggaaagagc gaaaatgcct cacatttgtg ccacctaaaa aggagcgatt
7201 ta
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质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P4654/pCMV-SPORT6-SLC39A3人源基因质粒 |
| P4655/pCMV-SPORT6-AKAP7人源基因质粒 |
| P4656/pCMV-SPORT6-MRPS11人源基因质粒 |
| P4657/pCMV-SPORT6-YIPF6人源基因质粒 |
| P4658/pCMV-SPORT6-TMOD3人源基因质粒 |
| P4659/pCMV-SPORT6-CXCL6人源基因质粒 |
| P4660/pCMV-SPORT6-C4orf18人源基因质粒 |
| P4661/pCMV-SPORT6-SMAD2人源基因质粒 |
| P4662/pCMV-SPORT6-SAV1人源基因质粒 |
| P4663/pCMV-SPORT6-API5人源基因质粒 |
| P4664/pCMV-SPORT6-PBX3人源基因质粒 |
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文献和实验相关实验
Marburg遗传背景清楚，是研究枯草芽孢杆菌的标准菌株；AS1作为胞内表达的备用菌株，常用于表达外源蛋白。而胞外蛋白酶缺陷菌株WB800N能有效解决由于枯草芽孢杆菌丰富的蛋白酶导致的蛋白表达产物降解问题。 2 给力的表达载体 大部分的枯草芽孢杆菌不含内源性质粒，并且一般不能识别大肠杆菌中的启动子。最初的枯草芽孢杆菌载体源于金黄色葡萄球菌，其结构不稳定并易丢失。现在普遍使用的质粒载体是由枯草芽孢杆菌隐性质粒与大肠杆菌质粒构成的穿梭载体，可在大肠杆菌中完成基因片段的连接克隆
，或是感受态污染（二）筛选标记二、园友们的经验与建议1、一般不需要有能诱导表达的重组酶基因来进行有效地同源重组。除非你的菌株是重组缺限型的，这另当别论。当然，在做自杀性质粒是需要考虑交换臂的长度，臂越长突变菌株越容易得到，筛先的工作量越少。一般，在交换的双臂保证有1kb左右的同源序列，可提高其交换效率。2、Q:如果我想构建枯草芽胞杆菌的某个基因的突变株,(1)在体外将该基因进行突变;(2)在该突变因两端接上与染色体上该基因两端相同的核苷酸序列;(3)将该DNA片段重组入某大肠杆菌的质粒中;(4)将重组质粒
-GFP 等）以及其他应用的质粒。根据质粒的拷贝数不同，又可以分为高拷贝质粒（质粒可以在细胞内复制成几百个拷贝）和低拷贝质粒（质粒在细胞内只有＜20 个拷贝）。质粒的拷贝数通常受到复制子的调控。 质粒上通常会带有多种元件，例如，复制起始位点（ORI），抗性基因，多克隆位点，启动子，终止子，标签序列等等。质粒上至少要带有复制位点（ORI），否则无法进行复制；除了一些特殊质粒（如 minicircle plasmid）之外，绝大多数质粒都带有抗性基因，用于抗生素筛选。多克隆位点可以通过酶切，酶连或者同源
pMA5枯草胞内质粒
￥100 - 1000
