pEYFP-Golgi高尔基体定位质粒

基本信息
名称：pEYFP-Golgi高尔基体定位质粒
别称: pEYFP-Golgi

启动子:	CMV
复制子:	pUC
终止子:	SV40 poly(A) signal
质粒分类:	哺乳细胞，荧光蛋白报告载体
质粒大小:	4918bp
原核抗性:	Kan
筛选标记:	G418
克隆菌株:	DH5a
培养条件:	37度
表达宿主:	哺乳细胞
诱导方式:	无须诱导，瞬时表达
5'测序引物:	CMV-F：CGCAAATGGGCGGTAGGCGTG
3'测序引物:	根据序列设计引物

质粒属性

载体宿主：	哺乳细胞
载体用途：	亚细胞定位
基因种属：
基因类型：	ORF
原核抗性：	Kan
真核抗性：	Neo/G418
荧光蛋白：	黄色

质粒简介


质粒图谱


质粒序列
LOCUS       Exported                4918 bp ds-DNA    circular SYN 20-10-2015
DEFINITION  .
ACCESSION   .
VERSION     .
KEYWORDS    Untitled
SOURCE      synthetic DNA construct
  ORGANISM  synthetic DNA construct
REFERENCE   1  (bases 1 to 4918)
  AUTHORS   admin
  TITLE     Direct Submission
  JOURNAL   Exported 2015-10-20   from MLCC
            http://www.miaolingbio.com
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..4918
                     /organism="synthetic DNA construct"
                     /mol_type="other DNA"
     enhancer        61..364
                     /note="CMV enhancer"
                     /note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
     promoter        365..568
                     /note="CMV promoter"
                     /note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early 
                     promoter"
     CDS             864..1583
                     /codon_start=1
                     /product="enhanced YFP"
                     /note="EYFP"
                     /note="mammalian codon-optimized"
                     /translation="MVSKGEELFTGVVPILVELDGDVNGHKFSVSGEGEGDATYGKLTL
                     KFICTTGKLPVPWPTLVTTFGYGLQCFARYPDHMKQHDFFKSAMPEGYVQERTIFFKDD
                     GNYKTRAEVKFEGDTLVNRIELKGIDFKEDGNILGHKLEYNYNSHNVYIMADKQKNGIK
                     VNFKIRHNIEDGSVQLADHYQQNTPIGDGPVLLPDNHYLSYQSALSKDPNEKRDHMVLL
                     EFVTAAGITLGMDELYK"
     polyA_signal    1706..1827
                     /note="SV40 poly(A) signal"
                     /note="SV40 polyadenylation signal"
     rep_origin      complement(1834..2289)
                     /direction=LEFT
                     /note="f1 ori"
                     /note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow 
                     indicates direction of (+) strand synthesis"
     promoter        2316..2420
                     /gene="bla"
                     /note="AmpR promoter"
     promoter        2422..2779
                     /note="SV40 promoter"
                     /note="SV40 enhancer and early promoter"
     rep_origin      2630..2765
                     /note="SV40 ori"
                     /note="SV40 origin of replication"
     CDS             2814..3608
                     /codon_start=1
                     /gene="aph(3')-II (or nptII)"
                     /product="aminoglycoside phosphotransferase from Tn5"
                     /note="NeoR/KanR"
                     /note="confers resistance to neomycin, kanamycin, and G418 
                     (Geneticin(R))"
                     /translation="MIEQDGLHAGSPAAWVERLFGYDWAQQTIGCSDAAVFRLSAQGRP
                     VLFVKTDLSGALNELQDEAARLSWLATTGVPCAAVLDVVTEAGRDWLLLGEVPGQDLLS
                     SHLAPAEKVSIMADAMRRLHTLDPAT-CPFDHQAKHRIERARTRMEAGLVDQDDLDEEHQ
                     GLAPAELFARLKASMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRYQDIA
                     LATRDIAEELGGEWADRFLVLYGIAAPDSQRIAFYRLLDEFF"
     polyA_signal    3840..3887
                     /note="HSV TK poly(A) signal"
                     /note="herpesvirus thymidine kinase polyadenylation signal"
     rep_origin      4216..4804
                     /direction=RIGHT
                     /note="ori"
                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 
                     replication"
ORIGIN
        1 tagttattaa tagtaatcaa ttacggggtc attagttcat agcccatata tggagttccg
       61 cgttacataa cttacggtaa atggcccgcc tggctgaccg cccaacgacc cccgcccatt
      121 gacgtcaata atgacgtatg ttcccatagt aacgccaata gggactttcc attgacgtca
      181 atgggtggag tatttacggt aaactgccca cttggcagta catcaagtgt atcatatgcc
      241 aagtacgccc cctattgacg tcaatgacgg taaatggccc gcctggcatt atgcccagta
      301 catgacctta tgggactttc ctacttggca gtacatctac gtattagtca tcgctattac
      361 catggtgatg cggttttggc agtacatcaa tgggcgtgga tagcggtttg actcacgggg
      421 atttccaagt ctccacccca ttgacgtcaa tgggagtttg ttttggcacc aaaatcaacg
      481 ggactttcca aaatgtcgta acaactccgc cccattgacg caaatgggcg gtaggcgtgt
      541 acggtgggag gtctatataa gcagagctgg tttagtgaac cgtcagatcc gctagcatga
      601 ggcttcggga gccgctcctg agcggcagcg ccgcgatgcc aggcgcgtcc ctacagcggg
      661 cctgccgcct gctcgtggcc gtctgcgctc tgcaccttgg cgtcaccctc gtttactacc
      721 tggctggccg cgacctgagc cgcctgcccc aactggtcgg agtctccaca ccgctgcagg
      781 gcggctcgaa cagtgccgcc gccatcgggc agtcctccgg ggagctccgg accggagggg
      841 ccaaggatcc accggtcgcc accatggtga gcaagggcga ggagctgttc accggggtgg
      901 tgcccatcct ggtcgagctg gacggcgacg taaacggcca caagttcagc gtgtccggcg
      961 agggcgaggg cgatgccacc tacggcaagc tgaccctgaa gttcatctgc accaccggca
     1021 agctgcccgt gccctggccc accctcgtga ccaccttcgg ctacggcctg cagtgcttcg
     1081 cccgctaccc cgaccacatg aagcagcacg acttcttcaa gtccgccatg cccgaaggct
     1141 acgtccagga gcgcaccatc ttcttcaagg acgacggcaa ctacaagacc cgcgccgagg
     1201 tgaagttcga gggcgacacc ctggtgaacc gcatcgagct gaagggcatc gacttcaagg
     1261 aggacggcaa catcctgggg cacaagctgg agtacaacta caacagccac aacgtctata
     1321 tcatggccga caagcagaag aacggcatca aggtgaactt caagatccgc cacaacatcg
     1381 aggacggcag cgtgcagctc gccgaccact accagcagaa cacccccatc ggcgacggcc
     1441 ccgtgctgct gcccgacaac cactacctga gctaccagtc cgccctgagc aaagacccca
     1501 acgagaagcg cgatcacatg gtcctgctgg agttcgtgac cgccgccggg atcactctcg
     1561 gcatggacga gctgtacaag taaagcggcc gcgactctag atcataatca gccataccac
     1621 atttgtagag gttttacttg ctttaaaaaa cctcccacac ctccccctga acctgaaaca
     1681 taaaatgaat gcaattgttg ttgttaactt gtttattgca gcttataatg gttacaaata
     1741 aagcaatagc atcacaaatt tcacaaataa agcatttttt tcactgcatt ctagttgtgg
     1801 tttgtccaaa ctcatcaatg tatcttaagg cgtaaattgt aagcgttaat attttgttaa
     1861 aattcgcgtt aaatttttgt taaatcagct cattttttaa ccaataggcc gaaatcggca
     1921 aaatccctta taaatcaaaa gaatagaccg agatagggtt gagtgttgtt ccagtttgga
     1981 acaagagtcc actattaaag aacgtggact ccaacgtcaa agggcgaaaa accgtctatc
     2041 agggcgatgg cccactacgt gaaccatcac cctaatcaag ttttttgggg tcgaggtgcc
     2101 gtaaagcact aaatcggaac cctaaaggga gcccccgatt tagagcttga cggggaaagc
     2161 cggcgaacgt ggcgagaaag gaagggaaga aagcgaaagg agcgggcgct agggcgctgg
     2221 caagtgtagc ggtcacgctg cgcgtaacca ccacacccgc cgcgcttaat gcgccgctac
     2281 agggcgcgtc aggtggcact tttcggggaa atgtgcgcgg aacccctatt tgtttatttt
     2341 tctaaataca ttcaaatatg tatccgctca tgagacaata accctgataa atgcttcaat
     2401 aatattgaaa aaggaagagt cctgaggcgg aaagaaccag ctgtggaatg tgtgtcagtt
     2461 agggtgtgga aagtccccag gctccccagc aggcagaagt atgcaaagca tgcatctcaa
     2521 ttagtcagca accaggtgtg gaaagtcccc aggctcccca gcaggcagaa gtatgcaaag
     2581 catgcatctc aattagtcag caaccatagt cccgccccta actccgccca tcccgcccct
     2641 aactccgccc agttccgccc attctccgcc ccatggctga ctaatttttt ttatttatgc
     2701 agaggccgag gccgcctcgg cctctgagct attccagaag tagtgaggag gcttttttgg
     2761 aggcctaggc ttttgcaaag atcgatcaag agacaggatg aggatcgttt cgcatgattg
     2821 aacaagatgg attgcacgca ggttctccgg ccgcttgggt ggagaggcta ttcggctatg
     2881 actgggcaca acagacaatc ggctgctctg atgccgccgt gttccggctg tcagcgcagg
     2941 ggcgcccggt tctttttgtc aagaccgacc tgtccggtgc cctgaatgaa ctgcaagacg
     3001 aggcagcgcg gctatcgtgg ctggccacga cgggcgttcc ttgcgcagct gtgctcgacg
     3061 ttgtcactga agcgggaagg gactggctgc tattgggcga agtgccgggg caggatctcc
     3121 tgtcatctca ccttgctcct gccgagaaag tatccatcat ggctgatgca atgcggcggc
     3181 tgcatacgct tgatccggct acctgcccat tcgaccacca agcgaaacat cgcatcgagc
     3241 gagcacgtac tcggatggaa gccggtcttg tcgatcagga tgatctggac gaagagcatc
     3301 aggggctcgc gccagccgaa ctgttcgcca ggctcaaggc gagcatgccc gacggcgagg
     3361 atctcgtcgt gacccatggc gatgcctgct tgccgaatat catggtggaa aatggccgct
     3421 tttctggatt catcgactgt ggccggctgg gtgtggcgga ccgctatcag gacatagcgt
     3481 tggctacccg tgatattgct gaagagcttg gcggcgaatg ggctgaccgc ttcctcgtgc
     3541 tttacggtat cgccgctccc gattcgcagc gcatcgcctt ctatcgcctt cttgacgagt
     3601 tcttctgagc gggactctgg ggttcgaaat gaccgaccaa gcgacgccca acctgccatc
     3661 acgagatttc gattccaccg ccgccttcta tgaaaggttg ggcttcggaa tcgttttccg
     3721 ggacgccggc tggatgatcc tccagcgcgg ggatctcatg ctggagttct tcgcccaccc
     3781 tagggggagg ctaactgaaa cacggaagga gacaataccg gaaggaaccc gcgctatgac
     3841 ggcaataaaa agacagaata aaacgcacgg tgttgggtcg tttgttcata aacgcggggt
     3901 tcggtcccag ggctggcact ctgtcgatac cccaccgaga ccccattggg gccaatacgc
     3961 ccgcgtttct tccttttccc caccccaccc cccaagttcg ggtgaaggcc cagggctcgc
     4021 agccaacgtc ggggcggcag gccctgccat agcctcaggt tactcatata tactttagat
     4081 tgatttaaaa cttcattttt aatttaaaag gatctaggtg aagatccttt ttgataatct
     4141 catgaccaaa atcccttaac gtgagttttc gttccactga gcgtcagacc ccgtagaaaa
     4201 gatcaaagga tcttcttgag atcctttttt tctgcgcgta atctgctgct tgcaaacaaa
     4261 aaaaccaccg ctaccagcgg tggtttgttt gccggatcaa gagctaccaa ctctttttcc
     4321 gaaggtaact ggcttcagca gagcgcagat accaaatact gtccttctag tgtagccgta
     4381 gttaggccac cacttcaaga actctgtagc accgcctaca tacctcgctc tgctaatcct
     4441 gttaccagtg gctgctgcca gtggcgataa gtcgtgtctt accgggttgg actcaagacg
     4501 atagttaccg gataaggcgc agcggtcggg ctgaacgggg ggttcgtgca cacagcccag
     4561 cttggagcga acgacctaca ccgaactgag atacctacag cgtgagctat gagaaagcgc
     4621 cacgcttccc gaagggagaa aggcggacag gtatccggta agcggcaggg tcggaacagg
     4681 agagcgcacg agggagcttc cagggggaaa cgcctggtat ctttatagtc ctgtcgggtt
     4741 tcgccacctc tgacttgagc gtcgattttt gtgatgctcg tcaggggggc ggagcctatg
     4801 gaaaaacgcc agcaacgcgg cctttttacg gttcctggcc ttttgctggc cttttgctca
     4861 catgttcttt cctgcgttat cccctgattc tgtggataac cgtattaccg ccatgcat
//

质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
         收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
         1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              ①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
              ②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
              ③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
              ④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
              ⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
              ⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
        2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
              四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
        3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
        4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              直接挑取单菌落至液体培养基中。
        5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
              单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
        6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。

二、转化图片

P2871/pENTR223-SERBP1-C1108T人源基因质粒

P2872/pENTR223-DCTN2人源基因质粒

P2873/pENTR223-NOL4（343-1611bp）人源基因质粒

P2888/pENTR223-GOT2-T1283C人源基因质粒

P2889/pENTR223-UGCG-G1167T（2同义突变）人源基因质粒

P2890/pENTR223-RMDN2（56-1233bp）人源基因质粒

P2891/pENTR223-RCOR3-A299G人源基因质粒

P2892/pENTR223-BBOX1（2同义突变）人源基因质粒

P2893/pENTR223-RABEPK（3点突变）人源基因质粒

P2894/pENTR223-AP2M1（2同义突变）人源基因质粒

P2895/pENTR223-SETDB1人源基因质粒

P2896/pENTR223-SLC18A1（1-1146bp）人源基因质粒