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无锡云萃生物
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云萃
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文献和实验Active Motif ChIP 技术专家经验分享:如何才能做好 ChIP 实验?
。ChIP 实验原理ChIP 技术的原理:1)通过甲醛将染色质上的 DNA 和目的蛋白交联,2)通过超声或酶解的方法将染色质片段化,3)包含有目的蛋白的染色质片段通过抗体富集纯化,4)通过加热解除 DNA 和目的蛋白的交联,5)通过蛋白酶和 RNA 酶消化去除目的染色质的蛋白和 RNA 之后,将目的 DNA 纯化出来。6)得到的 DNA 可以通过 PCR 检测目标区域的 DNA 是否被目的蛋白富集,或者通过 DNA 测序的方式检测目的蛋白在全基因组上的分布[5]。ChIP 原理看似简单,但要想得到高质
一、固定剂大多数神经激素、肽类物质为水溶性,在用于免疫细胞化学研究之前,常需固定。但肽类和蛋白质的物理、化学性质不同,因而对不同的固定方法或固定剂的反应也不尽相同。某些固定剂甚至可同时破坏和/或保护同一抗原的不同抗原决定簇。因此,在进行免疫细胞化学研究之前,很有必要了解所要研究的物质(蛋白质或肽类)的化学性质,并根据需要来选择适宜的固定剂(或固定方法)以及改进固定条件。目前,免疫细胞化学研究中常用的固定剂仍为醛类固定剂,其中以甲醛类和戊二醛最为常用。在此,简要介绍几种目前较为常用和推荐的固定
实验试剂 1. 0.5M EDTA: EDTA 16.61g加ddH2O至80ml, 调pH至8.0, 定容至100ml。 2.50mM NaAc: NaAc 3.4g 加ddH2O至500ml, 加DEPC 0.5ml, 振荡, 37℃过夜,高压灭菌。 3. 5×甲醛凝胶电泳缓冲液: MOPS [3-(N-玛琳代)丙磺酸] 10.3g加50mM NaAc 400ml, 用2N NaOH调pH至7.0, 再加入0.5M
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