放.线.菌.素D,50-⑦6-0

类器官培养与应用——垂体瘤类器官

5 ml 组织解离液的离心管中，轻轻震荡混匀后，放置于 37℃ 培养箱中解离 5-10min，解离期间轻轻震荡或吹打混匀。然后将组织转移至含有 5ml 组织解离液II的离心管中，放置于 37℃ 培养箱中继续解离 5min。 5、解离后的组织用 D-PBS 清洗 2 次后，将悬浮液经过 70μm 细胞筛网过滤，收集解离的细胞。 6、将过滤的细胞悬液在 4℃ 条件下 400g 离心 5min，收集细胞沉淀。 7、若细胞沉淀有明显的红色，则将细胞重悬于 5ml 的红细胞裂解液中，冰上孵育 10min

做原核表达的几点教训和体会

错误。我们实验室合成引物都要先发给purchasing office，然后才由他们与公司交涉。这个office的老太太把引物弄掉了一个碱基。 教训：在实验过程中，再仔细都是不为过的。 引物来了后管壁上贴有序列，但我忽略了。 3.  第二次失败。后来重新构建，转化，诱导。第一次诱导时根本就没带。 然后开始找闷头原因。周一下午5点我就接了DE3菌，由于那天人非常不舒服，去看医生了，等了很久，到第二天中午11点才转接！而且是按1:50转接的！也就是菌在转接之前培养了18

原核表达实验方法

的沉淀，加10 μL 2× 凝胶电泳加样缓冲液，进行SDS-PAGE 。3 ）包涵体的溶解和复性（1）试剂与配制① 缓冲液I：1 mmol / L PMSF8mol /L 尿素10 mmol / L DTT溶于前述裂解缓冲液中。② 缓冲液Ⅱ：50 mmol / L KH2PO41 mmol / L EDTA (pH 8 .0 )50 mmol / L NaCI2 mmol / L 还原型谷胱甘肽1 mmol / L 氧化型谷胱甘肽③ KOH 和HCI 。④ 2×凝胶电泳加样缓冲液。（2）用100 μ