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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
-20
- 保质期:
2年
- 英文名:
pGAPZαC
- 库存:
100
- 供应商:
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格:
干粉/液体
名称:pGAPZαC毕赤酵母质粒
别称: pGAPZαC
| 启动子: | GAP |
|---|---|
| 复制子: | pUC |
| 终止子: | AOX1 TT |
| 质粒大小: | 3251bp |
| 质粒标签: | C-Myc, C-6×His |
| 原核抗性: | Zeo |
| 筛选标记: | Zeo |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
| 表达宿主: | 酵母细胞 |
| 培养条件: | 28℃,YPD |
| 5'测序引物: | pGAP-F:GTCCCTATTTCAATCAATTGAA |
| 3'测序引物: | AOX3:GGCAAATGGCATTCTGACAT |
质粒属性
| 载体宿主: | 酵母菌 |
|---|---|
| 载体用途: | 蛋白表达 |
| 基因种属: | 空载体 |
| 基因类型: | ORF |
| 原核抗性: | Zeo |
| 筛选标记: | Zeo |
| 荧光蛋白: |
质粒简介
甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)的酶在许多生物细胞中包括毕赤酵母,稳定高水平表达。最近GAPDH蛋白编码基因启动子(GAP)被深入研究,并在毕赤酵母中能够高水表达重组蛋白,这取决于使用的碳源(Waterham等 人,,1997)。GAP启动子(PGAP)的重组蛋白表达水平略高于AOX1启动子。
pGAPZ A,B,和C载体(2.9 KB)和pGAPZαB和C(3.1 KB)载体使用GAP启动子在毕赤酵母中稳定表达重组蛋白。重组蛋白表达为为带有C-末端myc抗原表位和C端His标签的融合蛋白。此外,pGAPZα 表达的融合蛋白在N-端带有酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)的α-因子分泌信号肽。这两个系列的载体都提供三个不同读码框的载体,以方便克隆的带有C-端标签和/或N-末端分泌信号肽的载体中。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 3152 bp ds-DNA circular SYN 10-SEP-2016
DEFINITION synthetic circular DNA
KEYWORDS Untitled 14
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 3152)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported Saturday, September 10, 2016 from SnapGene Viewer 3.1.4
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..3152
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
promoter 7..483
/note="GAP promoter"
/note="promoter for Pichia pastoris
glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase"
CDS 832..861
/codon_start=1
/product="Myc (human c-Myc oncogene) epitope tag"
/note="Myc"
/translation="EQKLISEEDL"
CDS 877..894
/codon_start=1
/product="6xHis affinity tag"
/note="6xHis"
/translation="HHHHHH"
terminator 973..1219
/gene="Pichia pastoris AOX1"
/note="AOX1 terminator"
/note="transcription terminator for AOX1"
promoter 1234..1645
/gene="S. cerevisiae TEF1"
/note="TEF1 promoter"
/note="promoter for EF-1-alpha"
promoter 1652..1699
/note="EM7 promoter"
/note="synthetic bacterial promoter "
CDS 1718..2092
/codon_start=1
/gene="Sh ble from Streptoalloteichus hindustanus"
/product="antibiotic-binding protein"
/note="BleoR"
/note="confers resistance to bleomycin, phleomycin, and
Zeocin(TM)"
/translation="MAKLTSAVPVLTARDVAGAVEFWTDRLGFSRDFVEDDFAGVVRDD
VTLFISAVQDQVVPDNTLAWVWVRGLDELYAEWSEVVSTNFRDASGPAMTEIGEQPWGR
EFALRDPAGNCVHFVAEEQD"
terminator 2158..2405
/gene="S. cerevisiae CYC1"
/note="CYC1 terminator"
/note="transcription terminator for CYC1"
rep_origin complement(2480..3068)
/direction=LEFT
/note="ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
ORIGIN
1 agatcttttt tgtagaaatg tcttggtgtc ctcgtccaat caggtagcca tctctgaaat
61 atctggctcc gttgcaactc cgaacgacct gctggcaacg taaaattctc cggggtaaaa
121 cttaaatgtg gagtaatgga accagaaacg tctcttccct tctctctcct tccaccgccc
181 gttaccgtcc ctaggaaatt ttactctgct ggagagcttc ttctacggcc cccttgcagc
241 aatgctcttc ccagcattac gttgcgggta aaacggaggt cgtgtacccg acctagcagc
301 ccagggatgg aaaagtcccg gccgtcgctg gcaataatag cgggcggacg catgtcatga
361 gattattgga aaccaccaga atcgaatata aaaggcgaac acctttccca attttggttt
421 ctcctgaccc aaagacttta aatttaattt atttgtccct atttcaatca attgaacaac
481 tatttcgaaa cgatgagatt tccttcaatt tttactgctg ttttattcgc agcatcctcc
541 gcattagctg ctccagtcaa cactacaaca gaagatgaaa cggcacaaat tccggctgaa
601 gctgtcatcg gttactcaga tttagaaggg gatttcgatg ttgctgtttt gccattttcc
661 aacagcacaa ataacgggtt attgtttata aatactacta ttgccagcat tgctgctaaa
721 gaagaagggg tatctctcga gaagagagag gctgaagcat cgatgaattc acgtggccca
781 gccggccgtc tcggatcggt acctcgagcc gcggcggccg ccagctttct agaacaaaaa
841 ctcatctcag aagaggatct gaatagcgcc gtcgaccatc atcatcatca tcattgagtt
901 ttagccttag acatgactgt tcctcagttc aagttgggca cttacgagaa gaccggtctt
961 gctagattct aatcaagagg atgtcagaat gccatttgcc tgagagatgc aggcttcatt
1021 tttgatactt ttttatttgt aacctatata gtataggatt ttttttgtca ttttgtttct
1081 tctcgtacga gcttgctcct gatcagccta tctcgcagct gatgaatatc ttgtggtagg
1141 ggtttgggaa aatcattcga gtttgatgtt tttcttggta tttcccactc ctcttcagag
1201 tacagaagat taagtgagac cttcgtttgt gcggatcccc cacacaccat agcttcaaaa
1261 tgtttctact ccttttttac tcttccagat tttctcggac tccgcgcatc gccgtaccac
1321 ttcaaaacac ccaagcacag catactaaat tttccctctt tcttcctcta gggtgtcgtt
1381 aattacccgt actaaaggtt tggaaaagaa aaaagagacc gcctcgtttc tttttcttcg
1441 tcgaaaaagg caataaaaat ttttatcacg tttctttttc ttgaaatttt tttttttagt
1501 ttttttctct ttcagtgacc tccattgata tttaagttaa taaacggtct tcaatttctc
1561 aagtttcagt ttcatttttc ttgttctatt acaacttttt ttacttcttg ttcattagaa
1621 agaaagcata gcaatctaat ctaagggcgg tgttgacaat taatcatcgg catagtatat
1681 cggcatagta taatacgaca aggtgaggaa ctaaaccatg gccaagttga ccagtgccgt
1741 tccggtgctc accgcgcgcg acgtcgccgg agcggtcgag ttctggaccg accggctcgg
1801 gttctcccgg gacttcgtgg aggacgactt cgccggtgtg gtccgggacg acgtgaccct
1861 gttcatcagc gcggtccagg accaggtggt gccggacaac accctggcct gggtgtgggt
1921 gcgcggcctg gacgagctgt acgccgagtg gtcggaggtc gtgtccacga acttccggga
1981 cgcctccggg ccggccatga ccgagatcgg cgagcagccg tgggggcggg agttcgccct
2041 gcgcgacccg gccggcaact gcgtgcactt cgtggccgag gagcaggact gacacgtccg
2101 acggcggccc acgggtccca ggcctcggag atccgtcccc cttttccttt gtcgatatca
2161 tgtaattagt tatgtcacgc ttacattcac gccctccccc cacatccgct ctaaccgaaa
2221 aggaaggagt tagacaacct gaagtctagg tccctattta tttttttata gttatgttag
2281 tattaagaac gttatttata tttcaaattt ttcttttttt tctgtacaga cgcgtgtacg
2341 catgtaacat tatactgaaa accttgcttg agaaggtttt gggacgctcg aaggctttaa
2401 tttgcaagct ggagaccaac atgtgagcaa aaggccagca aaaggccagg aaccgtaaaa
2461 aggccgcgtt gctggcgttt ttccataggc tccgcccccc tgacgagcat cacaaaaatc
2521 gacgctcaag tcagaggtgg cgaaacccga caggactata aagataccag gcgtttcccc
2581 ctggaagctc cctcgtgcgc tctcctgttc cgaccctgcc gcttaccgga tacctgtccg
2641 cctttctccc ttcgggaagc gtggcgcttt ctcaatgctc acgctgtagg tatctcagtt
2701 cggtgtaggt cgttcgctcc aagctgggct gtgtgcacga accccccgtt cagcccgacc
2761 gctgcgcctt atccggtaac tatcgtcttg agtccaaccc ggtaagacac gacttatcgc
2821 cactggcagc agccactggt aacaggatta gcagagcgag gtatgtaggc ggtgctacag
2881 agttcttgaa gtggtggcct aactacggct acactagaag gacagtattt ggtatctgcg
2941 ctctgctgaa gccagttacc ttcggaaaaa gagttggtag ctcttgatcc ggcaaacaaa
3001 ccaccgctgg tagcggtggt ttttttgttt gcaagcagca gattacgcgc agaaaaaaag
3061 gatctcaaga agatcctttg atcttttcta cggggtctga cgctcagtgg aacgaaaact
3121 cacgttaagg gattttggtc atgcatgaga tc
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后,请先根据产品管壁标签来判断产品形式,并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉(常温运输,存于-20度,90天保质期,请务必转化挑单克隆培养,不要直接使用和测序)
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒;
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min,加入2μl质粒,再冰浴30min后,42℃热激60s,不要搅动,再冰浴2min;(从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作)
③加入900μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡37℃培养45min;
④6000rpm离心5min,仅留100μl上清液重悬细菌沉淀,并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;(可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布,可以比传统涂布方法获得更多转化子)
⑤将平板正向培养1h,再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h;
(菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态,要先转克隆感受态,重提质粒后再导入表达感受态)
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中,加入对应抗生素,220rpm震荡培养14h,根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种(冰袋运输,存于-80℃,保质期90天,请务必划线挑单克隆培养)
四区划线后挑单菌落培养,酵母菌需要先液体复苏再四区划线,再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种(冰袋运输,存于4℃,保质期7天)
穿刺接种,液体培养后四区划线,再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板(冰袋运输,存于4℃,保质期7天)
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒(冰袋运输,存于-20℃,保质期90天)
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒(常温运输,存于-20度,90天保质期,请务必转化挑单克隆培养,不要直接使用和测序)
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中,加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min,吸取5ul质粒转化,离心全涂。
二、转化图片
| P1074/pLV-mCherry慢病毒表达质粒 |
| P1092/FUGW慢病毒表达质粒质粒 |
| P1216/pLenti CMV Puro LUC (w168-1) 慢病毒表达质粒 |
| P1387/pLenti CMV V5-LUC Blast (w567-1)慢病毒表达质粒 |
| P1589/Clover-Geminin(1-110) 慢病毒表达质粒 |
| P1598/pLenti CMV GFP Blast (659-1)慢病毒表达质粒 |
| P2883/pSLIK-GFP四环素诱导绿色荧光质粒 |
| P2953/pLNCX2慢病毒表达质粒 |
| P1686/pLVX-TetOne-Puro慢病毒四环素激活表达质粒 |
| P4364/pLVX-TetOne-Puro-Luc慢病毒四环素激活表达质粒 |
| P4208/pLIX_403慢病毒四环素诱导表达质粒 |
| P4869/pLenti-MP2慢病毒表达质粒 |
风险提示:丁香通仅作为第三方平台,为商家信息发布提供平台空间。用户咨询产品时请注意保护个人信息及财产安全,合理判断,谨慎选购商品,商家和用户对交易行为负责。对于医疗器械类产品,请先查证核实企业经营资质和医疗器械产品注册证情况。
文献和实验purification of recombinant proteins 7、毕赤酵母表达手册精译版中文版 8、Pichia Fermentation Process Guidelines 9、毕赤酵母表达实验手册中文版 10、pPICZα A, B, and C-Pichia expression vectors for selection on Zeocin. andpurification of secreted, recombinant proteins 11、Heterologous
-1,pBADHis, pBADHislacZ,pLLP ompA, pINIIIompA, pMBP-P ,pMBP-C 共表达质粒:pCDFduet-1 以及pCDNA3.1,pEGFP-N2等 大肠杆菌Rosetta(DE3),Rasettagame(DE3),Top10F', BL21(DE3)plySS 等 酵母表达质粒: pPICZαA, pGAPZαA, 酵母细胞 KM71, X33 yingzi
的酿酒酵母的分泌信号—α交配因子(α-factor)引导序列已经成功地引导了几种外源蛋白的分泌。分泌表达载体主要有:pPIC9,pPIC9K,pHIL-S1,pPICZα A,pYAM75P等。胞内表达载体主要有:pHIL-D2,pA0815,pPIC3K,pPICZ,pHWO10,pGAPZ, pGAPZa(Invitrogen),pPIC3.5K等。工程菌株Y11430,MG1003,GS115 (AOX1),KM71,SMD1168。毕赤酵母宿主菌常用的有GS115和KM71两种,都具有










