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pGAPZαC毕赤酵母质粒

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  • Xybio
  • 上海
  • P1232
  • 2025年07月16日
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    • 详细信息
    • 文献和实验
    • 技术资料
    • 保存条件

      -20

    • 保质期

      2年

    • 英文名

      pGAPZαC

    • 库存

      100

    • 供应商

      上海烜雅生物科技有限公司

    • 规格

      干粉/液体

    基本信息
    名称:pGAPZαC毕赤酵母质粒
    别称: pGAPZαC
    启动子: GAP
    复制子: pUC
    终止子: AOX1 TT
    质粒大小: 3251bp
    质粒标签: C-Myc, C-6×His
    原核抗性: Zeo
    筛选标记: Zeo
    克隆菌株: DH5a
    培养条件: 37度
    表达宿主: 酵母细胞
    培养条件: 28℃,YPD
    5'测序引物: pGAP-F:GTCCCTATTTCAATCAATTGAA
    3'测序引物: AOX3:GGCAAATGGCATTCTGACAT


    质粒属性
    载体宿主: 酵母菌
    载体用途: 蛋白表达
    基因种属: 空载体
    基因类型: ORF
    原核抗性: Zeo
    筛选标记: Zeo
    荧光蛋白:


    质粒简介
        甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)的酶在许多生物细胞中包括毕赤酵母,稳定高水平表达。最近GAPDH蛋白编码基因启动子(GAP)被深入研究,并在毕赤酵母中能够高水表达重组蛋白,这取决于使用的碳源(Waterham等 人,,1997)。GAP启动子(PGAP)的重组蛋白表达水平略高于AOX1启动子。
       pGAPZ A,B,和C载体(2.9 KB)和pGAPZαB和C(3.1 KB)载体使用GAP启动子在毕赤酵母中稳定表达重组蛋白。重组蛋白表达为为带有C-末端myc抗原表位和C端His标签的融合蛋白。此外,pGAPZα 表达的融合蛋白在N-端带有酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)的α-因子分泌信号肽。这两个系列的载体都提供三个不同读码框的载体,以方便克隆的带有C-端标签和/或N-末端分泌信号肽的载体中。
    产品细节图片1
    质粒图谱
    产品细节图片2

    质粒序列
    LOCUS       Exported                3152 bp ds-DNA     circular SYN 10-SEP-2016
    DEFINITION  synthetic circular DNA
    KEYWORDS    Untitled 14
    SOURCE      synthetic DNA construct
      ORGANISM  synthetic DNA construct
    REFERENCE   1  (bases 1 to 3152)
      AUTHORS   .
      TITLE     Direct Submission
      JOURNAL   Exported Saturday, September 10, 2016 from SnapGene Viewer 3.1.4
                http://www.miaolingbio.com
    FEATURES             Location/Qualifiers
         source          1..3152
                         /organism="synthetic DNA construct"
                         /mol_type="other DNA"
         promoter        7..483
                         /note="GAP promoter"
                         /note="promoter for Pichia pastoris 
                         glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase"
         CDS             832..861
                         /codon_start=1
                         /product="Myc (human c-Myc oncogene) epitope tag"
                         /note="Myc"
                         /translation="EQKLISEEDL"
         CDS             877..894
                         /codon_start=1
                         /product="6xHis affinity tag"
                         /note="6xHis"
                         /translation="HHHHHH"
         terminator      973..1219
                         /gene="Pichia pastoris AOX1"
                         /note="AOX1 terminator"
                         /note="transcription terminator for AOX1"
         promoter        1234..1645
                         /gene="S. cerevisiae TEF1"
                         /note="TEF1 promoter"
                         /note="promoter for EF-1-alpha"
         promoter        1652..1699
                         /note="EM7 promoter"
                         /note="synthetic bacterial promoter "
         CDS             1718..2092
                         /codon_start=1
                         /gene="Sh ble from Streptoalloteichus hindustanus"
                         /product="antibiotic-binding protein"
                         /note="BleoR"
                         /note="confers resistance to bleomycin, phleomycin, and 
                         Zeocin(TM)"
                         /translation="MAKLTSAVPVLTARDVAGAVEFWTDRLGFSRDFVEDDFAGVVRDD
                         VTLFISAVQDQVVPDNTLAWVWVRGLDELYAEWSEVVSTNFRDASGPAMTEIGEQPWGR
                         EFALRDPAGNCVHFVAEEQD"
         terminator      2158..2405
                         /gene="S. cerevisiae CYC1"
                         /note="CYC1 terminator"
                         /note="transcription terminator for CYC1"
         rep_origin      complement(2480..3068)
                         /direction=LEFT
                         /note="ori"
                         /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 
                         replication"
    ORIGIN
            1 agatcttttt tgtagaaatg tcttggtgtc ctcgtccaat caggtagcca tctctgaaat
           61 atctggctcc gttgcaactc cgaacgacct gctggcaacg taaaattctc cggggtaaaa
          121 cttaaatgtg gagtaatgga accagaaacg tctcttccct tctctctcct tccaccgccc
          181 gttaccgtcc ctaggaaatt ttactctgct ggagagcttc ttctacggcc cccttgcagc
          241 aatgctcttc ccagcattac gttgcgggta aaacggaggt cgtgtacccg acctagcagc
          301 ccagggatgg aaaagtcccg gccgtcgctg gcaataatag cgggcggacg catgtcatga
          361 gattattgga aaccaccaga atcgaatata aaaggcgaac acctttccca attttggttt
          421 ctcctgaccc aaagacttta aatttaattt atttgtccct atttcaatca attgaacaac
          481 tatttcgaaa cgatgagatt tccttcaatt tttactgctg ttttattcgc agcatcctcc
          541 gcattagctg ctccagtcaa cactacaaca gaagatgaaa cggcacaaat tccggctgaa
          601 gctgtcatcg gttactcaga tttagaaggg gatttcgatg ttgctgtttt gccattttcc
          661 aacagcacaa ataacgggtt attgtttata aatactacta ttgccagcat tgctgctaaa
          721 gaagaagggg tatctctcga gaagagagag gctgaagcat cgatgaattc acgtggccca
          781 gccggccgtc tcggatcggt acctcgagcc gcggcggccg ccagctttct agaacaaaaa
          841 ctcatctcag aagaggatct gaatagcgcc gtcgaccatc atcatcatca tcattgagtt
          901 ttagccttag acatgactgt tcctcagttc aagttgggca cttacgagaa gaccggtctt
          961 gctagattct aatcaagagg atgtcagaat gccatttgcc tgagagatgc aggcttcatt
         1021 tttgatactt ttttatttgt aacctatata gtataggatt ttttttgtca ttttgtttct
         1081 tctcgtacga gcttgctcct gatcagccta tctcgcagct gatgaatatc ttgtggtagg
         1141 ggtttgggaa aatcattcga gtttgatgtt tttcttggta tttcccactc ctcttcagag
         1201 tacagaagat taagtgagac cttcgtttgt gcggatcccc cacacaccat agcttcaaaa
         1261 tgtttctact ccttttttac tcttccagat tttctcggac tccgcgcatc gccgtaccac
         1321 ttcaaaacac ccaagcacag catactaaat tttccctctt tcttcctcta gggtgtcgtt
         1381 aattacccgt actaaaggtt tggaaaagaa aaaagagacc gcctcgtttc tttttcttcg
         1441 tcgaaaaagg caataaaaat ttttatcacg tttctttttc ttgaaatttt tttttttagt
         1501 ttttttctct ttcagtgacc tccattgata tttaagttaa taaacggtct tcaatttctc
         1561 aagtttcagt ttcatttttc ttgttctatt acaacttttt ttacttcttg ttcattagaa
         1621 agaaagcata gcaatctaat ctaagggcgg tgttgacaat taatcatcgg catagtatat
         1681 cggcatagta taatacgaca aggtgaggaa ctaaaccatg gccaagttga ccagtgccgt
         1741 tccggtgctc accgcgcgcg acgtcgccgg agcggtcgag ttctggaccg accggctcgg
         1801 gttctcccgg gacttcgtgg aggacgactt cgccggtgtg gtccgggacg acgtgaccct
         1861 gttcatcagc gcggtccagg accaggtggt gccggacaac accctggcct gggtgtgggt
         1921 gcgcggcctg gacgagctgt acgccgagtg gtcggaggtc gtgtccacga acttccggga
         1981 cgcctccggg ccggccatga ccgagatcgg cgagcagccg tgggggcggg agttcgccct
         2041 gcgcgacccg gccggcaact gcgtgcactt cgtggccgag gagcaggact gacacgtccg
         2101 acggcggccc acgggtccca ggcctcggag atccgtcccc cttttccttt gtcgatatca
         2161 tgtaattagt tatgtcacgc ttacattcac gccctccccc cacatccgct ctaaccgaaa
         2221 aggaaggagt tagacaacct gaagtctagg tccctattta tttttttata gttatgttag
         2281 tattaagaac gttatttata tttcaaattt ttcttttttt tctgtacaga cgcgtgtacg
         2341 catgtaacat tatactgaaa accttgcttg agaaggtttt gggacgctcg aaggctttaa
         2401 tttgcaagct ggagaccaac atgtgagcaa aaggccagca aaaggccagg aaccgtaaaa
         2461 aggccgcgtt gctggcgttt ttccataggc tccgcccccc tgacgagcat cacaaaaatc
         2521 gacgctcaag tcagaggtgg cgaaacccga caggactata aagataccag gcgtttcccc
         2581 ctggaagctc cctcgtgcgc tctcctgttc cgaccctgcc gcttaccgga tacctgtccg
         2641 cctttctccc ttcgggaagc gtggcgcttt ctcaatgctc acgctgtagg tatctcagtt
         2701 cggtgtaggt cgttcgctcc aagctgggct gtgtgcacga accccccgtt cagcccgacc
         2761 gctgcgcctt atccggtaac tatcgtcttg agtccaaccc ggtaagacac gacttatcgc
         2821 cactggcagc agccactggt aacaggatta gcagagcgag gtatgtaggc ggtgctacag
         2881 agttcttgaa gtggtggcct aactacggct acactagaag gacagtattt ggtatctgcg
         2941 ctctgctgaa gccagttacc ttcggaaaaa gagttggtag ctcttgatcc ggcaaacaaa
         3001 ccaccgctgg tagcggtggt ttttttgttt gcaagcagca gattacgcgc agaaaaaaag
         3061 gatctcaaga agatcctttg atcttttcta cggggtctga cgctcagtgg aacgaaaact
         3121 cacgttaagg gattttggtc atgcatgaga tc
    //

    质粒菌株产品操作说明书
    一、扩增流程
             收到产品后,请先根据产品管壁标签来判断产品形式,并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
             1、质粒干粉(常温运输,存于-20度,90天保质期,请务必转化挑单克隆培养,不要直接使用和测序)
                  收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒;
                  1100μl 感受态于冰上解冻10min,加入2μl质粒,再冰浴30min后,42热激60s,不要搅动,再冰浴2min;(从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作)
                  加入900μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡37培养45min
                  6000rpm离心5min,仅留100μl上清液重悬细菌沉淀,并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;(可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布,可以比传统涂布方法获得更多转化子)
                  将平板正向培养1h,再倒置37培养14h。如果要求是30度则培养20h
    (菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态,要先转克隆感受态,重提质粒后再导入表达感受态)
                  挑取单菌落至LB液体培养基中,加入对应抗生素,220rpm震荡培养14h,根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
            2、甘油菌种(冰袋运输,存于-80,保质期90天,请务必划线挑单克隆培养)
                  四区划线后挑单菌落培养,酵母菌需要先液体复苏再四区划线,再挑单菌落液体培养。
            3、穿刺菌种(冰袋运输,存于4,保质期7天)
                  穿刺接种,液体培养后四区划线,再挑单菌落液体培养。
            4、菌落平板(冰袋运输,存于4,保质期7天)
                  直接挑取单菌落至液体培养基中。
            5、液体质粒(冰袋运输,存于-20,保质期90天)
                  单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
            6、滤纸质粒(常温运输,存于-20度,90天保质期,请务必转化挑单克隆培养,不要直接使用和测序)
                  收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中,加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min,吸取5ul质粒转化,离心全涂。

    二、转化图片
    产品细节图片3
    产品细节图片4
    P1074/pLV-mCherry慢病毒表达质粒
    P1092/FUGW慢病毒表达质粒质粒
    P1216/pLenti CMV Puro LUC (w168-1) 慢病毒表达质粒
    P1387/pLenti CMV V5-LUC Blast (w567-1)慢病毒表达质粒
    P1589/Clover-Geminin(1-110) 慢病毒表达质粒
    P1598/pLenti CMV GFP Blast (659-1)慢病毒表达质粒
    P2883/pSLIK-GFP四环素诱导绿色荧光质粒
    P2953/pLNCX2慢病毒表达质粒
    P1686/pLVX-TetOne-Puro慢病毒四环素激活表达质粒
    P4364/pLVX-TetOne-Puro-Luc慢病毒四环素激活表达质粒
    P4208/pLIX_403慢病毒四环素诱导表达质粒
    P4869/pLenti-MP2慢病毒表达质粒

     

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