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- Xybio
- 上海
- P2918
- 2025年07月08日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
NM_021808.3;GALNAC-T9;GALNACT9
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
名称：pCR4-TOPO-GALNT9（3同义突变）人源基因质粒
别称: NM_021808.3;GALNAC-T9;GALNACT9
复制子: pUC
原核抗性: Amp
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
质粒属性
载体宿主：大肠杆菌
载体用途：PCR模板
基因种属：人
基因类型：cDNA
原核抗性：Amp
真核抗性：
荧光蛋白：
质粒简介：详询
质粒图谱
质粒序列：详询
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P1776/pENTR223-TMEM234-G139C人源基因质粒 |
| P1777/pENTR223-LINC00051人源基因质粒 |
| P1778/pENTR223-IWS1人源基因质粒 |
| P1779/pENTR223-LINC00152人源基因质粒 |
| P1791/pENTR223-NBR2人源基因质粒 |
| P1792/pENTR223-ZNF706人源基因质粒 |
| P1793/pENTR223-NICE-5人源基因质粒 |
| P1794/pENTR223-ARL17B人源基因质粒 |
| P1795/pENTR223-COX6A2人源基因质粒 |
| P1859/pENTR223-MLLT11人源基因质粒 |
| P1796/pENTR223-MLLT11-G262C人源基因质粒 |
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文献和实验比起其它公司的原核表达系列来说Invitrogen有个非常突出的地方就是它的重组克隆技术。像之前Novagen大部分载体都是用传统的酶切、链接方式做重组质粒，但是Invitrogen的表达系统大量运用了它的TOPO技术和Gateway技术。 虽然现在在许多做科研的学生看来，能出实验结果是最重要的，中间的过程不是那么重要。可是只有创新的技术才能推动科学不断的进步，比如：如果我们一直采用手工法测序，那真是不知道要猴年马月才能有人类基因组测序图谱，更难以进行
TOPO克隆提供高效的一步法克隆策略，可以定向克隆平端PCR产物到入门载体。平端PCR产物定向克隆的效率>90%，从而简化了筛选。同时不再需要连接酶、PCR后续步骤或者限制性内切酶。目前有两种定向TOPO克隆载体。pENTR/D-TOPO 和pENTR/SD/ D-TOPO（表2和图3）有以下特点： 位于PCR产物插入位点两侧的attL重组位点可以与Gateway目的载体进行有效重组 通用M13位点便于测序 基于pUC的ori位点提供高产量质粒 大肠杆菌中卡那霉素（kanamycin
浓度不同，两种引物浓度相差 100 倍。在最初 20 各循环中，主要产物是双链 DNA。当低浓度引物被耗尽后，高浓度引物引导的 PCR 就会产生大量单链 DNA，单链 DNA 可用于序列测定。 三、主要试剂 1. DNA 模板（1ng/μL）（质粒 R-pGEX-4T-1，R 指代外源基因） 2. 2.5mmol/LdNTP (TaKaRa) 3. 10×PCR 缓冲液(TaKaRa) 4. 25mmol/L MgCl 2 (TaKaRa) 5. 引物 1、引物 2（5pmol/μL） 引物
