Clover-Geminin(1-110) 慢病毒表达质粒

基本信息
名称：Clover-Geminin(1-110) 慢病毒表达质粒
别称: Plasmid#83915

启动子:	CMV
复制子:	pUC
原核抗性:	Amp
克隆菌株:	Stbl3
培养条件:	37度

质粒属性

载体宿主：	哺乳细胞,慢病毒
载体用途：	蛋白表达
基因种属：
基因类型：	ORF
原核抗性：	Amp
筛选标记：
荧光蛋白：	绿色

质粒简介
   Fluorescent probe for M/G1 transition.

质粒图谱


质粒序列
LOCUS       Exported                7475 bp ds-DNA     circular SYN 29-SEP-2017
DEFINITION  synthetic circular DNA
ACCESSION   .
VERSION     .
KEYWORDS    .
SOURCE      synthetic DNA construct
  ORGANISM  synthetic DNA construct
REFERENCE   1  (bases 1 to 7475)
  AUTHORS   .
  TITLE     Direct Submission
            http://www.miaolingbio.com
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..7475
                     /organism="synthetic DNA construct"
                     /mol_type="other DNA"
     enhancer        63..366
                     /label=CMV enhancer
                     /note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
     promoter        368..566
                     /label=CMV promoter
                     /note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early 
                     promoter"
     LTR             584..764
                     /label=5' LTR (truncated)
                     /note="truncated 5' long terminal repeat (LTR) from HIV-1"
     misc_feature    811..936
                     /label=HIV-1 Psi
                     /note="packaging signal of human immunodeficiency virus 
                     type 1"
     misc_feature    1435..1668
                     /label=RRE
                     /note="The Rev response element (RRE) of HIV-1 allows for 
                     Rev-dependent mRNA export from the nucleus to the 
                     cytoplasm."
     misc_feature    2195..2312
                     /label=cPPT/CTS
                     /note="central polypurine tract and central termination 
                     sequence of HIV-1"
     protein_bind    2759..2792
                     /label=loxP
                     /bound_moiety="Cre recombinase"
                     /note="Cre-mediated recombination occurs in the 8-bp core 
                     sequence (GCATACAT)."
     enhancer        2908..3211
                     /label=CMV enhancer
                     /note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
     promoter        3212..3415
                     /label=CMV promoter
                     /note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early 
                     promoter"
     CDS             3447..4163
                     /codon_start=1
                     /product="bright green-yellow fluorescent protein derived 
                     from GFP (Lam et al., 2012)"
                     /label=Clover
                     /translation="MVSKGEELFTGVVPILVELDGDVNGHKFSVRGEGEGDATNGKLTL
                     KFICTTGKLPVPWPTLVTTFGYGVACFSRYPDHMKQHDFFKSAMPEGYVQERTISFKDD
                     GTYKTRAEVKFEGDTLVNRIELKGIDFKEDGNILGHKLEYNFNSHNVYITADKQKNGIK
                     ANFKIRHNVEDGSVQLADHYQQNTPIGDGPVLLPDNHYLSHQSALSKDPNEKRDHMVLL
                     EFVTAAGITHGMDELYK"
     misc_feature    4164..4526
                     /label=Geminin(1-110)
     protein_bind    4562..4595
                     /label=loxP
                     /bound_moiety="Cre recombinase"
                     /note="Cre-mediated recombination occurs in the 8-bp core 
                     sequence (GCATACAT)."
     misc_feature    4651..5239
                     /label=WPRE
                     /note="woodchuck hepatitis virus posttranscriptional 
                     regulatory element"
     LTR             5481..5661
                     /label=5' LTR (truncated)
                     /note="truncated 5' long terminal repeat (LTR) from HIV-1"
     rep_origin      complement(5723..6311)
                     /direction=LEFT
                     /label=ori
                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 
                     replication"
     CDS             complement(6482..7342)
                     /codon_start=1
                     /gene="bla"
                     /product="beta-lactamase"
                     /label=AmpR
                     /note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
                     related antibiotics"
                     /translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
                     ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
                     PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
                     EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
                     LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
                     LIKHW"
     promoter        complement(7343..7447)
                     /gene="bla"
                     /label=AmpR promoter
ORIGIN
        1 actagttatt aatagtaatc aattacgggg tcattagttc atagcccata tatggagttc
       61 cgcgttacat aacttacggt aaatggcccg cctggctgac cgcccaacga cccccgccca
      121 ttgacgtcaa taatgacgta tgttcccata gtaacgccaa tagggacttt ccattgacgt
      181 caatgggtgg agtatttacg gtaaactgcc cacttggcag tacatcaagt gtatcatatg
      241 ccaagtacgc cccctattga cgtcaatgac ggtaaatggc ccgcctggca ttatgcccag
      301 tacatgacct tatgggactt tcctacttgg cagtacatct acgtattagt catcgctatt
      361 accatggtga tgcggttttg gcagtacatc aatgggcgtg gatagcggtt tgactcacgg
      421 ggatttccaa gtctccaccc cattgacgtc aatgggagtt tgttttggca ccaaaatcaa
      481 cgggactttc caaaatgtcg taacaactcc gccccattga cgcaaatggg cggtaggcgt
      541 gtacggtggg aggtctatat aagcagcgcg ttttgcctgt actgggtctc tctggttaga
      601 ccagatctga gcctgggagc tctctggcta actagggaac ccactgctta agcctcaata
      661 aagcttgcct tgagtgcttc aagtagtgtg tgcccgtctg ttgtgtgact ctggtaacta
      721 gagatccctc agaccctttt agtcagtgtg gaaaatctct agcagtggcg cccgaacagg
      781 gacttgaaag cgaaagggaa accagaggag ctctctcgac gcaggactcg gcttgctgaa
      841 gcgcgcacgg caagaggcga ggggcggcga ctggtgagta cgccaaaaat tttgactagc
      901 ggaggctaga aggagagaga tgggtgcgag agcgtcagta ttaagcgggg gagaattaga
      961 tcgcgatggg aaaaaattcg gttaaggcca gggggaaaga aaaaatataa attaaaacat
     1021 atagtatggg caagcaggga gctagaacga ttcgcagtta atcctggcct gttagaaaca
     1081 tcagaaggct gtagacaaat actgggacag ctacaaccat cccttcagac aggatcagaa
     1141 gaacttagat cattatataa tacagtagca accctctatt gtgtgcatca aaggatagag
     1201 ataaaagaca ccaaggaagc tttagacaag atagaggaag agcaaaacaa aagtaagacc
     1261 accgcacagc aagcggccgg ccgcgctgat cttcagacct ggaggaggag atatgaggga
     1321 caattggaga agtgaattat ataaatataa agtagtaaaa attgaaccat taggagtagc
     1381 acccaccaag gcaaagagaa gagtggtgca gagagaaaaa agagcagtgg gaataggagc
     1441 tttgttcctt gggttcttgg gagcagcagg aagcactatg ggcgcagcgt caatgacgct
     1501 gacggtacag gccagacaat tattgtctgg tatagtgcag cagcagaaca atttgctgag
     1561 ggctattgag gcgcaacagc atctgttgca actcacagtc tggggcatca agcagctcca
     1621 ggcaagaatc ctggctgtgg aaagatacct aaaggatcaa cagctcctgg ggatttgggg
     1681 ttgctctgga aaactcattt gcaccactgc tgtgccttgg aatgctagtt ggagtaataa
     1741 atctctggaa cagatttgga atcacacgac ctggatggag tgggacagag aaattaacaa
     1801 ttacacaagc ttaatacact ccttaattga agaatcgcaa aaccagcaag aaaagaatga
     1861 acaagaatta ttggaattag ataaatgggc aagtttgtgg aattggttta acataacaaa
     1921 ttggctgtgg tatataaaat tattcataat gatagtagga ggcttggtag gtttaagaat
     1981 agtttttgct gtactttcta tagtgaatag agttaggcag ggatattcac cattatcgtt
     2041 tcagacccac ctcccaaccc cgaggggacc cgacaggccc gaaggaatag aagaagaagg
     2101 tggagagaga gacagagaca gatccattcg attagtgaac ggatcggcac tgcgtgcgcc
     2161 aattctgcag acaaatggca gtattcatcc acaattttaa aagaaaaggg gggattgggg
     2221 ggtacagtgc aggggaaaga atagtagaca taatagcaac agacatacaa actaaagaat
     2281 tacaaaaaca aattacaaaa attcaaaatt ttcgggttta ttacagggac agcagagatc
     2341 cagtttggtt agtaccgggc ccgctctaga gatccgacgc cgccatctct aggcccgcgc
     2401 cggccccctc gcacagactt gtgggagaag ctcggctact cccctgcccc ggttaatttg
     2461 catataatat ttcctagtaa ctatagaggc ttaatgtgcg ataaaagaca gataatctgt
     2521 tctttttaat actagctaca ttttacatga taggcttgga tttctataag agatacaaat
     2581 actaaattat tattttaaaa aacagcacaa aaggaaactc accctaactg taaagtaatt
     2641 gtgtgttttg agactataaa tatcccttgg agaaaagcct tgttaacgcg cggtgaccct
     2701 cgaggtcgac ggtatcgata agctcgcttc acgagattcc agcaggtcga gggacctaat
     2761 aacttcgtat agcatacatt atacgaagtt atattaaggg ttccaagctt aagcggccgc
     2821 gtggataacc gtattaccgc catgcattag ttattaatag taatcaatta cggggtcatt
     2881 agttcatagc ccatatatgg agttccgcgt tacataactt acggtaaatg gcccgcctgg
     2941 ctgaccgccc aacgaccccc gcccattgac gtcaataatg acgtatgttc ccatagtaac
     3001 gccaataggg actttccatt gacgtcaatg ggtggagtat ttacggtaaa ctgcccactt
     3061 ggcagtacat caagtgtatc atatgccaag tacgccccct attgacgtca atgacggtaa
     3121 atggcccgcc tggcattatg cccagtacat gaccttatgg gactttccta cttggcagta
     3181 catctacgta ttagtcatcg ctattaccat ggtgatgcgg ttttggcagt acatcaatgg
     3241 gcgtggatag cggtttgact cacggggatt tccaagtctc caccccattg acgtcaatgg
     3301 gagtttgttt tggcaccaaa atcaacggga ctttccaaaa tgtcgtaaca actccgcccc
     3361 attgacgcaa atgggcggta ggcgtgtacg gtgggaggtc tatataagca gagctggttt
     3421 agtgaaccgt cagatccgct agcaccatgg tgagcaaggg cgaggagctg ttcaccgggg
     3481 tggtgcccat cctggtcgag ctggacggcg acgtaaacgg ccacaagttc agcgtccgcg
     3541 gcgagggcga gggcgatgcc accaacggca agctgaccct gaagttcatc tgcaccaccg
     3601 gcaagctgcc cgtgccctgg cccaccctcg tgaccacctt cggctacggc gtggcctgct
     3661 tcagccgcta ccccgaccac atgaagcagc acgacttctt caagtccgcc atgcccgaag
     3721 gctacgtcca ggagcgcacc atctctttca aggacgacgg tacctacaag acccgcgccg
     3781 aggtgaagtt cgagggcgac accctggtga accgcatcga gctgaagggc atcgacttca
     3841 aggaggacgg caacatcctg gggcacaagc tggagtacaa cttcaacagc cacaacgtct
     3901 atatcacggc cgacaagcag aagaacggca tcaaggctaa cttcaagatc cgccacaacg
     3961 ttgaggacgg cagcgtgcag ctcgccgacc actaccagca gaacaccccc atcggcgacg
     4021 gccccgtgct gctgcccgac aaccactacc tgagccatca gtccgccctg agcaaagacc
     4081 ccaacgagaa gcgcgatcac atggtcctgc tggagttcgt gaccgccgcc gggattacac
     4141 atggcatgga cgagctgtac aaggatatcc atgcacactg gcggccgctc gagatgaatc
     4201 ccagtatgaa gcagaaacaa gaagaaatca aagagaatat aaagaatagt tctgtcccaa
     4261 gaagaactct gaagatgatt cagccttctg catctggatc tcttgttgga agagaaaatg
     4321 agctgtccgc aggcttgtcc aaaaggaaac atcggaatga ccacttaaca tctacaactt
     4381 ccagccctgg ggttattgtc ccagaatcta gtgaaaataa aaatcttgga ggagtcaccc
     4441 aggagtcatt tgatcttatg attaaagaaa atccatcctc tcagtattgg aaggaagtgg
     4501 cagaaaaacg gagaaaggcg ctgtaagttt aaaccctgca gggaattcgt cgagggacct
     4561 aataacttcg tatagcatac attatacgaa gttatacatg tttaagggtt ccggttccac
     4621 taggtacaat tcgatatcaa gcttatcgat aatcaacctc tggattacaa aatttgtgaa
     4681 agattgactg gtattcttaa ctatgttgct ccttttacgc tatgtggata cgctgcttta
     4741 atgcctttgt atcatgctat tgcttcccgt atggctttca ttttctcctc cttgtataaa
     4801 tcctggttgc tgtctcttta tgaggagttg tggcccgttg tcaggcaacg tggcgtggtg
     4861 tgcactgtgt ttgctgacgc aacccccact ggttggggca ttgccaccac ctgtcagctc
     4921 ctttccggga ctttcgcttt ccccctccct attgccacgg cggaactcat cgccgcctgc
     4981 cttgcccgct gctggacagg ggctcggctg ttgggcactg acaattccgt ggtgttgtcg
     5041 gggaaatcat cgtcctttcc ttggctgctc gcctgtgttg ccacctggat tctgcgcggg
     5101 acgtccttct gctacgtccc ttcggccctc aatccagcgg accttccttc ccgcggcctg
     5161 ctgccggctc tgcggcctct tccgcgtctt cgccttcgcc ctcagacgag tcggatctcc
     5221 ctttgggccg cctccccgca tcgataccgt cgacctcgat cgagacctag aaaaacatgg
     5281 agcaatcaca agtagcaata cagcagctac caatgctgat tgtgcctggc tagaagcaca
     5341 agaggaggag gaggtgggtt ttccagtcac acctcaggta cctttaagac caatgactta
     5401 caaggcagct gacgcgtgat tttaaaagaa aaggggggac tggaagggct aattcactcc
     5461 cactgctttt tgcctgtact gggtctctct ggttagacca gatctgagcc tgggagctct
     5521 ctggctaact agggaaccca ctgcttaagc ctcaataaag cttgccttga gtgcttcaag
     5581 tagtgtgtgc ccgtctgttg tgtgactctg gtaactagag atccctcaga cccttttagt
     5641 cagtgtggaa aatctctagc agcatgtgag caaaaggcca gcaaaaggcc aggaaccgta
     5701 aaaaggccgc gttgctggcg tttttccata ggctccgccc ccctgacgag catcacaaaa
     5761 atcgacgctc aagtcagagg tggcgaaacc cgacaggact ataaagatac caggcgtttc
     5821 cccctggaag ctccctcgtg cgctctcctg ttccgaccct gccgcttacc ggatacctgt
     5881 ccgcctttct cccttcggga agcgtggcgc tttctcatag ctcacgctgt aggtatctca
     5941 gttcggtgta ggtcgttcgc tccaagctgg gctgtgtgca cgaacccccc gttcagcccg
     6001 accgctgcgc cttatccggt aactatcgtc ttgagtccaa cccggtaaga cacgacttat
     6061 cgccactggc agcagccact ggtaacagga ttagcagagc gaggtatgta ggcggtgcta
     6121 cagagttctt gaagtggtgg cctaactacg gctacactag aagaacagta tttggtatct
     6181 gcgctctgct gaagccagtt accttcggaa aaagagttgg tagctcttga tccggcaaac
     6241 aaaccaccgc tggtagcggt ggtttttttg tttgcaagca gcagattacg cgcagaaaaa
     6301 aaggatctca agaagatcct ttgatctttt ctacggggtc tgacgctcag tggaacgaaa
     6361 actcacgtta agggattttg gtcatgagat tatcaaaaag gatcttcacc tagatccttt
     6421 taaattaaaa atgaagtttt aaatcaatct aaagtatata tgagtaaact tggtctgaca
     6481 gttaccaatg cttaatcagt gaggcaccta tctcagcgat ctgtctattt cgttcatcca
     6541 tagttgcctg actccccgtc gtgtagataa ctacgatacg ggagggctta ccatctggcc
     6601 ccagtgctgc aatgataccg cgagacccac gctcaccggc tccagattta tcagcaataa
     6661 accagccagc cggaagggcc gagcgcagaa gtggtcctgc aactttatcc gcctccatcc
     6721 agtctattaa ttgttgccgg gaagctagag taagtagttc gccagttaat agtttgcgca
     6781 acgttgttgc cattgctaca ggcatcgtgg tgtcacgctc gtcgtttggt atggcttcat
     6841 tcagctccgg ttcccaacga tcaaggcgag ttacatgatc ccccatgttg tgcaaaaaag
     6901 cggttagctc cttcggtcct ccgatcgttg tcagaagtaa gttggccgca gtgttatcac
     6961 tcatggttat ggcagcactg cataattctc ttactgtcat gccatccgta agatgctttt
     7021 ctgtgactgg tgagtactca accaagtcat tctgagaata gtgtatgcgg cgaccgagtt
     7081 gctcttgccc ggcgtcaata cgggataata ccgcgccaca tagcagaact ttaaaagtgc
     7141 tcatcattgg aaaacgttct tcggggcgaa aactctcaag gatcttaccg ctgttgagat
     7201 ccagttcgat gtaacccact cgtgcaccca actgatcttc agcatctttt actttcacca
     7261 gcgtttctgg gtgagcaaaa acaggaaggc aaaatgccgc aaaaaaggga ataagggcga
     7321 cacggaaatg ttgaatactc atactcttcc tttttcaata ttattgaagc atttatcagg
     7381 gttattgtct catgagcgga tacatatttg aatgtattta gaaaaataaa caaatagggg
     7441 ttccgcgcac atttccccga aaagtgccac ctgac
//

质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
         收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
         1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              ①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
              ②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
              ③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
              ④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
              ⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
              ⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
        2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
              四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
        3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
        4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              直接挑取单菌落至液体培养基中。
        5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
              单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
        6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。

二、转化图片

P2322/pUCGM抗性基因质粒

P1383/GW1-PercevalHR其它基因质粒

P1581/pEVOL-pBpF球菌基因质粒

P3063/pASKt15C+SrtA金黄色葡萄球菌基因质粒

P1683/pEGFP-H37RV杆菌基因质粒

P1990/pEGFP-H37Rv-Outside杆菌基因质粒

P0490/p11-LacY-wtx1其它基因质粒

P1724/Lact-C2-GFP-p416牛源基因质粒

P2497/pLVML-3×FLAG-TPST2-bos-IRES-Puro牛源基因质粒

P1725/pET28a-cebE链霉菌基因质粒

P1205/pLAM12乙酰胺酶启动子质粒