pLJM1-FLAG慢病毒表达质粒

基本信息
名称：pLJM1-FLAG慢病毒表达质粒
别称: pLJM1-FLAG

启动子:	CMV
复制子:	pUC
终止子:	SV40 poly(A) signal
质粒分类:	病毒系列质粒；慢病毒类质粒；病毒表达质粒
质粒大小:	7389bp
质粒标签:	N-FLAG
原核抗性:	Amp
筛选标记:	Puro
克隆菌株:	Stbl3
培养条件:	37度
表达宿主:	293T等哺乳细胞
培养条件:	37℃，有氧，5%CO2
诱导方式:	无需诱导
5'测序引物:	CMV-F：CGCAAATGGGCGGTAGGCGTG
3'测序引物:	Sv40-polyA-R：GAAATTTGTGATGCTATTGC

质粒属性

载体宿主：	哺乳细胞,慢病毒
载体用途：	蛋白表达
基因种属：
基因类型：	ORF
原核抗性：	Amp
筛选标记：	Puro
荧光蛋白：

质粒简介
  pLJM1-FLAG质粒由武汉淼灵生物科技有限公司构建并分享至淼灵质粒平台。

质粒图谱


质粒序列
LOCUS       Exported                7389 bp ds-DNA     circular SYN 20-SEP-2017
DEFINITION  synthetic circular DNA
SOURCE      synthetic DNA construct
  ORGANISM  synthetic DNA construct
REFERENCE   1  (bases 1 to 7389)
  TITLE     Direct Submission
  JOURNAL   Exported Sep 20, 2017 from MiaoLingPlasmid
            http://www.miaolingbio.com
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..7389
                     /organism="synthetic DNA construct"
                     /mol_type="other DNA"
     promoter        131..334
                     /label=CMV promoter
                     /note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early 
                     promoter"
     CDS             375..398
                     /codon_start=1
                     /product="FLAG(R) epitope tag, followed by an enterokinase 
                     cleavage site"
                     /label=FLAG
                     /translation="DYKDDDDK"
     misc_feature    472..589
                     /label=cPPT/CTS
                     /note="central polypurine tract and central termination 
                     sequence of HIV-1"
     promoter        638..1148
                     /label=hPGK promoter
                     /note="human phosphoglycerate kinase 1 promoter"
     CDS             1170..1769
                     /codon_start=1
                     /gene="pac from Streptomyces alboniger"
                     /product="puromycin N-acetyltransferase"
                     /label=PuroR
                     /note="confers resistance to puromycin"
                     /translation="MTEYKPTVRLATRDDVPRAVRTLAAAFADYPATRHTVDPDRHIER
                     VTELQELFLTRVGLDIGKVWVADDGAAVAVWTTPESVEAGAVFAEIGPRMAELSGSRLA
                     AQQQMEGLLAPHRPKEPAWFLATVGVSPDHQGKGLGSAVVLPGVEAAERAGVPAFLETS
                     APRNLPFYERLGFTVTADVEVPEGPRTWCMTRKPGA"
     LTR             1897..2130
                     /label=3' LTR (Delta-U3)
                     /note="self-inactivating 3' long terminal repeat (LTR) from
                     HIV-1"
     polyA_signal    2202..2323
                     /label=SV40 poly(A) signal
                     /note="SV40 polyadenylation signal"
     rep_origin      2363..2498
                     /label=SV40 ori
                     /note="SV40 origin of replication"
     rep_origin      2705..3160
                     /direction=RIGHT
                     /label=f1 ori
                     /note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow 
                     indicates direction of (+) strand synthesis"
     promoter        3186..3290
                     /gene="bla"
                     /label=AmpR promoter
     CDS             3291..4151
                     /codon_start=1
                     /gene="bla"
                     /product="beta-lactamase"
                     /label=AmpR
                     /note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
                     related antibiotics"
                     /translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
                     ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
                     PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
                     EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
                     LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
                     LIKHW"
     rep_origin      4322..4910
                     /direction=RIGHT
                     /label=ori
                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 
                     replication"
     promoter        5379..5605
                     /label=RSV promoter
                     /note="Rous sarcoma virus enhancer/promoter"
     LTR             5606..5786
                     /label=5' LTR (truncated)
                     /note="truncated 5' long terminal repeat (LTR) from HIV-1"
     misc_feature    5833..5958
                     /label=HIV-1 Psi
                     /note="packaging signal of human immunodeficiency virus 
                     type 1"
     misc_feature    6451..6684
                     /label=RRE
                     /note="The Rev response element (RRE) of HIV-1 allows for 
                     Rev-dependent mRNA export from the nucleus to the 
                     cytoplasm."
ORIGIN
        1 tatgccaagt acgcccccta ttgacgtcaa tgacggtaaa tggcccgcct ggcattatgc
       61 ccagtacatg accttatggg actttcctac ttggcagtac atctacgtat tagtcatcgc
      121 tattaccatg gtgatgcggt tttggcagta catcaatggg cgtggatagc ggtttgactc
      181 acggggattt ccaagtctcc accccattga cgtcaatggg agtttgtttt ggcaccaaaa
      241 tcaacgggac tttccaaaat gtcgtaacaa ctccgcccca ttgacgcaaa tgggcggtag
      301 gcgtgtacgg tgggaggtct atataagcag agctggttta gtgaaccgtc agatccgcta
      361 gcgctaccgg tatggactac aaggatgacg atgacaaggg tggtggtggt ggtgcgtcga
      421 cgatatcttc gaattctcga cctcgagaca aatggcagta ttcatccaca attttaaaag
      481 aaaagggggg attggggggt acagtgcagg ggaaagaata gtagacataa tagcaacaga
      541 catacaaact aaagaattac aaaaacaaat tacaaaaatt caaaattttc gggtttatta
      601 cagggacagc agagatccac tttggccgcg gctcgagggg gttggggttg cgccttttcc
      661 aaggcagccc tgggtttgcg cagggacgcg gctgctctgg gcgtggttcc gggaaacgca
      721 gcggcgccga ccctgggtct cgcacattct tcacgtccgt tcgcagcgtc acccggatct
      781 tcgccgctac ccttgtgggc cccccggcga cgcttcctgc tccgccccta agtcgggaag
      841 gttccttgcg gttcgcggcg tgccggacgt gacaaacgga agccgcacgt ctcactagta
      901 ccctcgcaga cggacagcgc cagggagcaa tggcagcgcg ccgaccgcga tgggctgtgg
      961 ccaatagcgg ctgctcagca gggcgcgccg agagcagcgg ccgggaaggg gcggtgcggg
     1021 aggcggggtg tggggcggta gtgtgggccc tgttcctgcc cgcgcggtgt tccgcattct
     1081 gcaagcctcc ggagcgcacg tcggcagtcg gctccctcgt tgaccgaatc accgacctct
     1141 ctccccaggg ggatccaccg gagcttacca tgaccgagta caagcccacg gtgcgcctcg
     1201 ccacccgcga cgacgtcccc agggccgtac gcaccctcgc cgccgcgttc gccgactacc
     1261 ccgccacgcg ccacaccgtc gatccggacc gccacatcga gcgggtcacc gagctgcaag
     1321 aactcttcct cacgcgcgtc gggctcgaca tcggcaaggt gtgggtcgcg gacgacggcg
     1381 ccgcggtggc ggtctggacc acgccggaga gcgtcgaagc gggggcggtg ttcgccgaga
     1441 tcggcccgcg catggccgag ttgagcggtt cccggctggc cgcgcagcaa cagatggaag
     1501 gcctcctggc gccgcaccgg cccaaggagc ccgcgtggtt cctggccacc gtcggcgtct
     1561 cgcccgacca ccagggcaag ggtctgggca gcgccgtcgt gctccccgga gtggaggcgg
     1621 ccgagcgcgc cggggtgccc gccttcctgg agacctccgc gccccgcaac ctccccttct
     1681 acgagcggct cggcttcacc gtcaccgccg acgtcgaggt gcccgaagga ccgcgcacct
     1741 ggtgcatgac ccgcaagccc ggtgcctgac gcccgcccca cgacccgcag cgcccgaccg
     1801 aaaggagcgc acgaccccat gcatcggtac ctttaagacc aatgacttac aaggcagctg
     1861 tagatcttag ccacttttta aaagaaaagg ggggactgga agggctaatt cactcccaac
     1921 gaagacaaga tctgcttttt gcttgtactg ggtctctctg gttagaccag atctgagcct
     1981 gggagctctc tggctaacta gggaacccac tgcttaagcc tcaataaagc ttgccttgag
     2041 tgcttcaagt agtgtgtgcc cgtctgttgt gtgactctgg taactagaga tccctcagac
     2101 ccttttagtc agtgtggaaa atctctagca gtagtagttc atgtcatctt attattcagt
     2161 atttataact tgcaaagaaa tgaatatcag agagtgagag gaacttgttt attgcagctt
     2221 ataatggtta caaataaagc aatagcatca caaatttcac aaataaagca tttttttcac
     2281 tgcattctag ttgtggtttg tccaaactca tcaatgtatc ttatcatgtc tggctctagc
     2341 tatcccgccc ctaactccgc ccatcccgcc cctaactccg cccagttccg cccattctcc
     2401 gccccatggc tgactaattt tttttattta tgcagaggcc gaggccgcct cggcctctga
     2461 gctattccag aagtagtgag gaggcttttt tggaggccta gggacgtacc caattcgccc
     2521 tatagtgagt cgtattacgc gcgctcactg gccgtcgttt tacaacgtcg tgactgggaa
     2581 aaccctggcg ttacccaact taatcgcctt gcagcacatc cccctttcgc cagctggcgt
     2641 aatagcgaag aggcccgcac cgatcgccct tcccaacagt tgcgcagcct gaatggcgaa
     2701 tgggacgcgc cctgtagcgg cgcattaagc gcggcgggtg tggtggttac gcgcagcgtg
     2761 accgctacac ttgccagcgc cctagcgccc gctcctttcg ctttcttccc ttcctttctc
     2821 gccacgttcg ccggctttcc ccgtcaagct ctaaatcggg ggctcccttt agggttccga
     2881 tttagtgctt tacggcacct cgaccccaaa aaacttgatt agggtgatgg ttcacgtagt
     2941 gggccatcgc cctgatagac ggtttttcgc cctttgacgt tggagtccac gttctttaat
     3001 agtggactct tgttccaaac tggaacaaca ctcaacccta tctcggtcta ttcttttgat
     3061 ttataaggga ttttgccgat ttcggcctat tggttaaaaa atgagctgat ttaacaaaaa
     3121 tttaacgcga attttaacaa aatattaacg cttacaattt aggtggcact tttcggggaa
     3181 atgtgcgcgg aacccctatt tgtttatttt tctaaataca ttcaaatatg tatccgctca
     3241 tgagacaata accctgataa atgcttcaat aatattgaaa aaggaagagt atgagtattc
     3301 aacatttccg tgtcgccctt attccctttt ttgcggcatt ttgccttcct gtttttgctc
     3361 acccagaaac gctggtgaaa gtaaaagatg ctgaagatca gttgggtgca cgagtgggtt
     3421 acatcgaact ggatctcaac agcggtaaga tccttgagag ttttcgcccc gaagaacgtt
     3481 ttccaatgat gagcactttt aaagttctgc tatgtggcgc ggtattatcc cgtattgacg
     3541 ccgggcaaga gcaactcggt cgccgcatac actattctca gaatgacttg gttgagtact
     3601 caccagtcac agaaaagcat cttacggatg gcatgacagt aagagaatta tgcagtgctg
     3661 ccataaccat gagtgataac actgcggcca acttacttct gacaacgatc ggaggaccga
     3721 aggagctaac cgcttttttg cacaacatgg gggatcatgt aactcgcctt gatcgttggg
     3781 aaccggagct gaatgaagcc ataccaaacg acgagcgtga caccacgatg cctgtagcaa
     3841 tggcaacaac gttgcgcaaa ctattaactg gcgaactact tactctagct tcccggcaac
     3901 aattaataga ctggatggag gcggataaag ttgcaggacc acttctgcgc tcggcccttc
     3961 cggctggctg gtttattgct gataaatctg gagccggtga gcgtgggtct cgcggtatca
     4021 ttgcagcact ggggccagat ggtaagccct cccgtatcgt agttatctac acgacgggga
     4081 gtcaggcaac tatggatgaa cgaaatagac agatcgctga gataggtgcc tcactgatta
     4141 agcattggta actgtcagac caagtttact catatatact ttagattgat ttaaaacttc
     4201 atttttaatt taaaaggatc taggtgaaga tcctttttga taatctcatg accaaaatcc
     4261 cttaacgtga gttttcgttc cactgagcgt cagaccccgt agaaaagatc aaaggatctt
     4321 cttgagatcc tttttttctg cgcgtaatct gctgcttgca aacaaaaaaa ccaccgctac
     4381 cagcggtggt ttgtttgccg gatcaagagc taccaactct ttttccgaag gtaactggct
     4441 tcagcagagc gcagatacca aatactgttc ttctagtgta gccgtagtta ggccaccact
     4501 tcaagaactc tgtagcaccg cctacatacc tcgctctgct aatcctgtta ccagtggctg
     4561 ctgccagtgg cgataagtcg tgtcttaccg ggttggactc aagacgatag ttaccggata
     4621 aggcgcagcg gtcgggctga acggggggtt cgtgcacaca gcccagcttg gagcgaacga
     4681 cctacaccga actgagatac ctacagcgtg agctatgaga aagcgccacg cttcccgaag
     4741 ggagaaaggc ggacaggtat ccggtaagcg gcagggtcgg aacaggagag cgcacgaggg
     4801 agcttccagg gggaaacgcc tggtatcttt atagtcctgt cgggtttcgc cacctctgac
     4861 ttgagcgtcg atttttgtga tgctcgtcag gggggcggag cctatggaaa aacgccagca
     4921 acgcggcctt tttacggttc ctggcctttt gctggccttt tgctcacatg ttctttcctg
     4981 cgttatcccc tgattctgtg gataaccgta ttaccgcctt tgagtgagct gataccgctc
     5041 gccgcagccg aacgaccgag cgcagcgagt cagtgagcga ggaagcggaa gagcgcccaa
     5101 tacgcaaacc gcctctcccc gcgcgttggc cgattcatta atgcagctgg cacgacaggt
     5161 ttcccgactg gaaagcgggc agtgagcgca acgcaattaa tgtgagttag ctcactcatt
     5221 aggcacccca ggctttacac tttatgcttc cggctcgtat gttgtgtgga attgtgagcg
     5281 gataacaatt tcacacagga aacagctatg accatgatta cgccaagcgc gcaattaacc
     5341 ctcactaaag ggaacaaaag ctggagctgc aagcttaatg tagtcttatg caatactctt
     5401 gtagtcttgc aacatggtaa cgatgagtta gcaacatgcc ttacaaggag agaaaaagca
     5461 ccgtgcatgc cgattggtgg aagtaaggtg gtacgatcgt gccttattag gaaggcaaca
     5521 gacgggtctg acatggattg gacgaaccac tgaattgccg cattgcagag atattgtatt
     5581 taagtgccta gctcgataca taaacgggtc tctctggtta gaccagatct gagcctggga
     5641 gctctctggc taactaggga acccactgct taagcctcaa taaagcttgc cttgagtgct
     5701 tcaagtagtg tgtgcccgtc tgttgtgtga ctctggtaac tagagatccc tcagaccctt
     5761 ttagtcagtg tggaaaatct ctagcagtgg cgcccgaaca gggacttgaa agcgaaaggg
     5821 aaaccagagg agctctctcg acgcaggact cggcttgctg aagcgcgcac ggcaagaggc
     5881 gaggggcggc gactggtgag tacgccaaaa attttgacta gcggaggcta gaaggagaga
     5941 gatgggtgcg agagcgtcag tattaagcgg gggagaatta gatcgcgatg ggaaaaaatt
     6001 cggttaaggc cagggggaaa gaaaaaatat aaattaaaac atatagtatg ggcaagcagg
     6061 gagctagaac gattcgcagt taatcctggc ctgttagaaa catcagaagg ctgtagacaa
     6121 atactgggac agctacaacc atcccttcag acaggatcag aagaacttag atcattatat
     6181 aatacagtag caaccctcta ttgtgtgcat caaaggatag agataaaaga caccaaggaa
     6241 gctttagaca agatagagga agagcaaaac aaaagtaaga ccaccgcaca gcaagcggcc
     6301 gctgatcttc agacctggag gaggagatat gagggacaat tggagaagtg aattatataa
     6361 atataaagta gtaaaaattg aaccattagg agtagcaccc accaaggcaa agagaagagt
     6421 ggtgcagaga gaaaaaagag cagtgggaat aggagctttg ttccttgggt tcttgggagc
     6481 agcaggaagc actatgggcg cagcgtcaat gacgctgacg gtacaggcca gacaattatt
     6541 gtctggtata gtgcagcagc agaacaattt gctgagggct attgaggcgc aacagcatct
     6601 gttgcaactc acagtctggg gcatcaagca gctccaggca agaatcctgg ctgtggaaag
     6661 atacctaaag gatcaacagc tcctggggat ttggggttgc tctggaaaac tcatttgcac
     6721 cactgctgtg ccttggaatg ctagttggag taataaatct ctggaacaga tttggaatca
     6781 cacgacctgg atggagtggg acagagaaat taacaattac acaagcttaa tacactcctt
     6841 aattgaagaa tcgcaaaacc agcaagaaaa gaatgaacaa gaattattgg aattagataa
     6901 atgggcaagt ttgtggaatt ggtttaacat aacaaattgg ctgtggtata taaaattatt
     6961 cataatgata gtaggaggct tggtaggttt aagaatagtt tttgctgtac tttctatagt
     7021 gaatagagtt aggcagggat attcaccatt atcgtttcag acccacctcc caaccccgag
     7081 gggacccgac aggcccgaag gaatagaaga agaaggtgga gagagagaca gagacagatc
     7141 cattcgatta gtgaacggat ctcgacggta tcgatcacga gactagcctc gagcggccgc
     7201 ccccttcacc gagggcctat ttcccatgat tccttcatat ttgcatatac gatacaaggc
     7261 tgttagagag ataattggaa ttaatttgac tgtaaacaca aagatattag tacaaaatac
     7321 gtgacgtaga aagtaataat ttcttgggta gtttgcagtt ttaaaattat gttttaaaat
     7381 ggactatca
//

质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
         收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
         1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              ①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
              ②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
              ③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
              ④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
              ⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
              ⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
        2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
              四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
        3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
        4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              直接挑取单菌落至液体培养基中。
        5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
              单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
        6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。

二、转化图片

P2229/pSV40-Calm1-m小鼠基因质粒

P2230/pSV40-Cacybp-m小鼠基因质粒

P2231/pSV40-Nat8f1-m小鼠基因质粒

P2232/pSV40-Ttr-m小鼠基因质粒

P2233/pSV40-Vamp3-m小鼠基因质粒

P2240/pSV40-Ptgds-m小鼠基因质粒

P2241/pSV40-Ppia-m小鼠基因质粒

P2242/pSV40-Plp1-m小鼠基因质粒

P2243/pSV40-Anapc11-m小鼠基因质粒

P2244/pSV40-Arf3-m小鼠基因质粒

P2245/pSV40-Fam103a1-m小鼠基因质粒

P2246/pSV40-Dexi-m小鼠基因质粒