1-碘-4-(1-丙烯-2-基)苯；561023-21-0

十二烷基硫酸钠―聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS―PAGE)

十二烷基硫酸钠―聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS ― PAGE) 第二相聚丙烯胺 胺凝胶的选择主要取决于需要分离蛋白质的相对分子质量的范围，这与单相的聚丙烯酰胺凝胶电泳的选择是相同的。当蛋白质相对分子质量在15 000～200 000时，电泳迁移率与相对分子质量的对数呈线性关系。SDS―PAGE不仅可分离蛋白质，且可在一定范围内粗略测定蛋白质的相对分子质量。其主要步骤如下。 (1)凝胶配制及灌胶：胶浓度越高，所分离蛋白质的相对分子质量范围也越大。薄的胶，其染色和脱色快，且背景

SDS-PAGE电泳常见问题分析

（1）还原SDS处理：在上样buffer中加入SDS和DTT(或Beta巯基乙醇)后，蛋白质构象被解离，电荷被中和，形成SDS与蛋白相结合的分子，在电泳中，只根据分子量来分离。一般电泳均按这种方式处理，样品稀释适当浓度，加入上样Buffer，离心，沸水煮5min，再离心加样。 （2）带有烷基化作用的还原SDS处理：碘乙酸胺的烷基化作用可以很好的并经久牢固的保护SH基团，得到较窄的谱带;另碘乙酸胺可捕集过量的DTT，而防止银染时的纹理现象。100μl样品缓冲液中10μl 20%的碘

专家点评：双向电泳中常犯的六大错误

C左右，然后加入碘乙酰胺。通常我们在100 μl样品中加入10 μl 20%(w/v)的碘乙酰胺水溶液，并在室温下孵育30分钟。 通过这一步，我们可以获得更为锐利的条带，并排除了一些假象，如两条带、其他的高分子量条带、点样孔中的沉淀，以及凝胶上的线。 4. SDS电泳中运行缓冲液的滴定 到目前为止，大部分单向和双向SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳的应用是在基于Lämmli的不连续缓冲液系统中开展的[1]。其他基于磷酸盐、咪唑或其他缓冲液的均一系统表现