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- 上海
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- 2025年07月14日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
pLVX-Puro
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pLVX-Puro慢病毒表达质粒
别称: pLVX-Puro
质粒属性
质粒简介
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 8102 bp ds-DNA circular SYN 27-AUG-2016
DEFINITION synthetic circular DNA
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS Untitled 14
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 8102)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported Saturday, August 27, 2016 from SnapGene Viewer 3.1.4
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..8102
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
LTR 1..634
/note="3' LTR"
/note="3' long terminal repeat (LTR) from HIV-1"
misc_feature 681..806
/note="HIV-1 Psi"
/note="packaging signal of human immunodeficiency virus
type 1"
misc_feature 1303..1536
/note="RRE"
/note="The Rev response element (RRE) of HIV-1 allows for
Rev-dependent mRNA export from the nucleus to the
cytoplasm."
misc_feature 2028..2143
/note="cPPT/CTS"
/note="central polypurine tract and central termination
sequence of HIV-1 (lacking the first T)"
enhancer 2201..2504
/note="CMV enhancer"
/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
promoter 2505..2708
/note="CMV promoter"
/note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early
promoter"
misc_feature 2811..2867
/note="MCS"
/note="multiple cloning site"
promoter 2890..3389
/note="PGK promoter"
/note="mouse phosphoglycerate kinase 1 promoter"
CDS 3410..4009
/codon_start=1
/gene="pac from Streptomyces alboniger"
/product="puromycin N-acetyltransferase"
/note="PuroR"
/note="confers resistance to puromycin"
/translation="MTEYKPTVRLATRDDVPRAVRTLAAAFADYPATRHTVDPDRHIER
VTELQELFLTRVGLDIGKVWVADDGAAVAVWTTPESVEAGAVFAEIGPRMAELSGSRLA
AQQQMEGLLAPHRPKEPAWFLATVGVSPDHQGKGLGSAVVLPGVEAAERAGVPAFLETS
APRNLPFYERLGFTVTADVEVPEGPRTWCMTRKPGA"
misc_feature 4023..4611
/note="WPRE"
/note="woodchuck hepatitis virus posttranscriptional
regulatory element"
CDS complement(4494..4505)
/codon_start=1
/product="Factor Xa recognition and cleavage site"
/note="Factor Xa site"
/translation="IEGR"
LTR 4818..5451
/note="3' LTR"
/note="3' long terminal repeat (LTR) from HIV-1"
primer_bind complement(5580..5596)
/note="M13 rev"
/note="common sequencing primer, one of multiple similar
variants"
protein_bind 5604..5620
/bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
/note="lac operator"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
promoter complement(5628..5658)
/note="lac promoter"
/note="promoter for the E. coli lac operon"
protein_bind 5673..5694
/bound_moiety="E. coli catabolite activator protein"
/note="CAP binding site"
/note="CAP binding activates transcription in the presence
of cAMP."
rep_origin complement(5982..6570)
/direction=LEFT
/note="ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(6741..7601)
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/note="AmpR"
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
promoter complement(7602..7706)
/gene="bla"
/note="AmpR promoter"
polyA_signal 7754..7888
/note="SV40 poly(A) signal"
/note="SV40 polyadenylation signal"
ORIGIN
1 tggaagggct aattcactcc caaagaagac aagatatcct tgatctgtgg atctaccaca
61 cacaaggcta cttccctgat tagcagaact acacaccagg gccaggggtc agatatccac
121 tgacctttgg atggtgctac aagctagtac cagttgagcc agataaggta gaagaggcca
181 ataaaggaga gaacaccagc ttgttacacc ctgtgagcct gcatgggatg gatgacccgg
241 agagagaagt gttagagtgg aggtttgaca gccgcctagc atttcatcac gtggcccgag
301 agctgcatcc ggagtacttc aagaactgct gatatcgagc ttgctacaag ggactttccg
361 ctggggactt tccagggagg cgtggcctgg gcgggactgg ggagtggcga gccctcagat
421 cctgcatata agcagctgct ttttgcctgt actgggtctc tctggttaga ccagatctga
481 gcctgggagc tctctggcta actagggaac ccactgctta agcctcaata aagcttgcct
541 tgagtgcttc aagtagtgtg tgcccgtctg ttgtgtgact ctggtaacta gagatccctc
601 agaccctttt agtcagtgtg gaaaatctct agcagtggcg cccgaacagg gacttgaaag
661 cgaaagggaa accagaggag ctctctcgac gcaggactcg gcttgctgaa gcgcgcacgg
721 caagaggcga ggggcggcga ctggtgagta cgccaaaaat tttgactagc ggaggctaga
781 aggagagaga tgggtgcgag agcgtcagta ttaagcgggg gagaattaga tcgcgatggg
841 aaaaaattcg gttaaggcca gggggaaaga aaaaatataa attaaaacat atagtatggg
901 caagcaggga gctagaacga ttcgcagtta atcctggcct gttagaaaca tcagaaggct
961 gtagacaaat actgggacag ctacaaccat cccttcagac aggatcagaa gaacttagat
1021 cattatataa tacagtagca accctctatt gtgtgcatca aaggatagag ataaaagaca
1081 ccaaggaagc tttagacaag atagaggaag agcaaaacaa aagtaagacc accgcacagc
1141 aagcggccgg ccgctgatct tcagacctgg aggaggagat atgagggaca attggagaag
1201 tgaattatat aaatataaag tagtaaaaat tgaaccatta ggagtagcac ccaccaaggc
1261 aaagagaaga gtggtgcaga gagaaaaaag agcagtggga ataggagctt tgttccttgg
1321 gttcttggga gcagcaggaa gcactatggg cgcagcgtca atgacgctga cggtacaggc
1381 cagacaatta ttgtctggta tagtgcagca gcagaacaat ttgctgaggg ctattgaggc
1441 gcaacagcat ctgttgcaac tcacagtctg gggcatcaag cagctccagg caagaatcct
1501 ggctgtggaa agatacctaa aggatcaaca gctcctgggg atttggggtt gctctggaaa
1561 actcatttgc accactgctg tgccttggaa tgctagttgg agtaataaat ctctggaaca
1621 gatttggaat cacacgacct ggatggagtg ggacagagaa attaacaatt acacaagctt
1681 aatacactcc ttaattgaag aatcgcaaaa ccagcaagaa aagaatgaac aagaattatt
1741 ggaattagat aaatgggcaa gtttgtggaa ttggtttaac ataacaaatt ggctgtggta
1801 tataaaatta ttcataatga tagtaggagg cttggtaggt ttaagaatag tttttgctgt
1861 actttctata gtgaatagag ttaggcaggg atattcacca ttatcgtttc agacccacct
1921 cccaaccccg aggggacccg acaggcccga aggaatagaa gaagaaggtg gagagagaga
1981 cagagacaga tccattcgat tagtgaacgg atctcgacgg tatcgccttt aaaagaaaag
2041 gggggattgg ggggtacagt gcaggggaaa gaatagtaga cataatagca acagacatac
2101 aaactaaaga attacaaaaa caaattacaa aaattcaaaa ttttcgggtt tattacaggg
2161 acagcagaga tccagtttat cgataagctt gggagttccg cgttacataa cttacggtaa
2221 atggcccgcc tggctgaccg cccaacgacc cccgcccatt gacgtcaata atgacgtatg
2281 ttcccatagt aacgccaata gggactttcc attgacgtca atgggtggag tatttacggt
2341 aaactgccca cttggcagta catcaagtgt atcatatgcc aagtacgccc cctattgacg
2401 tcaatgacgg taaatggccc gcctggcatt atgcccagta catgacctta tgggactttc
2461 ctacttggca gtacatctac gtattagtca tcgctattac catggtgatg cggttttggc
2521 agtacatcaa tgggcgtgga tagcggtttg actcacgggg atttccaagt ctccacccca
2581 ttgacgtcaa tgggagtttg ttttggcacc aaaatcaacg ggactttcca aaatgtcgta
2641 acaactccgc cccattgacg caaatgggcg gtaggcgtgt acggtgggag gtctatataa
2701 gcagagctcg tttagtgaac cgtcagatcg cctggagacg ccatccacgc tgttttgacc
2761 tccatagaag acaccgactc tactagagga tcgctagcgc taccggactc agatctcgag
2821 ctcaagcttc gaattctgca gtcgacggta ccgcgggccc gggatcccgc gactctagat
2881 aattctaccg ggtaggggag gcgcttttcc caaggcagtc tggagcatgc gctttagcag
2941 ccccgctggg cacttggcgc tacacaagtg gcctctggcc tcgcacacat tccacatcca
3001 ccggtaggcg ccaaccggct ccgttctttg gtggcccctt cgcgccacct tctactcctc
3061 ccctagtcag gaagttcccc cccgccccgc agctcgcgtc gtgcaggacg tgacaaatgg
3121 aagtagcacg tctcactagt ctcgtgcaga tggacagcac cgctgagcaa tggaagcggg
3181 taggcctttg gggcagcggc caatagcagc tttgctcctt cgctttctgg gctcagaggc
3241 tgggaagggg tgggtccggg ggcgggctca ggggcgggct caggggcggg gcgggcgccc
3301 gaaggtcctc cggaggcccg gcattctgca cgcttcaaaa gcgcacgtct gccgcgctgt
3361 tctcctcttc ctcatctccg ggcctttcga cctgcagccc aagcttacca tgaccgagta
3421 caagcccacg gtgcgcctcg ccacccgcga cgacgtcccc agggccgtac gcaccctcgc
3481 cgccgcgttc gccgactacc ccgccacgcg ccacaccgtc gatccggacc gccacatcga
3541 gcgggtcacc gagctgcaag aactcttcct cacgcgcgtc gggctcgaca tcggcaaggt
3601 gtgggtcgcg gacgacggcg ccgcggtggc ggtctggacc acgccggaga gcgtcgaagc
3661 gggggcggtg ttcgccgaga tcggcccgcg catggccgag ttgagcggtt cccggctggc
3721 cgcgcagcaa cagatggaag gcctcctggc gccgcaccgg cccaaggagc ccgcgtggtt
3781 cctggccacc gtcggcgtct cgcccgacca ccagggcaag ggtctgggca gcgccgtcgt
3841 gctccccgga gtggaggcgg ccgagcgcgc cggggtgccc gccttcctgg agacctccgc
3901 gccccgcaac ctccccttct acgagcggct cggcttcacc gtcaccgccg acgtcgaggt
3961 gcccgaagga ccgcgcacct ggtgcatgac ccgcaagccc ggtgcctgac cgcgtctgga
4021 acaatcaacc tctggattac aaaatttgtg aaagattgac tggtattctt aactatgttg
4081 ctccttttac gctatgtgga tacgctgctt taatgccttt gtatcatgct attgcttccc
4141 gtatggcttt cattttctcc tccttgtata aatcctggtt gctgtctctt tatgaggagt
4201 tgtggcccgt tgtcaggcaa cgtggcgtgg tgtgcactgt gtttgctgac gcaaccccca
4261 ctggttgggg cattgccacc acctgtcagc tcctttccgg gactttcgct ttccccctcc
4321 ctattgccac ggcggaactc atcgccgcct gccttgcccg ctgctggaca ggggctcggc
4381 tgttgggcac tgacaattcc gtggtgttgt cggggaagct gacgtccttt ccatggctgc
4441 tcgcctgtgt tgccacctgg attctgcgcg ggacgtcctt ctgctacgtc ccttcggccc
4501 tcaatccagc ggaccttcct tcccgcggcc tgctgccggc tctgcggcct cttccgcgtc
4561 ttcgccttcg ccctcagacg agtcggatct ccctttgggc cgcctccccg cctggaatta
4621 attctgcagt cgagacctag aaaaacatgg agcaatcaca agtagcaata cagcagctac
4681 caatgctgat tgtgcctggc tagaagcaca agaggaggag gaggtgggtt ttccagtcac
4741 acctcaggta cctttaagac caatgactta caaggcagct gtagatctta gccacttttt
4801 aaaagaaaag aggggactgg aagggctaat tcactcccaa cgaagacaag atatccttga
4861 tctgtggatc taccacacac aaggctactt ccctgattag cagaactaca caccagggcc
4921 aggggtcaga tatccactga cctttggatg gtgctacaag ctagtaccag ttgagccaga
4981 taaggtagaa gaggccaata aaggagagaa caccagcttg ttacaccctg tgagcctgca
5041 tgggatggat gacccggaga gagaagtgtt agagtggagg tttgacagcc gcctagcatt
5101 tcatcacgtg gcccgagagc tgcatccgga gtacttcaag aactgctgat atcgagcttg
5161 ctacaaggga ctttccgctg gggactttcc agggaggcgt ggcctgggcg ggactgggga
5221 gtggcgagcc ctcagatcct gcatataagc agctgctttt tgcctgtact gggtctctct
5281 ggttagacca gatctgagcc tgggagctct ctggctaact agggaaccca ctgcttaagc
5341 ctcaataaag cttgccttga gtgcttcaag tagtgtgtgc ccgtctgttg tgtgactctg
5401 gtaactagag atccctcaga cccttttagt cagtgtggaa aatctctagc agtagtagtt
5461 catgtcatct tattattcag tatttataac ttgcaaagaa atgaatatca gagagtgaga
5521 ggccttgaca ttgctagcgt tttaccgtcg acctctagct agagcttggc gtaatcatgg
5581 tcatagctgt ttcctgtgtg aaattgttat ccgctcacaa ttccacacaa catacgagcc
5641 ggaagcataa agtgtaaagc ctggggtgcc taatgagtga gctaactcac attaattgcg
5701 ttgcgctcac tgcccgcttt ccagtcggga aacctgtcgt gccagctgca ttaatgaatc
5761 ggccaacgcg cggggagagg cggtttgcgt attgggcgct cttccgcttc ctcgctcact
5821 gactcgctgc gctcggtcgt tcggctgcgg cgagcggtat cagctcactc aaaggcggta
5881 atacggttat ccacagaatc aggggataac gcaggaaaga acatgtgagc aaaaggccag
5941 caaaaggcca ggaaccgtaa aaaggccgcg ttgctggcgt ttttccatag gctccgcccc
6001 cctgacgagc atcacaaaaa tcgacgctca agtcagaggt ggcgaaaccc gacaggacta
6061 taaagatacc aggcgtttcc ccctggaagc tccctcgtgc gctctcctgt tccgaccctg
6121 ccgcttaccg gatacctgtc cgcctttctc ccttcgggaa gcgtggcgct ttctcatagc
6181 tcacgctgta ggtatctcag ttcggtgtag gtcgttcgct ccaagctggg ctgtgtgcac
6241 gaaccccccg ttcagcccga ccgctgcgcc ttatccggta actatcgtct tgagtccaac
6301 ccggtaagac acgacttatc gccactggca gcagccactg gtaacaggat tagcagagcg
6361 aggtatgtag gcggtgctac agagttcttg aagtggtggc ctaactacgg ctacactaga
6421 agaacagtat ttggtatctg cgctctgctg aagccagtta ccttcggaaa aagagttggt
6481 agctcttgat ccggcaaaca aaccaccgct ggtagcggtg gtttttttgt ttgcaagcag
6541 cagattacgc gcagaaaaaa aggatctcaa gaagatcctt tgatcttttc tacggggtct
6601 gacgctcagt ggaacgaaaa ctcacgttaa gggattttgg tcatgagatt atcaaaaagg
6661 atcttcacct agatcctttt aaattaaaaa tgaagtttta aatcaatcta aagtatatat
6721 gagtaaactt ggtctgacag ttaccaatgc ttaatcagtg aggcacctat ctcagcgatc
6781 tgtctatttc gttcatccat agttgcctga ctccccgtcg tgtagataac tacgatacgg
6841 gagggcttac catctggccc cagtgctgca atgataccgc gagacccacg ctcaccggct
6901 ccagatttat cagcaataaa ccagccagcc ggaagggccg agcgcagaag tggtcctgca
6961 actttatccg cctccatcca gtctattaat tgttgccggg aagctagagt aagtagttcg
7021 ccagttaata gtttgcgcaa cgttgttgcc attgctacag gcatcgtggt gtcacgctcg
7081 tcgtttggta tggcttcatt cagctccggt tcccaacgat caaggcgagt tacatgatcc
7141 cccatgttgt gcaaaaaagc ggttagctcc ttcggtcctc cgatcgttgt cagaagtaag
7201 ttggccgcag tgttatcact catggttatg gcagcactgc ataattctct tactgtcatg
7261 ccatccgtaa gatgcttttc tgtgactggt gagtactcaa ccaagtcatt ctgagaatag
7321 tgtatgcggc gaccgagttg ctcttgcccg gcgtcaatac gggataatac cgcgccacat
7381 agcagaactt taaaagtgct catcattgga aaacgttctt cggggcgaaa actctcaagg
7441 atcttaccgc tgttgagatc cagttcgatg taacccactc gtgcacccaa ctgatcttca
7501 gcatctttta ctttcaccag cgtttctggg tgagcaaaaa caggaaggca aaatgccgca
7561 aaaaagggaa taagggcgac acggaaatgt tgaatactca tactcttcct ttttcaatat
7621 tattgaagca tttatcaggg ttattgtctc atgagcggat acatatttga atgtatttag
7681 aaaaataaac aaataggggt tccgcgcaca tttccccgaa aagtgccacc tgacgtcgac
7741 ggatcgggag atcaacttgt ttattgcagc ttataatggt tacaaataaa gcaatagcat
7801 cacaaatttc acaaataaag catttttttc actgcattct agttgtggtt tgtccaaact
7861 catcaatgta tcttatcatg tctggatcaa ctggataact caagctaacc aaaatcatcc
7921 caaacttccc accccatacc ctattaccac tgccaattac ctgtggtttc atttactcta
7981 aacctgtgat tcctctgaat tattttcatt ttaaagaaat tgtatttgtt aaatatgtac
8041 tacaaactta gtagttttta aagaaattgt atttgttaaa tatgtactac aaacttagta
8101 gt
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pLVX-Puro慢病毒表达质粒
别称: pLVX-Puro
| 启动子: | CMV |
|---|---|
| 复制子: | pUC |
| 终止子: | SV40 poly(A) signal |
| 质粒分类: | 病毒系列，慢病毒克隆质粒 |
| 质粒大小: | 8102bp |
| 原核抗性: | Amp |
| 筛选标记: | Puro |
| 克隆菌株: | Stbl3 |
| 培养条件: | 37度 |
| 表达宿主: | 哺乳细胞 |
| 5'测序引物: | CMV-F：CGCAAATGGGCGGTAGGCGTG |
| 3'测序引物: | 根据序列设计引物 |
质粒属性
| 质粒宿主： | 哺乳细胞,慢病毒 |
|---|---|
| 质粒用途： | 蛋白表达 |
| 片段类型： | ORF |
| 片段物种： | 空载体 |
| 原核抗性： | Amp |
| 真核抗性： | Puro |
| 荧光标记： |
质粒简介
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 8102 bp ds-DNA circular SYN 27-AUG-2016
DEFINITION synthetic circular DNA
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS Untitled 14
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 8102)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported Saturday, August 27, 2016 from SnapGene Viewer 3.1.4
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..8102
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
LTR 1..634
/note="3' LTR"
/note="3' long terminal repeat (LTR) from HIV-1"
misc_feature 681..806
/note="HIV-1 Psi"
/note="packaging signal of human immunodeficiency virus
type 1"
misc_feature 1303..1536
/note="RRE"
/note="The Rev response element (RRE) of HIV-1 allows for
Rev-dependent mRNA export from the nucleus to the
cytoplasm."
misc_feature 2028..2143
/note="cPPT/CTS"
/note="central polypurine tract and central termination
sequence of HIV-1 (lacking the first T)"
enhancer 2201..2504
/note="CMV enhancer"
/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
promoter 2505..2708
/note="CMV promoter"
/note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early
promoter"
misc_feature 2811..2867
/note="MCS"
/note="multiple cloning site"
promoter 2890..3389
/note="PGK promoter"
/note="mouse phosphoglycerate kinase 1 promoter"
CDS 3410..4009
/codon_start=1
/gene="pac from Streptomyces alboniger"
/product="puromycin N-acetyltransferase"
/note="PuroR"
/note="confers resistance to puromycin"
/translation="MTEYKPTVRLATRDDVPRAVRTLAAAFADYPATRHTVDPDRHIER
VTELQELFLTRVGLDIGKVWVADDGAAVAVWTTPESVEAGAVFAEIGPRMAELSGSRLA
AQQQMEGLLAPHRPKEPAWFLATVGVSPDHQGKGLGSAVVLPGVEAAERAGVPAFLETS
APRNLPFYERLGFTVTADVEVPEGPRTWCMTRKPGA"
misc_feature 4023..4611
/note="WPRE"
/note="woodchuck hepatitis virus posttranscriptional
regulatory element"
CDS complement(4494..4505)
/codon_start=1
/product="Factor Xa recognition and cleavage site"
/note="Factor Xa site"
/translation="IEGR"
LTR 4818..5451
/note="3' LTR"
/note="3' long terminal repeat (LTR) from HIV-1"
primer_bind complement(5580..5596)
/note="M13 rev"
/note="common sequencing primer, one of multiple similar
variants"
protein_bind 5604..5620
/bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
/note="lac operator"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
promoter complement(5628..5658)
/note="lac promoter"
/note="promoter for the E. coli lac operon"
protein_bind 5673..5694
/bound_moiety="E. coli catabolite activator protein"
/note="CAP binding site"
/note="CAP binding activates transcription in the presence
of cAMP."
rep_origin complement(5982..6570)
/direction=LEFT
/note="ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(6741..7601)
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/note="AmpR"
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
promoter complement(7602..7706)
/gene="bla"
/note="AmpR promoter"
polyA_signal 7754..7888
/note="SV40 poly(A) signal"
/note="SV40 polyadenylation signal"
ORIGIN
1 tggaagggct aattcactcc caaagaagac aagatatcct tgatctgtgg atctaccaca
61 cacaaggcta cttccctgat tagcagaact acacaccagg gccaggggtc agatatccac
121 tgacctttgg atggtgctac aagctagtac cagttgagcc agataaggta gaagaggcca
181 ataaaggaga gaacaccagc ttgttacacc ctgtgagcct gcatgggatg gatgacccgg
241 agagagaagt gttagagtgg aggtttgaca gccgcctagc atttcatcac gtggcccgag
301 agctgcatcc ggagtacttc aagaactgct gatatcgagc ttgctacaag ggactttccg
361 ctggggactt tccagggagg cgtggcctgg gcgggactgg ggagtggcga gccctcagat
421 cctgcatata agcagctgct ttttgcctgt actgggtctc tctggttaga ccagatctga
481 gcctgggagc tctctggcta actagggaac ccactgctta agcctcaata aagcttgcct
541 tgagtgcttc aagtagtgtg tgcccgtctg ttgtgtgact ctggtaacta gagatccctc
601 agaccctttt agtcagtgtg gaaaatctct agcagtggcg cccgaacagg gacttgaaag
661 cgaaagggaa accagaggag ctctctcgac gcaggactcg gcttgctgaa gcgcgcacgg
721 caagaggcga ggggcggcga ctggtgagta cgccaaaaat tttgactagc ggaggctaga
781 aggagagaga tgggtgcgag agcgtcagta ttaagcgggg gagaattaga tcgcgatggg
841 aaaaaattcg gttaaggcca gggggaaaga aaaaatataa attaaaacat atagtatggg
901 caagcaggga gctagaacga ttcgcagtta atcctggcct gttagaaaca tcagaaggct
961 gtagacaaat actgggacag ctacaaccat cccttcagac aggatcagaa gaacttagat
1021 cattatataa tacagtagca accctctatt gtgtgcatca aaggatagag ataaaagaca
1081 ccaaggaagc tttagacaag atagaggaag agcaaaacaa aagtaagacc accgcacagc
1141 aagcggccgg ccgctgatct tcagacctgg aggaggagat atgagggaca attggagaag
1201 tgaattatat aaatataaag tagtaaaaat tgaaccatta ggagtagcac ccaccaaggc
1261 aaagagaaga gtggtgcaga gagaaaaaag agcagtggga ataggagctt tgttccttgg
1321 gttcttggga gcagcaggaa gcactatggg cgcagcgtca atgacgctga cggtacaggc
1381 cagacaatta ttgtctggta tagtgcagca gcagaacaat ttgctgaggg ctattgaggc
1441 gcaacagcat ctgttgcaac tcacagtctg gggcatcaag cagctccagg caagaatcct
1501 ggctgtggaa agatacctaa aggatcaaca gctcctgggg atttggggtt gctctggaaa
1561 actcatttgc accactgctg tgccttggaa tgctagttgg agtaataaat ctctggaaca
1621 gatttggaat cacacgacct ggatggagtg ggacagagaa attaacaatt acacaagctt
1681 aatacactcc ttaattgaag aatcgcaaaa ccagcaagaa aagaatgaac aagaattatt
1741 ggaattagat aaatgggcaa gtttgtggaa ttggtttaac ataacaaatt ggctgtggta
1801 tataaaatta ttcataatga tagtaggagg cttggtaggt ttaagaatag tttttgctgt
1861 actttctata gtgaatagag ttaggcaggg atattcacca ttatcgtttc agacccacct
1921 cccaaccccg aggggacccg acaggcccga aggaatagaa gaagaaggtg gagagagaga
1981 cagagacaga tccattcgat tagtgaacgg atctcgacgg tatcgccttt aaaagaaaag
2041 gggggattgg ggggtacagt gcaggggaaa gaatagtaga cataatagca acagacatac
2101 aaactaaaga attacaaaaa caaattacaa aaattcaaaa ttttcgggtt tattacaggg
2161 acagcagaga tccagtttat cgataagctt gggagttccg cgttacataa cttacggtaa
2221 atggcccgcc tggctgaccg cccaacgacc cccgcccatt gacgtcaata atgacgtatg
2281 ttcccatagt aacgccaata gggactttcc attgacgtca atgggtggag tatttacggt
2341 aaactgccca cttggcagta catcaagtgt atcatatgcc aagtacgccc cctattgacg
2401 tcaatgacgg taaatggccc gcctggcatt atgcccagta catgacctta tgggactttc
2461 ctacttggca gtacatctac gtattagtca tcgctattac catggtgatg cggttttggc
2521 agtacatcaa tgggcgtgga tagcggtttg actcacgggg atttccaagt ctccacccca
2581 ttgacgtcaa tgggagtttg ttttggcacc aaaatcaacg ggactttcca aaatgtcgta
2641 acaactccgc cccattgacg caaatgggcg gtaggcgtgt acggtgggag gtctatataa
2701 gcagagctcg tttagtgaac cgtcagatcg cctggagacg ccatccacgc tgttttgacc
2761 tccatagaag acaccgactc tactagagga tcgctagcgc taccggactc agatctcgag
2821 ctcaagcttc gaattctgca gtcgacggta ccgcgggccc gggatcccgc gactctagat
2881 aattctaccg ggtaggggag gcgcttttcc caaggcagtc tggagcatgc gctttagcag
2941 ccccgctggg cacttggcgc tacacaagtg gcctctggcc tcgcacacat tccacatcca
3001 ccggtaggcg ccaaccggct ccgttctttg gtggcccctt cgcgccacct tctactcctc
3061 ccctagtcag gaagttcccc cccgccccgc agctcgcgtc gtgcaggacg tgacaaatgg
3121 aagtagcacg tctcactagt ctcgtgcaga tggacagcac cgctgagcaa tggaagcggg
3181 taggcctttg gggcagcggc caatagcagc tttgctcctt cgctttctgg gctcagaggc
3241 tgggaagggg tgggtccggg ggcgggctca ggggcgggct caggggcggg gcgggcgccc
3301 gaaggtcctc cggaggcccg gcattctgca cgcttcaaaa gcgcacgtct gccgcgctgt
3361 tctcctcttc ctcatctccg ggcctttcga cctgcagccc aagcttacca tgaccgagta
3421 caagcccacg gtgcgcctcg ccacccgcga cgacgtcccc agggccgtac gcaccctcgc
3481 cgccgcgttc gccgactacc ccgccacgcg ccacaccgtc gatccggacc gccacatcga
3541 gcgggtcacc gagctgcaag aactcttcct cacgcgcgtc gggctcgaca tcggcaaggt
3601 gtgggtcgcg gacgacggcg ccgcggtggc ggtctggacc acgccggaga gcgtcgaagc
3661 gggggcggtg ttcgccgaga tcggcccgcg catggccgag ttgagcggtt cccggctggc
3721 cgcgcagcaa cagatggaag gcctcctggc gccgcaccgg cccaaggagc ccgcgtggtt
3781 cctggccacc gtcggcgtct cgcccgacca ccagggcaag ggtctgggca gcgccgtcgt
3841 gctccccgga gtggaggcgg ccgagcgcgc cggggtgccc gccttcctgg agacctccgc
3901 gccccgcaac ctccccttct acgagcggct cggcttcacc gtcaccgccg acgtcgaggt
3961 gcccgaagga ccgcgcacct ggtgcatgac ccgcaagccc ggtgcctgac cgcgtctgga
4021 acaatcaacc tctggattac aaaatttgtg aaagattgac tggtattctt aactatgttg
4081 ctccttttac gctatgtgga tacgctgctt taatgccttt gtatcatgct attgcttccc
4141 gtatggcttt cattttctcc tccttgtata aatcctggtt gctgtctctt tatgaggagt
4201 tgtggcccgt tgtcaggcaa cgtggcgtgg tgtgcactgt gtttgctgac gcaaccccca
4261 ctggttgggg cattgccacc acctgtcagc tcctttccgg gactttcgct ttccccctcc
4321 ctattgccac ggcggaactc atcgccgcct gccttgcccg ctgctggaca ggggctcggc
4381 tgttgggcac tgacaattcc gtggtgttgt cggggaagct gacgtccttt ccatggctgc
4441 tcgcctgtgt tgccacctgg attctgcgcg ggacgtcctt ctgctacgtc ccttcggccc
4501 tcaatccagc ggaccttcct tcccgcggcc tgctgccggc tctgcggcct cttccgcgtc
4561 ttcgccttcg ccctcagacg agtcggatct ccctttgggc cgcctccccg cctggaatta
4621 attctgcagt cgagacctag aaaaacatgg agcaatcaca agtagcaata cagcagctac
4681 caatgctgat tgtgcctggc tagaagcaca agaggaggag gaggtgggtt ttccagtcac
4741 acctcaggta cctttaagac caatgactta caaggcagct gtagatctta gccacttttt
4801 aaaagaaaag aggggactgg aagggctaat tcactcccaa cgaagacaag atatccttga
4861 tctgtggatc taccacacac aaggctactt ccctgattag cagaactaca caccagggcc
4921 aggggtcaga tatccactga cctttggatg gtgctacaag ctagtaccag ttgagccaga
4981 taaggtagaa gaggccaata aaggagagaa caccagcttg ttacaccctg tgagcctgca
5041 tgggatggat gacccggaga gagaagtgtt agagtggagg tttgacagcc gcctagcatt
5101 tcatcacgtg gcccgagagc tgcatccgga gtacttcaag aactgctgat atcgagcttg
5161 ctacaaggga ctttccgctg gggactttcc agggaggcgt ggcctgggcg ggactgggga
5221 gtggcgagcc ctcagatcct gcatataagc agctgctttt tgcctgtact gggtctctct
5281 ggttagacca gatctgagcc tgggagctct ctggctaact agggaaccca ctgcttaagc
5341 ctcaataaag cttgccttga gtgcttcaag tagtgtgtgc ccgtctgttg tgtgactctg
5401 gtaactagag atccctcaga cccttttagt cagtgtggaa aatctctagc agtagtagtt
5461 catgtcatct tattattcag tatttataac ttgcaaagaa atgaatatca gagagtgaga
5521 ggccttgaca ttgctagcgt tttaccgtcg acctctagct agagcttggc gtaatcatgg
5581 tcatagctgt ttcctgtgtg aaattgttat ccgctcacaa ttccacacaa catacgagcc
5641 ggaagcataa agtgtaaagc ctggggtgcc taatgagtga gctaactcac attaattgcg
5701 ttgcgctcac tgcccgcttt ccagtcggga aacctgtcgt gccagctgca ttaatgaatc
5761 ggccaacgcg cggggagagg cggtttgcgt attgggcgct cttccgcttc ctcgctcact
5821 gactcgctgc gctcggtcgt tcggctgcgg cgagcggtat cagctcactc aaaggcggta
5881 atacggttat ccacagaatc aggggataac gcaggaaaga acatgtgagc aaaaggccag
5941 caaaaggcca ggaaccgtaa aaaggccgcg ttgctggcgt ttttccatag gctccgcccc
6001 cctgacgagc atcacaaaaa tcgacgctca agtcagaggt ggcgaaaccc gacaggacta
6061 taaagatacc aggcgtttcc ccctggaagc tccctcgtgc gctctcctgt tccgaccctg
6121 ccgcttaccg gatacctgtc cgcctttctc ccttcgggaa gcgtggcgct ttctcatagc
6181 tcacgctgta ggtatctcag ttcggtgtag gtcgttcgct ccaagctggg ctgtgtgcac
6241 gaaccccccg ttcagcccga ccgctgcgcc ttatccggta actatcgtct tgagtccaac
6301 ccggtaagac acgacttatc gccactggca gcagccactg gtaacaggat tagcagagcg
6361 aggtatgtag gcggtgctac agagttcttg aagtggtggc ctaactacgg ctacactaga
6421 agaacagtat ttggtatctg cgctctgctg aagccagtta ccttcggaaa aagagttggt
6481 agctcttgat ccggcaaaca aaccaccgct ggtagcggtg gtttttttgt ttgcaagcag
6541 cagattacgc gcagaaaaaa aggatctcaa gaagatcctt tgatcttttc tacggggtct
6601 gacgctcagt ggaacgaaaa ctcacgttaa gggattttgg tcatgagatt atcaaaaagg
6661 atcttcacct agatcctttt aaattaaaaa tgaagtttta aatcaatcta aagtatatat
6721 gagtaaactt ggtctgacag ttaccaatgc ttaatcagtg aggcacctat ctcagcgatc
6781 tgtctatttc gttcatccat agttgcctga ctccccgtcg tgtagataac tacgatacgg
6841 gagggcttac catctggccc cagtgctgca atgataccgc gagacccacg ctcaccggct
6901 ccagatttat cagcaataaa ccagccagcc ggaagggccg agcgcagaag tggtcctgca
6961 actttatccg cctccatcca gtctattaat tgttgccggg aagctagagt aagtagttcg
7021 ccagttaata gtttgcgcaa cgttgttgcc attgctacag gcatcgtggt gtcacgctcg
7081 tcgtttggta tggcttcatt cagctccggt tcccaacgat caaggcgagt tacatgatcc
7141 cccatgttgt gcaaaaaagc ggttagctcc ttcggtcctc cgatcgttgt cagaagtaag
7201 ttggccgcag tgttatcact catggttatg gcagcactgc ataattctct tactgtcatg
7261 ccatccgtaa gatgcttttc tgtgactggt gagtactcaa ccaagtcatt ctgagaatag
7321 tgtatgcggc gaccgagttg ctcttgcccg gcgtcaatac gggataatac cgcgccacat
7381 agcagaactt taaaagtgct catcattgga aaacgttctt cggggcgaaa actctcaagg
7441 atcttaccgc tgttgagatc cagttcgatg taacccactc gtgcacccaa ctgatcttca
7501 gcatctttta ctttcaccag cgtttctggg tgagcaaaaa caggaaggca aaatgccgca
7561 aaaaagggaa taagggcgac acggaaatgt tgaatactca tactcttcct ttttcaatat
7621 tattgaagca tttatcaggg ttattgtctc atgagcggat acatatttga atgtatttag
7681 aaaaataaac aaataggggt tccgcgcaca tttccccgaa aagtgccacc tgacgtcgac
7741 ggatcgggag atcaacttgt ttattgcagc ttataatggt tacaaataaa gcaatagcat
7801 cacaaatttc acaaataaag catttttttc actgcattct agttgtggtt tgtccaaact
7861 catcaatgta tcttatcatg tctggatcaa ctggataact caagctaacc aaaatcatcc
7921 caaacttccc accccatacc ctattaccac tgccaattac ctgtggtttc atttactcta
7981 aacctgtgat tcctctgaat tattttcatt ttaaagaaat tgtatttgtt aaatatgtac
8041 tacaaactta gtagttttta aagaaattgt atttgttaaa tatgtactac aaacttagta
8101 gt
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P3905/pCMV-SPORT6-AQP3人源基因质粒 |
| P3906/pCMV-SPORT6-TMED3（1同义突变）人源基因质粒 |
| P3907/pCMV-SPORT6-TMEM184B人源基因质粒 |
| P3908/pCMV-SPORT6-CHST8人源基因质粒 |
| P3909/pCMV-SPORT6-ATP5IF1（2点突变）人源基因质粒 |
| P3910/pCMV-SPORT6-LYRM4（1点突变）人源基因质粒 |
| P3911/pCMV-SPORT6-ADIPOR1人源基因质粒 |
| P3912/pCMV-SPORT6-WSB2人源基因质粒 |
| P3913/pCMV-SPORT6-FEZ1人源基因质粒 |
| P3914/pCMV-SPORT6-SLC50A1人源基因质粒 |
| P3915/pCMV-SPORT6-GOPC人源基因质粒 |
| P3916/pCMV-SPORT6-TBRG4人源基因质粒 |
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文献和实验相关实验
但感觉自己包装效率还是不太高，做起来不好弄 kinguangjun 你可以考虑clontech的pLVX-ShRNA2和pLVX-IRES-ZsGreen1慢病毒系统，比invitrogen的慢病毒系统要高两个数量级以上，我们实验室一直都用这个系统。 jinanfendou 看你做什么实验了，慢病毒载体系统很多公司有卖的，但是你自己包装的话，滴度可能达不到这么高，好转染的细胞还是可以的，但是要是难转染的细胞和动物
作为细胞生物学专业的博士生，在基因功能研究上已经有五年的经验了，今天我给大家讲讲其中经常用到并且非常重要的一种技术--慢病毒包装的过表达体系。下面我就从引物设计，慢病毒表达质粒构建等方面详细讲述。下面以 plex-MCS 载体为例。1. 选择酶切位点，为了避免移码突变，上游的酶切位点选择起始密码子 ATG 前面的 spel，下游选择 xho1。2. 构建方法的选择。连接法对于连接法，首先设计引物将目的基因 PCR 出来，即酶切位点加基因引物，此时应注意，为了防止酶切将基因破坏，通常习惯在两端
Cell Death Differ：中大五院黄曦团队发现新冠病毒引起肺损伤的分子机制
上皮细胞线粒体凋亡，并导致肺水肿的发生。 图片来源：Cell death & differentiation 病毒相关蛋白与细胞蛋白相互作用影响细胞凋亡过程。作者首先分别将携带刺突蛋白（Spike protein, S 蛋白），核衣壳蛋白（Nucleocapsid, N 蛋白），膜蛋白（Membrane protein, M 蛋白）和包膜蛋白（Envelope protein，E 蛋白）真核表达质粒载体分别转染人肺上皮 H292 细胞和人血管内皮 EA.hy926 细胞，通过荧光分光光度法检测胞内活化
pLVX-Puro慢病毒表达质粒
￥100 - 1000
