pLVML-Myc-MCS-IRES-Puro慢病毒表达质粒

基本信息
名称：pLVML-Myc-MCS-IRES-Puro慢病毒表达质粒
别称: pLVML-Myc-MCS-IRES-Puro

启动子:	CMV
复制子:	pUC
原核抗性:	Amp
筛选标记:	Puro
克隆菌株:	Stbl3
培养条件:	37度

质粒属性

载体宿主：	哺乳细胞,慢病毒
载体用途：	蛋白表达
基因种属：	空载体
基因类型：	ORF
原核抗性：	Amp
真核抗性：	Puro
荧光蛋白：

质粒简介
 pLVML-Myc-MCS-IRES-Puro慢病毒表达质粒

质粒图谱


质粒序列
LOCUS       Exported                8179 bp ds-DNA     circular SYN 06-JUL-2018
DEFINITION  synthetic circular DNA
ACCESSION   .
VERSION     .
KEYWORDS    pLVML-Myc-MCS-IRES-Puro
SOURCE      synthetic DNA construct
  ORGANISM  synthetic DNA construct
REFERENCE   1  (bases 1 to 8179)
  AUTHORS   .
  TITLE     Direct Submission
  JOURNAL   Exported Friday, July 6, 2018 from www.miaolingbio.com
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..8179
                     /organism="synthetic DNA construct"
                     /mol_type="other DNA"
     LTR             1..634
                     /note="3' LTR"
                     /note="3' long terminal repeat (LTR) from HIV-1"
     misc_feature    681..806
                     /note="HIV-1 Psi"
                     /note="packaging signal of human immunodeficiency virus 
                     type 1"
     misc_feature    1303..1536
                     /note="RRE"
                     /note="The Rev response element (RRE) of HIV-1 allows for 
                     Rev-dependent mRNA export from the nucleus to the 
                     cytoplasm."
     misc_feature    2028..2143
                     /note="cPPT/CTS"
                     /note="central polypurine tract and central termination 
                     sequence of HIV-1 (lacking the first T)"
     enhancer        2201..2504
                     /note="CMV enhancer"
                     /note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
     promoter        2505..2708
                     /note="CMV promoter"
                     /note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early 
                     promoter"
     regulatory      2809..2818
                     /regulatory_class="other"
                     /note="Kozak sequence"
                     /note="vertebrate consensus sequence for strong initiation 
                     of translation (Kozak, 1987)"
     CDS             2818..2847
                     /codon_start=1
                     /product="Myc (human c-Myc proto-oncogene) epitope tag"
                     /note="Myc"
                     /translation="EQKLISEEDL"
     misc_feature    2848..2879
                     /note="MCS"
     misc_feature    2882..3455
                     /note="IRES"
                     /note="internal ribosome entry site (IRES) of the 
                     encephalomyocarditis virus (EMCV)"
     CDS             3488..4087
                     /codon_start=1
                     /gene="pac from Streptomyces alboniger"
                     /product="puromycin N-acetyltransferase"
                     /note="PuroR"
                     /note="confers resistance to puromycin"
                     /translation="MTEYKPTVRLATRDDVPRAVRTLAAAFADYPATRHTVDPDRHIER
                     VTELQELFLTRVGLDIGKVWVADDGAAVAVWTTPESVEAGAVFAEIGPRMAELSGSRLA
                     AQQQMEGLLAPHRPKEPAWFLATVGVSPDHQGKGLGSAVVLPGVEAAERAGVPAFLETS
                     APRNLPFYERLGFTVTADVEVPEGPRTWCMTRKPGA"
     misc_feature    4101..4689
                     /note="WPRE"
                     /note="woodchuck hepatitis virus posttranscriptional 
                     regulatory element"
     LTR             4896..5529
                     /note="3' LTR"
                     /note="3' long terminal repeat (LTR) from HIV-1"
     rep_origin      complement(6059..6647)
                     /direction=LEFT
                     /note="ori"
                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 
                     replication"
     CDS             complement(6818..7678)
                     /codon_start=1
                     /gene="bla"
                     /product="beta-lactamase"
                     /note="AmpR"
                     /note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
                     related antibiotics"
                     /translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
                     ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
                     PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
                     EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
                     LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
                     LIKHW"
     promoter        complement(7679..7783)
                     /gene="bla"
                     /note="AmpR promoter"
     polyA_signal    7831..7965
                     /note="SV40 poly(A) signal"
                     /note="SV40 polyadenylation signal"
ORIGIN
        1 tggaagggct aattcactcc caaagaagac aagatatcct tgatctgtgg atctaccaca
       61 cacaaggcta cttccctgat tagcagaact acacaccagg gccaggggtc agatatccac
      121 tgacctttgg atggtgctac aagctagtac cagttgagcc agataaggta gaagaggcca
      181 ataaaggaga gaacaccagc ttgttacacc ctgtgagcct gcatgggatg gatgacccgg
      241 agagagaagt gttagagtgg aggtttgaca gccgcctagc atttcatcac gtggcccgag
      301 agctgcatcc ggagtacttc aagaactgct gatatcgagc ttgctacaag ggactttccg
      361 ctggggactt tccagggagg cgtggcctgg gcgggactgg ggagtggcga gccctcagat
      421 cctgcatata agcagctgct ttttgcctgt actgggtctc tctggttaga ccagatctga
      481 gcctgggagc tctctggcta actagggaac ccactgctta agcctcaata aagcttgcct
      541 tgagtgcttc aagtagtgtg tgcccgtctg ttgtgtgact ctggtaacta gagatccctc
      601 agaccctttt agtcagtgtg gaaaatctct agcagtggcg cccgaacagg gacttgaaag
      661 cgaaagggaa accagaggag ctctctcgac gcaggactcg gcttgctgaa gcgcgcacgg
      721 caagaggcga ggggcggcga ctggtgagta cgccaaaaat tttgactagc ggaggctaga
      781 aggagagaga tgggtgcgag agcgtcagta ttaagcgggg gagaattaga tcgcgatggg
      841 aaaaaattcg gttaaggcca gggggaaaga aaaaatataa attaaaacat atagtatggg
      901 caagcaggga gctagaacga ttcgcagtta atcctggcct gttagaaaca tcagaaggct
      961 gtagacaaat actgggacag ctacaaccat cccttcagac aggatcagaa gaacttagat
     1021 cattatataa tacagtagca accctctatt gtgtgcatca aaggatagag ataaaagaca
     1081 ccaaggaagc tttagacaag atagaggaag agcaaaacaa aagtaagacc accgcacagc
     1141 aagcggccgg ccgctgatct tcagacctgg aggaggagat atgagggaca attggagaag
     1201 tgaattatat aaatataaag tagtaaaaat tgaaccatta ggagtagcac ccaccaaggc
     1261 aaagagaaga gtggtgcaga gagaaaaaag agcagtggga ataggagctt tgttccttgg
     1321 gttcttggga gcagcaggaa gcactatggg cgcagcgtca atgacgctga cggtacaggc
     1381 cagacaatta ttgtctggta tagtgcagca gcagaacaat ttgctgaggg ctattgaggc
     1441 gcaacagcat ctgttgcaac tcacagtctg gggcatcaag cagctccagg caagaatcct
     1501 ggctgtggaa agatacctaa aggatcaaca gctcctgggg atttggggtt gctctggaaa
     1561 actcatttgc accactgctg tgccttggaa tgctagttgg agtaataaat ctctggaaca
     1621 gatttggaat cacacgacct ggatggagtg ggacagagaa attaacaatt acacaagctt
     1681 aatacactcc ttaattgaag aatcgcaaaa ccagcaagaa aagaatgaac aagaattatt
     1741 ggaattagat aaatgggcaa gtttgtggaa ttggtttaac ataacaaatt ggctgtggta
     1801 tataaaatta ttcataatga tagtaggagg cttggtaggt ttaagaatag tttttgctgt
     1861 actttctata gtgaatagag ttaggcaggg atattcacca ttatcgtttc agacccacct
     1921 cccaaccccg aggggacccg acaggcccga aggaatagaa gaagaaggtg gagagagaga
     1981 cagagacaga tccattcgat tagtgaacgg atctcgacgg tatcgccttt aaaagaaaag
     2041 gggggattgg ggggtacagt gcaggggaaa gaatagtaga cataatagca acagacatac
     2101 aaactaaaga attacaaaaa caaattacaa aaattcaaaa ttttcgggtt tattacaggg
     2161 acagcagaga tccagtttat cgataagctt gggagttccg cgttacataa cttacggtaa
     2221 atggcccgcc tggctgaccg cccaacgacc cccgcccatt gacgtcaata atgacgtatg
     2281 ttcccatagt aacgccaata gggactttcc attgacgtca atgggtggag tatttacggt
     2341 aaactgccca cttggcagta catcaagtgt atcatatgcc aagtacgccc cctattgacg
     2401 tcaatgacgg taaatggccc gcctggcatt atgcccagta catgacctta tgggactttc
     2461 ctacttggca gtacatctac gtattagtca tcgctattac catggtgatg cggttttggc
     2521 agtacatcaa tgggcgtgga tagcggtttg actcacgggg atttccaagt ctccacccca
     2581 ttgacgtcaa tgggagtttg ttttggcacc aaaatcaacg ggactttcca aaatgtcgta
     2641 acaactccgc cccattgacg caaatgggcg gtaggcgtgt acggtgggag gtctatataa
     2701 gcagagctcg tttagtgaac cgtcagatcg cctggagacg ccatccacgc tgttttgacc
     2761 tccatagaag acaccgactc tactagagga tctatttccg gtgaattcgc caccatggaa
     2821 caaaaactca tctcagaaga ggatctgctc gagactagtt ctagagcggc cgcggatccc
     2881 gcccctctcc ctcccccccc cctaacgtta ctggccgaag ccgcttggaa taaggccggt
     2941 gtgcgtttgt ctatatgtta ttttccacca tattgccgtc ttttggcaat gtgagggccc
     3001 ggaaacctgg ccctgtcttc ttgacgagca ttcctagggg tctttcccct ctcgccaaag
     3061 gaatgcaagg tctgttgaat gtcgtgaagg aagcagttcc tctggaagct tcttgaagac
     3121 aaacaacgtc tgtagcgacc ctttgcaggc agcggaaccc cccacctggc gacaggtgcc
     3181 tctgcggcca aaagccacgt gtataagata cacctgcaaa ggcggcacaa ccccagtgcc
     3241 acgttgtgag ttggatagtt gtggaaagag tcaaatggct ctcctcaagc gtattcaaca
     3301 aggggctgaa ggatgcccag aaggtacccc attgtatggg atctgatctg gggcctcggt
     3361 gcacatgctt tacatgtgtt tagtcgaggt taaaaaaacg tctaggcccc ccgaaccacg
     3421 gggacgtggt tttcctttga aaaacacgat gataagcttg ccacaaccca caaggagacg
     3481 accttccatg accgagtaca agcccacggt gcgcctcgcc acccgcgacg acgtcccccg
     3541 ggccgtacgc accctcgccg ccgcgttcgc cgactacccc gccacgcgcc acaccgtcga
     3601 cccggaccgc cacatcgagc gggtcaccga gctgcaagaa ctcttcctca cgcgcgtcgg
     3661 gctcgacatc ggcaaggtgt gggtcgcgga cgacggcgcc gcggtggcgg tctggaccac
     3721 gccggagagc gtcgaagcgg gggcggtgtt cgccgagatc ggcccgcgca tggccgagtt
     3781 gagcggttcc cggctggccg cgcagcaaca gatggaaggc ctcctggcgc cgcaccggcc
     3841 caaggagccc gcgtggttcc tggccaccgt cggcgtctcg cccgaccacc agggcaaggg
     3901 tctgggcagc gccgtcgtgc tccccggagt ggaggcggcc gagcgcgccg gggtgcccgc
     3961 cttcctggag acctccgcgc cccgcaacct ccccttctac gagcggctcg gcttcaccgt
     4021 caccgccgac gtcgaggtgc ccgaaggacc gcgcacctgg tgcatgaccc gcaagcccgg
     4081 tgcctagacg cgtctggaac aatcaacctc tggattacaa aatttgtgaa agattgactg
     4141 gtattcttaa ctatgttgct ccttttacgc tatgtggata cgctgcttta atgcctttgt
     4201 atcatgctat tgcttcccgt atggctttca ttttctcctc cttgtataaa tcctggttgc
     4261 tgtctcttta tgaggagttg tggcccgttg tcaggcaacg tggcgtggtg tgcactgtgt
     4321 ttgctgacgc aacccccact ggttggggca ttgccaccac ctgtcagctc ctttccggga
     4381 ctttcgcttt ccccctccct attgccacgg cggaactcat cgccgcctgc cttgcccgct
     4441 gctggacagg ggctcggctg ttgggcactg acaattccgt ggtgttgtcg gggaagctga
     4501 cgtcctttcc atggctgctc gcctgtgttg ccacctggat tctgcgcggg acgtccttct
     4561 gctacgtccc ttcggccctc aatccagcgg accttccttc ccgcggcctg ctgccggctc
     4621 tgcggcctct tccgcgtctt cgccttcgcc ctcagacgag tcggatctcc ctttgggccg
     4681 cctccccgcc tggaattaat tctgcagtcg agacctagaa aaacatggag caatcacaag
     4741 tagcaataca gcagctacca atgctgattg tgcctggcta gaagcacaag aggaggagga
     4801 ggtgggtttt ccagtcacac ctcaggtacc tttaagacca atgacttaca aggcagctgt
     4861 agatcttagc cactttttaa aagaaaagag gggactggaa gggctaattc actcccaacg
     4921 aagacaagat atccttgatc tgtggatcta ccacacacaa ggctacttcc ctgattagca
     4981 gaactacaca ccagggccag gggtcagata tccactgacc tttggatggt gctacaagct
     5041 agtaccagtt gagccagata aggtagaaga ggccaataaa ggagagaaca ccagcttgtt
     5101 acaccctgtg agcctgcatg ggatggatga cccggagaga gaagtgttag agtggaggtt
     5161 tgacagccgc ctagcatttc atcacgtggc ccgagagctg catccggagt acttcaagaa
     5221 ctgctgatat cgagcttgct acaagggact ttccgctggg gactttccag ggaggcgtgg
     5281 cctgggcggg actggggagt ggcgagccct cagatcctgc atataagcag ctgctttttg
     5341 cctgtactgg gtctctctgg ttagaccaga tctgagcctg ggagctctct ggctaactag
     5401 ggaacccact gcttaagcct caataaagct tgccttgagt gcttcaagta gtgtgtgccc
     5461 gtctgttgtg tgactctggt aactagagat ccctcagacc cttttagtca gtgtggaaaa
     5521 tctctagcag tagtagttca tgtcatctta ttattcagta tttataactt gcaaagaaat
     5581 gaatatcaga gagtgagagg ccttgacatt gctagcgttt accgtcgacc tctagctaga
     5641 gcttggcgta atcatggtca tagctgtttc ctgtgtgaaa ttgttatccg ctcacaattc
     5701 cacacaacat acgagccgga agcataaagt gtaaagcctg gggtgcctaa tgagtgagct
     5761 aactcacatt aattgcgttg cgctcactgc ccgctttcca gtcgggaaac ctgtcgtgcc
     5821 agctgcatta atgaatcggc caacgcgcgg ggagaggcgg tttgcgtatt gggcgctctt
     5881 ccgcttcctc gctcactgac tcgctgcgct cggtcgttcg gctgcggcga gcggtatcag
     5941 ctcactcaaa ggcggtaata cggttatcca cagaatcagg ggataacgca ggaaagaaca
     6001 tgtgagcaaa aggccagcaa aaggccagga accgtaaaaa ggccgcgttg ctggcgtttt
     6061 tccataggct ccgcccccct gacgagcatc acaaaaatcg acgctcaagt cagaggtggc
     6121 gaaacccgac aggactataa agataccagg cgtttccccc tggaagctcc ctcgtgcgct
     6181 ctcctgttcc gaccctgccg cttaccggat acctgtccgc ctttctccct tcgggaagcg
     6241 tggcgctttc tcatagctca cgctgtaggt atctcagttc ggtgtaggtc gttcgctcca
     6301 agctgggctg tgtgcacgaa ccccccgttc agcccgaccg ctgcgcctta tccggtaact
     6361 atcgtcttga gtccaacccg gtaagacacg acttatcgcc actggcagca gccactggta
     6421 acaggattag cagagcgagg tatgtaggcg gtgctacaga gttcttgaag tggtggccta
     6481 actacggcta cactagaaga acagtatttg gtatctgcgc tctgctgaag ccagttacct
     6541 tcggaaaaag agttggtagc tcttgatccg gcaaacaaac caccgctggt agcggtggtt
     6601 tttttgtttg caagcagcag attacgcgca gaaaaaaagg atctcaagaa gatcctttga
     6661 tcttttctac ggggtctgac gctcagtgga acgaaaactc acgttaaggg attttggtca
     6721 tgagattatc aaaaaggatc ttcacctaga tccttttaaa ttaaaaatga agttttaaat
     6781 caatctaaag tatatatgag taaacttggt ctgacagtta ccaatgctta atcagtgagg
     6841 cacctatctc agcgatctgt ctatttcgtt catccatagt tgcctgactc cccgtcgtgt
     6901 agataactac gatacgggag ggcttaccat ctggccccag tgctgcaatg ataccgcgag
     6961 acccacgctc accggctcca gatttatcag caataaacca gccagccgga agggccgagc
     7021 gcagaagtgg tcctgcaact ttatccgcct ccatccagtc tattaattgt tgccgggaag
     7081 ctagagtaag tagttcgcca gttaatagtt tgcgcaacgt tgttgccatt gctacaggca
     7141 tcgtggtgtc acgctcgtcg tttggtatgg cttcattcag ctccggttcc caacgatcaa
     7201 ggcgagttac atgatccccc atgttgtgca aaaaagcggt tagctccttc ggtcctccga
     7261 tcgttgtcag aagtaagttg gccgcagtgt tatcactcat ggttatggca gcactgcata
     7321 attctcttac tgtcatgcca tccgtaagat gcttttctgt gactggtgag tactcaacca
     7381 agtcattctg agaatagtgt atgcggcgac cgagttgctc ttgcccggcg tcaatacggg
     7441 ataataccgc gccacatagc agaactttaa aagtgctcat cattggaaaa cgttcttcgg
     7501 ggcgaaaact ctcaaggatc ttaccgctgt tgagatccag ttcgatgtaa cccactcgtg
     7561 cacccaactg atcttcagca tcttttactt tcaccagcgt ttctgggtga gcaaaaacag
     7621 gaaggcaaaa tgccgcaaaa aagggaataa gggcgacacg gaaatgttga atactcatac
     7681 tcttcctttt tcaatattat tgaagcattt atcagggtta ttgtctcatg agcggataca
     7741 tatttgaatg tatttagaaa aataaacaaa taggggttcc gcgcacattt ccccgaaaag
     7801 tgccacctga cgtcgacgga tcgggagatc aacttgttta ttgcagctta taatggttac
     7861 aaataaagca atagcatcac aaatttcaca aataaagcat ttttttcact gcattctagt
     7921 tgtggtttgt ccaaactcat caatgtatct tatcatgtct ggatcaactg gataactcaa
     7981 gctaaccaaa atcatcccaa acttcccacc ccatacccta ttaccactgc caattacctg
     8041 tggtttcatt tactctaaac ctgtgattcc tctgaattat tttcatttta aagaaattgt
     8101 atttgttaaa tatgtactac aaacttagta gtttttaaag aaattgtatt tgttaaatat
     8161 gtactacaaa cttagtagt
//

质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
         收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
         1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              ①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
              ②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
              ③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
              ④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
              ⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
              ⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
        2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
              四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
        3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
        4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              直接挑取单菌落至液体培养基中。
        5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
              单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
        6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。

二、转化图片

P3894/pCMV-SPORT6-TMSB10人源基因质粒

P3895/pCMV-SPORT6-RMDN1人源基因质粒

P3896/pCMV-SPORT6-PLEKHG2人源基因质粒

P3897/pCMV-SPORT6-LOC404266人源基因质粒

P3898/pCMV-SPORT6-CCL2人源基因质粒

P3899/pCMV-SPORT6-PROS1人源基因质粒

P3900/pCMV-SPORT6-SYTL4（1同义突变）人源基因质粒

P3901/pCMV-SPORT6-H2AFV人源基因质粒

P3902/pCMV-SPORT6-LMBR1L（1同义突变）人源基因质粒

P3903/pCMV-SPORT6-PEX26（1点突变）人源基因质粒

P3904/pCMV-SPORT6-RRAS人源基因质粒