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-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
pShuttle-CMV
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pShuttle-CMV腺病毒质粒
别称: pShuttle-CMV
质粒属性
质粒简介
The vector pShuttle-CMV contains a multiple cloning site sandwiched between the CMV promoter and the SV40 polyadenylation signal and is suitable for insertion of a large cDNA (up to 6.6 kb). pShuttle contains only a multiple cloning site. This allows for the insertion of an entire expression cassette, including specialized promoters and termination signals (up to 7.5 kb). The regions indicated as arms are the stretches of sequence homology with pAdEasy-1 where the homologous recombination occurs. The R-ITR and L-ITR regions are short inverted terminal repeats (Left and Right) which have a role in replication of the viral DNA.
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 7384 bp ds-DNA circular SYN 06-SEP-2016
DEFINITION synthetic circular DNA
KEYWORDS Untitled 9
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 7384)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..7384
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
enhancer 412..715
/note="CMV enhancer"
/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
promoter 716..919
/note="CMV promoter"
/note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early
promoter"
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/note="SV40 poly(A) signal"
/note="SV40 polyadenylation signal"
rep_origin complement(4756..5344)
/direction=LEFT
/note="ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS 6155..6949
/codon_start=1
/gene="aph(3')-II (or nptII)"
/product="aminoglycoside phosphotransferase from Tn5"
/note="NeoR/KanR"
/note="confers resistance to neomycin, kanamycin, and G418
(Geneticin(R))"
/translation="MIEQDGLHAGSPAAWVERLFGYDWAQQTIGCSDAAVFRLSAQGRP
VLFVKTDLSGALNELQDEAARLSWLATTGVPCAAVLDVVTEAGRDWLLLGEVPGQDLLS
SHLAPAEKVSIMADAMRRLHTLDPAT-CPFDHQAKHRIERARTRMEAGLVDQDDLDEEHQ
GLAPAELFARLKASMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRYQDIA
LATRDIAEELGGEWADRFLVLYGIAAPDSQRIAFYRLLDEFF"
gap 7364..7384
/estimated_length="21"
ORIGIN
1 nnnttaatta annntccctt ccagctctct gccccttttg gattgaagcc aatatgataa
61 tgagggggtg gagtttgtga cgtggcgcgg ggcgtgggaa cggggcgggt gacgtagtag
121 tgtggcggaa gtgtgatgtt gcaagtgtgg cggaacacat gtaagcgacg gatgtggcaa
181 aagtgacgtt tttggtgtgc gccggtgtac acaggaagtg acaattttcg cgcggtttta
241 ggcggatgtt gtagtaaatt tgggcgtaac cgagtaagat ttggccattt tcgcgggaaa
301 actgaataag aggaagtgaa atctgaataa ttttgtgtta ctcatagcgc gtaannnnta
361 atagtaatca attacggggt cattagttca tagcccatat atggagttcc gcgttacata
421 acttacggta aatggcccgc ctggctgacc gcccaacgac ccccgcccat tgacgtcaat
481 aatgacgtat gttcccatag taacgccaat agggactttc cattgacgtc aatgggtgga
541 gtatttacgg taaactgccc acttggcagt acatcaagtg tatcatatgc caagtacgcc
601 ccctattgac gtcaatgacg gtaaatggcc cgcctggcat tatgcccagt acatgacctt
661 atgggacttt cctacttggc agtacatcta cgtattagtc atcgctatta ccatggtgat
721 gcggttttgg cagtacatca atgggcgtgg atagcggttt gactcacggg gatttccaag
781 tctccacccc attgacgtca atgggagttt gttttggcac caaaatcaac gggactttcc
841 aaaatgtcgt aacaactccg ccccattgac gcaaatgggc ggtaggcgtg tacggtggga
901 ggtctatata agcagagctg gtttagtgaa ccgtcagatc cgctagagat ctggtaccgt
961 cgacgcggcc gctcgagcct aagcttctag ataagatatc cgatccaccg gatctagata
1021 actgatcata atcagccata ccacatttgt agaggtttta cttgctttaa aaaacctccc
1081 acacctcccc ctgaacctga aacataaaat gaatgcaatt gttgttgtta acttgtttat
1141 tgcagcttat aatggttaca aataaagcaa tagcatcaca aatttcacaa ataaagcatt
1201 tttttcactg cattctagtt gtggtttgtc caaactcatc aatgtatctt aacgcnnnnt
1261 aagggtggga aagaatatat aaggtggggg tcttatgtag ttttgtatct gttttgcagc
1321 agccgccgcc gccatgagca ccaactcgtt tgatggaagc attgtgagct catatttgac
1381 aacgcgcatg cccccatggg ccggggtgcg tcagaatgtg atgggctcca gcattgatgg
1441 tcgccccgtc ctgcccgcaa actctactac cttgacctac gagaccgtgt ctggaacgcc
1501 gttggagact gcagcctccg ccgccgcttc agccgctgca gccaccgccc gcgggattgt
1561 gactgacttt gctttcctga gcccgcttgc aagcagtgca gcttcccgtt catccgcccg
1621 cgatgacaag ttgacggctc ttttggcaca attggattct ttgacccggg aacttaatgt
1681 cgtttctcag cagctgttgg atctgcgcca gcaggtttct gccctgaagg cttcctcccc
1741 tcccaatgcg gtttaaaaca taaataaaaa accagactct gtttggattt ggatcaagca
1801 agtgtcttgc tgtctttatt taggggtttt gcgcgcgcgg taggcccggg accagcggtc
1861 tcggtcgttg agggtcctgt gtattttttc caggacgtgg taaaggtgac tctggatgtt
1921 cagatacatg ggcataagcc cgtctctggg gtggaggtag caccactgca gagcttcatg
1981 ctgcggggtg gtgttgtaga tgatccagtc gtagcaggag cgctgggcgt ggtgcctaaa
2041 aatgtctttc agtagcaagc tgattgccag gggcaggccc ttggtgtaag tgtttacaaa
2101 gcggttaagc tgggatgggt gcatacgtgg ggatatgaga tgcatcttgg actgtatttt
2161 taggttggct atgttcccag ccatatccct ccggggattc atgttgtgca gaaccaccag
2221 cacagtgtat ccggtgcact tgggaaattt gtcatgtagc ttagaaggaa atgcgtggaa
2281 gaacttggag acgcccttgt gacctccaag attttccatg cattcgtcca taatgatggc
2341 aatgggccca cgggcggcgg cctgggcgaa gatatttctg ggatcactaa cgtcatagtt
2401 gtgttccagg atgagatcgt cataggccat ttttacaaag cgcgggcgga gggtgccaga
2461 ctgcggtata atggttccat ccggcccagg ggcgtagtta ccctcacaga tttgcatttc
2521 ccacgctttg agttcagatg gggggatcat gtctacctgc ggggcgatga agaaaacggt
2581 ttccggggta ggggagatca gctgggaaga aagcaggttc ctgagcagct gcgacttacc
2641 gcagccggtg ggcccgtaaa tcacacctat taccgggtgc aactggtagt taagagagct
2701 gcagctgccg tcatccctga gcaggggggc cacttcgtta agcatgtccc tgactcgcat
2761 gttttccctg accaaatccg ccagaaggcg ctcgccgccc agcgatagca gttcttgcaa
2821 ggaagcaaag tttttcaacg gtttgagacc gtccgccgta ggcatgcttt tgagcgtttg
2881 accaagcagt tccaggcggt cccacagctc ggtcacctgc tctacggcat ctcgatccag
2941 catatctcct cgtttcgcgg gttggggcgg ctttcgctgt acggcagtag tcggtgctcg
3001 tccagacggg ccagggtcat gtctttccac gggcgcaggg tcctcgtcag cgtagtctgg
3061 gtcacggtga aggggtgcgc tccgggctgc gcgctggcca gggtgcgctt gaggctggtc
3121 ctgctggtgc tgaagcgctg ccggtcttcg ccctgcgcgt cggccaggta gcatttgacc
3181 atggtgtcat agtccagccc ctccgcggcg tggcccttgg cgcgcagctt gcccttggag
3241 gaggcgccgc acgaggggca gtgcagactt ttgagggcgt agagcttggg cgcgagaaat
3301 accgattccg gggagtaggc atccgcgccg caggccccgc agacggtctc gcattccacg
3361 agccaggtga gctctggccg ttcggggtca aaaaccaggt ttcccccatg ctttttgatg
3421 cgtttcttac ctctggtttc catgagccgg tgtccacgct cggtgacgaa aaggctgtcc
3481 gtgtccccgt atacagactn nngtttaaac gaattcnnna tataaaatgc aaggtgctgc
3541 tcaaaaaatc aggcaaagcc tcgcgcaaaa aagaaagcac atcgtagtca tgctcatgca
3601 gataaaggca ggtaagctcc ggaaccacca cagaaaaaga caccattttt ctctcaaaca
3661 tgtctgcggg tttctgcata aacacaaaat aaaataacaa aaaaacattt aaacattaga
3721 agcctgtctt acaacaggaa aaacaaccct tataagcata agacggacta cggccatgcc
3781 ggcgtgaccg taaaaaaact ggtcaccgtg attaaaaagc accaccgaca gctcctcggt
3841 catgtccgga gtcataatgt aagactcggt aaacacatca ggttgattca tcggtcagtg
3901 ctaaaaagcg accgaaatag cccgggggaa tacatacccg caggcgtaga gacaacatta
3961 cagcccccat aggaggtata acaaaattaa taggagagaa aaacacataa acacctgaaa
4021 aaccctcctg cctaggcaaa atagcaccct cccgctccag aacaacatac agcgcttcac
4081 agcggcagcc taacagtcag ccttaccagt aaaaaagaaa acctattaaa aaaacaccac
4141 tcgacacggc accagctcaa tcagtcacag tgtaaaaaag ggccaagtgc agagcgagta
4201 tatataggac taaaaaatga cgtaacggtt aaagtccaca aaaaacaccc agaaaaccgc
4261 acgcgaacct acgcccagaa acgaaagcca aaaaacccac aacttcctca aatcgtcact
4321 tccgttttcc cacgttacgt aacttcccat tttaagaaaa ctacaattcc caacacatac
4381 aagttactcc gccctaaaac ctacgtcacc cgccccgttc ccacgccccg cgccacgtca
4441 caaactccac cccctcatta tcatattggc ttcaatccaa aataaggtat attattgatg
4501 atnnnttaat taaggatccn nncggtgtga aataccgcac agatgcgtaa ggagaaaata
4561 ccgcatcagg cgctcttccg cttcctcgct cactgactcg ctgcgctcgg tcgttcggct
4621 gcggcgagcg gtatcagctc actcaaaggc ggtaatacgg ttatccacag aatcagggga
4681 taacgcagga aagaacatgt gagcaaaagg ccagcaaaag gccaggaacc gtaaaaaggc
4741 cgcgttgctg gcgtttttcc ataggctccg cccccctgac gagcatcaca aaaatcgacg
4801 ctcaagtcag aggtggcgaa acccgacagg actataaaga taccaggcgt ttccccctgg
4861 aagctccctc gtgcgctctc ctgttccgac cctgccgctt accggatacc tgtccgcctt
4921 tctcccttcg ggaagcgtgg cgctttctca tagctcacgc tgtaggtatc tcagttcggt
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5101 ggcagcagcc actggtaaca ggattagcag agcgaggtat gtaggcggtg ctacagagtt
5161 cttgaagtgg tggcctaact acggctacac tagaaggaca gtatttggta tctgcgctct
5221 gctgaagcca gttaccttcg gaaaaagagt tggtagctct tgatccggca aacaaaccac
5281 cgctggtagc ggtggttttt ttgtttgcaa gcagcagatt acgcgcagaa aaaaaggatc
5341 tcaagaagat cctttgatct tttctacggg gtctgacgct cagtggaacg aaaactcacg
5401 ttaagggatt ttggtcatga gattatcaaa aaggatcttc acctagatcc ttttaaatta
5461 aaaatgaagt tttaaatcaa tctaaagtat atatgagtaa acttggtctg acagttacca
5521 atgcttaatc agtgaggcac ctatctcagc gatctgtcta tttcgttcat ccatagttgc
5581 ctgactcccc gtcgtgtaga taactacgat acgggagggc ttaccatctg gccccagtgc
5641 tgcaatgata ccgcgagacc cacgctcacc ggctccagat ttatcagcaa taaaccagcc
5701 agccggaagg gccgagcgca gaagtggtcc tgcaacttta tccgcctcca tccagtctat
5761 taattgttgc cgggaagcta gagtaagtag ttcgccagtt aatagtttgc gcaacgttgt
5821 tgnnnnaaaa aggatcttca cctagatcct tttcacgtag aaagccagtc cgcagaaacg
5881 gtgctgaccc cggatgaatg tcagctactg ggctatctgg acaagggaaa acgcaagcgc
5941 aaagagaaag caggtagctt gcagtgggct tacatggcga tagctagact gggcggtttt
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6661 actgttcgcc aggctcaagg cgagcatgcc cgacggcgag gatctcgtcg tgacccatgg
6721 cgatgcctgc ttgccgaata tcatggtgga aaatggccgc ttttctggat tcatcgactg
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6901 cgattcgcag cgcatcgcct tctatcgcct tcttgacgag ttcttctgaa ttttgttaaa
6961 atttttgtta aatcagctca ttttttaacc aataggccga aatcggcaac atcccttata
7021 aatcaaaaga atagaccgcg atagggttga gtgttgttcc agtttggaac aagagtccac
7081 tattaaagaa cgtggactcc aacgtcaaag ggcgaaaaac cgtctatcag ggcgatggcc
7141 cactacgtga accatcaccc aaatcaagtt ttttgcggtc gaggtgccgt aaagctctaa
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7381 nnnn
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pShuttle-CMV腺病毒质粒
别称: pShuttle-CMV
| 启动子: | CMV |
|---|---|
| 复制子: | pUC |
| 终止子: | SV40 poly(A) signal |
| 质粒大小: | 7384bp |
| 原核抗性: | Kan |
| 筛选标记: | G418 |
| 克隆菌株: | Stbl3 |
| 培养条件: | 37度 |
| 表达宿主: | 哺乳细胞 |
| 诱导方式: | 无须诱导，瞬时表达 |
| 5'测序引物: | CMV-F：CGCAAATGGGCGGTAGGCGTG |
| 3'测序引物: | Sv40-polyA-R：GAAATTTGTGATGCTATTGC |
质粒属性
| 载体宿主： | 哺乳细胞,腺病毒 |
|---|---|
| 载体用途： | 蛋白表达 |
| 基因种属： | |
| 基因类型： | ORF |
| 原核抗性： | Kan |
| 真核抗性： | Neo/G418 |
| 荧光蛋白： |
质粒简介
The vector pShuttle-CMV contains a multiple cloning site sandwiched between the CMV promoter and the SV40 polyadenylation signal and is suitable for insertion of a large cDNA (up to 6.6 kb). pShuttle contains only a multiple cloning site. This allows for the insertion of an entire expression cassette, including specialized promoters and termination signals (up to 7.5 kb). The regions indicated as arms are the stretches of sequence homology with pAdEasy-1 where the homologous recombination occurs. The R-ITR and L-ITR regions are short inverted terminal repeats (Left and Right) which have a role in replication of the viral DNA.
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 7384 bp ds-DNA circular SYN 06-SEP-2016
DEFINITION synthetic circular DNA
KEYWORDS Untitled 9
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 7384)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..7384
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
enhancer 412..715
/note="CMV enhancer"
/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
promoter 716..919
/note="CMV promoter"
/note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early
promoter"
polyA_signal 1130..1251
/note="SV40 poly(A) signal"
/note="SV40 polyadenylation signal"
rep_origin complement(4756..5344)
/direction=LEFT
/note="ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS 6155..6949
/codon_start=1
/gene="aph(3')-II (or nptII)"
/product="aminoglycoside phosphotransferase from Tn5"
/note="NeoR/KanR"
/note="confers resistance to neomycin, kanamycin, and G418
(Geneticin(R))"
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SHLAPAEKVSIMADAMRRLHTLDPAT-CPFDHQAKHRIERARTRMEAGLVDQDDLDEEHQ
GLAPAELFARLKASMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRYQDIA
LATRDIAEELGGEWADRFLVLYGIAAPDSQRIAFYRLLDEFF"
gap 7364..7384
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ORIGIN
1 nnnttaatta annntccctt ccagctctct gccccttttg gattgaagcc aatatgataa
61 tgagggggtg gagtttgtga cgtggcgcgg ggcgtgggaa cggggcgggt gacgtagtag
121 tgtggcggaa gtgtgatgtt gcaagtgtgg cggaacacat gtaagcgacg gatgtggcaa
181 aagtgacgtt tttggtgtgc gccggtgtac acaggaagtg acaattttcg cgcggtttta
241 ggcggatgtt gtagtaaatt tgggcgtaac cgagtaagat ttggccattt tcgcgggaaa
301 actgaataag aggaagtgaa atctgaataa ttttgtgtta ctcatagcgc gtaannnnta
361 atagtaatca attacggggt cattagttca tagcccatat atggagttcc gcgttacata
421 acttacggta aatggcccgc ctggctgacc gcccaacgac ccccgcccat tgacgtcaat
481 aatgacgtat gttcccatag taacgccaat agggactttc cattgacgtc aatgggtgga
541 gtatttacgg taaactgccc acttggcagt acatcaagtg tatcatatgc caagtacgcc
601 ccctattgac gtcaatgacg gtaaatggcc cgcctggcat tatgcccagt acatgacctt
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721 gcggttttgg cagtacatca atgggcgtgg atagcggttt gactcacggg gatttccaag
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901 ggtctatata agcagagctg gtttagtgaa ccgtcagatc cgctagagat ctggtaccgt
961 cgacgcggcc gctcgagcct aagcttctag ataagatatc cgatccaccg gatctagata
1021 actgatcata atcagccata ccacatttgt agaggtttta cttgctttaa aaaacctccc
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1861 tcggtcgttg agggtcctgt gtattttttc caggacgtgg taaaggtgac tctggatgtt
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1981 ctgcggggtg gtgttgtaga tgatccagtc gtagcaggag cgctgggcgt ggtgcctaaa
2041 aatgtctttc agtagcaagc tgattgccag gggcaggccc ttggtgtaag tgtttacaaa
2101 gcggttaagc tgggatgggt gcatacgtgg ggatatgaga tgcatcttgg actgtatttt
2161 taggttggct atgttcccag ccatatccct ccggggattc atgttgtgca gaaccaccag
2221 cacagtgtat ccggtgcact tgggaaattt gtcatgtagc ttagaaggaa atgcgtggaa
2281 gaacttggag acgcccttgt gacctccaag attttccatg cattcgtcca taatgatggc
2341 aatgggccca cgggcggcgg cctgggcgaa gatatttctg ggatcactaa cgtcatagtt
2401 gtgttccagg atgagatcgt cataggccat ttttacaaag cgcgggcgga gggtgccaga
2461 ctgcggtata atggttccat ccggcccagg ggcgtagtta ccctcacaga tttgcatttc
2521 ccacgctttg agttcagatg gggggatcat gtctacctgc ggggcgatga agaaaacggt
2581 ttccggggta ggggagatca gctgggaaga aagcaggttc ctgagcagct gcgacttacc
2641 gcagccggtg ggcccgtaaa tcacacctat taccgggtgc aactggtagt taagagagct
2701 gcagctgccg tcatccctga gcaggggggc cacttcgtta agcatgtccc tgactcgcat
2761 gttttccctg accaaatccg ccagaaggcg ctcgccgccc agcgatagca gttcttgcaa
2821 ggaagcaaag tttttcaacg gtttgagacc gtccgccgta ggcatgcttt tgagcgtttg
2881 accaagcagt tccaggcggt cccacagctc ggtcacctgc tctacggcat ctcgatccag
2941 catatctcct cgtttcgcgg gttggggcgg ctttcgctgt acggcagtag tcggtgctcg
3001 tccagacggg ccagggtcat gtctttccac gggcgcaggg tcctcgtcag cgtagtctgg
3061 gtcacggtga aggggtgcgc tccgggctgc gcgctggcca gggtgcgctt gaggctggtc
3121 ctgctggtgc tgaagcgctg ccggtcttcg ccctgcgcgt cggccaggta gcatttgacc
3181 atggtgtcat agtccagccc ctccgcggcg tggcccttgg cgcgcagctt gcccttggag
3241 gaggcgccgc acgaggggca gtgcagactt ttgagggcgt agagcttggg cgcgagaaat
3301 accgattccg gggagtaggc atccgcgccg caggccccgc agacggtctc gcattccacg
3361 agccaggtga gctctggccg ttcggggtca aaaaccaggt ttcccccatg ctttttgatg
3421 cgtttcttac ctctggtttc catgagccgg tgtccacgct cggtgacgaa aaggctgtcc
3481 gtgtccccgt atacagactn nngtttaaac gaattcnnna tataaaatgc aaggtgctgc
3541 tcaaaaaatc aggcaaagcc tcgcgcaaaa aagaaagcac atcgtagtca tgctcatgca
3601 gataaaggca ggtaagctcc ggaaccacca cagaaaaaga caccattttt ctctcaaaca
3661 tgtctgcggg tttctgcata aacacaaaat aaaataacaa aaaaacattt aaacattaga
3721 agcctgtctt acaacaggaa aaacaaccct tataagcata agacggacta cggccatgcc
3781 ggcgtgaccg taaaaaaact ggtcaccgtg attaaaaagc accaccgaca gctcctcggt
3841 catgtccgga gtcataatgt aagactcggt aaacacatca ggttgattca tcggtcagtg
3901 ctaaaaagcg accgaaatag cccgggggaa tacatacccg caggcgtaga gacaacatta
3961 cagcccccat aggaggtata acaaaattaa taggagagaa aaacacataa acacctgaaa
4021 aaccctcctg cctaggcaaa atagcaccct cccgctccag aacaacatac agcgcttcac
4081 agcggcagcc taacagtcag ccttaccagt aaaaaagaaa acctattaaa aaaacaccac
4141 tcgacacggc accagctcaa tcagtcacag tgtaaaaaag ggccaagtgc agagcgagta
4201 tatataggac taaaaaatga cgtaacggtt aaagtccaca aaaaacaccc agaaaaccgc
4261 acgcgaacct acgcccagaa acgaaagcca aaaaacccac aacttcctca aatcgtcact
4321 tccgttttcc cacgttacgt aacttcccat tttaagaaaa ctacaattcc caacacatac
4381 aagttactcc gccctaaaac ctacgtcacc cgccccgttc ccacgccccg cgccacgtca
4441 caaactccac cccctcatta tcatattggc ttcaatccaa aataaggtat attattgatg
4501 atnnnttaat taaggatccn nncggtgtga aataccgcac agatgcgtaa ggagaaaata
4561 ccgcatcagg cgctcttccg cttcctcgct cactgactcg ctgcgctcgg tcgttcggct
4621 gcggcgagcg gtatcagctc actcaaaggc ggtaatacgg ttatccacag aatcagggga
4681 taacgcagga aagaacatgt gagcaaaagg ccagcaaaag gccaggaacc gtaaaaaggc
4741 cgcgttgctg gcgtttttcc ataggctccg cccccctgac gagcatcaca aaaatcgacg
4801 ctcaagtcag aggtggcgaa acccgacagg actataaaga taccaggcgt ttccccctgg
4861 aagctccctc gtgcgctctc ctgttccgac cctgccgctt accggatacc tgtccgcctt
4921 tctcccttcg ggaagcgtgg cgctttctca tagctcacgc tgtaggtatc tcagttcggt
4981 gtaggtcgtt cgctccaagc tgggctgtgt gcacgaaccc cccgttcagc ccgaccgctg
5041 cgccttatcc ggtaactatc gtcttgagtc caacccggta agacacgact tatcgccact
5101 ggcagcagcc actggtaaca ggattagcag agcgaggtat gtaggcggtg ctacagagtt
5161 cttgaagtgg tggcctaact acggctacac tagaaggaca gtatttggta tctgcgctct
5221 gctgaagcca gttaccttcg gaaaaagagt tggtagctct tgatccggca aacaaaccac
5281 cgctggtagc ggtggttttt ttgtttgcaa gcagcagatt acgcgcagaa aaaaaggatc
5341 tcaagaagat cctttgatct tttctacggg gtctgacgct cagtggaacg aaaactcacg
5401 ttaagggatt ttggtcatga gattatcaaa aaggatcttc acctagatcc ttttaaatta
5461 aaaatgaagt tttaaatcaa tctaaagtat atatgagtaa acttggtctg acagttacca
5521 atgcttaatc agtgaggcac ctatctcagc gatctgtcta tttcgttcat ccatagttgc
5581 ctgactcccc gtcgtgtaga taactacgat acgggagggc ttaccatctg gccccagtgc
5641 tgcaatgata ccgcgagacc cacgctcacc ggctccagat ttatcagcaa taaaccagcc
5701 agccggaagg gccgagcgca gaagtggtcc tgcaacttta tccgcctcca tccagtctat
5761 taattgttgc cgggaagcta gagtaagtag ttcgccagtt aatagtttgc gcaacgttgt
5821 tgnnnnaaaa aggatcttca cctagatcct tttcacgtag aaagccagtc cgcagaaacg
5881 gtgctgaccc cggatgaatg tcagctactg ggctatctgg acaagggaaa acgcaagcgc
5941 aaagagaaag caggtagctt gcagtgggct tacatggcga tagctagact gggcggtttt
6001 atggacagca agcgaaccgg aattgccagc tggggcgccc tctggtaagg ttgggaagcc
6061 ctgcaaagta aactggatgg ctttctcgcc gccaaggatc tgatggcgca ggggatcaag
6121 ctctgatcaa gagacaggat gaggatcgtt tcgcatgatt gaacaagatg gattgcacgc
6181 aggttctccg gccgcttggg tggagaggct attcggctat gactgggcac aacagacaat
6241 cggctgctct gatgccgccg tgttccggct gtcagcgcag gggcgcccgg ttctttttgt
6301 caagaccgac ctgtccggtg ccctgaatga actgcaagac gaggcagcgc ggctatcgtg
6361 gctggccacg acgggcgttc cttgcgcagc tgtgctcgac gttgtcactg aagcgggaag
6421 ggactggctg ctattgggcg aagtgccggg gcaggatctc ctgtcatctc accttgctcc
6481 tgccgagaaa gtatccatca tggctgatgc aatgcggcgg ctgcatacgc ttgatccggc
6541 tacctgccca ttcgaccacc aagcgaaaca tcgcatcgag cgagcacgta ctcggatgga
6601 agccggtctt gtcgatcagg atgatctgga cgaagagcat caggggctcg cgccagccga
6661 actgttcgcc aggctcaagg cgagcatgcc cgacggcgag gatctcgtcg tgacccatgg
6721 cgatgcctgc ttgccgaata tcatggtgga aaatggccgc ttttctggat tcatcgactg
6781 tggccggctg ggtgtggcgg accgctatca ggacatagcg ttggctaccc gtgatattgc
6841 tgaagagctt ggcggcgaat gggctgaccg cttcctcgtg ctttacggta tcgccgctcc
6901 cgattcgcag cgcatcgcct tctatcgcct tcttgacgag ttcttctgaa ttttgttaaa
6961 atttttgtta aatcagctca ttttttaacc aataggccga aatcggcaac atcccttata
7021 aatcaaaaga atagaccgcg atagggttga gtgttgttcc agtttggaac aagagtccac
7081 tattaaagaa cgtggactcc aacgtcaaag ggcgaaaaac cgtctatcag ggcgatggcc
7141 cactacgtga accatcaccc aaatcaagtt ttttgcggtc gaggtgccgt aaagctctaa
7201 atcggaaccc taaagggagc ccccgattta gagcttgacg gggaaagccg gcgaacgtgg
7261 cgagaaagga agggaagaaa gcgaaaggag cgggcgctag ggcgctggca agtgtagcgg
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质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P2372/pENTR223-RPLP0人源基因质粒 |
| P2373/pENTR223-RALYL人源基因质粒 |
| P2374/pENTR223-GPM6A人源基因质粒 |
| P2375/pENTR223-BLVRA人源基因质粒 |
| P2293/pENTR223-CDCA8人源基因质粒 |
| P2294/pENTR223-KLF6人源基因质粒 |
| P2328/pENTR223-RSU1人源基因质粒 |
| P2387/pENTR223-CCDC82-C445G人源基因质粒 |
| P2388/pENTR223-CDCP1人源基因质粒 |
| P2389/pENTR223-BTN2A2人源基因质粒 |
| P2390/pENTR223-MAX人源基因质粒 |
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文献和实验相关实验
hhyy601 别人赠予基因腺病毒质粒，邮寄过来的，拿到后，我该怎么办？多谢！ freecell 版内以前有讨论的。如果是点在滤纸上的，将滤纸减碎，然后浸泡在TE溶液中若干时间。随后低速离心，取上清。用滤膜过滤。将消毒的TE溶液转化相应宿主菌扩增即可。 whbf5 转化DH5a或者jm109这一类的菌中保种和扩增 本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯
基因，可通过 IRES 将两个目的基因相连； （ 3 ）携带干涉序列 shRNA 的穿梭质粒：首先将 H1 启动子构建到 pShuttle 质粒上，然后将目的基因克隆到 H1 启动子下游； 3 、重组腺病毒质粒构建： 携带目的基因的穿梭质粒线性化后与 Adeasy-1 共转 BJ5183 感受态细胞（电转），筛选得到重组腺病毒质粒，并经 PacI 酶切鉴定：可见目的质粒出现两条条带，分别为 3.0kb 或 4.5kb 和 >23Kb 两条条带。 将得到的重组腺病毒质粒转染 DH
、TCID50、PFU Page 16： 1. pShuttle-CMV图谱 2. 病毒滴度测定 3. 重组腺病毒质粒转染 4. 重组腺病毒传代 Page 17： 1. 噬斑纯化 2. Adeno-X系统腺病毒包装protocol 3. PCR鉴定重组载体的缺陷 4. Sequences of pAdTrack-CMV and pAdEasy-1 5. BJ5183中质粒提取 Page 18： 1. 重组后质粒鉴定 2. BJ5183细菌的验证 3. 腺
pShuttle-CMV腺病毒质粒
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