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- 2025年07月13日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
pRevTRE
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pRevTRE哺乳调控质粒
别称: NM_001308090.1;HD7;HD7A;HDAC7A
质粒属性
质粒简介
pRevTRE is a retroviral Tet response vector that expresses a gene of interest from the Tetresponse element (TRE). This vector is derived from pLNCX, a retroviral vector created using elements of Moloney murine leukemia virus (MoMuLV) and Moloney murine sarcoma virus (MoMuSV) as described (1). The TRE contains seven direct repeats of the tetO operator sequence, upstream of a minimal CMV promoter, which can be bound by the tTA and rtTA transactivators. The 5' viral LTR controls expression of the transcript that contains Ψ+ (the extended viral packaging signal) and the hygromycin resistance (Hygr) gene for antibiotic selection in mammalian cells. The TRE is derived from vectors described previously (2, 3). pRevTRE also includes the E. coli Ampr gene for antibiotic selection in bacteria.
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 6487 bp ds-DNA circular SYN 05-SEP-2016
DEFINITION synthetic circular DNA
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS Untitled 4
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 6487)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported Monday, September 5, 2016 from SnapGene Viewer 3.1.4
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..6487
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
LTR 414..589
/note="5' LTR (truncated)"
/note="truncated long terminal repeat from Moloney murine
sarcoma virus"
misc_feature 652..851
/note="MMLV Psi"
/note="packaging signal of Moloney murine leukemia virus
(MMLV)"
CDS 1052..1468
/note="gag (truncated)"
/note="truncated Moloney murine leukemia virus (MMLV) gag
gene lacking the start codon"
CDS 1524..2543
/codon_start=1
/gene="aph(4)-Ia"
/product="aminoglycoside phosphotransferase from E. coli"
/note="HygR"
/note="confers resistance to hygromycin"
/translation="KPELTATSVEKFLIEKFDSVSDLMQLSEGEESRAFSFDVGGRGYV
LRVNSCADGFYKDRYVYRHFASAALPIPEVLDIGEFSESLTYCISRRAQGVTLQDLPET
ELPAVLQPVAEAM-DAIAAADLSQTSGFGPFGPQGIGQYTTWRDFICAIADPHVYHWQTV
MDDTVSASVAQALDELMLWAEDCPEVRHLVHADFGSNNVLTDNGRITAVIDWSEAMFGD
SQYEVANIFFWRPWLACMEQQTRYFERRHPELAGSPRLRAYMLRIGLDQLYQSLVDGNF
DDAAWAQGRCDAIVRSGAGTVGRTQIARRSAAVWTDGCVEVLADSGNRRPSTRPRAKE"
protein_bind 2847..3117
/bound_moiety="tetracycline repressor TetR"
/note="tetracycline response element"
/note="contains seven copies of the tetracycline operator
tetO"
promoter 3150..3187
/note="minimal CMV promoter"
/note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early
promoter"
misc_feature 3281..3337
/note="MCS"
/note="pUC18/19 multiple cloning site"
LTR 3389..3982
/note="long terminal repeat from Moloney murine leukemia
virus"
misc_feature 4193..4333
/note="bom"
/note="basis of mobility region from pBR322"
rep_origin complement(4519..5107)
/direction=LEFT
/note="ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(5278..6138)
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/note="AmpR"
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRVDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPAAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
promoter complement(6139..6243)
/gene="bla"
/note="AmpR promoter"
ORIGIN
1 tttgaaagac cccacccgta ggtggcaagc tagcttaagt aacgccactt tgcaaggcat
61 ggaaaaatac ataactgaga atagaaaagt tcagatcaag gtcaggaaca aagaaacagc
121 tgaataccaa acaggatatc tgtggtaagc ggttcctgcc ccggctcagg gccaagaaca
181 gatgagacag ctgagtgatg ggccaaacag gatatctgtg gtaagcagtt cctgccccgg
241 ctcggggcca agaacagatg gtccccagat gcggtccagc cctcagcagt ttctagtgaa
301 tcatcagatg tttccagggt gccccaagga cctgaaaatg accctgtacc ttatttgaac
361 taaccaatca gttcgcttct cgcttctgtt cgcgcgcttc cgctctccga gctcaataaa
421 agagcccaca acccctcact cggcgcgcca gtcttccgat agactgcgtc gcccgggtac
481 ccgtattccc aataaagcct cttgctgttt gcatccgaat cgtggtctcg ctgttccttg
541 ggagggtctc ctctgagtga ttgactaccc acgacggggg tctttcattt gggggctcgt
601 ccgggatttg gagacccctg cccagggacc accgacccac caccgggagg taagctggcc
661 agcaacttat ctgtgtctgt ccgattgtct agtgtctatg tttgatgtta tgcgcctgcg
721 tctgtactag ttagctaact agctctgtat ctggcggacc cgtggtggaa ctgacgagtt
781 ctgaacaccc ggccgcaacc ctgggagacg tcccagggac tttgggggcc gtttttgtgg
841 cccgacctga ggaagggagt cgatgtggaa tccgaccccg tcaggatatg tggttctggt
901 aggagacgag aacctaaaac agttcccgcc tccgtctgaa tttttgcttt cggtttggaa
961 ccgaagccgc gcgtcttgtc tgctgcagcg ctgcagcatc gttctgtgtt gtctctgtct
1021 gactgtgttt ctgtatttgt ctgaaaatta gggccagact gttaccactc ccttaagttt
1081 gaccttaggt cactggaaag atgtcgagcg gatcgctcac aaccagtcgg tagatgtcaa
1141 gaagagacgt tgggttacct tctgctctgc agaatggcca acctttaacg tcggatggcc
1201 gcgagacggc acctttaacc gagacctcat cacccaggtt aagatcaagg tcttttcacc
1261 tggcccgcat ggacacccag accaggtccc ctacatcgtg acctgggaag ccttggcttt
1321 tgacccccct ccctgggtca agccctttgt acaccctaag cctccgcctc ctcttcctcc
1381 atccgccccg tctctccccc ttgaacctcc tcgttcgacc ccgcctcgat cctcccttta
1441 tccagccctc actccttctc taggcgccgg aattccgatc tgatagcttg ccacaacccg
1501 taccaaagat ggatagatcc ggaaagcctg aactcaccgc gacgtctgtc gagaagtttc
1561 tgatcgaaaa gttcgacagc gtctccgacc tgatgcagct ctcggagggc gaagaatctc
1621 gtgctttcag cttcgatgta ggagggcgtg gatatgtcct gcgggtaaat agctgcgccg
1681 atggtttcta caaagatcgt tatgtttatc ggcactttgc atcggccgcg ctcccgattc
1741 cggaagtgct tgacattggg gaattcagcg agagcctgac ctattgcatc tcccgccgtg
1801 cacagggtgt cacgttgcaa gacctgcctg aaaccgaact gcccgctgtt ctgcagccgg
1861 tcgcggaggc catggatgcg atcgctgcgg ccgatcttag ccagacgagc gggttcggcc
1921 cattcggacc gcaaggaatc ggtcaataca ctacatggcg tgatttcata tgcgcgattg
1981 ctgatcccca tgtgtatcac tggcaaactg tgatggacga caccgtcagt gcgtccgtcg
2041 cgcaggctct cgatgagctg atgctttggg ccgaggactg ccccgaagtc cggcacctcg
2101 tgcacgcgga tttcggctcc aacaatgtcc tgacggacaa tggccgcata acagcggtca
2161 ttgactggag cgaggcgatg ttcggggatt cccaatacga ggtcgccaac atcttcttct
2221 ggaggccgtg gttggcttgt atggagcagc agacgcgcta cttcgagcgg aggcatccgg
2281 agcttgcagg atcgccgcgg ctccgggcgt atatgctccg cattggtctt gaccaactct
2341 atcagagctt ggttgacggc aatttcgatg atgcagcttg ggcgcagggt cgatgcgacg
2401 caatcgtccg atccggagcc gggactgtcg ggcgtacaca aatcgcccgc agaagcgcgg
2461 ccgtctggac cgatggctgt gtagaagtac tcgccgatag tggaaaccga cgccccagca
2521 ctcgtccgag ggcaaaggaa tagagtagat gccgaccgaa caagagctga tttcgagaac
2581 gcctcagcca gcaactcgcg cgagcctagc aaggcaaatg cgagagaacg gccttacgct
2641 tggtggcaca gttctcgtcc acagttcgct aagctcgctc ggctgggtcg cgggagggcc
2701 ggtcgcagtg attcaggccc ttctggattg tgttggtccc cagggcacga ttgtcatgcc
2761 cacgcactcg ggtgatctga ctgatcccgc agattggaga tcgccgcccg tgcctgccga
2821 ttgggtgcag atctcgagtt taccactccc tatcagtgat agagaaaagt gaaagtcgag
2881 tttaccactc cctatcagtg atagagaaaa gtgaaagtcg agtttaccac tccctatcag
2941 tgatagagaa aagtgaaagt cgagtttacc actccctatc agtgatagag aaaagtgaaa
3001 gtcgagttta ccactcccta tcagtgatag agaaaagtga aagtcgagtt taccactccc
3061 tatcagtgat agagaaaagt gaaagtcgag tttaccactc cctatcagtg atagagaaaa
3121 gtgaaagtcg agctcggtac ccgggtcgag taggcgtgta cggtgggagg cctatataag
3181 cagagctcgt ttagtgaacc gtcagatcgc ctggagacgc catccacgct gttttgacct
3241 ccatagaaga caccgggacc gatccagcct ccgcggcccc gaattcgagc tcggtacccg
3301 gggatcctct agagtcgacc tgcaggcatg caagcttgtt aacatcgata aaataaaaga
3361 ttttatttag tctccagaaa aaggggggaa tgaaagaccc cacctgtagg tttggcaagc
3421 tagcttaagt aacgccattt tgcaaggcat ggaaaaatac ataactgaga atagagaagt
3481 tcagatcaag gtcaggaaca gatggaacag ctgaatatgg gccaaacagg atatctgtgg
3541 taagcagttc ctgccccggc tcagggccaa gaacagatgg aacagctgaa tatgggccaa
3601 acaggatatc tgtggtaagc agttcctgcc ccggctcagg gccaagaaca gatggtcccc
3661 agatgcggtc cagccctcag cagtttctag agaaccatca gatgtttcca gggtgcccca
3721 aggacctgaa atgaccctgt gccttatttg aactaaccaa tcagttcgct tctcgcttct
3781 gttcgcgcgc ttctgctccc cgagctcaat aaaagagccc acaacccctc actcggggcg
3841 ccagtcctcc gattgactga gtcgcccggg tacccgtgta tccaataaac cctcttgcag
3901 ttgcatccga cttgtggtct cgctgttcct tgggagggtc tcctctgagt gattgactac
3961 ccgtcagcgg gggtctttca tttgggggct cgtccgggat cgggagaccc ctgcccaggg
4021 accaccgacc caccaccggg aggtaagctg gctgcctcgc gcgtttcggt gatgacggtg
4081 aaaacctctg acacatgcag ctcccggaga cggtcacagc ttgtctgtaa gcggatgccg
4141 ggagcagaca agcccgtcag ggcgcgtcag cgggtgttgg cgggtgtcgg ggcgcagcca
4201 tgacccagtc acgtagcgat agcggagtgt atactggctt aactatgcgg catcagagca
4261 gattgtactg agagtgcacc atatgcggtg tgaaataccg cacagatgcg taaggagaaa
4321 ataccgcatc aggcgctctt ccgcttcctc gctcactgac tcgctgcgct cggtcgttcg
4381 gctgcggcga gcggtatcag ctcactcaaa ggcggtaata cggttatcca cagaatcagg
4441 ggataacgca ggaaagaaca tgtgagcaaa aggccagcaa aaggccagga accgtaaaaa
4501 ggccgcgttg ctggcgtttt tccataggct ccgcccccct gacgagcatc acaaaaatcg
4561 acgctcaagt cagaggtggc gaaacccgac aggactataa agataccagg cgtttccccc
4621 tggaagctcc ctcgtgcgct ctcctgttcc gaccctgccg cttaccggat acctgtccgc
4681 ctttctccct tcgggaagcg tggcgctttc tcatagctca cgctgtaggt atctcagttc
4741 ggtgtaggtc gttcgctcca agctgggctg tgtgcacgaa ccccccgttc agcccgaccg
4801 ctgcgcctta tccggtaact atcgtcttga gtccaacccg gtaagacacg acttatcgcc
4861 actggcagca gccactggta acaggattag cagagcgagg tatgtaggcg gtgctacaga
4921 gttcttgaag tggtggccta actacggcta cactagaagg acagtatttg gtatctgcgc
4981 tctgctgaag ccagttacct tcggaaaaag agttggtagc tcttgatccg gcaaacaaac
5041 caccgctggt agcggtggtt tttttgtttg caagcagcag attacgcgca gaaaaaaagg
5101 atctcaagaa gatcctttga tcttttctac ggggtctgac gctcagtgga acgaaaactc
5161 acgttaaggg attttggtca tgagattatc aaaaaggatc ttcacctaga tccttttaaa
5221 ttaaaaatga agttttaaat caatctaaag tatatatgag taaacttggt ctgacagtta
5281 ccaatgctta atcagtgagg cacctatctc agcgatctgt ctatttcgtt catccatagt
5341 tgcctgactc cccgtcgtgt agataactac gatacgggag ggcttaccat ctggccccag
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5761 ggttatggca gcactgcata attctcttac tgtcatgcca tccgtaagat gcttttctgt
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6061 ttctgggtga gcaaaaacag gaaggcaaaa tgccgcaaaa aagggaataa gggcgacacg
6121 gaaatgttga atactcatac tcttcctttt tcaatattat tgaagcattt atcagggtta
6181 ttgtctcatg agcggataca tatttgaatg tatttagaaa aataaacaaa taggggttcc
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6301 aacctataaa aataggcgta tcacgaggcc ctttcgtctt caagaattca taccagatca
6361 ccgaaaactg tcctccaaat gtgtccccct cacactccca aattcgcggg cttctgcctc
6421 ttagaccact ctaccctatt ccccacactc accggagcca aagccgcggc ccttccgttt
6481 ctttgct
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pRevTRE哺乳调控质粒
别称: NM_001308090.1;HD7;HD7A;HDAC7A
| 启动子: | CMV |
|---|---|
| 复制子: | pUC |
| 质粒分类: | 哺乳细胞，四环素调控系统载体 |
| 质粒大小: | 6487bp |
| 原核抗性: | Amp |
| 筛选标记: | Hyg |
| 克隆菌株: | Stbl3 |
| 培养条件: | 37度 |
| 表达宿主: | 哺乳细胞 |
| 诱导方式: | 四环素诱导 |
| 5'测序引物: | 根据序列设计引物 |
| 3'测序引物: | 根据序列设计引物 |
质粒属性
| 载体宿主： | 哺乳细胞 |
|---|---|
| 载体用途： | 蛋白表达 |
| 基因种属： | |
| 基因类型： | ORF |
| 原核抗性： | Amp |
| 真核抗性： | Hyg |
| 荧光蛋白： |
质粒简介
pRevTRE is a retroviral Tet response vector that expresses a gene of interest from the Tetresponse element (TRE). This vector is derived from pLNCX, a retroviral vector created using elements of Moloney murine leukemia virus (MoMuLV) and Moloney murine sarcoma virus (MoMuSV) as described (1). The TRE contains seven direct repeats of the tetO operator sequence, upstream of a minimal CMV promoter, which can be bound by the tTA and rtTA transactivators. The 5' viral LTR controls expression of the transcript that contains Ψ+ (the extended viral packaging signal) and the hygromycin resistance (Hygr) gene for antibiotic selection in mammalian cells. The TRE is derived from vectors described previously (2, 3). pRevTRE also includes the E. coli Ampr gene for antibiotic selection in bacteria.
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 6487 bp ds-DNA circular SYN 05-SEP-2016
DEFINITION synthetic circular DNA
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS Untitled 4
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 6487)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported Monday, September 5, 2016 from SnapGene Viewer 3.1.4
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..6487
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
LTR 414..589
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/note="truncated long terminal repeat from Moloney murine
sarcoma virus"
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/note="MMLV Psi"
/note="packaging signal of Moloney murine leukemia virus
(MMLV)"
CDS 1052..1468
/note="gag (truncated)"
/note="truncated Moloney murine leukemia virus (MMLV) gag
gene lacking the start codon"
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ELPAVLQPVAEAM-DAIAAADLSQTSGFGPFGPQGIGQYTTWRDFICAIADPHVYHWQTV
MDDTVSASVAQALDELMLWAEDCPEVRHLVHADFGSNNVLTDNGRITAVIDWSEAMFGD
SQYEVANIFFWRPWLACMEQQTRYFERRHPELAGSPRLRAYMLRIGLDQLYQSLVDGNF
DDAAWAQGRCDAIVRSGAGTVGRTQIARRSAAVWTDGCVEVLADSGNRRPSTRPRAKE"
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/note="tetracycline response element"
/note="contains seven copies of the tetracycline operator
tetO"
promoter 3150..3187
/note="minimal CMV promoter"
/note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early
promoter"
misc_feature 3281..3337
/note="MCS"
/note="pUC18/19 multiple cloning site"
LTR 3389..3982
/note="long terminal repeat from Moloney murine leukemia
virus"
misc_feature 4193..4333
/note="bom"
/note="basis of mobility region from pBR322"
rep_origin complement(4519..5107)
/direction=LEFT
/note="ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(5278..6138)
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/note="AmpR"
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRVDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
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EPELNEAIPNDERDTTMPAAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
promoter complement(6139..6243)
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/note="AmpR promoter"
ORIGIN
1 tttgaaagac cccacccgta ggtggcaagc tagcttaagt aacgccactt tgcaaggcat
61 ggaaaaatac ataactgaga atagaaaagt tcagatcaag gtcaggaaca aagaaacagc
121 tgaataccaa acaggatatc tgtggtaagc ggttcctgcc ccggctcagg gccaagaaca
181 gatgagacag ctgagtgatg ggccaaacag gatatctgtg gtaagcagtt cctgccccgg
241 ctcggggcca agaacagatg gtccccagat gcggtccagc cctcagcagt ttctagtgaa
301 tcatcagatg tttccagggt gccccaagga cctgaaaatg accctgtacc ttatttgaac
361 taaccaatca gttcgcttct cgcttctgtt cgcgcgcttc cgctctccga gctcaataaa
421 agagcccaca acccctcact cggcgcgcca gtcttccgat agactgcgtc gcccgggtac
481 ccgtattccc aataaagcct cttgctgttt gcatccgaat cgtggtctcg ctgttccttg
541 ggagggtctc ctctgagtga ttgactaccc acgacggggg tctttcattt gggggctcgt
601 ccgggatttg gagacccctg cccagggacc accgacccac caccgggagg taagctggcc
661 agcaacttat ctgtgtctgt ccgattgtct agtgtctatg tttgatgtta tgcgcctgcg
721 tctgtactag ttagctaact agctctgtat ctggcggacc cgtggtggaa ctgacgagtt
781 ctgaacaccc ggccgcaacc ctgggagacg tcccagggac tttgggggcc gtttttgtgg
841 cccgacctga ggaagggagt cgatgtggaa tccgaccccg tcaggatatg tggttctggt
901 aggagacgag aacctaaaac agttcccgcc tccgtctgaa tttttgcttt cggtttggaa
961 ccgaagccgc gcgtcttgtc tgctgcagcg ctgcagcatc gttctgtgtt gtctctgtct
1021 gactgtgttt ctgtatttgt ctgaaaatta gggccagact gttaccactc ccttaagttt
1081 gaccttaggt cactggaaag atgtcgagcg gatcgctcac aaccagtcgg tagatgtcaa
1141 gaagagacgt tgggttacct tctgctctgc agaatggcca acctttaacg tcggatggcc
1201 gcgagacggc acctttaacc gagacctcat cacccaggtt aagatcaagg tcttttcacc
1261 tggcccgcat ggacacccag accaggtccc ctacatcgtg acctgggaag ccttggcttt
1321 tgacccccct ccctgggtca agccctttgt acaccctaag cctccgcctc ctcttcctcc
1381 atccgccccg tctctccccc ttgaacctcc tcgttcgacc ccgcctcgat cctcccttta
1441 tccagccctc actccttctc taggcgccgg aattccgatc tgatagcttg ccacaacccg
1501 taccaaagat ggatagatcc ggaaagcctg aactcaccgc gacgtctgtc gagaagtttc
1561 tgatcgaaaa gttcgacagc gtctccgacc tgatgcagct ctcggagggc gaagaatctc
1621 gtgctttcag cttcgatgta ggagggcgtg gatatgtcct gcgggtaaat agctgcgccg
1681 atggtttcta caaagatcgt tatgtttatc ggcactttgc atcggccgcg ctcccgattc
1741 cggaagtgct tgacattggg gaattcagcg agagcctgac ctattgcatc tcccgccgtg
1801 cacagggtgt cacgttgcaa gacctgcctg aaaccgaact gcccgctgtt ctgcagccgg
1861 tcgcggaggc catggatgcg atcgctgcgg ccgatcttag ccagacgagc gggttcggcc
1921 cattcggacc gcaaggaatc ggtcaataca ctacatggcg tgatttcata tgcgcgattg
1981 ctgatcccca tgtgtatcac tggcaaactg tgatggacga caccgtcagt gcgtccgtcg
2041 cgcaggctct cgatgagctg atgctttggg ccgaggactg ccccgaagtc cggcacctcg
2101 tgcacgcgga tttcggctcc aacaatgtcc tgacggacaa tggccgcata acagcggtca
2161 ttgactggag cgaggcgatg ttcggggatt cccaatacga ggtcgccaac atcttcttct
2221 ggaggccgtg gttggcttgt atggagcagc agacgcgcta cttcgagcgg aggcatccgg
2281 agcttgcagg atcgccgcgg ctccgggcgt atatgctccg cattggtctt gaccaactct
2341 atcagagctt ggttgacggc aatttcgatg atgcagcttg ggcgcagggt cgatgcgacg
2401 caatcgtccg atccggagcc gggactgtcg ggcgtacaca aatcgcccgc agaagcgcgg
2461 ccgtctggac cgatggctgt gtagaagtac tcgccgatag tggaaaccga cgccccagca
2521 ctcgtccgag ggcaaaggaa tagagtagat gccgaccgaa caagagctga tttcgagaac
2581 gcctcagcca gcaactcgcg cgagcctagc aaggcaaatg cgagagaacg gccttacgct
2641 tggtggcaca gttctcgtcc acagttcgct aagctcgctc ggctgggtcg cgggagggcc
2701 ggtcgcagtg attcaggccc ttctggattg tgttggtccc cagggcacga ttgtcatgcc
2761 cacgcactcg ggtgatctga ctgatcccgc agattggaga tcgccgcccg tgcctgccga
2821 ttgggtgcag atctcgagtt taccactccc tatcagtgat agagaaaagt gaaagtcgag
2881 tttaccactc cctatcagtg atagagaaaa gtgaaagtcg agtttaccac tccctatcag
2941 tgatagagaa aagtgaaagt cgagtttacc actccctatc agtgatagag aaaagtgaaa
3001 gtcgagttta ccactcccta tcagtgatag agaaaagtga aagtcgagtt taccactccc
3061 tatcagtgat agagaaaagt gaaagtcgag tttaccactc cctatcagtg atagagaaaa
3121 gtgaaagtcg agctcggtac ccgggtcgag taggcgtgta cggtgggagg cctatataag
3181 cagagctcgt ttagtgaacc gtcagatcgc ctggagacgc catccacgct gttttgacct
3241 ccatagaaga caccgggacc gatccagcct ccgcggcccc gaattcgagc tcggtacccg
3301 gggatcctct agagtcgacc tgcaggcatg caagcttgtt aacatcgata aaataaaaga
3361 ttttatttag tctccagaaa aaggggggaa tgaaagaccc cacctgtagg tttggcaagc
3421 tagcttaagt aacgccattt tgcaaggcat ggaaaaatac ataactgaga atagagaagt
3481 tcagatcaag gtcaggaaca gatggaacag ctgaatatgg gccaaacagg atatctgtgg
3541 taagcagttc ctgccccggc tcagggccaa gaacagatgg aacagctgaa tatgggccaa
3601 acaggatatc tgtggtaagc agttcctgcc ccggctcagg gccaagaaca gatggtcccc
3661 agatgcggtc cagccctcag cagtttctag agaaccatca gatgtttcca gggtgcccca
3721 aggacctgaa atgaccctgt gccttatttg aactaaccaa tcagttcgct tctcgcttct
3781 gttcgcgcgc ttctgctccc cgagctcaat aaaagagccc acaacccctc actcggggcg
3841 ccagtcctcc gattgactga gtcgcccggg tacccgtgta tccaataaac cctcttgcag
3901 ttgcatccga cttgtggtct cgctgttcct tgggagggtc tcctctgagt gattgactac
3961 ccgtcagcgg gggtctttca tttgggggct cgtccgggat cgggagaccc ctgcccaggg
4021 accaccgacc caccaccggg aggtaagctg gctgcctcgc gcgtttcggt gatgacggtg
4081 aaaacctctg acacatgcag ctcccggaga cggtcacagc ttgtctgtaa gcggatgccg
4141 ggagcagaca agcccgtcag ggcgcgtcag cgggtgttgg cgggtgtcgg ggcgcagcca
4201 tgacccagtc acgtagcgat agcggagtgt atactggctt aactatgcgg catcagagca
4261 gattgtactg agagtgcacc atatgcggtg tgaaataccg cacagatgcg taaggagaaa
4321 ataccgcatc aggcgctctt ccgcttcctc gctcactgac tcgctgcgct cggtcgttcg
4381 gctgcggcga gcggtatcag ctcactcaaa ggcggtaata cggttatcca cagaatcagg
4441 ggataacgca ggaaagaaca tgtgagcaaa aggccagcaa aaggccagga accgtaaaaa
4501 ggccgcgttg ctggcgtttt tccataggct ccgcccccct gacgagcatc acaaaaatcg
4561 acgctcaagt cagaggtggc gaaacccgac aggactataa agataccagg cgtttccccc
4621 tggaagctcc ctcgtgcgct ctcctgttcc gaccctgccg cttaccggat acctgtccgc
4681 ctttctccct tcgggaagcg tggcgctttc tcatagctca cgctgtaggt atctcagttc
4741 ggtgtaggtc gttcgctcca agctgggctg tgtgcacgaa ccccccgttc agcccgaccg
4801 ctgcgcctta tccggtaact atcgtcttga gtccaacccg gtaagacacg acttatcgcc
4861 actggcagca gccactggta acaggattag cagagcgagg tatgtaggcg gtgctacaga
4921 gttcttgaag tggtggccta actacggcta cactagaagg acagtatttg gtatctgcgc
4981 tctgctgaag ccagttacct tcggaaaaag agttggtagc tcttgatccg gcaaacaaac
5041 caccgctggt agcggtggtt tttttgtttg caagcagcag attacgcgca gaaaaaaagg
5101 atctcaagaa gatcctttga tcttttctac ggggtctgac gctcagtgga acgaaaactc
5161 acgttaaggg attttggtca tgagattatc aaaaaggatc ttcacctaga tccttttaaa
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5281 ccaatgctta atcagtgagg cacctatctc agcgatctgt ctatttcgtt catccatagt
5341 tgcctgactc cccgtcgtgt agataactac gatacgggag ggcttaccat ctggccccag
5401 tgctgcaatg ataccgcgag acccacgctc accggctcca gatttatcag caataaacca
5461 gccagccgga agggccgagc gcagaagtgg tcctgcaact ttatccgcct ccatccagtc
5521 tattaattgt tgccgggaag ctagagtaag tagttcgcca gttaatagtt tgcgcaacgt
5581 tgttgccatt gctgcaggca tcgtggtgtc acgctcgtcg tttggtatgg cttcattcag
5641 ctccggttcc caacgatcaa ggcgagttac atgatccccc atgttgtgca aaaaagcggt
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5761 ggttatggca gcactgcata attctcttac tgtcatgcca tccgtaagat gcttttctgt
5821 gactggtgag tactcaacca agtcattctg agaatagtgt atgcggcgac cgagttgctc
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6361 ccgaaaactg tcctccaaat gtgtccccct cacactccca aattcgcggg cttctgcctc
6421 ttagaccact ctaccctatt ccccacactc accggagcca aagccgcggc ccttccgttt
6481 ctttgct
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质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P2786/pENTR223-PPID（倒数第20碱基A缺失）人源基因质粒 |
| P2787/pENTR223-SURF6人源基因质粒 |
| P2788/pENTR223-PSMD4人源基因质粒 |
| P2789/pENTR223-DAZAP2人源基因质粒 |
| P2790/pENTR223-MUL1（3点突变）人源基因质粒 |
| P2791/pENTR223-PAAF1（2点突变）人源基因质粒 |
| P2792/pENTR223-STOML2（2点突变）人源基因质粒 |
| P2793/pENTR223-RAD51B（2点突变）人源基因质粒 |
| P2794/pENTR223-PRKAR1A人源基因质粒 |
| P2795/pENTR223-SLC35G2（67-1239bp2点突变）人源基因质粒 |
| P2796/pENTR223-LDHAL6B人源基因质粒 |
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