- ￥100 - 1000
- Xybio
- 上海
- P0111
- 2025年07月11日
9 年钻石会员
企业认证
相关产品推荐更多 >
万千商家帮你免费找货
0 人在求购买到急需产品
- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
Plasmid#61591;pX601-AAV-CMV::NLS-SaC
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pX601哺乳编辑质粒
别称: Plasmid#61591;pX601-AAV-CMV::NLS-SaC
质粒属性
质粒简介
pX601是一个哺乳细胞基因编辑质粒。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 7447 bp ds-DNA circular SYN 27-JUL-2017
DEFINITION synthetic circular DNA
KEYWORDS pX601
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 7447)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported Thursday, July 27, 2017 from MiaoLing plasmid
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..7447
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
promoter 534..737
/note="CMV promoter"
/note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early
promoter"
CDS 768..788
/codon_start=1
/product="nuclear localization signal of SV40 large T
antigen"
/note="SV40 NLS"
/translation="PKKKRKV"
CDS 813..3968
/codon_start=1
/product="Cas9 (Csn1) endonuclease from the Staphylococcus
aureus Type II CRISPR/Cas system"
/note="SaCas9"
/note="generates RNA-guided double strand breaks in DNA"
/translation="KRNYILGLDIGITSVGYGIIDYETRDVIDAGVRLFKEANVENNEG
RRSKRGARRLKRRRRHRIQRVKKLLFDYNLLTDHSELSGINPYEARVKGLSQKLSEEEF
SAALLHLAKRRGVHNVNEVEEDTGNELSTKEQISRNSKALEEKYVAELQLERLKKDGEV
RGSINRFKTSDYVKEAKQLLKVQKAYHQLDQSFIDTYIDLLETRRTYYEGPGEGSPFGW
KDIKEWYEMLMGHCTYFPEELRSVKYAYNADLYNALNDLNNLVITRDENEKLEYYEKFQ
IIENVFKQKKKPTLKQIAKEILVNEEDIKGYRVTSTGKPEFTNLKVYHDIKDITARKEI
IENAELLDQIAKILTIYQSSEDIQEELTNLNSELTQEEIEQISNLKGYTGTHNLSLKAI
NLILDELWHTNDNQIAIFNRLKLVPKKVDLSQQKEIPTTLVDDFILSPVVKRSFIQSIK
VINAIIKKYGLPNDIIIELAREKNSKDAQKMINEMQKRNRQTNERIEEIIRTTGKENAK
YLIEKIKLHDMQEGKCLYSLEAIPLEDLLNNPFNYEVDHIIPRSVSFDNSFNNKVLVKQ
EENSKKGNRTPFQYLSSSDSKISYETFKKHILNLAKGKGRISKTKKEYLLEERDINRFS
VQKDFINRNLVDTRYATRGLMNLLRSYFRVNNLDVKVKSINGGFTSFLRRKWKFKKERN
KGYKHHAEDALIIANADFIFKEWKKLDKAKKVMENQMFEEKQAESMPEIETEQEYKEIF
ITPHQIKHIKDFKDYKYSHRVDKKPNRELINDTLYSTRKDDKGNTLIVNNLNGLYDKDN
DKLKKLINKSPEKLLMYHHDPQTYQKLKLIMEQYGDEKNPLYKYYEETGNYLTKYSKKD
NGPVIKKIKYYGNKLNAHLDITDDYPNSRNKVVKLSLKPYRFDVYLDNGVYKFVTVKNL
DVIKKENYYEVNSKCYEEAKKLKKISNQAEFIASFYNNDLIKINGELYRVIGVNNDLLN
RIEVNMIDITYREYLENMNDKRPPRIIKTIASKTQSIKKYSTDILGNLYEVKSKKHPQI
IKKG"
CDS 3969..4016
/codon_start=1
/product="bipartite nuclear localization signal from
nucleoplasmin"
/note="nucleoplasmin NLS"
/translation="KRPAATKKAGQAKKKK"
CDS 4023..4103
/codon_start=1
/product="three tandem HA epitope tags"
/note="3xHA"
/translation="YPYDVPDYAYPYDVPDYAYPYDVPDYA"
polyA_signal 4137..4344
/note="bGH poly(A) signal"
/note="bovine growth hormone polyadenylation signal"
promoter 4352..4592
/note="U6 promoter"
/note="RNA polymerase III promoter for human U6 snRNA"
misc_RNA 4621..4696
/note="Sa gRNA scaffold"
/note="guide RNA scaffold for the Staphylococcus aureus
CRISPR/Cas9 system"
repeat_region 4710..4850
/note="AAV2 ITR"
/note="inverted terminal repeat of adeno-associated virus
serotype 2"
rep_origin 4925..5380
/direction=RIGHT
/note="f1 ori"
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
promoter 5662..5766
/gene="bla"
/note="AmpR promoter"
CDS 5767..6627
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/note="AmpR"
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
rep_origin 6798..7386
/direction=RIGHT
/note="ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
ORIGIN
1 cctgcaggca gctgcgcgct cgctcgctca ctgaggccgc ccgggcgtcg ggcgaccttt
61 ggtcgcccgg cctcagtgag cgagcgagcg cgcagagagg gagtggccaa ctccatcact
121 aggggttcct gcggcctcta gactcgaggc gttgacattg attattgact agttattaat
181 agtaatcaat tacggggtca ttagttcata gcccatatat ggagttccgc gttacataac
241 ttacggtaaa tggcccgcct ggctgaccgc ccaacgaccc ccgcccattg acgtcaataa
301 tgacgtatgt tcccatagta acgccaatag ggactttcca ttgacgtcaa tgggtggagt
361 atttacggta aactgcccac ttggcagtac atcaagtgta tcatatgcca agtacgcccc
421 ctattgacgt caatgacggt aaatggcccg cctggcatta tgcccagtac atgaccttat
481 gggactttcc tacttggcag tacatctacg tattagtcat cgctattacc atggtgatgc
541 ggttttggca gtacatcaat gggcgtggat agcggtttga ctcacgggga tttccaagtc
601 tccaccccat tgacgtcaat gggagtttgt tttggcacca aaatcaacgg gactttccaa
661 aatgtcgtaa caactccgcc ccattgacgc aaatgggcgg taggcgtgta cggtgggagg
721 tctatataag cagagctctc tggctaacta ccggtgccac catggcccca aagaagaagc
781 ggaaggtcgg tatccacgga gtcccagcag ccaagcggaa ctacatcctg ggcctggaca
841 tcggcatcac cagcgtgggc tacggcatca tcgactacga gacacgggac gtgatcgatg
901 ccggcgtgcg gctgttcaaa gaggccaacg tggaaaacaa cgagggcagg cggagcaaga
961 gaggcgccag aaggctgaag cggcggaggc ggcatagaat ccagagagtg aagaagctgc
1021 tgttcgacta caacctgctg accgaccaca gcgagctgag cggcatcaac ccctacgagg
1081 ccagagtgaa gggcctgagc cagaagctga gcgaggaaga gttctctgcc gccctgctgc
1141 acctggccaa gagaagaggc gtgcacaacg tgaacgaggt ggaagaggac accggcaacg
1201 agctgtccac caaagagcag atcagccgga acagcaaggc cctggaagag aaatacgtgg
1261 ccgaactgca gctggaacgg ctgaagaaag acggcgaagt gcggggcagc atcaacagat
1321 tcaagaccag cgactacgtg aaagaagcca aacagctgct gaaggtgcag aaggcctacc
1381 accagctgga ccagagcttc atcgacacct acatcgacct gctggaaacc cggcggacct
1441 actatgaggg acctggcgag ggcagcccct tcggctggaa ggacatcaaa gaatggtacg
1501 agatgctgat gggccactgc acctacttcc ccgaggaact gcggagcgtg aagtacgcct
1561 acaacgccga cctgtacaac gccctgaacg acctgaacaa tctcgtgatc accagggacg
1621 agaacgagaa gctggaatat tacgagaagt tccagatcat cgagaacgtg ttcaagcaga
1681 agaagaagcc caccctgaag cagatcgcca aagaaatcct cgtgaacgaa gaggatatta
1741 agggctacag agtgaccagc accggcaagc ccgagttcac caacctgaag gtgtaccacg
1801 acatcaagga cattaccgcc cggaaagaga ttattgagaa cgccgagctg ctggatcaga
1861 ttgccaagat cctgaccatc taccagagca gcgaggacat ccaggaagaa ctgaccaatc
1921 tgaactccga gctgacccag gaagagatcg agcagatctc taatctgaag ggctataccg
1981 gcacccacaa cctgagcctg aaggccatca acctgatcct ggacgagctg tggcacacca
2041 acgacaacca gatcgctatc ttcaaccggc tgaagctggt gcccaagaag gtggacctgt
2101 cccagcagaa agagatcccc accaccctgg tggacgactt catcctgagc cccgtcgtga
2161 agagaagctt catccagagc atcaaagtga tcaacgccat catcaagaag tacggcctgc
2221 ccaacgacat cattatcgag ctggcccgcg agaagaactc caaggacgcc cagaaaatga
2281 tcaacgagat gcagaagcgg aaccggcaga ccaacgagcg gatcgaggaa atcatccgga
2341 ccaccggcaa agagaacgcc aagtacctga tcgagaagat caagctgcac gacatgcagg
2401 aaggcaagtg cctgtacagc ctggaagcca tccctctgga agatctgctg aacaacccct
2461 tcaactatga ggtggaccac atcatcccca gaagcgtgtc cttcgacaac agcttcaaca
2521 acaaggtgct cgtgaagcag gaagaaaaca gcaagaaggg caaccggacc ccattccagt
2581 acctgagcag cagcgacagc aagatcagct acgaaacctt caagaagcac atcctgaatc
2641 tggccaaggg caagggcaga atcagcaaga ccaagaaaga gtatctgctg gaagaacggg
2701 acatcaacag gttctccgtg cagaaagact tcatcaaccg gaacctggtg gataccagat
2761 acgccaccag aggcctgatg aacctgctgc ggagctactt cagagtgaac aacctggacg
2821 tgaaagtgaa gtccatcaat ggcggcttca ccagctttct gcggcggaag tggaagttta
2881 agaaagagcg gaacaagggg tacaagcacc acgccgagga cgccctgatc attgccaacg
2941 ccgatttcat cttcaaagag tggaagaaac tggacaaggc caaaaaagtg atggaaaacc
3001 agatgttcga ggaaaagcag gccgagagca tgcccgagat cgaaaccgag caggagtaca
3061 aagagatctt catcaccccc caccagatca agcacattaa ggacttcaag gactacaagt
3121 acagccaccg ggtggacaag aagcctaata gagagctgat taacgacacc ctgtactcca
3181 cccggaagga cgacaagggc aacaccctga tcgtgaacaa tctgaacggc ctgtacgaca
3241 aggacaatga caagctgaaa aagctgatca acaagagccc cgaaaagctg ctgatgtacc
3301 accacgaccc ccagacctac cagaaactga agctgattat ggaacagtac ggcgacgaga
3361 agaatcccct gtacaagtac tacgaggaaa ccgggaacta cctgaccaag tactccaaaa
3421 aggacaacgg ccccgtgatc aagaagatta agtattacgg caacaaactg aacgcccatc
3481 tggacatcac cgacgactac cccaacagca gaaacaaggt cgtgaagctg tccctgaagc
3541 cctacagatt cgacgtgtac ctggacaatg gcgtgtacaa gttcgtgacc gtgaagaatc
3601 tggatgtgat caaaaaagaa aactactacg aagtgaatag caagtgctat gaggaagcta
3661 agaagctgaa gaagatcagc aaccaggccg agtttatcgc ctccttctac aacaacgatc
3721 tgatcaagat caacggcgag ctgtatagag tgatcggcgt gaacaacgac ctgctgaacc
3781 ggatcgaagt gaacatgatc gacatcacct accgcgagta cctggaaaac atgaacgaca
3841 agaggccccc caggatcatt aagacaatcg cctccaagac ccagagcatt aagaagtaca
3901 gcacagacat tctgggcaac ctgtatgaag tgaaatctaa gaagcaccct cagatcatca
3961 aaaagggcaa aaggccggcg gccacgaaaa aggccggcca ggcaaaaaag aaaaagggat
4021 cctacccata cgatgttcca gattacgctt acccatacga tgttccagat tacgcttacc
4081 catacgatgt tccagattac gcttaagaat tcctagagct cgctgatcag cctcgactgt
4141 gccttctagt tgccagccat ctgttgtttg cccctccccc gtgccttcct tgaccctgga
4201 aggtgccact cccactgtcc tttcctaata aaatgaggaa attgcatcgc attgtctgag
4261 taggtgtcat tctattctgg ggggtggggt ggggcaggac agcaaggggg aggattggga
4321 agagaatagc aggcatgctg gggaggtacc tgagggccta tttcccatga ttccttcata
4381 tttgcatata cgatacaagg ctgttagaga gataattgga attaatttga ctgtaaacac
4441 aaagatatta gtacaaaata cgtgacgtag aaagtaataa tttcttgggt agtttgcagt
4501 tttaaaatta tgttttaaaa tggactatca tatgcttacc gtaacttgaa agtatttcga
4561 tttcttggct ttatatatct tgtggaaagg acgaaacacc ggagaccacg gcaggtctca
4621 gttttagtac tctggaaaca gaatctacta aaacaaggca aaatgccgtg tttatctcgt
4681 caacttgttg gcgagatttt tgcggccgca ggaaccccta gtgatggagt tggccactcc
4741 ctctctgcgc gctcgctcgc tcactgaggc cgggcgacca aaggtcgccc gacgcccggg
4801 ctttgcccgg gcggcctcag tgagcgagcg agcgcgcagc tgcctgcagg ggcgcctgat
4861 gcggtatttt ctccttacgc atctgtgcgg tatttcacac cgcatacgtc aaagcaacca
4921 tagtacgcgc cctgtagcgg cgcattaagc gcggcgggtg tggtggttac gcgcagcgtg
4981 accgctacac ttgccagcgc cctagcgccc gctcctttcg ctttcttccc ttcctttctc
5041 gccacgttcg ccggctttcc ccgtcaagct ctaaatcggg ggctcccttt agggttccga
5101 tttagtgctt tacggcacct cgaccccaaa aaacttgatt tgggtgatgg ttcacgtagt
5161 gggccatcgc cctgatagac ggtttttcgc cctttgacgt tggagtccac gttctttaat
5221 agtggactct tgttccaaac tggaacaaca ctcaacccta tctcgggcta ttcttttgat
5281 ttataaggga ttttgccgat ttcggcctat tggttaaaaa atgagctgat ttaacaaaaa
5341 tttaacgcga attttaacaa aatattaacg tttacaattt tatggtgcac tctcagtaca
5401 atctgctctg atgccgcata gttaagccag ccccgacacc cgccaacacc cgctgacgcg
5461 ccctgacggg cttgtctgct cccggcatcc gcttacagac aagctgtgac cgtctccggg
5521 agctgcatgt gtcagaggtt ttcaccgtca tcaccgaaac gcgcgagacg aaagggcctc
5581 gtgatacgcc tatttttata ggttaatgtc atgataataa tggtttctta gacgtcaggt
5641 ggcacttttc ggggaaatgt gcgcggaacc cctatttgtt tatttttcta aatacattca
5701 aatatgtatc cgctcatgag acaataaccc tgataaatgc ttcaataata ttgaaaaagg
5761 aagagtatga gtattcaaca tttccgtgtc gcccttattc ccttttttgc ggcattttgc
5821 cttcctgttt ttgctcaccc agaaacgctg gtgaaagtaa aagatgctga agatcagttg
5881 ggtgcacgag tgggttacat cgaactggat ctcaacagcg gtaagatcct tgagagtttt
5941 cgccccgaag aacgttttcc aatgatgagc acttttaaag ttctgctatg tggcgcggta
6001 ttatcccgta ttgacgccgg gcaagagcaa ctcggtcgcc gcatacacta ttctcagaat
6061 gacttggttg agtactcacc agtcacagaa aagcatctta cggatggcat gacagtaaga
6121 gaattatgca gtgctgccat aaccatgagt gataacactg cggccaactt acttctgaca
6181 acgatcggag gaccgaagga gctaaccgct tttttgcaca acatggggga tcatgtaact
6241 cgccttgatc gttgggaacc ggagctgaat gaagccatac caaacgacga gcgtgacacc
6301 acgatgcctg tagcaatggc aacaacgttg cgcaaactat taactggcga actacttact
6361 ctagcttccc ggcaacaatt aatagactgg atggaggcgg ataaagttgc aggaccactt
6421 ctgcgctcgg cccttccggc tggctggttt attgctgata aatctggagc cggtgagcgt
6481 ggaagccgcg gtatcattgc agcactgggg ccagatggta agccctcccg tatcgtagtt
6541 atctacacga cggggagtca ggcaactatg gatgaacgaa atagacagat cgctgagata
6601 ggtgcctcac tgattaagca ttggtaactg tcagaccaag tttactcata tatactttag
6661 attgatttaa aacttcattt ttaatttaaa aggatctagg tgaagatcct ttttgataat
6721 ctcatgacca aaatccctta acgtgagttt tcgttccact gagcgtcaga ccccgtagaa
6781 aagatcaaag gatcttcttg agatcctttt tttctgcgcg taatctgctg cttgcaaaca
6841 aaaaaaccac cgctaccagc ggtggtttgt ttgccggatc aagagctacc aactcttttt
6901 ccgaaggtaa ctggcttcag cagagcgcag ataccaaata ctgtccttct agtgtagccg
6961 tagttaggcc accacttcaa gaactctgta gcaccgccta catacctcgc tctgctaatc
7021 ctgttaccag tggctgctgc cagtggcgat aagtcgtgtc ttaccgggtt ggactcaaga
7081 cgatagttac cggataaggc gcagcggtcg ggctgaacgg ggggttcgtg cacacagccc
7141 agcttggagc gaacgaccta caccgaactg agatacctac agcgtgagct atgagaaagc
7201 gccacgcttc ccgaagggag aaaggcggac aggtatccgg taagcggcag ggtcggaaca
7261 ggagagcgca cgagggagct tccaggggga aacgcctggt atctttatag tcctgtcggg
7321 tttcgccacc tctgacttga gcgtcgattt ttgtgatgct cgtcaggggg gcggagccta
7381 tggaaaaacg ccagcaacgc ggccttttta cggttcctgg ccttttgctg gccttttgct
7441 cacatgt
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pX601哺乳编辑质粒
别称: Plasmid#61591;pX601-AAV-CMV::NLS-SaC
| 启动子: | U6,CMV |
|---|---|
| 复制子: | pUC |
| 原核抗性: | Amp |
| 克隆菌株: | Stbl3 |
| 培养条件: | 37度 |
质粒属性
| 载体宿主： | 哺乳细胞,腺相关病毒 |
|---|---|
| 载体用途： | 基因敲除 |
| 基因种属： | 空载体 |
| 基因类型： | CRISPR,Cas9,sgRNA |
| 原核抗性： | Amp |
| 真核抗性： | |
| 荧光蛋白： |
质粒简介
pX601是一个哺乳细胞基因编辑质粒。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 7447 bp ds-DNA circular SYN 27-JUL-2017
DEFINITION synthetic circular DNA
KEYWORDS pX601
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 7447)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported Thursday, July 27, 2017 from MiaoLing plasmid
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..7447
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
promoter 534..737
/note="CMV promoter"
/note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early
promoter"
CDS 768..788
/codon_start=1
/product="nuclear localization signal of SV40 large T
antigen"
/note="SV40 NLS"
/translation="PKKKRKV"
CDS 813..3968
/codon_start=1
/product="Cas9 (Csn1) endonuclease from the Staphylococcus
aureus Type II CRISPR/Cas system"
/note="SaCas9"
/note="generates RNA-guided double strand breaks in DNA"
/translation="KRNYILGLDIGITSVGYGIIDYETRDVIDAGVRLFKEANVENNEG
RRSKRGARRLKRRRRHRIQRVKKLLFDYNLLTDHSELSGINPYEARVKGLSQKLSEEEF
SAALLHLAKRRGVHNVNEVEEDTGNELSTKEQISRNSKALEEKYVAELQLERLKKDGEV
RGSINRFKTSDYVKEAKQLLKVQKAYHQLDQSFIDTYIDLLETRRTYYEGPGEGSPFGW
KDIKEWYEMLMGHCTYFPEELRSVKYAYNADLYNALNDLNNLVITRDENEKLEYYEKFQ
IIENVFKQKKKPTLKQIAKEILVNEEDIKGYRVTSTGKPEFTNLKVYHDIKDITARKEI
IENAELLDQIAKILTIYQSSEDIQEELTNLNSELTQEEIEQISNLKGYTGTHNLSLKAI
NLILDELWHTNDNQIAIFNRLKLVPKKVDLSQQKEIPTTLVDDFILSPVVKRSFIQSIK
VINAIIKKYGLPNDIIIELAREKNSKDAQKMINEMQKRNRQTNERIEEIIRTTGKENAK
YLIEKIKLHDMQEGKCLYSLEAIPLEDLLNNPFNYEVDHIIPRSVSFDNSFNNKVLVKQ
EENSKKGNRTPFQYLSSSDSKISYETFKKHILNLAKGKGRISKTKKEYLLEERDINRFS
VQKDFINRNLVDTRYATRGLMNLLRSYFRVNNLDVKVKSINGGFTSFLRRKWKFKKERN
KGYKHHAEDALIIANADFIFKEWKKLDKAKKVMENQMFEEKQAESMPEIETEQEYKEIF
ITPHQIKHIKDFKDYKYSHRVDKKPNRELINDTLYSTRKDDKGNTLIVNNLNGLYDKDN
DKLKKLINKSPEKLLMYHHDPQTYQKLKLIMEQYGDEKNPLYKYYEETGNYLTKYSKKD
NGPVIKKIKYYGNKLNAHLDITDDYPNSRNKVVKLSLKPYRFDVYLDNGVYKFVTVKNL
DVIKKENYYEVNSKCYEEAKKLKKISNQAEFIASFYNNDLIKINGELYRVIGVNNDLLN
RIEVNMIDITYREYLENMNDKRPPRIIKTIASKTQSIKKYSTDILGNLYEVKSKKHPQI
IKKG"
CDS 3969..4016
/codon_start=1
/product="bipartite nuclear localization signal from
nucleoplasmin"
/note="nucleoplasmin NLS"
/translation="KRPAATKKAGQAKKKK"
CDS 4023..4103
/codon_start=1
/product="three tandem HA epitope tags"
/note="3xHA"
/translation="YPYDVPDYAYPYDVPDYAYPYDVPDYA"
polyA_signal 4137..4344
/note="bGH poly(A) signal"
/note="bovine growth hormone polyadenylation signal"
promoter 4352..4592
/note="U6 promoter"
/note="RNA polymerase III promoter for human U6 snRNA"
misc_RNA 4621..4696
/note="Sa gRNA scaffold"
/note="guide RNA scaffold for the Staphylococcus aureus
CRISPR/Cas9 system"
repeat_region 4710..4850
/note="AAV2 ITR"
/note="inverted terminal repeat of adeno-associated virus
serotype 2"
rep_origin 4925..5380
/direction=RIGHT
/note="f1 ori"
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
promoter 5662..5766
/gene="bla"
/note="AmpR promoter"
CDS 5767..6627
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/note="AmpR"
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
rep_origin 6798..7386
/direction=RIGHT
/note="ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
ORIGIN
1 cctgcaggca gctgcgcgct cgctcgctca ctgaggccgc ccgggcgtcg ggcgaccttt
61 ggtcgcccgg cctcagtgag cgagcgagcg cgcagagagg gagtggccaa ctccatcact
121 aggggttcct gcggcctcta gactcgaggc gttgacattg attattgact agttattaat
181 agtaatcaat tacggggtca ttagttcata gcccatatat ggagttccgc gttacataac
241 ttacggtaaa tggcccgcct ggctgaccgc ccaacgaccc ccgcccattg acgtcaataa
301 tgacgtatgt tcccatagta acgccaatag ggactttcca ttgacgtcaa tgggtggagt
361 atttacggta aactgcccac ttggcagtac atcaagtgta tcatatgcca agtacgcccc
421 ctattgacgt caatgacggt aaatggcccg cctggcatta tgcccagtac atgaccttat
481 gggactttcc tacttggcag tacatctacg tattagtcat cgctattacc atggtgatgc
541 ggttttggca gtacatcaat gggcgtggat agcggtttga ctcacgggga tttccaagtc
601 tccaccccat tgacgtcaat gggagtttgt tttggcacca aaatcaacgg gactttccaa
661 aatgtcgtaa caactccgcc ccattgacgc aaatgggcgg taggcgtgta cggtgggagg
721 tctatataag cagagctctc tggctaacta ccggtgccac catggcccca aagaagaagc
781 ggaaggtcgg tatccacgga gtcccagcag ccaagcggaa ctacatcctg ggcctggaca
841 tcggcatcac cagcgtgggc tacggcatca tcgactacga gacacgggac gtgatcgatg
901 ccggcgtgcg gctgttcaaa gaggccaacg tggaaaacaa cgagggcagg cggagcaaga
961 gaggcgccag aaggctgaag cggcggaggc ggcatagaat ccagagagtg aagaagctgc
1021 tgttcgacta caacctgctg accgaccaca gcgagctgag cggcatcaac ccctacgagg
1081 ccagagtgaa gggcctgagc cagaagctga gcgaggaaga gttctctgcc gccctgctgc
1141 acctggccaa gagaagaggc gtgcacaacg tgaacgaggt ggaagaggac accggcaacg
1201 agctgtccac caaagagcag atcagccgga acagcaaggc cctggaagag aaatacgtgg
1261 ccgaactgca gctggaacgg ctgaagaaag acggcgaagt gcggggcagc atcaacagat
1321 tcaagaccag cgactacgtg aaagaagcca aacagctgct gaaggtgcag aaggcctacc
1381 accagctgga ccagagcttc atcgacacct acatcgacct gctggaaacc cggcggacct
1441 actatgaggg acctggcgag ggcagcccct tcggctggaa ggacatcaaa gaatggtacg
1501 agatgctgat gggccactgc acctacttcc ccgaggaact gcggagcgtg aagtacgcct
1561 acaacgccga cctgtacaac gccctgaacg acctgaacaa tctcgtgatc accagggacg
1621 agaacgagaa gctggaatat tacgagaagt tccagatcat cgagaacgtg ttcaagcaga
1681 agaagaagcc caccctgaag cagatcgcca aagaaatcct cgtgaacgaa gaggatatta
1741 agggctacag agtgaccagc accggcaagc ccgagttcac caacctgaag gtgtaccacg
1801 acatcaagga cattaccgcc cggaaagaga ttattgagaa cgccgagctg ctggatcaga
1861 ttgccaagat cctgaccatc taccagagca gcgaggacat ccaggaagaa ctgaccaatc
1921 tgaactccga gctgacccag gaagagatcg agcagatctc taatctgaag ggctataccg
1981 gcacccacaa cctgagcctg aaggccatca acctgatcct ggacgagctg tggcacacca
2041 acgacaacca gatcgctatc ttcaaccggc tgaagctggt gcccaagaag gtggacctgt
2101 cccagcagaa agagatcccc accaccctgg tggacgactt catcctgagc cccgtcgtga
2161 agagaagctt catccagagc atcaaagtga tcaacgccat catcaagaag tacggcctgc
2221 ccaacgacat cattatcgag ctggcccgcg agaagaactc caaggacgcc cagaaaatga
2281 tcaacgagat gcagaagcgg aaccggcaga ccaacgagcg gatcgaggaa atcatccgga
2341 ccaccggcaa agagaacgcc aagtacctga tcgagaagat caagctgcac gacatgcagg
2401 aaggcaagtg cctgtacagc ctggaagcca tccctctgga agatctgctg aacaacccct
2461 tcaactatga ggtggaccac atcatcccca gaagcgtgtc cttcgacaac agcttcaaca
2521 acaaggtgct cgtgaagcag gaagaaaaca gcaagaaggg caaccggacc ccattccagt
2581 acctgagcag cagcgacagc aagatcagct acgaaacctt caagaagcac atcctgaatc
2641 tggccaaggg caagggcaga atcagcaaga ccaagaaaga gtatctgctg gaagaacggg
2701 acatcaacag gttctccgtg cagaaagact tcatcaaccg gaacctggtg gataccagat
2761 acgccaccag aggcctgatg aacctgctgc ggagctactt cagagtgaac aacctggacg
2821 tgaaagtgaa gtccatcaat ggcggcttca ccagctttct gcggcggaag tggaagttta
2881 agaaagagcg gaacaagggg tacaagcacc acgccgagga cgccctgatc attgccaacg
2941 ccgatttcat cttcaaagag tggaagaaac tggacaaggc caaaaaagtg atggaaaacc
3001 agatgttcga ggaaaagcag gccgagagca tgcccgagat cgaaaccgag caggagtaca
3061 aagagatctt catcaccccc caccagatca agcacattaa ggacttcaag gactacaagt
3121 acagccaccg ggtggacaag aagcctaata gagagctgat taacgacacc ctgtactcca
3181 cccggaagga cgacaagggc aacaccctga tcgtgaacaa tctgaacggc ctgtacgaca
3241 aggacaatga caagctgaaa aagctgatca acaagagccc cgaaaagctg ctgatgtacc
3301 accacgaccc ccagacctac cagaaactga agctgattat ggaacagtac ggcgacgaga
3361 agaatcccct gtacaagtac tacgaggaaa ccgggaacta cctgaccaag tactccaaaa
3421 aggacaacgg ccccgtgatc aagaagatta agtattacgg caacaaactg aacgcccatc
3481 tggacatcac cgacgactac cccaacagca gaaacaaggt cgtgaagctg tccctgaagc
3541 cctacagatt cgacgtgtac ctggacaatg gcgtgtacaa gttcgtgacc gtgaagaatc
3601 tggatgtgat caaaaaagaa aactactacg aagtgaatag caagtgctat gaggaagcta
3661 agaagctgaa gaagatcagc aaccaggccg agtttatcgc ctccttctac aacaacgatc
3721 tgatcaagat caacggcgag ctgtatagag tgatcggcgt gaacaacgac ctgctgaacc
3781 ggatcgaagt gaacatgatc gacatcacct accgcgagta cctggaaaac atgaacgaca
3841 agaggccccc caggatcatt aagacaatcg cctccaagac ccagagcatt aagaagtaca
3901 gcacagacat tctgggcaac ctgtatgaag tgaaatctaa gaagcaccct cagatcatca
3961 aaaagggcaa aaggccggcg gccacgaaaa aggccggcca ggcaaaaaag aaaaagggat
4021 cctacccata cgatgttcca gattacgctt acccatacga tgttccagat tacgcttacc
4081 catacgatgt tccagattac gcttaagaat tcctagagct cgctgatcag cctcgactgt
4141 gccttctagt tgccagccat ctgttgtttg cccctccccc gtgccttcct tgaccctgga
4201 aggtgccact cccactgtcc tttcctaata aaatgaggaa attgcatcgc attgtctgag
4261 taggtgtcat tctattctgg ggggtggggt ggggcaggac agcaaggggg aggattggga
4321 agagaatagc aggcatgctg gggaggtacc tgagggccta tttcccatga ttccttcata
4381 tttgcatata cgatacaagg ctgttagaga gataattgga attaatttga ctgtaaacac
4441 aaagatatta gtacaaaata cgtgacgtag aaagtaataa tttcttgggt agtttgcagt
4501 tttaaaatta tgttttaaaa tggactatca tatgcttacc gtaacttgaa agtatttcga
4561 tttcttggct ttatatatct tgtggaaagg acgaaacacc ggagaccacg gcaggtctca
4621 gttttagtac tctggaaaca gaatctacta aaacaaggca aaatgccgtg tttatctcgt
4681 caacttgttg gcgagatttt tgcggccgca ggaaccccta gtgatggagt tggccactcc
4741 ctctctgcgc gctcgctcgc tcactgaggc cgggcgacca aaggtcgccc gacgcccggg
4801 ctttgcccgg gcggcctcag tgagcgagcg agcgcgcagc tgcctgcagg ggcgcctgat
4861 gcggtatttt ctccttacgc atctgtgcgg tatttcacac cgcatacgtc aaagcaacca
4921 tagtacgcgc cctgtagcgg cgcattaagc gcggcgggtg tggtggttac gcgcagcgtg
4981 accgctacac ttgccagcgc cctagcgccc gctcctttcg ctttcttccc ttcctttctc
5041 gccacgttcg ccggctttcc ccgtcaagct ctaaatcggg ggctcccttt agggttccga
5101 tttagtgctt tacggcacct cgaccccaaa aaacttgatt tgggtgatgg ttcacgtagt
5161 gggccatcgc cctgatagac ggtttttcgc cctttgacgt tggagtccac gttctttaat
5221 agtggactct tgttccaaac tggaacaaca ctcaacccta tctcgggcta ttcttttgat
5281 ttataaggga ttttgccgat ttcggcctat tggttaaaaa atgagctgat ttaacaaaaa
5341 tttaacgcga attttaacaa aatattaacg tttacaattt tatggtgcac tctcagtaca
5401 atctgctctg atgccgcata gttaagccag ccccgacacc cgccaacacc cgctgacgcg
5461 ccctgacggg cttgtctgct cccggcatcc gcttacagac aagctgtgac cgtctccggg
5521 agctgcatgt gtcagaggtt ttcaccgtca tcaccgaaac gcgcgagacg aaagggcctc
5581 gtgatacgcc tatttttata ggttaatgtc atgataataa tggtttctta gacgtcaggt
5641 ggcacttttc ggggaaatgt gcgcggaacc cctatttgtt tatttttcta aatacattca
5701 aatatgtatc cgctcatgag acaataaccc tgataaatgc ttcaataata ttgaaaaagg
5761 aagagtatga gtattcaaca tttccgtgtc gcccttattc ccttttttgc ggcattttgc
5821 cttcctgttt ttgctcaccc agaaacgctg gtgaaagtaa aagatgctga agatcagttg
5881 ggtgcacgag tgggttacat cgaactggat ctcaacagcg gtaagatcct tgagagtttt
5941 cgccccgaag aacgttttcc aatgatgagc acttttaaag ttctgctatg tggcgcggta
6001 ttatcccgta ttgacgccgg gcaagagcaa ctcggtcgcc gcatacacta ttctcagaat
6061 gacttggttg agtactcacc agtcacagaa aagcatctta cggatggcat gacagtaaga
6121 gaattatgca gtgctgccat aaccatgagt gataacactg cggccaactt acttctgaca
6181 acgatcggag gaccgaagga gctaaccgct tttttgcaca acatggggga tcatgtaact
6241 cgccttgatc gttgggaacc ggagctgaat gaagccatac caaacgacga gcgtgacacc
6301 acgatgcctg tagcaatggc aacaacgttg cgcaaactat taactggcga actacttact
6361 ctagcttccc ggcaacaatt aatagactgg atggaggcgg ataaagttgc aggaccactt
6421 ctgcgctcgg cccttccggc tggctggttt attgctgata aatctggagc cggtgagcgt
6481 ggaagccgcg gtatcattgc agcactgggg ccagatggta agccctcccg tatcgtagtt
6541 atctacacga cggggagtca ggcaactatg gatgaacgaa atagacagat cgctgagata
6601 ggtgcctcac tgattaagca ttggtaactg tcagaccaag tttactcata tatactttag
6661 attgatttaa aacttcattt ttaatttaaa aggatctagg tgaagatcct ttttgataat
6721 ctcatgacca aaatccctta acgtgagttt tcgttccact gagcgtcaga ccccgtagaa
6781 aagatcaaag gatcttcttg agatcctttt tttctgcgcg taatctgctg cttgcaaaca
6841 aaaaaaccac cgctaccagc ggtggtttgt ttgccggatc aagagctacc aactcttttt
6901 ccgaaggtaa ctggcttcag cagagcgcag ataccaaata ctgtccttct agtgtagccg
6961 tagttaggcc accacttcaa gaactctgta gcaccgccta catacctcgc tctgctaatc
7021 ctgttaccag tggctgctgc cagtggcgat aagtcgtgtc ttaccgggtt ggactcaaga
7081 cgatagttac cggataaggc gcagcggtcg ggctgaacgg ggggttcgtg cacacagccc
7141 agcttggagc gaacgaccta caccgaactg agatacctac agcgtgagct atgagaaagc
7201 gccacgcttc ccgaagggag aaaggcggac aggtatccgg taagcggcag ggtcggaaca
7261 ggagagcgca cgagggagct tccaggggga aacgcctggt atctttatag tcctgtcggg
7321 tttcgccacc tctgacttga gcgtcgattt ttgtgatgct cgtcaggggg gcggagccta
7381 tggaaaaacg ccagcaacgc ggccttttta cggttcctgg ccttttgctg gccttttgct
7441 cacatgt
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P1250/pECMV-3×FLAG-SGLT1人源基因质粒 |
| P1251/pECMV-3×FLAG-SIRT4人源基因质粒 |
| P1281/pECMV-3×FLAG-LONP2人源基因质粒 |
| P1563/pECMV-3×FLAG-Survium人源基因质粒 |
| P1565/pECMV-3×FLAG-RLN2人源基因质粒 |
| P1853/pECMV-3×FLAG-IL8人源基因质粒 |
| P1854/pECMV-3×FLAG-IL17A人源基因质粒 |
| P1882/pECMV-3×FLAG-PKM人源基因质粒 |
| P4107/pECMV-3×FLAG-SLC25A10人源基因质粒 |
| P4108/pECMV-3×FLAG-CLDN12人源基因质粒 |
风险提示：丁香通仅作为第三方平台，为商家信息发布提供平台空间。用户咨询产品时请注意保护个人信息及财产安全，合理判断，谨慎选购商品，商家和用户对交易行为负责。对于医疗器械类产品，请先查证核实企业经营资质和医疗器械产品注册证情况。
文献和实验相关实验
1、质粒的概念 质粒（Plasmid）是一种存在于细菌、酵母等微生物细胞中的小型环状双链 DNA 分子，能够独立于宿主染色体进行自我复制，并通常携带对宿主生存非必需但具有特定功能的基因（如抗生素抗性基因）。质粒是分子生物学和基因工程中最重要的工具之一。 质粒根据其用途可以分为多种不同的类型，如用于保存序列信息的克隆质粒（如：pUC 系列质粒），用于表达蛋白的质粒（如哺乳动物细胞表达所用的 pcDNA3.1 系列质粒），用于基因编辑的质粒（如哺乳动物细胞基因编辑所用的 espCas9-2A
CRISPR/Cas9 是一种强大的基因组编辑工具，今天我们介绍 CRISPR/Cas9 系统操作。以下操作说明是基于作者冰糖个人实验室操作，仅供参考。 质粒介绍我们使用的是 Feng Zhang 实验室的系统的 pX330 质粒，如下图所示： 酶切系统 37 ℃, 3 hr；Run 1% gel，回收。Elute 到 50 mL H2O。我们利用 BbsI 消化载体形成粘末端，以利于下游 oligo 退火产物的连接；酶切时请充分，且绝对不能加 CIP 处理
Cell Rep：上海科技大学季泉江团队开发出高效微型 CRISPR-SpaCas12f1 基因编辑系统
统转化为哺乳动物细胞中高效的基因组编辑器。来自 Syntrophomonas palmitatica 的紧凑型 SpaCas12f1 只有 497 个氨基酸，该研究首先系统地表征了 SpaCas12f1 的生化特性及对 DNA 识别与切割的模式，证明了 SpaCas12f1 是一种镁离子依赖的嗜热核酸酶，可在 tracrRNA 和 crRNA 的帮助下有效切割含有 5'-NTTY (Y 代表 C 或 T)PAM 的双链 DNA。此外，SpaCas12f1 拥有与 AsCas12f1 相似的切割模式
pX601哺乳编辑质粒
￥100 - 1000
