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- 上海
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-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
pTol2-Promoter-T2A-EGFP
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pTol2-Promoter-T2A-EGFP哺乳转座质粒
别称: pTol2-Promoter-T2A-EGFP
质粒属性
质粒简介
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 7312 bp ds-DNA circular SYN 07-DEC-2015
DEFINITION synthetic circular DNA
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS pTol2-Promoter-T2A-EGFP
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 7312)
AUTHORS hp
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported Monday, September 5, 2016 from SnapGene Viewer 3.1.4
http://www.miaolingbio.com
COMMENT http://www.informaxinc.com/
ORIGDB|GenBank
FEATURES Location/Qualifiers
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ORIGIN
1 tagttattaa tagaggtgta aagtacttga gtaattttac ttgattactg tacttaagta
61 ttatttttgg ggatttttac tttacttgag tacaattaaa aatcaatact tttactttta
121 cttaattaca tttttttaga aaaaaaagta ctttttactc cttacaattt tatttacagt
181 caaaaagtac ttattttttg gagatcactt cattctattt tcccttgcta ttagctagcg
241 ctaccggact cagatctcga gcgtttactc tgagaaactt ccatatttta gaggtaaaat
301 gctcagaatt gtaaaaagtc ttgtcaaaat acttggaatt tgccaaaaac aaaataaaag
361 tcacatcacc tcattgtcct tggtatcagc aagcactttt aacacaatca gctgtttttg
421 tttataactc ccactgaagg ccatgtgcat tactcccaag ttacacagta aaaagtcaca
481 tgtagtttat catgatcact gctgctcaag cacagcttta tctgttattc agtgtggcaa
541 tatctgaaat gtgtgcaaaa tattatttat tgtagctgat caccaacact ttcagtgttt
601 tttttttcta cttttaatga gaattatgtt cttaggattt atccttataa acctctttaa
661 aaagaaatgt tatgtctgca tagacacgac atgaaattat gaacagaaaa tttaactatt
721 taagatcaag acttgacata taacatttct aatgaacatt aaacctgagg taggcccact
781 tgcaaaaatg taactgctat cactcacttt atacatcatt gtgtaacttg tacacacaaa
841 aatagtgaag caatgtggca tggaatgcag gtcccattca ttcaaagtta ttaaagcact
901 ttcttaaagt gcattactac tgagctaaga ccagctagtt gctcatacaa catactacaa
961 gtagtgtcat cctaatttgg ataaaaaaaa tgtccatttt atacatggaa aagtactcat
1021 tagatccccc attgtttgta ttacggtatt tcgtgaacac aagaggtaaa tgacctacag
1081 agctgctgtt gtgttagatt gaaaacacaa cacaggatca tggaggcatc catcattatg
1141 acgcattctg ccacttgtaa ctctgcacag actttttgaa aagtttaatt gagtcttggc
1201 gttgtcgcag aaaaatacga aaaattctgt gttaaaattt gcaaataaaa attccagttt
1261 tataggaaat cgccatggcc ttgttcttta accagttaag cttccccttc tttcactctc
1321 aagttgcaag aagcaagtgt agcaatgtgc acgcgacagc cgggtgtgtg acgctggacc
1381 aatcagagca cagagctccg aaagtttacc ttttatggct agagccgggt atgtgccgtc
1441 atataaaaga gcgcgcccag cttttcagcc tcactttgag ctcctccaca cgcagctagt
1501 gcggaatatc atctgcttgt aacccattct cttaagtcga caacccccca aacccaaggt
1561 gagttggttt tacagttttt aagcgtttaa ttatagtttc tatctattaa tgttaagtaa
1621 aatgtgtaaa tggataaata tgatttgatg aagtctttag acagttcata acggtctctt
1681 tgtagttatc tactaggttt gatttataag tggtggttct tttgataatc tatgttacat
1741 ttaataaata ttggctgtat cttaactttt ttgtagcgtt agtggatgtg gcaggtgaga
1801 atgtcggtaa tttaacgtga ccagtcgtag gcacgacatt gaacattgaa taggccggtg
1861 tgaaatgggt gttaagtctt aatataaagt tgtgttctgg ctaatctctc tttaacagcc
1921 ataaatgtga tttttaacta cagttttgag ggtgctggtg agcatgttgc acacttgatg
1981 gatagccggc atgggaagtt ctttgtgcag gcagtgctgc agcagggtgt gacctacttt
2041 agctagccgg ctaaccagct ctcatctgat gtaacgtaaa ccccatcaat ctaacatcgg
2101 ctcattcgtg ctttataaga tcgaagatct tgttattagt aacgggtatt ggcatttagt
2161 tttaacttgg ttaattttct ttttgttatg tgttctattt aaatgtagcc tgcagccccc
2221 tctgtcttta atgaagctga agattaacgt taacgttagt gaagtgttgt atccgctatg
2281 aaagatttga attttagagg tgtggtccac tttaataacg gctgcggagt tctctggctg
2341 cacttcagcc gctgtgactg tcgaagcaga gcccatcagt ttttcaggat ctcggtgatt
2401 tttgaggcta gactatgaac tgaaccgact gagagtgacc gtccagaaat gctttagtgt
2461 gaagtctccg ctcacgagga gtccgtggac tgactgcaga tctgtgacgc agtaacaccc
2521 ggcggcagac acccgttgaa atgcggttgt gtaattgatc gcaggcgagg gtggaagagg
2581 atgtgaaact tcatttgtgt aaaatttagg gagtggtcct ggtgtgatga atgtcgaaat
2641 ctgttccttt ttactgagcc ctacgactct ggctgagtgc cacaccgccg gcagccgcaa
2701 agcggctcaa accattgcct tttatggtaa taatgagaga atgcagaggg acttcctttg
2761 tctggcatat ctgaggcgcg cgctgtcact agcgcccacc agcggtcaga ctgtagaatg
2821 cagagcaaaa caggaagttg actccagatg gtcacatgct tgctgaaacg cctctccctg
2881 gcagcagtgc aattctaaca gtttcccttt cttttacagt tcagccgaat tctgcagtcg
2941 acggtaccgc gggcccggga tccggaggtg gcagcggtgg cggtcagctg ttgaattttg
3001 accttcttaa acttgcggga gacgtcgagt ccaaccctgg gcccacaacc atggtgagca
3061 agggcgagga gctgttcacc ggggtggtgc ccatcctggt cgagctggac ggcgacgtaa
3121 acggccacaa gttcagcgtg tccggcgagg gcgagggcga tgccacctac ggcaagctga
3181 ccctgaagtt catctgcacc accggcaagc tgcccgtgcc ctggcccacc ctcgtgacca
3241 ccctgaccta cggcgtgcag tgcttcagcc gctaccccga ccacatgaag cagcacgact
3301 tcttcaagtc cgccatgccc gaaggctacg tccaggagcg caccatcttc ttcaaggacg
3361 acggcaacta caagacccgc gccgaggtga agttcgaggg cgacaccctg gtgaaccgca
3421 tcgagctgaa gggcatcgac ttcaaggagg acggcaacat cctggggcac aagctggagt
3481 acaactacaa cagccacaac gtctatatca tggccgacaa gcagaagaac ggcatcaagg
3541 tgaacttcaa gatccgccac aacatcgagg acggcagcgt gcagctcgcc gaccactacc
3601 agcagaacac ccccatcggc gacggccccg tgctgctgcc cgacaaccac tacctgagca
3661 cccagtccgc cctgagcaaa gaccccaacg agaagcgcga tcacatggtc ctgctggagt
3721 tcgtgaccgc cgccgggatc actctcggca tggacgagct gtacaagtaa agcggccgcg
3781 actctagatc ataatcagcc ataccacatt tgtagaggtt ttacttgctt taaaaaacct
3841 cccacacctc cccctgaacc tgaaacataa aatgaatgca attgttgttg ttaacttgtt
3901 tattgcagct tataatggtt acaaataaag caatagcatc acaaatttca caaataaagc
3961 atttttttca ctgcattcta gttgtggttt gtccaaactc atcaatgtat cttaaggctt
4021 aaacaagaat ctctagtttt ctttcttgct tttactttta cttccttaat actcaagtac
4081 aattttaatg gagtactttt ttacttttac tcaagtaaga ttctagccag atacttttac
4141 ttttaattga gtaaaatttt ccctaagtac ttgtactttc acttgagtaa aatttttgag
4201 tactttttac acctctgctt aaggcgtaaa ttgtaagcgt taatattttg ttaaaattcg
4261 cgttaaattt ttgttaaatc agctcatttt ttaaccaata ggccgaaatc ggcaaaatcc
4321 cttataaatc aaaagaatag accgagatag ggttgagtgt tgttccagtt tggaacaaga
4381 gtccactatt aaagaacgtg gactccaacg tcaaagggcg aaaaaccgtc tatcagggcg
4441 atggcccact acgtgaacca tcaccctaat caagtttttt ggggtcgagg tgccgtaaag
4501 cactaaatcg gaaccctaaa gggagccccc gatttagagc ttgacgggga aagccggcga
4561 acgtggcgag aaaggaaggg aagaaagcga aaggagcggg cgctagggcg ctggcaagtg
4621 tagcggtcac gctgcgcgta accaccacac ccgccgcgct taatgcgccg ctacagggcg
4681 cgtcaggtgg cacttttcgg ggaaatgtgc gcggaacccc tatttgttta tttttctaaa
4741 tacattcaaa tatgtatccg ctcatgagac aataaccctg ataaatgctt caataatatt
4801 gaaaaaggaa gagtcctgag gcggaaagaa ccagctgtgg aatgtgtgtc agttagggtg
4861 tggaaagtcc ccaggctccc cagcaggcag aagtatgcaa agcatgcatc tcaattagtc
4921 agcaaccagg tgtggaaagt ccccaggctc cccagcaggc agaagtatgc aaagcatgca
4981 tctcaattag tcagcaacca tagtcccgcc cctaactccg cccatcccgc ccctaactcc
5041 gcccagttcc gcccattctc cgccccatgg ctgactaatt ttttttattt atgcagaggc
5101 cgaggccgcc tcggcctctg agctattcca gaagtagtga ggaggctttt ttggaggcct
5161 aggcttttgc aaagatcgat caagagacag gatgaggatc gtttcgcatg attgaacaag
5221 atggattgca cgcaggttct ccggccgctt gggtggagag gctattcggc tatgactggg
5281 cacaacagac aatcggctgc tctgatgccg ccgtgttccg gctgtcagcg caggggcgcc
5341 cggttctttt tgtcaagacc gacctgtccg gtgccctgaa tgaactgcaa gacgaggcag
5401 cgcggctatc gtggctggcc acgacgggcg ttccttgcgc agctgtgctc gacgttgtca
5461 ctgaagcggg aagggactgg ctgctattgg gcgaagtgcc ggggcaggat ctcctgtcat
5521 ctcaccttgc tcctgccgag aaagtatcca tcatggctga tgcaatgcgg cggctgcata
5581 cgcttgatcc ggctacctgc ccattcgacc accaagcgaa acatcgcatc gagcgagcac
5641 gtactcggat ggaagccggt cttgtcgatc aggatgatct ggacgaagag catcaggggc
5701 tcgcgccagc cgaactgttc gccaggctca aggcgagcat gcccgacggc gaggatctcg
5761 tcgtgaccca tggcgatgcc tgcttgccga atatcatggt ggaaaatggc cgcttttctg
5821 gattcatcga ctgtggccgg ctgggtgtgg cggaccgcta tcaggacata gcgttggcta
5881 cccgtgatat tgctgaagag cttggcggcg aatgggctga ccgcttcctc gtgctttacg
5941 gtatcgccgc tcccgattcg cagcgcatcg ccttctatcg ccttcttgac gagttcttct
6001 gagcgggact ctggggttcg aaatgaccga ccaagcgacg cccaacctgc catcacgaga
6061 tttcgattcc accgccgcct tctatgaaag gttgggcttc ggaatcgttt tccgggacgc
6121 cggctggatg atcctccagc gcggggatct catgctggag ttcttcgccc accctagggg
6181 gaggctaact gaaacacgga aggagacaat accggaagga acccgcgcta tgacggcaat
6241 aaaaagacag aataaaacgc acggtgttgg gtcgtttgtt cataaacgcg gggttcggtc
6301 ccagggctgg cactctgtcg ataccccacc gagaccccat tggggccaat acgcccgcgt
6361 ttcttccttt tccccacccc accccccaag ttcgggtgaa ggcccagggc tcgcagccaa
6421 cgtcggggcg gcaggccctg ccatagcctc aggttactca tatatacttt agattgattt
6481 aaaacttcat ttttaattta aaaggatcta ggtgaagatc ctttttgata atctcatgac
6541 caaaatccct taacgtgagt tttcgttcca ctgagcgtca gaccccgtag aaaagatcaa
6601 aggatcttct tgagatcctt tttttctgcg cgtaatctgc tgcttgcaaa caaaaaaacc
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6721 aactggcttc agcagagcgc agataccaaa tactgtcctt ctagtgtagc cgtagttagg
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6841 agtggctgct gccagtggcg ataagtcgtg tcttaccggg ttggactcaa gacgatagtt
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6961 gcgaacgacc tacaccgaac tgagatacct acagcgtgag ctatgagaaa gcgccacgct
7021 tcccgaaggg agaaaggcgg acaggtatcc ggtaagcggc agggtcggaa caggagagcg
7081 cacgagggag cttccagggg gaaacgcctg gtatctttat agtcctgtcg ggtttcgcca
7141 cctctgactt gagcgtcgat ttttgtgatg ctcgtcaggg gggcggagcc tatggaaaaa
7201 cgccagcaac gcggcctttt tacggttcct ggccttttgc tggccttttg ctcacatgtt
7261 ctttcctgcg ttatcccctg attctgtgga taaccgtatt accgccatgc at
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pTol2-Promoter-T2A-EGFP哺乳转座质粒
别称: pTol2-Promoter-T2A-EGFP
| 启动子: | ZBactin |
|---|---|
| 复制子: | pUC |
| 质粒分类: | 哺乳细胞，转座子载体 |
| 质粒大小: | 7312bp |
| 原核抗性: | Kan |
| 筛选标记: | G418 |
| 克隆菌株: | Stbl3 |
| 培养条件: | 37度 |
| 表达宿主: | 哺乳细胞 |
| 诱导方式: | 无须诱导，瞬时表达 |
| 5'测序引物: | pEGFP-N-3:CGTCGCCGTCCAGCTCGACCAG |
| 3'测序引物: | 根据序列设计引物 |
质粒属性
| 载体宿主： | 哺乳细胞 |
|---|---|
| 载体用途： | 蛋白表达,转座 |
| 基因种属： | |
| 基因类型： | ORF |
| 原核抗性： | Kan |
| 真核抗性： | Neo/G418 |
| 荧光蛋白： |
质粒简介
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 7312 bp ds-DNA circular SYN 07-DEC-2015
DEFINITION synthetic circular DNA
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS pTol2-Promoter-T2A-EGFP
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 7312)
AUTHORS hp
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported Monday, September 5, 2016 from SnapGene Viewer 3.1.4
http://www.miaolingbio.com
COMMENT http://www.informaxinc.com/
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FEATURES Location/Qualifiers
source 1..7312
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ORIGIN
1 tagttattaa tagaggtgta aagtacttga gtaattttac ttgattactg tacttaagta
61 ttatttttgg ggatttttac tttacttgag tacaattaaa aatcaatact tttactttta
121 cttaattaca tttttttaga aaaaaaagta ctttttactc cttacaattt tatttacagt
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2041 agctagccgg ctaaccagct ctcatctgat gtaacgtaaa ccccatcaat ctaacatcgg
2101 ctcattcgtg ctttataaga tcgaagatct tgttattagt aacgggtatt ggcatttagt
2161 tttaacttgg ttaattttct ttttgttatg tgttctattt aaatgtagcc tgcagccccc
2221 tctgtcttta atgaagctga agattaacgt taacgttagt gaagtgttgt atccgctatg
2281 aaagatttga attttagagg tgtggtccac tttaataacg gctgcggagt tctctggctg
2341 cacttcagcc gctgtgactg tcgaagcaga gcccatcagt ttttcaggat ctcggtgatt
2401 tttgaggcta gactatgaac tgaaccgact gagagtgacc gtccagaaat gctttagtgt
2461 gaagtctccg ctcacgagga gtccgtggac tgactgcaga tctgtgacgc agtaacaccc
2521 ggcggcagac acccgttgaa atgcggttgt gtaattgatc gcaggcgagg gtggaagagg
2581 atgtgaaact tcatttgtgt aaaatttagg gagtggtcct ggtgtgatga atgtcgaaat
2641 ctgttccttt ttactgagcc ctacgactct ggctgagtgc cacaccgccg gcagccgcaa
2701 agcggctcaa accattgcct tttatggtaa taatgagaga atgcagaggg acttcctttg
2761 tctggcatat ctgaggcgcg cgctgtcact agcgcccacc agcggtcaga ctgtagaatg
2821 cagagcaaaa caggaagttg actccagatg gtcacatgct tgctgaaacg cctctccctg
2881 gcagcagtgc aattctaaca gtttcccttt cttttacagt tcagccgaat tctgcagtcg
2941 acggtaccgc gggcccggga tccggaggtg gcagcggtgg cggtcagctg ttgaattttg
3001 accttcttaa acttgcggga gacgtcgagt ccaaccctgg gcccacaacc atggtgagca
3061 agggcgagga gctgttcacc ggggtggtgc ccatcctggt cgagctggac ggcgacgtaa
3121 acggccacaa gttcagcgtg tccggcgagg gcgagggcga tgccacctac ggcaagctga
3181 ccctgaagtt catctgcacc accggcaagc tgcccgtgcc ctggcccacc ctcgtgacca
3241 ccctgaccta cggcgtgcag tgcttcagcc gctaccccga ccacatgaag cagcacgact
3301 tcttcaagtc cgccatgccc gaaggctacg tccaggagcg caccatcttc ttcaaggacg
3361 acggcaacta caagacccgc gccgaggtga agttcgaggg cgacaccctg gtgaaccgca
3421 tcgagctgaa gggcatcgac ttcaaggagg acggcaacat cctggggcac aagctggagt
3481 acaactacaa cagccacaac gtctatatca tggccgacaa gcagaagaac ggcatcaagg
3541 tgaacttcaa gatccgccac aacatcgagg acggcagcgt gcagctcgcc gaccactacc
3601 agcagaacac ccccatcggc gacggccccg tgctgctgcc cgacaaccac tacctgagca
3661 cccagtccgc cctgagcaaa gaccccaacg agaagcgcga tcacatggtc ctgctggagt
3721 tcgtgaccgc cgccgggatc actctcggca tggacgagct gtacaagtaa agcggccgcg
3781 actctagatc ataatcagcc ataccacatt tgtagaggtt ttacttgctt taaaaaacct
3841 cccacacctc cccctgaacc tgaaacataa aatgaatgca attgttgttg ttaacttgtt
3901 tattgcagct tataatggtt acaaataaag caatagcatc acaaatttca caaataaagc
3961 atttttttca ctgcattcta gttgtggttt gtccaaactc atcaatgtat cttaaggctt
4021 aaacaagaat ctctagtttt ctttcttgct tttactttta cttccttaat actcaagtac
4081 aattttaatg gagtactttt ttacttttac tcaagtaaga ttctagccag atacttttac
4141 ttttaattga gtaaaatttt ccctaagtac ttgtactttc acttgagtaa aatttttgag
4201 tactttttac acctctgctt aaggcgtaaa ttgtaagcgt taatattttg ttaaaattcg
4261 cgttaaattt ttgttaaatc agctcatttt ttaaccaata ggccgaaatc ggcaaaatcc
4321 cttataaatc aaaagaatag accgagatag ggttgagtgt tgttccagtt tggaacaaga
4381 gtccactatt aaagaacgtg gactccaacg tcaaagggcg aaaaaccgtc tatcagggcg
4441 atggcccact acgtgaacca tcaccctaat caagtttttt ggggtcgagg tgccgtaaag
4501 cactaaatcg gaaccctaaa gggagccccc gatttagagc ttgacgggga aagccggcga
4561 acgtggcgag aaaggaaggg aagaaagcga aaggagcggg cgctagggcg ctggcaagtg
4621 tagcggtcac gctgcgcgta accaccacac ccgccgcgct taatgcgccg ctacagggcg
4681 cgtcaggtgg cacttttcgg ggaaatgtgc gcggaacccc tatttgttta tttttctaaa
4741 tacattcaaa tatgtatccg ctcatgagac aataaccctg ataaatgctt caataatatt
4801 gaaaaaggaa gagtcctgag gcggaaagaa ccagctgtgg aatgtgtgtc agttagggtg
4861 tggaaagtcc ccaggctccc cagcaggcag aagtatgcaa agcatgcatc tcaattagtc
4921 agcaaccagg tgtggaaagt ccccaggctc cccagcaggc agaagtatgc aaagcatgca
4981 tctcaattag tcagcaacca tagtcccgcc cctaactccg cccatcccgc ccctaactcc
5041 gcccagttcc gcccattctc cgccccatgg ctgactaatt ttttttattt atgcagaggc
5101 cgaggccgcc tcggcctctg agctattcca gaagtagtga ggaggctttt ttggaggcct
5161 aggcttttgc aaagatcgat caagagacag gatgaggatc gtttcgcatg attgaacaag
5221 atggattgca cgcaggttct ccggccgctt gggtggagag gctattcggc tatgactggg
5281 cacaacagac aatcggctgc tctgatgccg ccgtgttccg gctgtcagcg caggggcgcc
5341 cggttctttt tgtcaagacc gacctgtccg gtgccctgaa tgaactgcaa gacgaggcag
5401 cgcggctatc gtggctggcc acgacgggcg ttccttgcgc agctgtgctc gacgttgtca
5461 ctgaagcggg aagggactgg ctgctattgg gcgaagtgcc ggggcaggat ctcctgtcat
5521 ctcaccttgc tcctgccgag aaagtatcca tcatggctga tgcaatgcgg cggctgcata
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5641 gtactcggat ggaagccggt cttgtcgatc aggatgatct ggacgaagag catcaggggc
5701 tcgcgccagc cgaactgttc gccaggctca aggcgagcat gcccgacggc gaggatctcg
5761 tcgtgaccca tggcgatgcc tgcttgccga atatcatggt ggaaaatggc cgcttttctg
5821 gattcatcga ctgtggccgg ctgggtgtgg cggaccgcta tcaggacata gcgttggcta
5881 cccgtgatat tgctgaagag cttggcggcg aatgggctga ccgcttcctc gtgctttacg
5941 gtatcgccgc tcccgattcg cagcgcatcg ccttctatcg ccttcttgac gagttcttct
6001 gagcgggact ctggggttcg aaatgaccga ccaagcgacg cccaacctgc catcacgaga
6061 tttcgattcc accgccgcct tctatgaaag gttgggcttc ggaatcgttt tccgggacgc
6121 cggctggatg atcctccagc gcggggatct catgctggag ttcttcgccc accctagggg
6181 gaggctaact gaaacacgga aggagacaat accggaagga acccgcgcta tgacggcaat
6241 aaaaagacag aataaaacgc acggtgttgg gtcgtttgtt cataaacgcg gggttcggtc
6301 ccagggctgg cactctgtcg ataccccacc gagaccccat tggggccaat acgcccgcgt
6361 ttcttccttt tccccacccc accccccaag ttcgggtgaa ggcccagggc tcgcagccaa
6421 cgtcggggcg gcaggccctg ccatagcctc aggttactca tatatacttt agattgattt
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6601 aggatcttct tgagatcctt tttttctgcg cgtaatctgc tgcttgcaaa caaaaaaacc
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7261 ctttcctgcg ttatcccctg attctgtgga taaccgtatt accgccatgc at
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质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P4745/pCMV-SPORT6-C1orf109人源基因质粒 |
| P4746/pCMV-SPORT6-MYO9B人源基因质粒 |
| P4747/pCMV-SPORT6-COPG1人源基因质粒 |
| P4748/pCMV-SPORT6-RPIA人源基因质粒 |
| P4749/pCMV-SPORT6-CC2D1B人源基因质粒 |
| P4750/pCMV-SPORT6-RCSD1人源基因质粒 |
| P4751/pCMV-SPORT6-PRRT1人源基因质粒 |
| P4752/pCMV-SPORT6-TM4SF19人源基因质粒 |
| P4753/pCMV-SPORT6-MSX2（1点突变）人源基因质粒 |
| P4754/pCMV-SPORT6-SSBP2人源基因质粒 |
| P4755/pCMV-SPORT6-CYB5A人源基因质粒 |
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文献和实验相关实验
human full length protein coding ORFs ; ; ORF2： ; ;eGFP eCFP eYFP Luciferase Biotin Ligase ; ;UBC9 HA-Sumo His-AviTag-ubiquitin Neomycin Human ORFs zhaolifei认为： 不知道楼主注意到没有：质粒的不相容性，具有相同复制起始
human full length protein coding ORFs ; ; ORF2： ; ;eGFP eCFP eYFP Luciferase Biotin Ligase ; ;UBC9 HA-Sumo His-AviTag-ubiquitin Neomycin Human ORFs zhaolifei认为： 不知道楼主注意到没有：质粒的不相容性，具有相同复制起始
。 Simple-sequence DNA (简单序列DNA)：等同于卫星DNA。 SINES：短散布序列，是一类反转座子，以短的散布重复在哺乳动物基因组中出现，来自 RNA 聚合酶III介导的转录。 Single-copy plasmid (单拷贝质粒)：在细菌中以每个宿主染色体一个质粒的比率存在。 Single-strand assimilation (单链同化)：指RecA 蛋白质引起DNA单链替换双螺旋中其同源 链的能力，即能使单链同化进双链。 Single
pTol2-Promoter-T2A-EGFP哺乳转座质粒
￥100 - 1000
