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- 上海
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- 2025年07月10日
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- 详细信息
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- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
PB513B-1;pB-CMV-MCS-ef1α-greenpuro
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：PiggyBac Dual promoter (PB513B-1)哺乳转座质粒
别称: PB513B-1;pB-CMV-MCS-ef1α-greenpuro
质粒属性
质粒简介
PiggyBac Dual promoter (PB513B-1)是用于哺乳细胞转座实验的质粒，位于CMV启动子下游的多克隆位点（MCS），使目的基因或microRNA更方便克隆。下游的EF-1α core promoter启动GFP的表达。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported File 7258 bp ds-DNA circular SYN 24-5-2015
KEYWORDS PiggyBac Dual promoter(PB513B-1)
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 7258)
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported 2015-5-24 from MiaoLingPlasmid
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..7258
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
promoter complement(1..105)
/gene="bla"
/note="AmpR promoter"
rep_origin complement(131..586)
/direction=LEFT
/note="f1 ori"
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
primer_bind 728..744
/note="M13 fwd"
/note="common sequencing primer, one of multiple similar
variants"
promoter 1442..1645
/note="CMV promoter"
/note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early
promoter"
CDS 3068..3121
/codon_start=1
/product="2A peptide from?Thosea asigna virus capsid
protein"
/note="T2A"
/note="Eukaryotic ribosomes fail to insert a peptide bond
between the Gly and Pro residues, yielding separate
polypeptides."
/protein_id="
"
/translation="EGRGSLLTCGDVEENPGP"
CDS 3122..3721
/codon_start=1
/gene="pac from Streptomyces alboniger"
/product="puromycin N-acetyltransferase"
/note="PuroR"
/note="confers resistance to puromycin"
/translation="MTEYKPTVRLATRDDVPRAVRTLAAAFADYPATRHTVDPDRHIER
VTELQELFLTRVGLDIGKVWVADDGAAVAVWTTPESVEAGAVFAEIGPRMAELSGSRLA
AQQQMEGLLAPHRPKEPAWFLATVGVSPDHQGKGLGSAVVLPGVEAAERAGVPAFLETS
APRNLPFYERLGFTVTADVEVPEGPRTWCMTRKPGA"
polyA_signal 3829..3950
/note="SV40 poly(A) signal"
/note="SV40 polyadenylation signal"
primer_bind complement(5237..5253)
/note="M13 rev"
/note="common sequencing primer, one of multiple similar
variants"
protein_bind 5261..5277
/bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
/note="lac operator"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
promoter complement(5285..5315)
/note="lac promoter"
/note="promoter for the E. coli lac operon"
protein_bind 5330..5351
/bound_moiety="E. coli catabolite activator protein"
/note="CAP binding site"
/note="CAP binding activates transcription in the presence
of cAMP."
rep_origin complement(5639..6227)
/direction=LEFT
/note="ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(6398..7258)
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/note="AmpR"
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
ORIGIN
1 actcttcctt tttcaatatt attgaagcat ttatcagggt tattgtctca tgagcggata
61 catatttgaa tgtatttaga aaaataaaca aataggggtt ccgcgcacat ttccccgaaa
121 agtgccacct aaattgtaag cgttaatatt ttgttaaaat tcgcgttaaa tttttgttaa
181 atcagctcat tttttaacca ataggccgaa atcggcaaaa tcccttataa atcaaaagaa
241 tagaccgaga tagggttgag tgttgttcca gtttggaaca agagtccact attaaagaac
301 gtggactcca acgtcaaagg gcgaaaaacc gtctatcagg gcgatggccc actacgtgaa
361 ccatcaccct aatcaagttt tttggggtcg aggtgccgta aagcactaaa tcggaaccct
421 aaagggagcc cccgatttag agcttgacgg ggaaagccgg cgaacgtggc gagaaaggaa
481 gggaagaaag cgaaaggagc gggcgctagg gcgctggcaa gtgtagcggt cacgctgcgc
541 gtaaccacca cacccgccgc gcttaatgcg ccgctacagg gcgcgtccca ttcgccattc
601 aggctgcgca actgttggga agggcgatcg gtgcgggcct cttcgctatt acgccagctg
661 gcgaaagggg gatgtgctgc aaggcgatta agttgggtaa cgccagggtt ttcccagtca
721 cgacgttgta aaacgacggc cagtgagcgc gcctcgttca ttcacgtttt tgaacccgtg
781 gaggacgggc agactcgcgg tgcaaatgtg ttttacagcg tgatggagca gatgaagatg
841 ctcgacacgc tgcagaacac gcagctagat taaccctaga aagataatca tattgtgacg
901 tacgttaaag ataatcatgc gtaaaattga cgcatgtgtt ttatcggtct gtatatcgag
961 gtttatttat taatttgaat agatattaag ttttattata tttacactta catactaata
1021 ataaattcaa caaacaattt atttatgttt atttatttat taaaaaaaaa caaaaactca
1081 aaatttcttc tataaagtaa caaaactttt atgagggaca gccccccccc aaagccccca
1141 gggatgtaat tacgtccctc ccccgctagg gggcagcagc gagccgcccg gggctccgct
1201 ccggtccggc gctccccccg catccccgag ccggcagcgt gcggggacag cccgggcacg
1261 gggaaggtgg cacgggatcg ctttcctctg aacgcttctc gctgctcttt gagcctgcag
1321 acacctgggg ggatacgggg aaaaggcctc caaggcctac tagtattatg cccagtacat
1381 gaccttatgg gactttccta cttggcagta catctacgta ttagtcatcg ctattaccat
1441 ggtgatgcgg ttttggcagt acatcaatgg gcgtggatag cggtttgact cacggggatt
1501 tccaagtctc caccccattg acgtcaatgg gagtttgttt tggcaccaaa atcaacggga
1561 ctttccaaaa tgtcgtaaca actccgcccc attgacgcaa atgggcggta ggcgtgtacg
1621 gtgggaggtc tatataagca gagctcgttt agtgaaccgt cagatcgcct ggagacgcca
1681 tccacgctgt tttgacctcc atagaagatt ctagagctag cgaattcgaa tttaaatcgg
1741 atccgcggcc gcaaggatct gcgatcgctc cggtgcccgt cagtgggcag agcgcacatc
1801 gcccacagtc cccgagaagt tggggggagg ggtcggcaat tgaacgggtg cctagagaag
1861 gtggcgcggg gtaaactggg aaagtgatgt cgtgtactgg ctccgccttt ttcccgaggg
1921 tgggggagaa ccgtatataa gtgcagtagt cgccgtgaac gttctttttc gcaacgggtt
1981 tgccgccaga acacagctga agcttcgagg ggctcgcatc tctccttcac gcgcccgccg
2041 ccctacctga ggccgccatc cacgccggtt gagtcgcgtt ctgccgcctc ccgcctgtgg
2101 tgcctcctga actgcgtccg ccgtctaggt aagtttaaag ctcaggtcga gaccgggcct
2161 ttgtccggcg ctcccttgga gcctacctag actcagccgg ctctccacgc tttgcctgac
2221 cctgcttgct caactctacg tctttgtttc gttttctgtt ctgcgccgtt acagatccaa
2281 gctgtgaccg gcgcctacgc tagacgccac catggagagc gacgagagcg gcctgcccgc
2341 catggagatc gagtgccgca tcaccggcac cctgaacggc gtggagttcg agctggtggg
2401 cggcggagag ggcaccccca agcagggccg catgaccaac aagatgaaga gcaccaaagg
2461 cgccctgacc ttcagcccct acctgctgag ccacgtgatg ggctacggct tctaccactt
2521 cggcacctac cccagcggct acgagaaccc cttcctgcac gccatcaaca acggcggcta
2581 caccaacacc cgcatcgaga agtacgagga cggcggcgtg ctgcacgtga gcttcagcta
2641 ccgctacgag gccggccgcg tgatcggcga cttcaaggtg gtgggcaccg gcttccccga
2701 ggacagcgtg atcttcaccg acaagatcat ccgcagcaac gccaccgtgg agcacctgca
2761 ccccatgggc gataacgtgc tggtgggcag cttcgcccgc accttcagcc tgcgcgacgg
2821 cggctactac agcttcgtgg tggacagcca catgcacttc aagagcgcca tccaccccag
2881 catcctgcag aacgggggcc ccatgttcgc cttccgccgc gtggaggagc tgcacagcaa
2941 caccgagctg ggcatcgtgg agtaccagca cgccttcaag acccccatcg ccttcgccag
3001 atcccgcgct cagtcgtcca attctgccgt ggacggcacc gccggacccg gctccaccgg
3061 atctcgcgag ggcagaggaa gtcttctaac atgcggtgac gtggaggaga atcccggccc
3121 tatgaccgag tacaagccca cggtgcgcct cgccacccgc gacgacgtcc ccagggccgt
3181 acgcaccctc gccgccgcgt tcgccgacta ccccgccacg cgccacaccg tcgatccgga
3241 ccgccacatc gagcgggtca ccgagctgca agaactcttc ctcacgcgcg tcgggctcga
3301 catcggcaag gtgtgggtcg cggacgacgg cgccgcggtg gcggtctgga ccacgccgga
3361 gagcgtcgaa gcgggggcgg tgttcgccga gatcggcccg cgcatggccg agttgagcgg
3421 ttcccggctg gccgcgcagc aacagatgga aggcctcctg gcgccgcacc ggcccaagga
3481 gcccgcgtgg ttcctggcca ccgtcggcgt ctcgcccgac caccagggca agggtctggg
3541 cagcgccgtc gtgctccccg gagtggaggc ggccgagcgc gccggggtgc ccgccttcct
3601 ggagacctcc gcgccccgca acctcccctt ctacgagcgg ctcggcttca ccgtcaccgc
3661 cgacgtcgag gtgcccgaag gaccgcgcac ctggtgcatg acccgcaagc ccggtgcctg
3721 aaatcaacct ctggattaca aaatttgtga aagattgact ggtattctta actatgttgc
3781 tccttttacg ctatgtggat acgctgcttt aatgcctttg tatcagttaa cttgtttatt
3841 gcagcttata atggttacaa ataaagcaat agcatcacaa atttcacaaa taaagcattt
3901 ttttcactgc attctagttg tggtttgtcc aaactcatca atgtatctta tcatgtctgg
3961 aattgactca aatgatgtca attagtctat cagaagctat ctggtctccc ttccggggga
4021 caagacatcc ctgtttaata tttaaacagc agtgttccca aactgggttc ttatatccct
4081 tgctctggtc aaccaggttg cagggtttcc tgtcctcaca ggaacgaagt ccctaaagaa
4141 acagtggcag ccaggtttag ccccggaatt gactggattc cttttttagg gcccattggt
4201 atggcttttt ccccgtatcc ccccaggtgt ctgcaggctc aaagagcagc gagaagcgtt
4261 cagaggaaag cgatcccgtg ccaccttccc cgtgcccggg ctgtccccgc acgctgccgg
4321 ctcggggatg cggggggagc gccggaccgg agcggagccc cgggcggctc gctgctgccc
4381 cctagcgggg gagggacgta attacatccc tgggggcttt gggggggggc tgtccctgat
4441 atctataaca agaaaatata tatataataa gttatcacgt aagtagaaca tgaaataaca
4501 atataattat cgtatgagtt aaatcttaaa agtcacgtaa aagataatca tgcgtcattt
4561 tgactcacgc ggtcgttata gttcaaaatc agtgacactt accgcattga caagcacgcc
4621 tcacgggagc tccaagcggc gactgagatg tcctaaatgc acagcgacgg attcgcgcta
4681 tttagaaaga gagagcaata tttcaagaat gcatgcgtca attttacgca gactatcttt
4741 ctagggttaa tctagctgca tcaggatcat atcgtcgggt cttttttccg gctcagtcat
4801 cgcccaagct ggcgctatct gggcatcggg gaggaagaag cccgtgcctt ttcccgcgag
4861 gttgaagcgg catggaaaga gtttgccgag gatgactgct gctgcattga cgttgagcga
4921 aaacgcacgt ttaccatgat gattcgggaa ggtgtggcca tgcacgcctt taacggtgaa
4981 ctgttcgttc aggccacctg ggataccagt tcgtcgcggc ttttccggac acagttccgg
5041 atggtcagcc cgaagcgcat cagcaacccg aacaataccg gcgacagccg gaactgccgt
5101 gccggtgtgc agattaatga cagcggtgcg gcgctgggat attacgtcag cgaggacggg
5161 tatcctggct ggatgccgca gaaatggaca tggatacccc gtgagttacc cggcgggcgc
5221 gcttggcgta atcatggtca tagctgtttc ctgtgtgaaa ttgttatccg ctcacaattc
5281 cacacaacat acgagccgga agcataaagt gtaaagcctg gggtgcctaa tgagtgagct
5341 aactcacatt aattgcgttg cgctcactgc ccgctttcca gtcgggaaac ctgtcgtgcc
5401 agctgcatta atgaatcggc caacgcgcgg ggagaggcgg tttgcgtatt gggcgctctt
5461 ccgcttcctc gctcactgac tcgctgcgct cggtcgttcg gctgcggcga gcggtatcag
5521 ctcactcaaa ggcggtaata cggttatcca cagaatcagg ggataacgca ggaaagaaca
5581 tgtgagcaaa aggccagcaa aaggccagga accgtaaaaa ggccgcgttg ctggcgtttt
5641 tccataggct ccgcccccct gacgagcatc acaaaaatcg acgctcaagt cagaggtggc
5701 gaaacccgac aggactataa agataccagg cgtttccccc tggaagctcc ctcgtgcgct
5761 ctcctgttcc gaccctgccg cttaccggat acctgtccgc ctttctccct tcgggaagcg
5821 tggcgctttc tcatagctca cgctgtaggt atctcagttc ggtgtaggtc gttcgctcca
5881 agctgggctg tgtgcacgaa ccccccgttc agcccgaccg ctgcgcctta tccggtaact
5941 atcgtcttga gtccaacccg gtaagacacg acttatcgcc actggcagca gccactggta
6001 acaggattag cagagcgagg tatgtaggcg gtgctacaga gttcttgaag tggtggccta
6061 actacggcta cactagaagg acagtatttg gtatctgcgc tctgctgaag ccagttacct
6121 tcggaaaaag agttggtagc tcttgatccg gcaaacaaac caccgctggt agcggtggtt
6181 tttttgtttg caagcagcag attacgcgca gaaaaaaagg atctcaagaa gatcctttga
6241 tcttttctac ggggtctgac gctcagtgga acgaaaactc acgttaaggg attttggtca
6301 tgagattatc aaaaaggatc ttcacctaga tccttttaaa ttaaaaatga agttttaaat
6361 caatctaaag tatatatgag taaacttggt ctgacagtta ccaatgctta atcagtgagg
6421 cacctatctc agcgatctgt ctatttcgtt catccatagt tgcctgactc cccgtcgtgt
6481 agataactac gatacgggag ggcttaccat ctggccccag tgctgcaatg ataccgcgag
6541 acccacgctc accggctcca gatttatcag caataaacca gccagccgga agggccgagc
6601 gcagaagtgg tcctgcaact ttatccgcct ccatccagtc tattaattgt tgccgggaag
6661 ctagagtaag tagttcgcca gttaatagtt tgcgcaacgt tgttgccatt gctacaggca
6721 tcgtggtgtc acgctcgtcg tttggtatgg cttcattcag ctccggttcc caacgatcaa
6781 ggcgagttac atgatccccc atgttgtgca aaaaagcggt tagctccttc ggtcctccga
6841 tcgttgtcag aagtaagttg gccgcagtgt tatcactcat ggttatggca gcactgcata
6901 attctcttac tgtcatgcca tccgtaagat gcttttctgt gactggtgag tactcaacca
6961 agtcattctg agaatagtgt atgcggcgac cgagttgctc ttgcccggcg tcaatacggg
7021 ataataccgc gccacatagc agaactttaa aagtgctcat cattggaaaa cgttcttcgg
7081 ggcgaaaact ctcaaggatc ttaccgctgt tgagatccag ttcgatgtaa cccactcgtg
7141 cacccaactg atcttcagca tcttttactt tcaccagcgt ttctgggtga gcaaaaacag
7201 gaaggcaaaa tgccgcaaaa aagggaataa gggcgacacg gaaatgttga atactcat
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：PiggyBac Dual promoter (PB513B-1)哺乳转座质粒
别称: PB513B-1;pB-CMV-MCS-ef1α-greenpuro
| 动子: | CMV |
|---|---|
| 复制子: | pUC |
| 终止子: | SV40 poly(A) signal |
| 质粒分类: | 哺乳系列质粒；哺乳编辑质粒；哺乳转座质粒 |
| 质粒大小: | 7258bp |
| 原核抗性: | Amp |
| 筛选标记: | Puro |
| 克隆菌株: | Stbl3 |
| 培养条件: | 37度 |
| 表达宿主: | 293T等哺乳细胞 |
| 培养条件: | 37℃，5%CO2 |
| 5'测序引物: | CMV-F（CGCAAATGGGCGGTAGGCGTG） |
| 3'测序引物: | Sv40-polyA-R（GAAATTTGTGATGCTATTGC） |
质粒属性
| 载体宿主： | 哺乳细胞 |
|---|---|
| 载体用途： | 蛋白表达,转座 |
| 基因种属： | 空载体 |
| 基因类型： | ORF |
| 原核抗性： | Amp |
| 真核抗性： | Puro |
| 荧光蛋白： | 绿色 |
质粒简介
PiggyBac Dual promoter (PB513B-1)是用于哺乳细胞转座实验的质粒，位于CMV启动子下游的多克隆位点（MCS），使目的基因或microRNA更方便克隆。下游的EF-1α core promoter启动GFP的表达。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported File 7258 bp ds-DNA circular SYN 24-5-2015
KEYWORDS PiggyBac Dual promoter(PB513B-1)
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 7258)
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported 2015-5-24 from MiaoLingPlasmid
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..7258
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
promoter complement(1..105)
/gene="bla"
/note="AmpR promoter"
rep_origin complement(131..586)
/direction=LEFT
/note="f1 ori"
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
primer_bind 728..744
/note="M13 fwd"
/note="common sequencing primer, one of multiple similar
variants"
promoter 1442..1645
/note="CMV promoter"
/note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early
promoter"
CDS 3068..3121
/codon_start=1
/product="2A peptide from?Thosea asigna virus capsid
protein"
/note="T2A"
/note="Eukaryotic ribosomes fail to insert a peptide bond
between the Gly and Pro residues, yielding separate
polypeptides."
/protein_id="
"
/translation="EGRGSLLTCGDVEENPGP"
CDS 3122..3721
/codon_start=1
/gene="pac from Streptomyces alboniger"
/product="puromycin N-acetyltransferase"
/note="PuroR"
/note="confers resistance to puromycin"
/translation="MTEYKPTVRLATRDDVPRAVRTLAAAFADYPATRHTVDPDRHIER
VTELQELFLTRVGLDIGKVWVADDGAAVAVWTTPESVEAGAVFAEIGPRMAELSGSRLA
AQQQMEGLLAPHRPKEPAWFLATVGVSPDHQGKGLGSAVVLPGVEAAERAGVPAFLETS
APRNLPFYERLGFTVTADVEVPEGPRTWCMTRKPGA"
polyA_signal 3829..3950
/note="SV40 poly(A) signal"
/note="SV40 polyadenylation signal"
primer_bind complement(5237..5253)
/note="M13 rev"
/note="common sequencing primer, one of multiple similar
variants"
protein_bind 5261..5277
/bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
/note="lac operator"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
promoter complement(5285..5315)
/note="lac promoter"
/note="promoter for the E. coli lac operon"
protein_bind 5330..5351
/bound_moiety="E. coli catabolite activator protein"
/note="CAP binding site"
/note="CAP binding activates transcription in the presence
of cAMP."
rep_origin complement(5639..6227)
/direction=LEFT
/note="ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(6398..7258)
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/note="AmpR"
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
ORIGIN
1 actcttcctt tttcaatatt attgaagcat ttatcagggt tattgtctca tgagcggata
61 catatttgaa tgtatttaga aaaataaaca aataggggtt ccgcgcacat ttccccgaaa
121 agtgccacct aaattgtaag cgttaatatt ttgttaaaat tcgcgttaaa tttttgttaa
181 atcagctcat tttttaacca ataggccgaa atcggcaaaa tcccttataa atcaaaagaa
241 tagaccgaga tagggttgag tgttgttcca gtttggaaca agagtccact attaaagaac
301 gtggactcca acgtcaaagg gcgaaaaacc gtctatcagg gcgatggccc actacgtgaa
361 ccatcaccct aatcaagttt tttggggtcg aggtgccgta aagcactaaa tcggaaccct
421 aaagggagcc cccgatttag agcttgacgg ggaaagccgg cgaacgtggc gagaaaggaa
481 gggaagaaag cgaaaggagc gggcgctagg gcgctggcaa gtgtagcggt cacgctgcgc
541 gtaaccacca cacccgccgc gcttaatgcg ccgctacagg gcgcgtccca ttcgccattc
601 aggctgcgca actgttggga agggcgatcg gtgcgggcct cttcgctatt acgccagctg
661 gcgaaagggg gatgtgctgc aaggcgatta agttgggtaa cgccagggtt ttcccagtca
721 cgacgttgta aaacgacggc cagtgagcgc gcctcgttca ttcacgtttt tgaacccgtg
781 gaggacgggc agactcgcgg tgcaaatgtg ttttacagcg tgatggagca gatgaagatg
841 ctcgacacgc tgcagaacac gcagctagat taaccctaga aagataatca tattgtgacg
901 tacgttaaag ataatcatgc gtaaaattga cgcatgtgtt ttatcggtct gtatatcgag
961 gtttatttat taatttgaat agatattaag ttttattata tttacactta catactaata
1021 ataaattcaa caaacaattt atttatgttt atttatttat taaaaaaaaa caaaaactca
1081 aaatttcttc tataaagtaa caaaactttt atgagggaca gccccccccc aaagccccca
1141 gggatgtaat tacgtccctc ccccgctagg gggcagcagc gagccgcccg gggctccgct
1201 ccggtccggc gctccccccg catccccgag ccggcagcgt gcggggacag cccgggcacg
1261 gggaaggtgg cacgggatcg ctttcctctg aacgcttctc gctgctcttt gagcctgcag
1321 acacctgggg ggatacgggg aaaaggcctc caaggcctac tagtattatg cccagtacat
1381 gaccttatgg gactttccta cttggcagta catctacgta ttagtcatcg ctattaccat
1441 ggtgatgcgg ttttggcagt acatcaatgg gcgtggatag cggtttgact cacggggatt
1501 tccaagtctc caccccattg acgtcaatgg gagtttgttt tggcaccaaa atcaacggga
1561 ctttccaaaa tgtcgtaaca actccgcccc attgacgcaa atgggcggta ggcgtgtacg
1621 gtgggaggtc tatataagca gagctcgttt agtgaaccgt cagatcgcct ggagacgcca
1681 tccacgctgt tttgacctcc atagaagatt ctagagctag cgaattcgaa tttaaatcgg
1741 atccgcggcc gcaaggatct gcgatcgctc cggtgcccgt cagtgggcag agcgcacatc
1801 gcccacagtc cccgagaagt tggggggagg ggtcggcaat tgaacgggtg cctagagaag
1861 gtggcgcggg gtaaactggg aaagtgatgt cgtgtactgg ctccgccttt ttcccgaggg
1921 tgggggagaa ccgtatataa gtgcagtagt cgccgtgaac gttctttttc gcaacgggtt
1981 tgccgccaga acacagctga agcttcgagg ggctcgcatc tctccttcac gcgcccgccg
2041 ccctacctga ggccgccatc cacgccggtt gagtcgcgtt ctgccgcctc ccgcctgtgg
2101 tgcctcctga actgcgtccg ccgtctaggt aagtttaaag ctcaggtcga gaccgggcct
2161 ttgtccggcg ctcccttgga gcctacctag actcagccgg ctctccacgc tttgcctgac
2221 cctgcttgct caactctacg tctttgtttc gttttctgtt ctgcgccgtt acagatccaa
2281 gctgtgaccg gcgcctacgc tagacgccac catggagagc gacgagagcg gcctgcccgc
2341 catggagatc gagtgccgca tcaccggcac cctgaacggc gtggagttcg agctggtggg
2401 cggcggagag ggcaccccca agcagggccg catgaccaac aagatgaaga gcaccaaagg
2461 cgccctgacc ttcagcccct acctgctgag ccacgtgatg ggctacggct tctaccactt
2521 cggcacctac cccagcggct acgagaaccc cttcctgcac gccatcaaca acggcggcta
2581 caccaacacc cgcatcgaga agtacgagga cggcggcgtg ctgcacgtga gcttcagcta
2641 ccgctacgag gccggccgcg tgatcggcga cttcaaggtg gtgggcaccg gcttccccga
2701 ggacagcgtg atcttcaccg acaagatcat ccgcagcaac gccaccgtgg agcacctgca
2761 ccccatgggc gataacgtgc tggtgggcag cttcgcccgc accttcagcc tgcgcgacgg
2821 cggctactac agcttcgtgg tggacagcca catgcacttc aagagcgcca tccaccccag
2881 catcctgcag aacgggggcc ccatgttcgc cttccgccgc gtggaggagc tgcacagcaa
2941 caccgagctg ggcatcgtgg agtaccagca cgccttcaag acccccatcg ccttcgccag
3001 atcccgcgct cagtcgtcca attctgccgt ggacggcacc gccggacccg gctccaccgg
3061 atctcgcgag ggcagaggaa gtcttctaac atgcggtgac gtggaggaga atcccggccc
3121 tatgaccgag tacaagccca cggtgcgcct cgccacccgc gacgacgtcc ccagggccgt
3181 acgcaccctc gccgccgcgt tcgccgacta ccccgccacg cgccacaccg tcgatccgga
3241 ccgccacatc gagcgggtca ccgagctgca agaactcttc ctcacgcgcg tcgggctcga
3301 catcggcaag gtgtgggtcg cggacgacgg cgccgcggtg gcggtctgga ccacgccgga
3361 gagcgtcgaa gcgggggcgg tgttcgccga gatcggcccg cgcatggccg agttgagcgg
3421 ttcccggctg gccgcgcagc aacagatgga aggcctcctg gcgccgcacc ggcccaagga
3481 gcccgcgtgg ttcctggcca ccgtcggcgt ctcgcccgac caccagggca agggtctggg
3541 cagcgccgtc gtgctccccg gagtggaggc ggccgagcgc gccggggtgc ccgccttcct
3601 ggagacctcc gcgccccgca acctcccctt ctacgagcgg ctcggcttca ccgtcaccgc
3661 cgacgtcgag gtgcccgaag gaccgcgcac ctggtgcatg acccgcaagc ccggtgcctg
3721 aaatcaacct ctggattaca aaatttgtga aagattgact ggtattctta actatgttgc
3781 tccttttacg ctatgtggat acgctgcttt aatgcctttg tatcagttaa cttgtttatt
3841 gcagcttata atggttacaa ataaagcaat agcatcacaa atttcacaaa taaagcattt
3901 ttttcactgc attctagttg tggtttgtcc aaactcatca atgtatctta tcatgtctgg
3961 aattgactca aatgatgtca attagtctat cagaagctat ctggtctccc ttccggggga
4021 caagacatcc ctgtttaata tttaaacagc agtgttccca aactgggttc ttatatccct
4081 tgctctggtc aaccaggttg cagggtttcc tgtcctcaca ggaacgaagt ccctaaagaa
4141 acagtggcag ccaggtttag ccccggaatt gactggattc cttttttagg gcccattggt
4201 atggcttttt ccccgtatcc ccccaggtgt ctgcaggctc aaagagcagc gagaagcgtt
4261 cagaggaaag cgatcccgtg ccaccttccc cgtgcccggg ctgtccccgc acgctgccgg
4321 ctcggggatg cggggggagc gccggaccgg agcggagccc cgggcggctc gctgctgccc
4381 cctagcgggg gagggacgta attacatccc tgggggcttt gggggggggc tgtccctgat
4441 atctataaca agaaaatata tatataataa gttatcacgt aagtagaaca tgaaataaca
4501 atataattat cgtatgagtt aaatcttaaa agtcacgtaa aagataatca tgcgtcattt
4561 tgactcacgc ggtcgttata gttcaaaatc agtgacactt accgcattga caagcacgcc
4621 tcacgggagc tccaagcggc gactgagatg tcctaaatgc acagcgacgg attcgcgcta
4681 tttagaaaga gagagcaata tttcaagaat gcatgcgtca attttacgca gactatcttt
4741 ctagggttaa tctagctgca tcaggatcat atcgtcgggt cttttttccg gctcagtcat
4801 cgcccaagct ggcgctatct gggcatcggg gaggaagaag cccgtgcctt ttcccgcgag
4861 gttgaagcgg catggaaaga gtttgccgag gatgactgct gctgcattga cgttgagcga
4921 aaacgcacgt ttaccatgat gattcgggaa ggtgtggcca tgcacgcctt taacggtgaa
4981 ctgttcgttc aggccacctg ggataccagt tcgtcgcggc ttttccggac acagttccgg
5041 atggtcagcc cgaagcgcat cagcaacccg aacaataccg gcgacagccg gaactgccgt
5101 gccggtgtgc agattaatga cagcggtgcg gcgctgggat attacgtcag cgaggacggg
5161 tatcctggct ggatgccgca gaaatggaca tggatacccc gtgagttacc cggcgggcgc
5221 gcttggcgta atcatggtca tagctgtttc ctgtgtgaaa ttgttatccg ctcacaattc
5281 cacacaacat acgagccgga agcataaagt gtaaagcctg gggtgcctaa tgagtgagct
5341 aactcacatt aattgcgttg cgctcactgc ccgctttcca gtcgggaaac ctgtcgtgcc
5401 agctgcatta atgaatcggc caacgcgcgg ggagaggcgg tttgcgtatt gggcgctctt
5461 ccgcttcctc gctcactgac tcgctgcgct cggtcgttcg gctgcggcga gcggtatcag
5521 ctcactcaaa ggcggtaata cggttatcca cagaatcagg ggataacgca ggaaagaaca
5581 tgtgagcaaa aggccagcaa aaggccagga accgtaaaaa ggccgcgttg ctggcgtttt
5641 tccataggct ccgcccccct gacgagcatc acaaaaatcg acgctcaagt cagaggtggc
5701 gaaacccgac aggactataa agataccagg cgtttccccc tggaagctcc ctcgtgcgct
5761 ctcctgttcc gaccctgccg cttaccggat acctgtccgc ctttctccct tcgggaagcg
5821 tggcgctttc tcatagctca cgctgtaggt atctcagttc ggtgtaggtc gttcgctcca
5881 agctgggctg tgtgcacgaa ccccccgttc agcccgaccg ctgcgcctta tccggtaact
5941 atcgtcttga gtccaacccg gtaagacacg acttatcgcc actggcagca gccactggta
6001 acaggattag cagagcgagg tatgtaggcg gtgctacaga gttcttgaag tggtggccta
6061 actacggcta cactagaagg acagtatttg gtatctgcgc tctgctgaag ccagttacct
6121 tcggaaaaag agttggtagc tcttgatccg gcaaacaaac caccgctggt agcggtggtt
6181 tttttgtttg caagcagcag attacgcgca gaaaaaaagg atctcaagaa gatcctttga
6241 tcttttctac ggggtctgac gctcagtgga acgaaaactc acgttaaggg attttggtca
6301 tgagattatc aaaaaggatc ttcacctaga tccttttaaa ttaaaaatga agttttaaat
6361 caatctaaag tatatatgag taaacttggt ctgacagtta ccaatgctta atcagtgagg
6421 cacctatctc agcgatctgt ctatttcgtt catccatagt tgcctgactc cccgtcgtgt
6481 agataactac gatacgggag ggcttaccat ctggccccag tgctgcaatg ataccgcgag
6541 acccacgctc accggctcca gatttatcag caataaacca gccagccgga agggccgagc
6601 gcagaagtgg tcctgcaact ttatccgcct ccatccagtc tattaattgt tgccgggaag
6661 ctagagtaag tagttcgcca gttaatagtt tgcgcaacgt tgttgccatt gctacaggca
6721 tcgtggtgtc acgctcgtcg tttggtatgg cttcattcag ctccggttcc caacgatcaa
6781 ggcgagttac atgatccccc atgttgtgca aaaaagcggt tagctccttc ggtcctccga
6841 tcgttgtcag aagtaagttg gccgcagtgt tatcactcat ggttatggca gcactgcata
6901 attctcttac tgtcatgcca tccgtaagat gcttttctgt gactggtgag tactcaacca
6961 agtcattctg agaatagtgt atgcggcgac cgagttgctc ttgcccggcg tcaatacggg
7021 ataataccgc gccacatagc agaactttaa aagtgctcat cattggaaaa cgttcttcgg
7081 ggcgaaaact ctcaaggatc ttaccgctgt tgagatccag ttcgatgtaa cccactcgtg
7141 cacccaactg atcttcagca tcttttactt tcaccagcgt ttctgggtga gcaaaaacag
7201 gaaggcaaaa tgccgcaaaa aagggaataa gggcgacacg gaaatgttga atactcat
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质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P4691/pCMV-SPORT6-PLEKHA5人源基因质粒 |
| P4692/pCMV-SPORT6-NCOA4人源基因质粒 |
| P4693/pCMV-SPORT6-PUF60人源基因质粒 |
| P4694/pCMV-SPORT6-PQLC2人源基因质粒 |
| P4695/pCMV-SPORT6-QARS人源基因质粒 |
| P4696/pCMV-SPORT6-BRIX1人源基因质粒 |
| P4697/pCMV-SPORT6-MTHFD2人源基因质粒 |
| P4698/pCMV-SPORT6-DELE1人源基因质粒 |
| P4699/pCMV-SPORT6-YBX1人源基因质粒 |
| P4700/pCMV-SPORT6-DNASE1L1人源基因质粒 |
| P4701/pCMV-SPORT6-DDX11人源基因质粒 |
| P4702/pCMV-SPORT6-OTULIN人源基因质粒 |
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文献和实验相关实验
pGLS23 d (A, B) HIS5 CmR ADH1 promoter expresses cI followed
基因组计划通过测序发现哺乳动物大约有3万个基因，那么，这些基因又产生怎样的功能？解读这本包括生老病死等无数奥秘的“天书”的“神奇工具”被中国科研人员发现。 复旦大学科研人员将一种源于飞蛾的PB（PiggyBac）转座因子用于小鼠和人类细胞的基因功能研究，在世界上首次创立了一个高效实用的哺乳动物转座因子系统，为大规模研究哺乳动物基因功能提供了新方法。该成果由国际顶级生命科学杂志《细胞》（CELL）作为封面文章发表，第一作者丁昇是复旦大学三年级研究生。相关技术已申请国际专利。这个源于飞蛾的PB转座
by Hemocytometry Counting (Sambrook and Russell 2006a ), Amplification of cDNA Generated by Reverse Transcription of mRNA (Sambrook and Russell 2006b ), Southern Blotting: Capillary Transfer of DNA to Membranes (Sambrook and Russell 2006c ), Southern
PiggyBac Dual promoter (PB513B-1)哺乳转座质粒
￥100 - 1000
