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- Xybio
- 上海
- P0207
- 2025年07月15日
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- 详细信息
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- 技术资料
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-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
pG5Luc
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pG5Luc哺乳双杂交质粒
别称: pG5Luc
质粒属性
质粒简介
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 4955 bp ds-DNA circular SYN 06-SEP-2016
DEFINITION synthetic circular DNA
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS Untitled
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 4955)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported Tuesday, September 6, 2016 from SnapGene Viewer 3.1.4
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..4955
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
CDS 225..1877
/codon_start=1
/gene="luc+"
/product="firefly luciferase"
/note="luciferase"
/note="enhanced luc+ version of the luciferase gene"
/translation="MEDAKNIKKGPAPFYPLEDGTAGEQLHKAMKRYALVPGTIAFTDA
HIEVDITYAEYFEMSVRLAEAMKRYGLNTNHRIVVCSENSLQFFMPVLGALFIGVAVAP
ANDIYNERELLNSMGISQPTVVFVSKKGLQKILNVQKKLPIIQKIIIMDSKTDYQGFQS
MYTFVTSHLPPGFNEYDFVPESFDRDKTIALIMNSSGSTGLPKGVALPHRTACVRFSHA
RDPIFGNQIIPDTAILSVVPFHHGFGMFTTLGYLICGFRVVLMYRFEEELFLRSLQDYK
IQSALLVPTLFSFFAKSTLIDKYDLSNLHEIASGGAPLSKEVGEAVAKRFHLPGIRQGY
GLTETTSAILITPEGDDKPGAVGKVVPFFEAKVVDLDTGKTLGVNQRGELCVRGPMIMS
GYVNNPEATNALIDKDGWLHSGDIAYWDEDEHFFIVDRLKSLIKYKGYQVAPAELESIL
LQHPNIFDAGVAGLPDDDAGELPAAVVVLEHGKTMTEKEIVDYVASQVTTAKKLRGGVV
FVDEVPKGLTGKLDARKIREILIKAKKGGKIAV"
polyA_signal 1918..2039
/note="SV40 poly(A) signal"
/note="SV40 polyadenylation signal"
rep_origin complement(2458..3046)
/direction=LEFT
/note="ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(3217..4077)
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/note="AmpR"
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
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PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
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LIKHW"
promoter complement(4078..4182)
/gene="bla"
/note="AmpR promoter"
rep_origin 4209..4664
/direction=RIGHT
/note="f1 ori"
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
polyA_signal 4795..4843
/note="synthetic polyadenylation signal"
misc_feature 4857..4948
/note="pause site"
/note="RNA polymerase II transcriptional pause signal from
the human alpha-2 globin gene"
ORIGIN
1 ggtaccgagt ttctagacgg agtactgtcc tccgagcgga gtactgtcct ccgactcgag
61 cggagtactg tcctccgatc ggagtactgt cctccgcgaa ttccggagta ctgtcctccg
121 aagacgctag cggggggcta taaaaggggg tgggggcgtt cgtcctcact ctagatctgc
181 gatctaagta agcttggcat tccggtactg ttggtaaagc caccatggaa gacgccaaaa
241 acataaagaa aggcccggcg ccattctatc cgctggaaga tggaaccgct ggagagcaac
301 tgcataaggc tatgaagaga tacgccctgg ttcctggaac aattgctttt acagatgcac
361 atatcgaggt ggacatcact tacgctgagt acttcgaaat gtccgttcgg ttggcagaag
421 ctatgaaacg atatgggctg aatacaaatc acagaatcgt cgtatgcagt gaaaactctc
481 ttcaattctt tatgccggtg ttgggcgcgt tatttatcgg agttgcagtt gcgcccgcga
541 acgacattta taatgaacgt gaattgctca acagtatggg catttcgcag cctaccgtgg
601 tgttcgtttc caaaaagggg ttgcaaaaaa ttttgaacgt gcaaaaaaag ctcccaatca
661 tccaaaaaat tattatcatg gattctaaaa cggattacca gggatttcag tcgatgtaca
721 cgttcgtcac atctcatcta cctcccggtt ttaatgaata cgattttgtg ccagagtcct
781 tcgataggga caagacaatt gcactgatca tgaactcctc tggatctact ggtctgccta
841 aaggtgtcgc tctgcctcat agaactgcct gcgtgagatt ctcgcatgcc agagatccta
901 tttttggcaa tcaaatcatt ccggatactg cgattttaag tgttgttcca ttccatcacg
961 gttttggaat gtttactaca ctcggatatt tgatatgtgg atttcgagtc gtcttaatgt
1021 atagatttga agaagagctg tttctgagga gccttcagga ttacaagatt caaagtgcgc
1081 tgctggtgcc aaccctattc tccttcttcg ccaaaagcac tctgattgac aaatacgatt
1141 tatctaattt acacgaaatt gcttctggtg gcgctcccct ctctaaggaa gtcggggaag
1201 cggttgccaa gaggttccat ctgccaggta tcaggcaagg atatgggctc actgagacta
1261 catcagctat tctgattaca cccgaggggg atgataaacc gggcgcggtc ggtaaagttg
1321 ttccattttt tgaagcgaag gttgtggatc tggataccgg gaaaacgctg ggcgttaatc
1381 aaagaggcga actgtgtgtg agaggtccta tgattatgtc cggttatgta aacaatccgg
1441 aagcgaccaa cgccttgatt gacaaggatg gatggctaca ttctggagac atagcttact
1501 gggacgaaga cgaacacttc ttcatcgttg accgcctgaa gtctctgatt aagtacaaag
1561 gctatcaggt ggctcccgct gaattggaat ccatcttgct ccaacacccc aacatcttcg
1621 acgcaggtgt cgcaggtctt cccgacgatg acgccggtga acttcccgcc gccgttgttg
1681 ttttggagca cggaaagacg atgacggaaa aagagatcgt ggattacgtc gccagtcaag
1741 taacaaccgc gaaaaagttg cgcggaggag ttgtgtttgt ggacgaagta ccgaaaggtc
1801 ttaccggaaa actcgacgca agaaaaatca gagagatcct cataaaggcc aagaagggcg
1861 gaaagatcgc cgtgtaattc tagagtcggg gcggccggcc gcttcgagca gacatgataa
1921 gatacattga tgagtttgga caaaccacaa ctagaatgca gtgaaaaaaa tgctttattt
1981 gtgaaatttg tgatgctatt gctttatttg taaccattat aagctgcaat aaacaagtta
2041 acaacaacaa ttgcattcat tttatgtttc aggttcaggg ggaggtgtgg gaggtttttt
2101 aaagcaagta aaacctctac aaatgtggta aaatcgataa ggatccgtcg accgatgccc
2161 ttgagagcct tcaacccagt cagctccttc cggtgggcgc ggggcatgac tatcgtcgcc
2221 gcacttatga ctgtcttctt tatcatgcaa ctcgtaggac aggtgccggc agcgctcttc
2281 cgcttcctcg ctcactgact cgctgcgctc ggtcgttcgg ctgcggcgag cggtatcagc
2341 tcactcaaag gcggtaatac ggttatccac agaatcaggg gataacgcag gaaagaacat
2401 gtgagcaaaa ggccagcaaa aggccaggaa ccgtaaaaag gccgcgttgc tggcgttttt
2461 ccataggctc cgcccccctg acgagcatca caaaaatcga cgctcaagtc agaggtggcg
2521 aaacccgaca ggactataaa gataccaggc gtttccccct ggaagctccc tcgtgcgctc
2581 tcctgttccg accctgccgc ttaccggata cctgtccgcc tttctccctt cgggaagcgt
2641 ggcgctttct caatgctcac gctgtaggta tctcagttcg gtgtaggtcg ttcgctccaa
2701 gctgggctgt gtgcacgaac cccccgttca gcccgaccgc tgcgccttat ccggtaacta
2761 tcgtcttgag tccaacccgg taagacacga cttatcgcca ctggcagcag ccactggtaa
2821 caggattagc agagcgaggt atgtaggcgg tgctacagag ttcttgaagt ggtggcctaa
2881 ctacggctac actagaagga cagtatttgg tatctgcgct ctgctgaagc cagttacctt
2941 cggaaaaaga gttggtagct cttgatccgg caaacaaacc accgctggta gcggtggttt
3001 ttttgtttgc aagcagcaga ttacgcgcag aaaaaaagga tctcaagaag atcctttgat
3061 cttttctacg gggtctgacg ctcagtggaa cgaaaactca cgttaaggga ttttggtcat
3121 gagattatca aaaaggatct tcacctagat ccttttaaat taaaaatgaa gttttaaatc
3181 aatctaaagt atatatgagt aaacttggtc tgacagttac caatgcttaa tcagtgaggc
3241 acctatctca gcgatctgtc tatttcgttc atccatagtt gcctgactcc ccgtcgtgta
3301 gataactacg atacgggagg gcttaccatc tggccccagt gctgcaatga taccgcgaga
3361 cccacgctca ccggctccag atttatcagc aataaaccag ccagccggaa gggccgagcg
3421 cagaagtggt cctgcaactt tatccgcctc catccagtct attaattgtt gccgggaagc
3481 tagagtaagt agttcgccag ttaatagttt gcgcaacgtt gttgccattg ctacaggcat
3541 cgtggtgtca cgctcgtcgt ttggtatggc ttcattcagc tccggttccc aacgatcaag
3601 gcgagttaca tgatccccca tgttgtgcaa aaaagcggtt agctccttcg gtcctccgat
3661 cgttgtcaga agtaagttgg ccgcagtgtt atcactcatg gttatggcag cactgcataa
3721 ttctcttact gtcatgccat ccgtaagatg cttttctgtg actggtgagt actcaaccaa
3781 gtcattctga gaatagtgta tgcggcgacc gagttgctct tgcccggcgt caatacggga
3841 taataccgcg ccacatagca gaactttaaa agtgctcatc attggaaaac gttcttcggg
3901 gcgaaaactc tcaaggatct taccgctgtt gagatccagt tcgatgtaac ccactcgtgc
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4321 tctcgccacg ttcgccggct ttccccgtca agctctaaat cgggggctcc ctttagggtt
4381 ccgatttagt gctttacggc acctcgaccc caaaaaactt gattagggtg atggttcacg
4441 tagtgggcca tcgccctgat agacggtttt tcgccctttg acgttggagt ccacgttctt
4501 taatagtgga ctcttgttcc aaactggaac aacactcaac cctatctcgg tctattcttt
4561 tgatttataa gggattttgc cgatttcggc ctattggtta aaaaatgagc tgatttaaca
4621 aaaatttaac gcgaatttta acaaaatatt aacgtttaca atttcccatt cgccattcag
4681 gctgcgcaac tgttgggaag ggcgatcggt gcgggcctct tcgctattac gccagcccaa
4741 gctaccatga taagtaagta atattaaggt acgggaggta cttggagcgg ccgcaataaa
4801 atatctttat tttcattaca tctgtgtgtt ggttttttgt gtgaatcgat agtactaaca
4861 tacgctctcc atcaaaacaa aacgaaacaa aacaaactag caaaataggc tgtccccagt
4921 gcaagtgcag gtgccagaac atttctctat cgata
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pG5Luc哺乳双杂交质粒
别称: pG5Luc
| 复制子: | pUC |
|---|---|
| 终止子: | SV40 poly(A) signal |
| 质粒分类: | 哺乳细胞，哺乳细胞双杂交载体 |
| 质粒大小: | 4955bp |
| 原核抗性: | Amp |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
| 表达宿主: | 哺乳细胞 |
| 诱导方式: | 无须诱导，瞬时表达 |
| 5'测序引物: | Sv40-polyA-R：GAAATTTGTGATGCTATTGC |
| 3'测序引物: | 根据序列设计引物 |
质粒属性
| 载体宿主： | 哺乳细胞 |
|---|---|
| 载体用途： | 杂交 |
| 基因种属： | |
| 基因类型： | |
| 原核抗性： | Amp |
| 真核抗性： | |
| 荧光蛋白： |
质粒简介
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 4955 bp ds-DNA circular SYN 06-SEP-2016
DEFINITION synthetic circular DNA
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS Untitled
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 4955)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported Tuesday, September 6, 2016 from SnapGene Viewer 3.1.4
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..4955
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
CDS 225..1877
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/gene="luc+"
/product="firefly luciferase"
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GYVNNPEATNALIDKDGWLHSGDIAYWDEDEHFFIVDRLKSLIKYKGYQVAPAELESIL
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replication"
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related antibiotics"
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LIKHW"
promoter complement(4078..4182)
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/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
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/note="synthetic polyadenylation signal"
misc_feature 4857..4948
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the human alpha-2 globin gene"
ORIGIN
1 ggtaccgagt ttctagacgg agtactgtcc tccgagcgga gtactgtcct ccgactcgag
61 cggagtactg tcctccgatc ggagtactgt cctccgcgaa ttccggagta ctgtcctccg
121 aagacgctag cggggggcta taaaaggggg tgggggcgtt cgtcctcact ctagatctgc
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1561 gctatcaggt ggctcccgct gaattggaat ccatcttgct ccaacacccc aacatcttcg
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1741 taacaaccgc gaaaaagttg cgcggaggag ttgtgtttgt ggacgaagta ccgaaaggtc
1801 ttaccggaaa actcgacgca agaaaaatca gagagatcct cataaaggcc aagaagggcg
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1921 gatacattga tgagtttgga caaaccacaa ctagaatgca gtgaaaaaaa tgctttattt
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2041 acaacaacaa ttgcattcat tttatgtttc aggttcaggg ggaggtgtgg gaggtttttt
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2521 aaacccgaca ggactataaa gataccaggc gtttccccct ggaagctccc tcgtgcgctc
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3421 cagaagtggt cctgcaactt tatccgcctc catccagtct attaattgtt gccgggaagc
3481 tagagtaagt agttcgccag ttaatagttt gcgcaacgtt gttgccattg ctacaggcat
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质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P4382/pGEM-UCP1人源基因质粒 |
| P4562/pGEM-LRP5（2同义突变2点突变）人源基因质粒 |
| P3272/pUC19-CCR5人源基因质粒 |
| P3273/pMD18-SNAI2人源基因质粒 |
| P4563/pMD18-TGFBR2人源基因质粒 |
| P3055/pHaMDRwt人源基因质粒 |
| P0527/pUC18-hCD40LG人源基因质粒 |
| P0528/SCN7A人源基因质粒 |
| P0597/pUC57-IGF1(145-354)人源基因质粒 |
| P0598/GSK3B人源基因质粒 |
| P0604/TRAF6-S12F人源基因质粒 |
| P0606/Smad3人源基因质粒 |
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文献和实验相关实验
啦！ 呵呵，以前看到过有人把NOTCH1的intracellular domain连上GAL4-VP16，然后共转UAS-Reporter。相当于一个直接结合的报告基因系统。UAS-Reporter可以改造pG5Luc载体。 NLS序列在pACT的vp16AD或者pGADT7的gal4AD的上游处，都是SV40NLS，说明书上就有。 呵呵，我不知道常用载体里有没有不带NLS的GAL4序列。GAL4-UAS系统思路及经典文献可以参考93年development
2）。 图2 使用BLOCK-iT™ Complete Dicer RNAi Kit得到＞80％的靶定基因阻断 经Dicer酶切的，来源于β-半乳糖苷酶或者荧光素酶的dsRNA产生siRNA（d-siRNA）库，用来确定d-siRNA特异阻断基因活性的效果。GripTite™ 293 MSR 细胞共转染pcDNA™1.2/V5-GW/lacZ阳性对照质粒和pcDNA™5/FRT/luc，分别独自表达β-gal或者荧光素酶报告子，或者50ng luc 或者lacZ d-siRNA。对于每一种报告子
更易实施，有报道将双杂交筛出的基因片段插入一个带有抗原决定簇标记的质粒载体，该载体可在哺乳动物细胞中高水平表达被抗原决定簇所标记的蛋白质。用BD-X质粒和带有AD-Y插入的抗原决定簇质粒载体共转染哺乳动物细胞，即可直接进行免疫共沉淀检测。应用这一方法已证实了Bcl-XL和Bad/Bax之间的相互作用。7、哺乳动物细胞双杂交系统也发展起来。它是利用体内重建转录因子的原理，在基因水平上分析蛋白质-蛋白质相互作用，已成为酵母双杂交系统的辅助手段。该系统与酵母双杂交系统的区别在于报告基因与融合基因位于不同
pG5Luc哺乳双杂交质粒
￥100 - 1000
