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- Xybio
- 上海
- P2237
- 2025年07月11日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
pEBFP-3×NLS
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
名称：pEBFP-3×NLS细胞核定位质粒
别称: pEBFP-3×NLS
| 启动子: | CMV |
|---|---|
| 复制子: | pUC |
| 原核抗性: | Kan |
| 筛选标记: | G418 |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
质粒属性
| 载体宿主： | 哺乳细胞 |
|---|---|
| 载体用途： | 亚细胞定位 |
| 基因种属： | |
| 基因类型： | ORF |
| 原核抗性： | Kan |
| 真核抗性： | Neo/G418 |
| 荧光蛋白： | 蓝色 |
质粒简介
pEBFP-3×NLS质粒由上海烜雅生物科技有限公司提供
质粒图谱
质粒序列：详询
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P3027/pENTR223-C20orf96（2同义突变）人源基因质粒 |
| P3030/pENTR223-NFATC1（2同义突变）人源基因质粒 |
| P3031/pENTR223-SYT3-C245A（3同义突变）人源基因质粒 |
| P3032/pENTR223-NCOA4人源基因质粒 |
| P3033/pENTR223-PRC1（1同义突变）人源基因质粒 |
| P3034/pENTR223-AOAH（1同义突变）人源基因质粒 |
| P3035/pENTR223-SCG2人源基因质粒 |
| P3036/pENTR223-PLAT（1点突变）人源基因质粒 |
| P3037/pENTR223-ETFDH-C92T人源基因质粒 |
| P3038/pENTR223-ALDH1B1人源基因质粒 |
| P3039/pENTR223-ZZZ3-G15人源基因质粒 |
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文献和实验研究应用｜使用 NanoBiT 技术进行的蛋白质相互作用细胞内定位成像
NanoBiT 的细胞内定位成像 为进行细胞溶质和核酸表达，我们将两种载体对转染到 HeLa 细胞中。第一对为非靶向 FKBP-SmBiT 控制载体和 FRB-LgBiT 控制载体。第二对为细胞核靶向 NLS-FKBP-SmBiT 控制载体和 FRB-LgBiT 控制载体（图 2）。已知 FKBP 和 FRB 会在西罗莫司治疗下结合。 图 2. FKBP/FRB NanoBiT 和 NLS-FKBP/RRB NanoBiT 的细胞内定位 然后使用 IXplore Live
tianjiaoya 我想构建一个真核表达质粒，用这个真核表达质粒来表达绿色荧光蛋白，但是我想让绿色荧光蛋白的表达受酵母菌GLA4转录因子的调控，也就是说有GLA4存在，这个质粒就表达绿色荧光蛋白，没有GLA4存在，就不表达绿色荧光蛋白。当然需要对真核表达质粒上的启动子做相应的调整，但是我现在的问题是，转录因子GLA4能不能对质粒上有相应调控元件的表达盒，进行调控？据说GLA4上有核定位元件，要是将这个核定位序列删除，可行吗？据说核内有很多的辅助因子，参与了蛋白
【求助】请教大家一个关于报告基因质粒瞬时转染与报告基因表达的问题，问题比较长，谢谢
少数。 质粒确实不会整合到基因组上，但是它表达出来的蛋白（也就是你的转录因子）是可以转运到核内的（只要你的蛋白含有入核序列NLS）就可用结合到调控序列并启动荧光素酶表达。 其实所有的转录因子不都是这样子的吗？它们在细胞质中形成成熟的蛋白之后才转到细胞核内行使起功能。所以说他们的原理是类似的。 蛋白和基因是有所区别的~~~ lsdcfhyj 我还是没有明白，可能是我的问题没问清楚，我的报告基因质粒上含有转录因子对应的调控
