pTE-10M0X其它基因质粒

基本信息
名称：pTE-10M0X其它基因质粒
别称: Plasmid#20318
启动子：Pimyc
复制子: pUC
质粒分类:  基因文库质粒;其它基因质粒;其它种源质粒
质粒大小：6103bp
原核抗性: Hyg
筛选标记：G418
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
备注:  低拷贝质粒

质粒属性
载体宿主：哺乳细胞
载体用途：蛋白表达
基因种属：人
基因类型：ORF
原核抗性：Hyg
真核抗性：
荧光蛋白：

质粒简介
   pTE-10M0X质粒提供Pimyc-tetR#10基因。

质粒图谱


质粒序列
LOCUS       Exported                6103 bp ds-DNA     circular SYN 15-AUG-2017
DEFINITION  synthetic circular DNA
KEYWORDS    pTE-10M0X.dna
SOURCE      synthetic DNA construct
  ORGANISM  synthetic DNA construct
REFERENCE   1  (bases 1 to 6103)
  TITLE     Direct Submission
  JOURNAL   Exported Aug 15, 2017 from MiaoLingPlasmid
            http://www.miaolingbio.com
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..6103
                     /organism="synthetic DNA construct"
                     /mol_type="other DNA"
     primer_bind     39..55
                     /label=KS primer
                     /note="common sequencing primer, one of multiple similar 
                     variants"
     terminator      1056..1083
                     /label=rrnB T2 terminator
                     /note="transcription terminator T2 from the E. coli rrnB 
                     gene"
     rep_origin      complement(1344..1932)
                     /direction=LEFT
                     /label=ori
                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 
                     replication"
ORIGIN
        1 aacgttctcg gctcgatgat ccccggcggg ccccccctcg aggtcgacgg tatcgattta
       61 attaatatgc atcaattgat ttaaatacta gtgttaacta tttaattggg gaccctagag
      121 gtcccctttt ttattttaaa aattttttcn aaggggacct ctagggtccc cagctggcta
      181 gcgagtcatg aggtnaccat ggtcattagg agccgctctc gcacttcagc tgcttctcca
      241 agccgcagat gatcagctcc aggccgaaca agaaggccgg ctcggcgccc tggtggtcga
      301 acagctcgat ggcctggcgc agcaacggcg gcatgctgtc ggtggtcggg gtctcgcgct
      361 cctccttggc gacctggtgc tcctggtcct ccaacacgca gcccagggtg aagtggccca
      421 cggccgacag ggcgtacaac gcgttctcca gcgagaagcc ctgctggcac aggaaggcca
      481 actggttctc cagggtctcg tactgcttct cggtcggccg ggtgcccagg tgcaccttgg
      541 cgccgtcgcg gtggctcagc aaggcgcagc ggaagctctt ggcgttgttg cgcaggaagt
      601 cctgccagct ctcgccctcc agcgggcaga agtgggtgtg gtggcggtcc aacatctcga
      661 tggccagggc gtcgagcagg gcccgcttgt tcttgacgtg ccagtacagg gtcggctgct
      721 cgacgcccag cttctgggcc agcttgcggg tggtcaggcc ctcgatgccg acctcgttca
      781 gcagctccag ggcggagttg atgaccttgg acttgtccag gcgggacatt gcgaagtgat
      841 tcctcctgat ggtaccggat ccgtggcagg agggtcgcct gcgtcggcaa ctcgcccagg
      901 ctacacgaga gccctcgact gcgaaaatgc cgaccaggca ccaccgcact ccaggcttaa
      961 cccggtgcga cgatccaata ttacgagatc tgatatcctc gaggcatgcc acgtgcctgc
     1021 aggtttaaac gcggccgcaa acagtattaa acgcaaaaag gccatccgtc aggatggcct
     1081 tctgcttagc taatcaacta gttctagctg cattaatgaa tcggccaacg cgcggggaga
     1141 ggcggtttgc gtattgggcg ctcttccgct tcctcgctca ctgactcgct gcgctcggtc
     1201 gttcggctgc ggcgagcggt atcagctcac tcaaaggcgg taatacggtt atccacagaa
     1261 tcaggggata acgcaggaaa gaacatgtga gcaaaaggcc agcaaaaggc caggaaccgt
     1321 aaaaaggccg cgttgctggc gtttttccat aggctccgcc cccctgacga gcatcacaaa
     1381 aatcgacgct caagtcagag gtggcgaaac ccgacaggac tataaagata ccaggcgttt
     1441 ccccctggaa gctccctcgt gcgctctcct gttccgaccc tgccgcttac cggatacctg
     1501 tccgcctttc tcccttcggg aagcgtggcg ctttctcata gctcacgctg taggtatctc
     1561 agttcggtgt aggtcgttcg ctccaagctg ggctgtgtgc acgaaccccc cgttcagccc
     1621 gaccgctgcg ccttatccgg taactatcgt cttgagtcca acccggtaag acacgactta
     1681 tcgccactgg cagcagccac tggtaacagg attagcagag cgaggtatgt aggcggtgct
     1741 acagagttct tgaagtggtg gcctaactac ggctacacta gaaggacagt atttggtatc
     1801 tgcgctctgc tgaagccagt taccttcgga aaaagagttg gtagctcttg atccggcaaa
     1861 caaaccaccg ctggtagcgg tggttttttt gtttgcaagc agcagattac gcgcagaaaa
     1921 aaaggatctc aagaagatcc tttgatcttt tctacggggt ctgacgctca gtggaacgaa
     1981 aactcacgtt aagggatttt ggtcatgaga ttatcaaaaa ggatcttcac ctagatcctt
     2041 ttaaattaaa aatgaagttt taaatcaatc taaagtatat atgagtaaac ttggtctgac
     2101 agttaccaat gcttaatcag tgaggcacct atctcagcga tctgtctatt tcgttcatcc
     2161 atagttgcct gactccccgg acgtggccga ccagcccgtc atcgtcaacg cctgaccgcg
     2221 gtgcggacag gccgtgtcgc gaccggccgt gcggaattaa gccggcccgt accctgtgaa
     2281 tagaggtccg ctgtgacaca agaatccctg ttacttctcg accgtattga ttcggatgat
     2341 tcctacgcga gcctgcggaa cgaccaggaa ttctgggagc cgctggcccg ccgagccctg
     2401 gaggagctcg ggctgccggt gccgccggtg ctgcgggtgc ccggcgagag caccaacccc
     2461 gtactggtcg gcgagcccga cccggtgatc aagctgttcg gcgagcactg gtgcggtccg
     2521 gagagcctcg cgtcggagtc ggaggcgtac gcggtcctgg cggacgcccc ggtgccggtg
     2581 ccccgcctcc tcggccgcgg cgagctgcgg cccggcaccg gagcctggcc gtggccctac
     2641 ctggtgatga gccggatgac cggcaccacc tggcggtccg cgatggacgg cacgaccgac
     2701 cggaacgcgc tgctcgccct ggcccgcgaa ctcggccggg tgctcggccg gctgcacagg
     2761 gtgccgctga ccgggaacac cgtgctcacc ccccattccg aggtcttccc ggaactgctg
     2821 cgggaacgcc gcgcggcgac cgtcgaggac caccgcgggt ggggctacct ctcgccccgg
     2881 ctgctggacc gcctggagga ctggctgccg gacgtggaca cgctgctggc cggccgcgaa
     2941 ccccggttcg tccacggcga cctgcacggg accaacatct tcgtggacct ggccgcgacc
     3001 gaggtcaccg ggatcgtcga cttcaccgac gtctatgcgg gagactcccg ctacagcctg
     3061 gtgcaactgc atctcaacgc cttccggggc gaccgcgaga tcctggccgc gctgctcgac
     3121 ggggcgcagt ggaagcggac cgaggacttc gcccgcgaac tgctcgcctt caccttcctg
     3181 cacgacttcg aggtgttcga ggagaccccg ctggatctct ccggcttcac cgatccggag
     3241 gaactggcgc agttcctctg ggggccgccg gacaccgccc ccggcgcctg acgccccggg
     3301 ccgcccggcg ccgcccccgg cccccggcgg ccggccgccc ggagccccgc ccgcgctcgg
     3361 gagccccggg cccgcgccga agcccgctgc tgcgagcccg gagcgggccg gccgacggcg
     3421 gtgcgggccc ggcggcggac gctcagcagc ggcgggcgtg aaaggccctg gcatcctcga
     3481 tcatctcctc cagggtggtc ggccgagctt ccatcccagc tcggcaagga tcaacgagga
     3541 cagtcgcacg acgaagttct tctggatcgc gcccgtgctg gaagcactca acctcgaagc
     3601 gtgtggttgc ggagccatct agcaaccaca cgaaacatgc gcaacgaacc gcgcaacgaa
     3661 caacgcctag aactggccct agatgagctg actcgtatcg ttggtaaacc tagtttgacc
     3721 agcatgtttt aactacgttc ggtgagctgt caacggggcc tgtaacggca caacgaaccg
     3781 tgcaacgaga gtggccacgg atgccaccac aggcactaca acggagttcg ccacgtacat
     3841 caccacaacc accgattctg gcggtgagct ccccgatatt cagcggaaat ggcttggtat
     3901 cgaccaagat tcgtagaacc ccgtctcgtc tggctggtat tcaaaacggg cgcaacgaaa
     3961 cacgcaacga gacaggcatg gcccaaacca gaaaactagc gtctaccagg acttttacct
     4021 gtccgacccg ttgcaacgga accccccacg gaacccccgc gacacccgct ccccaattgc
     4081 gttagaacag cggtggattg tcggcttcgt tgtgggcctt ttgagccgct tcctgttctg
     4141 ccgcacgctc tttcctcgcc cgatagccga gtcgcttaac ggtgtccaga tgcagcccga
     4201 aatgtttggc cgtttgcggc caagagtggc cctcgtcgtc gtgataggcg cggatgcgtt
     4261 cgcggcgtgc agcctgctcg gcgagccact cgctgcgttc ctgcgccacg agccggacga
     4321 cgtggcgttc ggatagtccg gtgattcgag cgccttcggc ggcggtcacg cgccgctttt
     4381 tgcggacagt cggctgccgg ttgtagccgt cgctgtagcc gtcgctgtag ccgtcgctca
     4441 tagcaatgcc tccatggctg acgcggactt tgcgcgccgc gcaactgtgc tcgccgccgt
     4501 gcgcgctgct gcgcccttcc gcgagatggc cgactggcgc gcactgagtg tggcctcgta
     4561 gaccacgatc ccgtccgccc aaatgcgcga cttggttgtg atccaacgcc aaatgctgtt
     4621 ggcgatggcg cggacctcgc tgtccggtag cggtccggga cacacgtcgt tgcacgggaa
     4681 ttcggcgttt cgcgcgtggc actcggcata gatcgcgcgg ccgagtccgt ccacgttccg
     4741 ggtcggcagg tagatccgca tgagggcggg acgataggcc cacaacctga cggaatcgaa
     4801 cagtgcgcaa ttccgcccta gcggcgtcgg agccgctttg tacgtggtct gctgacgcca
     4861 gcgcggcggt ggcatgttcg cgccgagctc ggcctcgatg tggctgagtg tgtagagatc
     4921 tgagtggagc cattccgttt cccaggcgat gtggccgggg tttttggtca tgaggcctga
     4981 gtaactgcgg tcgccgtcga cggcgcgccg aaggccttcg gcgcacgccg ccatgtatgc
     5041 gagcggctta cgccgcgcgt attcggtgcg tggaacaggg gcgttgagtg cccacactgc
     5101 gtgtgcgtgg ccgttggcgc gattgcccac gatcgcgttg ggcagcggat gggacccccg
     5161 ggcgctgagc gctcggagcg ctgcgtctgg atggtctacg tccacgacca gcaggtttgc
     5221 cagcgctgtt gggttcgcct cgatgtaccg gcggcctagg gccgacgcgc ggctttggcg
     5281 gtagatcccc tcgagcagat cgtcgcttgc cagcggccag tacggcagcc agagctgctc
     5341 aaattcgtcg gcgacgtggc tcacgcttgg tagtagacca cgattaatca ccggtgtatg
     5401 gtccgacacg agctccaagt cagatatttc gctgaggggc caccccacaa ctgcacactc
     5461 ccccgctctc ccgtcgagcc ctggtggtgg aacaccagcg acagccgagc acccccaacc
     5521 acctgtacca accaggagga acacatgcgt cgtttcgagg acgtttccgg gccgctgaga
     5581 gccgctgtgg cggccgtaca cgccgcctta gacccgttag accccctgcc gcctgaatgc
     5641 gcgggtacga gccacacagc gcccgaactt acggagctgg tgggctcacc tggctttatg
     5701 gcgtacgaat cggctgtgtg cgacctgttg ggcgaggtga ggtacgcgct actcacgctg
     5761 gcaagggcga cacagccgcc ccaccgagcc cgcacggccg cgcgcggtgt caacaaccgg
     5821 gtgagtcgtg cacaccagca ggtgttcgag gcttggctcg aagtgcagga catcgtggcg
     5881 aacgccgccc gatgagccgc gccttacgct ggctgccagc cgttcgcggg ctggttggtg
     5941 cagcgcgtcg agcggttaga ggccctgcgg tgttccacca ccgcaggcct cgcccttttt
     6001 aaggctgaat ttgcttgtct ccgaatccaa ctggcttgtc caagggtgta tctacgctta
     6061 atccaaagtt caaacgaggg gattacacat gaccaacttc gat
//

质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
         收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
         1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              ①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
              ②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
              ③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
              ④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
              ⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
              ⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
        2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
              四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
        3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
        4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              直接挑取单菌落至液体培养基中。
        5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
              单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
        6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。

二、转化图片

P4931/pOTB7-KBTBD6人源基因质粒

P4515/pOTB7-CXCL14人源基因质粒

P4823/pOTB7-TRIM14人源基因质粒

P4824/pOTB7-MCL1人源基因质粒

P4825/pOTB7-NDUFC2（1同义突变）人源基因质粒

P3733/pMD18-TBK1人源基因质粒

P4093/pMD18-STAT2人源基因质粒

P3210/pUC18-YWHAE人源基因质粒

P3734/pUC19-DDX58人源基因质粒

P4335/pUC19-FEN1人源基因质粒

P4094/pUC19-STAT1人源基因质粒