p2Luc哺乳报告质粒

基本信息
名称：p2Luc哺乳报告质粒
别称: NM_001308090.1;HD7;HD7A;HDAC7A

启动子:	SV40
复制子:	pUC
终止子:	SV40 poly(A) signal
原核抗性:	Amp
筛选标记:	荧光素酶Luc
克隆菌株:	DH5a
培养条件:	37度

质粒属性

载体宿主：	哺乳细胞
载体用途：	信号报告
基因种属：
基因类型：
原核抗性：	Amp
真核抗性：
荧光蛋白：	fLuc

质粒简介
  p2Luc是一个哺乳细胞双荧光素酶报告质粒。

质粒图谱


质粒序列
LOCUS       Exported                5397 bp ds-DNA     circular SYN 17-JAN-2018
DEFINITION  synthetic circular DNA
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..5397
                     /organism="synthetic DNA construct"
                     /mol_type="other DNA"
     promoter        66..423
                     /note="SV40 promoter"
                     /note="SV40 enhancer and early promoter"
     rep_origin      274..409
                     /note="SV40 ori"
                     /note="SV40 origin of replication"
     intron          493..625
                     /note="chimeric intron"
                     /note="chimera between introns from human beta-globin and 
                     immunoglobulin heavy chain genes"
     promoter        670..688
                     /note="T7 promoter"
                     /note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
     CDS             698..1630
                     /codon_start=1
                     /product="luciferase from the anthozoan coelenterate 
                     Renilla reniformis (sea pansy)"
                     /note="Rluc"
                     /translation="MTSKVYDPEQRKRMITGPQWWARCKQMNVLDSFINYYDSEKHAEN
                     AVIFLHGNAASSYLWRHVVPHIEPVARCIIPDLIGMGKSGKSGNGSYRLLDHYKYLTAW
                     FELLNLPKKIIFVGHDWGACLAFHYSYEHQDKIKAIVHAESVVDVIESWDEWPDIEEDI
                     ALIKSEEGEKMVLENNFFVETMLPSKIMRKLEPEEFAAYLEPFKEKGEVRRPTLSWPRE
                     IPLVKGGKPDVVQIVRNYNAYLRASDDLPKMFIESDPGFFSNAIVEGAKKFPNTEFVKV
                     KGLHFSQEDAPDEMGKYIKSFVERVLKNEQ"
     misc_feature    1633..1662
                     /note="MCS"
     CDS             1663..3312
                     /codon_start=1
                     /gene="luc"
                     /product="firefly luciferase"
                     /note="luciferase"
                     /translation="EDAKNIKKGPAPFYPLEDGTAGEQLHKAMKRYALVPGTIAFTDAH
                     IEVNITYAEYFEMSVRLAEAMKRYGLNTNHRIVVCSENSLQFFMPVLGALFIGVAVAPA
                     NDIYNERELLNSMNISQPTVVFVSKKGLQKILNVQKKLPIIQKIIIMDSKTDYQGFQSM
                     YTFVTSHLPPGFNEYDFVPESFDRDKTIALIMNSSGSTGLPKGVALPHRTACVRFSHAR
                     DPIFGNQIIPDTAILSVVPFHHGFGMFTTLGYLICGFRVVLMYRFEEELFLRSLQDYKI
                     QSALLVPTLFSFFAKSTLIDKYDLSNLHEIASGGAPLSKEVGEAVAKRFHLPGIRQGYG
                     LTETTSAILITPEGDDKPGAVGKVVPFFEAKVVDLDTGKTLGVNQRGELCVRGPMIMSG
                     YVNNPEATNALIDKDGWLHSGDIAYWDEDEHFFIVDRLKSLIKYKGYQVAPAELESILL
                     QHPNIFDAGVAGLPDDDAGELPAAVVVLEHGKTMTEKEIVDYVASQVTTAKKLRGGVVF
                     VDEVPKGLTGKLDARKIREILIKAKKGGKSKL"
     polyA_signal    3352..3473
                     /note="SV40 poly(A) signal"
                     /note="SV40 polyadenylation signal"
     promoter        3606..3710
                     /gene="bla"
                     /note="AmpR promoter"
     CDS             3711..4571
                     /codon_start=1
                     /gene="bla"
                     /product="beta-lactamase"
                     /note="AmpR"
                     /note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
                     related antibiotics"
                     /translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
                     ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
                     PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
                     EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
                     LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
                     LIKHW"
     rep_origin      4742..5330
                     /direction=RIGHT
                     /note="ori"
                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 
                     replication"
ORIGIN
        1 agatcgatct gcgcagcacc atggcctgaa ataacctctg aaagaggaac ttggttaggt
       61 accttctgag gcggaaagaa ccagctgtgg aatgtgtgtc agttagggtg tggaaagtcc
      121 ccaggctccc cagcaggcag aagtatgcaa agcatgcatc tcaattagtc agcaaccagg
      181 tgtggaaagt ccccaggctc cccagcaggc agaagtatgc aaagcatgca tctcaattag
      241 tcagcaacca tagtcccgcc cctaactccg cccatcccgc ccctaactcc gcccagttcc
      301 gcccattctc cgccccatgg ctgactaatt ttttttattt atgcagaggc cgaggccgcc
      361 tcggcctctg agctattcca gaagtagtga ggaggctttt ttggaggcct aggcttttgc
      421 aaaaagcttg attcttctga cacaacagtc tcgaacttaa gctgcagaag ttggtcgtga
      481 ggcactgggc aggtaagtat caaggttaca agacaggttt aaggagacca atagaaactg
      541 ggcttgtcga gacagagaag actcttgcgt ttctgatagg cacctattgg tcttactgac
      601 atccactttg cctttctctc cacaggtgtc cactcccagt tcaattacag ctcttaaggc
      661 tagagtactt aatacgactc actataggct agccaccatg acttcgaaag tttatgatcc
      721 agaacaaagg aaacggatga taactggtcc gcagtggtgg gccagatgta aacaaatgaa
      781 tgttcttgat tcatttatta attattatga ttcagaaaaa catgcagaaa atgctgttat
      841 ttttttacat ggtaacgcgg cctcttctta tttatggcga catgttgtgc cacatattga
      901 gccagtagcg cggtgtatta taccagacct tattggtatg ggcaaatcag gcaaatctgg
      961 taatggttct tataggttac ttgatcatta caaatatctt actgcatggt ttgaacttct
     1021 taatttacca aagaagatca tttttgtcgg ccatgattgg ggtgcttgtt tggcatttca
     1081 ttatagctat gagcatcaag ataagatcaa agcaatagtt cacgctgaaa gtgtagtaga
     1141 tgtgattgaa tcatgggatg aatggcctga tattgaagaa gatattgcgt tgatcaaatc
     1201 tgaagaagga gaaaaaatgg ttttggagaa taacttcttc gtggaaacca tgttgccatc
     1261 aaaaatcatg agaaagttag aaccagaaga atttgcagca tatcttgaac cattcaaaga
     1321 gaaaggtgaa gttcgtcgtc caacattatc atggcctcgt gaaatcccgt tagtaaaagg
     1381 tggtaaacct gacgttgtac aaattgttag gaattataat gcttatctac gtgcaagtga
     1441 tgatttacca aaaatgttta ttgaatcgga cccaggattc ttttccaatg ctattgttga
     1501 aggtgccaag aagtttccta atactgaatt tgtcaaagta aaaggtcttc atttttcgca
     1561 agaagatgca cctgatgaaa tgggaaaata tatcaaatcg ttcgttgagc gagttctcaa
     1621 aaatgaacaa atgtcgacgg atccttcaac ttccctgagc tcgaagacgc caaaaacata
     1681 aagaaaggcc cggcgccatt ctatcctcta gaggatggaa ccgctggaga gcaactgcat
     1741 aaggctatga agagatacgc cctggttcct ggaacaattg cttttacaga tgcacatatc
     1801 gaggtgaaca tcacgtacgc ggaatacttc gaaatgtccg ttcggttggc agaagctatg
     1861 aaacgatatg ggctgaatac aaatcacaga atcgtcgtat gcagtgaaaa ctctcttcaa
     1921 ttctttatgc cggtgttggg cgcgttattt atcggagttg cagttgcgcc cgcgaacgac
     1981 atttataatg aacgtgaatt gctcaacagt atgaacattt cgcagcctac cgtagtgttt
     2041 gtttccaaaa aggggttgca aaaaattttg aacgtgcaaa aaaaattacc aataatccag
     2101 aaaattatta tcatggattc taaaacggat taccagggat ttcagtcgat gtacacgttc
     2161 gtcacatctc atctacctcc cggttttaat gaatacgatt ttgtaccaga gtcctttgat
     2221 cgtgacaaaa caattgcact gataatgaat tcctctggat ctactgggtt acctaagggt
     2281 gtggcccttc cgcatagaac tgcctgcgtc agattctcgc atgccagaga tcctattttt
     2341 ggcaatcaaa tcattccgga tactgcgatt ttaagtgttg ttccattcca tcacggtttt
     2401 ggaatgttta ctacactcgg atatttgata tgtggatttc gagtcgtctt aatgtataga
     2461 tttgaagaag agctgttttt acgatccctt caggattaca aaattcaaag tgcgttgcta
     2521 gtaccaaccc tattttcatt cttcgccaaa agcactctga ttgacaaata cgatttatct
     2581 aatttacacg aaattgcttc tgggggcgca cctctttcga aagaagtcgg ggaagcggtt
     2641 gcaaaacgct tccatcttcc agggatacga caaggatatg ggctcactga gactacatca
     2701 gctattctga ttacacccga gggggatgat aaaccgggcg cggtcggtaa agttgttcca
     2761 ttttttgaag cgaaggttgt ggatctggat accgggaaaa cgctgggcgt taatcagaga
     2821 ggcgaattat gtgtcagagg acctatgatt atgtccggtt atgtaaacaa tccggaagcg
     2881 accaacgcct tgattgacaa ggatggatgg ctacattctg gagacatagc ttactgggac
     2941 gaagacgaac acttcttcat agttgaccgc ttgaagtctt taattaaata caaaggatat
     3001 caggtggccc ccgctgaatt ggaatcgata ttgttacaac accccaacat cttcgacgcg
     3061 ggcgtggcag gtcttcccga cgatgacgcc ggtgaacttc ccgccgccgt tgttgttttg
     3121 gagcacggaa agacgatgac ggaaaaagag atcgtggatt acgtcgccag tcaagtaaca
     3181 accgcgaaaa agttgcgcgg aggagttgtg tttgtggacg aagtaccgaa aggtcttacc
     3241 ggaaaactcg acgcaagaaa aatcagagag atcctcataa aggccaagaa gggcggaaag
     3301 tccaaattgt aacacgtgta attctagagc ggccgcttcg agcagacatg ataagataca
     3361 ttgatgagtt tggacaaacc acaactagaa tgcagtgaaa aaaatgcttt atttgtgaaa
     3421 tttgtgatgc tattgcttta tttgtaacca ttataagctg caataaacaa gttaacaaca
     3481 acaattgcat tcattttatg tttcaggttc agggggaggt gtgggaggtt ttttaaagca
     3541 agtaaaacct ctacaaatgt ggtaaaatcg ataaggatcc aggtggcact tttcggggaa
     3601 atgtgcgcgg aacccctatt tgtttatttt tctaaataca ttcaaatatg tatccgctca
     3661 tgagacaata accctgataa atgcttcaat aatattgaaa aaggaagagt atgagtattc
     3721 aacatttccg tgtcgccctt attccctttt ttgcggcatt ttgccttcct gtttttgctc
     3781 acccagaaac gctggtgaaa gtaaaagatg ctgaagatca gttgggtgca cgagtgggtt
     3841 acatcgaact ggatctcaac agcggtaaga tccttgagag ttttcgcccc gaagaacgtt
     3901 ttccaatgat gagcactttt aaagttctgc tatgtggcgc ggtattatcc cgtattgacg
     3961 ccgggcaaga gcaactcggt cgccgcatac actattctca gaatgacttg gttgagtact
     4021 caccagtcac agaaaagcat cttacggatg gcatgacagt aagagaatta tgcagtgctg
     4081 ccataaccat gagtgataac actgcggcca acttacttct gacaacgatc ggaggaccga
     4141 aggagctaac cgcttttttg cacaacatgg gggatcatgt aactcgcctt gatcgttggg
     4201 aaccggagct gaatgaagcc ataccaaacg acgagcgtga caccacgatg cctgtagcaa
     4261 tggcaacaac gttgcgcaaa ctattaactg gcgaactact tactctagct tcccggcaac
     4321 aattaataga ctggatggag gcggataaag ttgcaggacc acttctgcgc tcggcccttc
     4381 cggctggctg gtttattgct gataaatctg gagccggtga gcgtgggtct cgcggtatca
     4441 ttgcagcact ggggccagat ggtaagccct cccgtatcgt agttatctac acgacgggga
     4501 gtcaggcaac tatggatgaa cgaaatagac agatcgctga gataggtgcc tcactgatta
     4561 agcattggta actgtcagac caagtttact catatatact ttagattgat ttaaaacttc
     4621 atttttaatt taaaaggatc taggtgaaga tcctttttga taatctcatg accaaaatcc
     4681 cttaacgtga gttttcgttc cactgagcgt cagaccccgt agaaaagatc aaaggatctt
     4741 cttgagatcc tttttttctg cgcgtaatct gctgcttgca aacaaaaaaa ccaccgctac
     4801 cagcggtggt ttgtttgccg gatcaagagc taccaactct ttttccgaag gtaactggct
     4861 tcagcagagc gcagatacca aatactgtcc ttctagtgta gccgtagtta ggccaccact
     4921 tcaagaactc tgtagcaccg cctacatacc tcgctctgct aatcctgtta ccagtggctg
     4981 ctgccagtgg cgataagtcg tgtcttaccg ggttggactc aagacgatag ttaccggata
     5041 aggcgcagcg gtcgggctga acggggggtt cgtgcacaca gcccagcttg gagcgaacga
     5101 cctacaccga actgagatac ctacagcgtg agctatgaga aagcgccacg cttcccgaag
     5161 ggagaaaggc ggacaggtat ccggtaagcg gcagggtcgg aacaggagag cgcacgaggg
     5221 agcttccagg gggaaacgcc tggtatcttt atagtcctgt cgggtttcgc cacctctgac
     5281 ttgagcgtcg atttttgtga tgctcgtcag gggggcggag cctatggaaa aacgccagca
     5341 acgcggcctt tttacggttc ctggcctttt gctggccttt tgctcacatg gctcgac
//

质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
         收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
         1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              ①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
              ②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
              ③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
              ④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
              ⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
              ⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
        2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
              四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
        3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
        4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              直接挑取单菌落至液体培养基中。
        5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
              单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
        6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。

二、转化图片

P3988/pCMV-SPORT6-TBPL1人源基因质粒

P3989/pCMV-SPORT6-RPL3人源基因质粒

P3990/pCMV-SPORT6-UBE2Z（1同义突变）人源基因质粒

P3991/pCMV-SPORT6-KCNS3人源基因质粒

P3992/pCMV-SPORT6-MVK人源基因质粒

P3993/pCMV-SPORT6-NXF2（1同义突变）人源基因质粒

P3994/pCMV-SPORT6-BIRC2人源基因质粒

P3995/pCMV-SPORT6-RWDD4（1点突变）人源基因质粒

P3996/pCMV-SPORT6-ZNF707（1点突变1同义突变）人源基因质粒

P3997/pCMV-SPORT6-LUC7L2（1点突变）人源基因质粒

P3998/pCMV-SPORT6-EFCAB7人源基因质粒