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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
-20
- 保质期:
2年
- 英文名:
Plasmid#16539
- 库存:
100
- 供应商:
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格:
干粉/液体
名称:pBV-Luc哺乳报告质粒
别称: Plasmid#16539
| 复制子: | pUC |
|---|---|
| 原核抗性: | Amp |
| 筛选标记: | Luc |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
质粒属性
| 载体宿主: | 哺乳细胞 |
|---|---|
| 载体用途: | 启动子检测 |
| 基因种属: | 空载体 |
| 基因类型: | Promoter |
| 原核抗性: | Amp |
| 真核抗性: | |
| 荧光蛋白: | fLuc |
质粒简介
pBV-Luc哺乳报告质粒
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 4867 bp ds-DNA circular SYN 04-JUL-2018
DEFINITION synthetic circular DNA
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS pBV-Luc
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 4867)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..4867
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
regulatory 131..140
/regulatory_class="other"
/note="Kozak sequence"
/note="vertebrate consensus sequence for strong initiation
of translation (Kozak, 1987)"
CDS 137..1789
/codon_start=1
/gene="luc+"
/product="firefly luciferase"
/note="luciferase"
/note="enhanced luc+ version of the luciferase gene"
/translation="MEDAKNIKKGPAPFYPLEDGTAGEQLHKAMKRYALVPGTIAFTDA
HIEVDITYAEYFEMSVRLAEAMKRYGLNTNHRIVVCSENSLQFFMPVLGALFIGVAVAP
ANDIYNERELLNSMGISQPTVVFVSKKGLQKILNVQKKLPIIQKIIIMDSKTDYQGFQS
MYTFVTSHLPPGFNEYDFVPESFDRDKTIALIMNSSGSTGLPKGVALPHRTACVRFSHA
RDPIFGNQIIPDTAILSVVPFHHGFGMFTTLGYLICGFRVVLMYRFEEELFLRSLQDYK
IQSALLVPTLFSFFAKSTLIDKYDLSNLHEIASGGAPLSKEVGEAVAKRFHLPGIRQGY
GLTETTSAILITPEGDDKPGAVGKVVPFFEAKVVDLDTGKTLGVNQRGELCVRGPMIMS
GYVNNPEATNALIDKDGWLHSGDIAYWDEDEHFFIVDRLKSLIKYKGYQVAPAELESIL
LQHPNIFDAGVAGLPDDDAGELPAAVVVLEHGKTMTEKEIVDYVASQVTTAKKLRGGVV
FVDEVPKGLTGKLDARKIREILIKAKKGGKIAV"
polyA_signal 1830..1951
/note="SV40 poly(A) signal"
/note="SV40 polyadenylation signal"
rep_origin complement(2370..2958)
/direction=LEFT
/note="ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(3129..3989)
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/note="AmpR"
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
promoter complement(3990..4094)
/gene="bla"
/note="AmpR promoter"
rep_origin 4121..4576
/direction=RIGHT
/note="f1 ori"
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
polyA_signal 4707..4755
/note="synthetic polyadenylation signal"
misc_feature 4769..4860
/note="pause site"
/note="RNA polymerase II transcriptional pause signal from
the human alpha-2 globin gene"
ORIGIN
1 ggtaccgagc tcttacgcgt gctagcccgg gctcgacagc tggacgtcga tatcgaattc
61 gggtatataa tggatccggt atcgagatct gcgatctaag taagcttggc attccggtac
121 tgttggtaaa gccaccatgg aagacgccaa aaacataaag aaaggcccgg cgccattcta
181 tccgctggaa gatggaaccg ctggagagca actgcataag gctatgaaga gatacgccct
241 ggttcctgga acaattgctt ttacagatgc acatatcgag gtggacatca cttacgctga
301 gtacttcgaa atgtccgttc ggttggcaga agctatgaaa cgatatgggc tgaatacaaa
361 tcacagaatc gtcgtatgca gtgaaaactc tcttcaattc tttatgccgg tgttgggcgc
421 gttatttatc ggagttgcag ttgcgcccgc gaacgacatt tataatgaac gtgaattgct
481 caacagtatg ggcatttcgc agcctaccgt ggtgttcgtt tccaaaaagg ggttgcaaaa
541 aattttgaac gtgcaaaaaa agctcccaat catccaaaaa attattatca tggattctaa
601 aacggattac cagggatttc agtcgatgta cacgttcgtc acatctcatc tacctcccgg
661 ttttaatgaa tacgattttg tgccagagtc cttcgatagg gacaagacaa ttgcactgat
721 catgaactcc tctggatcta ctggtctgcc taaaggtgtc gctctgcctc atagaactgc
781 ctgcgtgaga ttctcgcatg ccagagatcc tatttttggc aatcaaatca ttccggatac
841 tgcgatttta agtgttgttc cattccatca cggttttgga atgtttacta cactcggata
901 tttgatatgt ggatttcgag tcgtcttaat gtatagattt gaagaagagc tgtttctgag
961 gagccttcag gattacaaga ttcaaagtgc gctgctggtg ccaaccctat tctccttctt
1021 cgccaaaagc actctgattg acaaatacga tttatctaat ttacacgaaa ttgcttctgg
1081 tggcgctccc ctctctaagg aagtcgggga agcggttgcc aagaggttcc atctgccagg
1141 tatcaggcaa ggatatgggc tcactgagac tacatcagct attctgatta cacccgaggg
1201 ggatgataaa ccgggcgcgg tcggtaaagt tgttccattt tttgaagcga aggttgtgga
1261 tctggatacc gggaaaacgc tgggcgttaa tcaaagaggc gaactgtgtg tgagaggtcc
1321 tatgattatg tccggttatg taaacaatcc ggaagcgacc aacgccttga ttgacaagga
1381 tggatggcta cattctggag acatagctta ctgggacgaa gacgaacact tcttcatcgt
1441 tgaccgcctg aagtctctga ttaagtacaa aggctatcag gtggctcccg ctgaattgga
1501 atccatcttg ctccaacacc ccaacatctt cgacgcaggt gtcgcaggtc ttcccgacga
1561 tgacgccggt gaacttcccg ccgccgttgt tgttttggag cacggaaaga cgatgacgga
1621 aaaagagatc gtggattacg tcgccagtca agtaacaacc gcgaaaaagt tgcgcggagg
1681 agttgtgttt gtggacgaag taccgaaagg tcttaccgga aaactcgacg caagaaaaat
1741 cagagagatc ctcataaagg ccaagaaggg cggaaagatc gccgtgtaat tctagagtcg
1801 gggcggccgg ccgcttcgag cagacatgat aagatacatt gatgagtttg gacaaaccac
1861 aactagaatg cagtgaaaaa aatgctttat ttgtgaaatt tgtgatgcta ttgctttatt
1921 tgtaaccatt ataagctgca ataaacaagt taacaacaac aattgcattc attttatgtt
1981 tcaggttcag ggggaggtgt gggaggtttt ttaaagcaag taaaacctct acaaatgtgg
2041 taaaatcgat aaggatccgt cgaccgatgc ccttgagagc cttcaaccca gtcagctcct
2101 tccggtgggc gcggggcatg actatcgtcg ccgcacttat gactgtcttc tttatcatgc
2161 aactcgtagg acaggtgccg gcagcgctct tccgcttcct cgctcactga ctcgctgcgc
2221 tcggtcgttc ggctgcggcg agcggtatca gctcactcaa aggcggtaat acggttatcc
2281 acagaatcag gggataacgc aggaaagaac atgtgagcaa aaggccagca aaaggccagg
2341 aaccgtaaaa aggccgcgtt gctggcgttt ttccataggc tccgcccccc tgacgagcat
2401 cacaaaaatc gacgctcaag tcagaggtgg cgaaacccga caggactata aagataccag
2461 gcgtttcccc ctggaagctc cctcgtgcgc tctcctgttc cgaccctgcc gcttaccgga
2521 tacctgtccg cctttctccc ttcgggaagc gtggcgcttt ctcaatgctc acgctgtagg
2581 tatctcagtt cggtgtaggt cgttcgctcc aagctgggct gtgtgcacga accccccgtt
2641 cagcccgacc gctgcgcctt atccggtaac tatcgtcttg agtccaaccc ggtaagacac
2701 gacttatcgc cactggcagc agccactggt aacaggatta gcagagcgag gtatgtaggc
2761 ggtgctacag agttcttgaa gtggtggcct aactacggct acactagaag gacagtattt
2821 ggtatctgcg ctctgctgaa gccagttacc ttcggaaaaa gagttggtag ctcttgatcc
2881 ggcaaacaaa ccaccgctgg tagcggtggt ttttttgttt gcaagcagca gattacgcgc
2941 agaaaaaaag gatctcaaga agatcctttg atcttttcta cggggtctga cgctcagtgg
3001 aacgaaaact cacgttaagg gattttggtc atgagattat caaaaaggat cttcacctag
3061 atccttttaa attaaaaatg aagttttaaa tcaatctaaa gtatatatga gtaaacttgg
3121 tctgacagtt accaatgctt aatcagtgag gcacctatct cagcgatctg tctatttcgt
3181 tcatccatag ttgcctgact ccccgtcgtg tagataacta cgatacggga gggcttacca
3241 tctggcccca gtgctgcaat gataccgcga gacccacgct caccggctcc agatttatca
3301 gcaataaacc agccagccgg aagggccgag cgcagaagtg gtcctgcaac tttatccgcc
3361 tccatccagt ctattaattg ttgccgggaa gctagagtaa gtagttcgcc agttaatagt
3421 ttgcgcaacg ttgttgccat tgctacaggc atcgtggtgt cacgctcgtc gtttggtatg
3481 gcttcattca gctccggttc ccaacgatca aggcgagtta catgatcccc catgttgtgc
3541 aaaaaagcgg ttagctcctt cggtcctccg atcgttgtca gaagtaagtt ggccgcagtg
3601 ttatcactca tggttatggc agcactgcat aattctctta ctgtcatgcc atccgtaaga
3661 tgcttttctg tgactggtga gtactcaacc aagtcattct gagaatagtg tatgcggcga
3721 ccgagttgct cttgcccggc gtcaatacgg gataataccg cgccacatag cagaacttta
3781 aaagtgctca tcattggaaa acgttcttcg gggcgaaaac tctcaaggat cttaccgctg
3841 ttgagatcca gttcgatgta acccactcgt gcacccaact gatcttcagc atcttttact
3901 ttcaccagcg tttctgggtg agcaaaaaca ggaaggcaaa atgccgcaaa aaagggaata
3961 agggcgacac ggaaatgttg aatactcata ctcttccttt ttcaatatta ttgaagcatt
4021 tatcagggtt attgtctcat gagcggatac atatttgaat gtatttagaa aaataaacaa
4081 ataggggttc cgcgcacatt tccccgaaaa gtgccacctg acgcgccctg tagcggcgca
4141 ttaagcgcgg cgggtgtggt ggttacgcgc agcgtgaccg ctacacttgc cagcgcccta
4201 gcgcccgctc ctttcgcttt cttcccttcc tttctcgcca cgttcgccgg ctttccccgt
4261 caagctctaa atcgggggct ccctttaggg ttccgattta gtgctttacg gcacctcgac
4321 cccaaaaaac ttgattaggg tgatggttca cgtagtgggc catcgccctg atagacggtt
4381 tttcgccctt tgacgttgga gtccacgttc tttaatagtg gactcttgtt ccaaactgga
4441 acaacactca accctatctc ggtctattct tttgatttat aagggatttt gccgatttcg
4501 gcctattggt taaaaaatga gctgatttaa caaaaattta acgcgaattt taacaaaata
4561 ttaacgttta caatttccca ttcgccattc aggctgcgca actgttggga agggcgatcg
4621 gtgcgggcct cttcgctatt acgccagccc aagctaccat gataagtaag taatattaag
4681 gtacgggagg tacttggagc ggccgcaata aaatatcttt attttcatta catctgtgtg
4741 ttggtttttt gtgtgaatcg atagtactaa catacgctct ccatcaaaac aaaacgaaac
4801 aaaacaaact agcaaaatag gctgtcccca gtgcaagtgc aggtgccaga acatttctct
4861 atcgata
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后,请先根据产品管壁标签来判断产品形式,并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉(常温运输,存于-20度,90天保质期,请务必转化挑单克隆培养,不要直接使用和测序)
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒;
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min,加入2μl质粒,再冰浴30min后,42℃热激60s,不要搅动,再冰浴2min;(从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作)
③加入900μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡37℃培养45min;
④6000rpm离心5min,仅留100μl上清液重悬细菌沉淀,并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;(可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布,可以比传统涂布方法获得更多转化子)
⑤将平板正向培养1h,再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h;
(菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态,要先转克隆感受态,重提质粒后再导入表达感受态)
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中,加入对应抗生素,220rpm震荡培养14h,根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种(冰袋运输,存于-80℃,保质期90天,请务必划线挑单克隆培养)
四区划线后挑单菌落培养,酵母菌需要先液体复苏再四区划线,再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种(冰袋运输,存于4℃,保质期7天)
穿刺接种,液体培养后四区划线,再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板(冰袋运输,存于4℃,保质期7天)
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒(冰袋运输,存于-20℃,保质期90天)
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒(常温运输,存于-20度,90天保质期,请务必转化挑单克隆培养,不要直接使用和测序)
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中,加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min,吸取5ul质粒转化,离心全涂。
二、转化图片
| P4889/pCMV-SPORT6-SLC26A6人源基因质粒 |
| P4890/pCMV-SPORT6-FKBP10人源基因质粒 |
| P4891/pCMV-SPORT6-NCAPG2人源基因质粒 |
| P3943/pCMV-SPORT6-MFAP2人源基因质粒 |
| P3944/pCMV-SPORT6-MLST8人源基因质粒 |
| P3945/pCMV-SPORT6-CCNK人源基因质粒 |
| P3946/pCMV-SPORT6-PEPD人源基因质粒 |
| P3947/pCMV-SPORT6-VIPAS39人源基因质粒 |
| P3948/pCMV-SPORT6-GALM人源基因质粒 |
| P3949/pCMV-SPORT6-CD73人源基因质粒 |
| P3950/pCMV-SPORT6-CASP7-T12G人源基因质粒 |
| P3951/pCMV-SPORT6-PDK3人源基因质粒 |
风险提示:丁香通仅作为第三方平台,为商家信息发布提供平台空间。用户咨询产品时请注意保护个人信息及财产安全,合理判断,谨慎选购商品,商家和用户对交易行为负责。对于医疗器械类产品,请先查证核实企业经营资质和医疗器械产品注册证情况。
文献和实验panzerking 我在设计实验 想用NF-kB-luc做报告基因 是不是一定要用β-galactosidase 报告质粒或者Renilla荧光素酶报告质粒作为内参? 我看了有些文献 好像有的用 有的一个都没用 是有这样的情况吗 或者是不是只要保证control组NF-kB-luc转染条件一样就可以做为可用的数据了? lwjssry 不可以,一定要用内参,需要校正对照和处理组细胞数目的差异
【求助】请教荧光素酶报告基因检测NF-KB转录活性需要哪些试剂?
阿兰梦 之前没有做过,只是根据文献的简单描述依葫芦画瓢,但是毕竟是好几千的试剂,生怕弄错了 临床医生一下子做科研,确实很多地方不懂,很艰难 目的是想用双荧光素酶报告基因的方法检测药物内皮细胞的NF-KB的转录活性影响,需要买pNF-kB-Luc 报告质粒,碧云天有;然后需要双荧光素酶报告基因检测系统,promega有;另外还需要一个内参,文献是β-半乳糖苷酶 问题是: 1、不知道买哪一个对: http://www
【求助】快急死了,再次求助关于wnt通路中TOPflash/FOPflash
to construct corresponding reporters in pBV-Luc: 5’-CTAGCATGTCTT TGTACTCGATGTCTTTGTACTCG-3’ and 5’-CTAGCGAGTACAAAGACATCGAG TACAAAGACATG-3’ for p4XTRE1-Luc; 5’-CTAGCATGTC TTTGGCCTCGATGT CTTTGGCCTCG-3’ and 5’-CTAGCGAGGCCAAAGACATCGAGGCCAAAGACA TG-3’ for p4XmTRE










