pGRE-luc哺乳报告质粒

基本信息
名称：pGRE-luc哺乳报告质粒
别称: pGRE-Luc

复制子:	pUC
原核抗性:	Amp
筛选标记:	荧光素酶Luc
克隆菌株:	DH5a
培养条件:	37度

质粒属性

载体宿主：	哺乳细胞
载体用途：	信号报告
基因种属：
基因类型：
原核抗性：	Amp
真核抗性：
荧光蛋白：	fLuc

质粒简介
  载体 pGRE-Luc 可以用来检测 GRE 信号通路活性。载体 pGRE-Luc 含有萤火虫来源的荧光 素酶基因。这个载体也包含多拷贝的 GRE 结合位点序列，并且该序列和一段 TATA-类似启 动子（PTAL）融合在一起，PTAL 源于单纯疱疹病毒胸苷激酶（HSV-TK）启动子。当内源性 的 GRE 蛋白结合到 GRE 增强元件时，转录起始，报告基因开始表达。 荧光素酶编码序列后有一段 SV40 多聚腺苷酸信号以确保在真核细胞中能正确有效的转录。 在 GRE 结合位点的上游有一段合成的转录抑制区（TB），该区域由多聚腺苷酸信号与转录 终止位点组成，以减少转录背景。该载体骨架也包含了一个 f1 复制起始区域以便进行单链 DNA 的复制，一个 pUC 复制起始位点以及一个氨苄抗性基因，便于进行培养筛选。
        载体 pGRE-Luc 用来检测转录因子 GRE 与 GRE 增强子的作用，提供了直接检测这条通路活 性的途径。该载体可以和一个目的基因的表达载体共转来观察，其是否影响这条通路的活性。 荧光素酶是一种高敏感性的酶原性报告蛋白，适用于任何一种标准的荧光素酶检测法，可以 用来定量表达水平。pGRE-Luc 载体可以用任何一种标准的方法转染至哺乳动物细胞。为了 筛选稳定克隆，转染的载体通常含有抗性筛选基因如：neomycin，hygromycin 或者 puromycin。
       合适的宿主系：DH5α 以及一些其他通用系。进行单链 DNA 的合成宿主菌需要包含一个 F’ episome，比如 JM109。 筛选标记：质粒为宿主 E.coli 提供了氨苄抗性（100ug/ml） E.coli 复制起始位点：pUC 拷贝数：~500 不相容质粒:pMB1/ColE1。
质粒图谱


质粒序列
ORIGIN
        1 gaattgttca ggaccagggc gtatctcttc atagccttat gcagttgctc tccagcggtt
       61 ccatcttcca gcggatagaa tggcgccggg cctttcttta tgtttttggc gtcttccatg
      121 gtggctttac caacagtacc ggaatgccaa gcttctgctt catccccgtg gcccgttgct
      181 cgcgtttgct ggcggtgtcc ccggaagaaa tatatttgca tgtctttagt tctatgatga
      241 cacaaacccc gcccagcgtc ttgtcattgg cgaattcgaa cacgcagatg cagtcggggc
      301 ggcagatcta gaacaaaatg taccggtaca ttttgttcta gaacaaaatg taccgctagc
      361 acgcgtaaga gctcggtacc tatcgataga gaaatgttct ggcacctgca cttgcactgg
      421 ggacagccta ttttgctagt ttgttttgtt tcgttttgtt ttgatggaga gcgtatgtta
      481 gtactatcga ttcacacaaa aaaccaacac acagatgtaa tgaaaataaa gatattttat
      541 tgcggccgct ccaagtacct cccgtacctt aatattactt acttatcatg gtagcttggg
      601 ctggcgtaat agcgaagagg cccgcaccga tcgcccttcc caacagttgc gcagcctgaa
      661 tggcgaatgg caaattgtaa gcgttaatat tttgttaaaa ttcgcgttaa atttttgtta
      721 aatcagctca ttttttaacc aataggccga aatcggcaaa atcccttata aatcaaaaga
      781 atagaccgag atagggttga gtgttgttcc agtttggaac aagagtccac tattaaagaa
      841 cgtggactcc aacgtcaaag ggcgaaaaac cgtctatcag ggcgatggcc cactacgtga
      901 accatcaccc taatcaagtt ttttggggtc gaggtgccgt aaagcactaa atc

质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
         收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
         1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              ①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
              ②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
              ③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
              ④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
              ⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
              ⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
        2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
              四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
        3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
        4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              直接挑取单菌落至液体培养基中。
        5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
              单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
        6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。

二、转化图片

P3564/pCMV-SPORT6-ETHE1人源基因质粒

P3565/pCMV-SPORT6-HEBP2人源基因质粒

P3566/pCMV-SPORT6-KCNIP3人源基因质粒

P3567/pCMV-SPORT6-PEA15人源基因质粒

P3568/pCMV-SPORT6-CCT4（867-1620）人源基因质粒

P3569/pCMV-SPORT6-PLGRKT人源基因质粒

P3570/pCMV-SPORT6-MED30人源基因质粒

P3571/pCMV-SPORT6-GCFC2-G181A人源基因质粒

P3572/pCMV-SPORT6-ZNF26（708-1542bp）人源基因质粒

P3573/pCMV-SPORT6-HBA1人源基因质粒

P3574/pCMV-SPORT6-ERGIC2人源基因质粒