pRL-TK-intronless哺乳报告质粒

基本信息
名称：pRL-TK-intronless哺乳报告质粒
别称：pRL-TK-intronless

原核抗性:	Amp
克隆菌株:	DH5a
培养条件:	37度

质粒属性

载体宿主：	哺乳细胞
载体用途：	信号报告
基因种属：
基因类型：
原核抗性：	Amp
真核抗性：
荧光蛋白：	rLuc

质粒简介
   pRL-TK-intronless是一个哺乳海肾荧光素报告质粒，由武汉淼灵生物科技有限公司构建并共享至淼灵质粒平台。

质粒图谱


质粒序列
LOCUS       Exported                3811 bp ds-DNA     circular SYN 03-DEC-2017
DEFINITION  synthetic circular DNA
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..3811
                     /organism="synthetic DNA construct"
                     /mol_type="other DNA"
     promoter        8..759
                     /label=HSV TK promoter
                     /note="herpes simplex virus thymidine kinase promoter"
     promoter        772..790
                     /label=T7 promoter
                     /note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
     CDS             800..1735
                     /codon_start=1
                     /product="luciferase from the anthozoan coelenterate 
                     Renilla reniformis (sea pansy)"
                     /label=Rluc
                     /translation="MTSKVYDPEQRKRMITGPQWWARCKQMNVLDSFINYYDSEKHAEN
                     AVIFLHGNAASSYLWRHVVPHIEPVARCIIPDLIGMGKSGKSGNGSYRLLDHYKYLTAW
                     FELLNLPKKIIFVGHDWGACLAFHYSYEHQDKIKAIVHAESVVDVIESWDEWPDIEEDI
                     ALIKSEEGEKMVLENNFFVETMLPSKIMRKLEPEEFAAYLEPFKEKGEVRRPTLSWPRE
                     IPLVKGGKPDVVQIVRNYNAYLRASDDLPKMFIESDPGFFSNAIVEGAKKFPNTEFVKV
                     KGLHFSQEDAPDEMGKYIKSFVERVLKNEQ"
     polyA_signal    1766..1887
                     /label=SV40 poly(A) signal
                     /note="SV40 polyadenylation signal"
     promoter        2020..2124
                     /gene="bla"
                     /label=AmpR promoter
     CDS             2125..2985
                     /codon_start=1
                     /gene="bla"
                     /product="beta-lactamase"
                     /label=AmpR
                     /note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
                     related antibiotics"
                     /translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
                     ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
                     PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
                     EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
                     LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
                     LIKHW"
     rep_origin      3156..3744
                     /direction=RIGHT
                     /label=ori
                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 
                     replication"
ORIGIN
        1 agatctaaat gagtcttcgg acctcgcggg ggccgcttaa gcggtggtta gggtttgtct
       61 gacgcggggg gagggggaag gaacgaaaca ctctcattcg gaggcggctc ggggtttggt
      121 cttggtggcc acgggcacgc agaagagcgc cgcgatcctc ttaagcaccc ccccgccctc
      181 cgtggaggcg ggggtttggt cggcgggtgg taactggcgg gccgctgact cgggcgggtc
      241 gcgcgcccca gagtgtgacc ttttcggtct gctcgcagac ccccgggcgg cgccgccgcg
      301 gcggcgacgg gctcgctggg tcctaggctc catggggacc gtatacgtgg acaggctctg
      361 gagcatccgc acgactgcgg tgatattacc ggagaccttc tgcgggacga gccgggtcac
      421 gcggctgacg cggagcgtcc gttgggcgac aaacaccagg acggggcaca ggtacactat
      481 cttgtcaccc ggaggcgcga gggactgcag gagcttcagg gagtggcgca gctgcttcat
      541 ccccgtggcc cgttgctcgc gtttgctggc ggtgtccccg gaagaaatat atttgcatgt
      601 ctttagttct atgatgacac aaaccccgcc cagcgtcttg tcattggcga attcgaacac
      661 gcagatgcag tcggggcggc gcggtcccag gtccacttcg catattaagg tgacgcgtgt
      721 ggcctcgaac accgagcgac cctgcagcga cccgcttaaa agcttagtac ttaatacgac
      781 tcactatagg ctagccacca tgacttcgaa agtttatgat ccagaacaaa ggaaacggat
      841 gataactggt ccgcagtggt gggccagatg taaacaaatg aatgttcttg attcatttat
      901 taattattat gattcagaaa aacatgcaga aaatgctgtt atttttttac atggtaacgc
      961 ggcctcttct tatttatggc gacatgttgt gccacatatt gagccagtag cgcggtgtat
     1021 tataccagac cttattggta tgggcaaatc aggcaaatct ggtaatggtt cttataggtt
     1081 acttgatcat tacaaatatc ttactgcatg gtttgaactt cttaatttac caaagaagat
     1141 catttttgtc ggccatgatt ggggtgcttg tttggcattt cattatagct atgagcatca
     1201 agataagatc aaagcaatag ttcacgctga aagtgtagta gatgtgattg aatcatggga
     1261 tgaatggcct gatattgaag aagatattgc gttgatcaaa tctgaagaag gagaaaaaat
     1321 ggttttggag aataacttct tcgtggaaac catgttgcca tcaaaaatca tgagaaagtt
     1381 agaaccagaa gaatttgcag catatcttga accattcaaa gagaaaggtg aagttcgtcg
     1441 tccaacatta tcatggcctc gtgaaatccc gttagtaaaa ggtggtaaac ctgacgttgt
     1501 acaaattgtt aggaattata atgcttatct acgtgcaagt gatgatttac caaaaatgtt
     1561 tattgaatcg gacccaggat tcttttccaa tgctattgtt gaaggtgcca agaagtttcc
     1621 taatactgaa tttgtcaaag taaaaggtct tcatttttcg caagaagatg cacctgatga
     1681 aatgggaaaa tatatcaaat cgttcgttga gcgagttctc aaaaatgaac aataattcta
     1741 gagcggccgc ttcgagcaga catgataaga tacattgatg agtttggaca aaccacaact
     1801 agaatgcagt gaaaaaaatg ctttatttgt gaaatttgtg atgctattgc tttatttgta
     1861 accattataa gctgcaataa acaagttaac aacaacaatt gcattcattt tatgtttcag
     1921 gttcaggggg aggtgtggga ggttttttaa agcaagtaaa acctctacaa atgtggtaaa
     1981 atcgataagg atccaggtgg cacttttcgg ggaaatgtgc gcggaacccc tatttgttta
     2041 tttttctaaa tacattcaaa tatgtatccg ctcatgagac aataaccctg ataaatgctt
     2101 caataatatt gaaaaaggaa gagtatgagt attcaacatt tccgtgtcgc ccttattccc
     2161 ttttttgcgg cattttgcct tcctgttttt gctcacccag aaacgctggt gaaagtaaaa
     2221 gatgctgaag atcagttggg tgcacgagtg ggttacatcg aactggatct caacagcggt
     2281 aagatccttg agagttttcg ccccgaagaa cgttttccaa tgatgagcac ttttaaagtt
     2341 ctgctatgtg gcgcggtatt atcccgtatt gacgccgggc aagagcaact cggtcgccgc
     2401 atacactatt ctcagaatga cttggttgag tactcaccag tcacagaaaa gcatcttacg
     2461 gatggcatga cagtaagaga attatgcagt gctgccataa ccatgagtga taacactgcg
     2521 gccaacttac ttctgacaac gatcggagga ccgaaggagc taaccgcttt tttgcacaac
     2581 atgggggatc atgtaactcg ccttgatcgt tgggaaccgg agctgaatga agccatacca
     2641 aacgacgagc gtgacaccac gatgcctgta gcaatggcaa caacgttgcg caaactatta
     2701 actggcgaac tacttactct agcttcccgg caacaattaa tagactggat ggaggcggat
     2761 aaagttgcag gaccacttct gcgctcggcc cttccggctg gctggtttat tgctgataaa
     2821 tctggagccg gtgagcgtgg gtctcgcggt atcattgcag cactggggcc agatggtaag
     2881 ccctcccgta tcgtagttat ctacacgacg gggagtcagg caactatgga tgaacgaaat
     2941 agacagatcg ctgagatagg tgcctcactg attaagcatt ggtaactgtc agaccaagtt
     3001 tactcatata tactttagat tgatttaaaa cttcattttt aatttaaaag gatctaggtg
     3061 aagatccttt ttgataatct catgaccaaa atcccttaac gtgagttttc gttccactga
     3121 gcgtcagacc ccgtagaaaa gatcaaagga tcttcttgag atcctttttt tctgcgcgta
     3181 atctgctgct tgcaaacaaa aaaaccaccg ctaccagcgg tggtttgttt gccggatcaa
     3241 gagctaccaa ctctttttcc gaaggtaact ggcttcagca gagcgcagat accaaatact
     3301 gttcttctag tgtagccgta gttaggccac cacttcaaga actctgtagc accgcctaca
     3361 tacctcgctc tgctaatcct gttaccagtg gctgctgcca gtggcgataa gtcgtgtctt
     3421 accgggttgg actcaagacg atagttaccg gataaggcgc agcggtcggg ctgaacgggg
     3481 ggttcgtgca cacagcccag cttggagcga acgacctaca ccgaactgag atacctacag
     3541 cgtgagctat gagaaagcgc cacgcttccc gaagggagaa aggcggacag gtatccggta
     3601 agcggcaggg tcggaacagg agagcgcacg agggagcttc cagggggaaa cgcctggtat
     3661 ctttatagtc ctgtcgggtt tcgccacctc tgacttgagc gtcgattttt gtgatgctcg
     3721 tcaggggggc ggagcctatg gaaaaacgcc agcaacgcgg cctttttacg gttcctggcc
     3781 ttttgctggc cttttgctca catggctcga c
//

质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
         收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
         1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              ①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
              ②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
              ③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
              ④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
              ⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
              ⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
        2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
              四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
        3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
        4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              直接挑取单菌落至液体培养基中。
        5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
              单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
        6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。

二、转化图片

P4625/pCMV-SPORT6-MAD2L2人源基因质粒

P4626/pCMV-SPORT6-PLEK（1点突变）人源基因质粒

P4627/pCMV-SPORT6-CD84人源基因质粒

P4628/pCMV-SPORT6-LRRFIP2人源基因质粒

P4629/pCMV-SPORT6-SECTM1（1点突变1同义突变）人源基因质粒

P4630/pCMV-SPORT6-LCK人源基因质粒

P4631/pCMV-SPORT6-MID2（34-2118bp）人源基因质粒

P4632/pCMV-SPORT6-IFI27L1人源基因质粒

P4633/pCMV-SPORT6-CCDC134人源基因质粒

P4634/pCMV-SPORT6-MAGEA2B(1同义突变1点突变）人源基因质粒