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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
pECFP-C1
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pECFP-C1哺乳荧光质粒
别称: pECFP-C1
质粒属性
质粒简介
pECFP-C1 encodes an enhanced cyan fluorescent variant of the Aequorea victoria green fluorescent protein gene (GFP). The ECFP gene contains six amino acid substitutions. The Tyr-66 to Trp substitution gives ECFP fluorescence excitation (major peak at 433 nm and a minor peak at 453 nm) and emission (major peak at 475 nm and a minor peak at 501 nm) similar to other cyan emission variants (1–3). The other five substitutions (Phe-64 to Leu; Ser-65 to Thr; Asn-146 to Ile; Met-153 to Thr; and Val-163 to Ala) enhance the brightness and solubility of the protein, primarily due to improved protein-folding properties and efficiency of chromophore formation (2, 4, 5).
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 4731 bp ds-DNA circular SYN 01-SEP-2016
DEFINITION synthetic circular DNA
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS Untitled
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 4731)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported Thursday, September 1, 2016 from SnapGene Viewer 3.1.4
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..4731
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
enhancer 61..364
/note="CMV enhancer"
/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
promoter 365..568
/note="CMV promoter"
/note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early
promoter"
CDS 613..1329
/codon_start=1
/product="enhanced CFP"
/note="ECFP"
/note="mammalian codon-optimized"
/translation="MVSKGEELFTGVVPILVELDGDVNGHKFSVSGEGEGDATYGKLTL
KFICTTGKLPVPWPTLVTTLTWGVQCFSRYPDHMKQHDFFKSAMPEGYVQERTIFFKDD
GNYKTRAEVKFEGDTLVNRIELKGIDFKEDGNILGHKLEYNYISHNVYITADKQKNGIK
ANFKIRHNIEDGSVQLADHYQQNTPIGDGPVLLPDNHYLSTQSALSKDPNEKRDHMVLL
EFVTAAGITLGMDELYK"
misc_feature 1330..1395
/note="MCS"
/note="multiple cloning site"
polyA_signal 1519..1640
/note="SV40 poly(A) signal"
/note="SV40 polyadenylation signal"
rep_origin complement(1647..2102)
/direction=LEFT
/note="f1 ori"
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
promoter 2129..2233
/gene="bla"
/note="AmpR promoter"
promoter 2235..2592
/note="SV40 promoter"
/note="SV40 enhancer and early promoter"
rep_origin 2443..2578
/note="SV40 ori"
/note="SV40 origin of replication"
CDS 2627..3421
/codon_start=1
/gene="aph(3')-II (or nptII)"
/product="aminoglycoside phosphotransferase from Tn5"
/note="NeoR/KanR"
/note="confers resistance to neomycin, kanamycin, and G418
(Geneticin(R))"
/translation="MIEQDGLHAGSPAAWVERLFGYDWAQQTIGCSDAAVFRLSAQGRP
VLFVKTDLSGALNELQDEAARLSWLATTGVPCAAVLDVVTEAGRDWLLLGEVPGQDLLS
SHLAPAEKVSIMADAMRRLHTLDPAT-CPFDHQAKHRIERARTRMEAGLVDQDDLDEEHQ
GLAPAELFARLKASMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRYQDIA
LATRDIAEELGGEWADRFLVLYGIAAPDSQRIAFYRLLDEFF"
polyA_signal 3653..3700
/note="HSV TK poly(A) signal"
/note="herpes simplex virus thymidine kinase
polyadenylation signal (Cole and Stacy, 1985)"
rep_origin 4029..4617
/direction=RIGHT
/note="ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
ORIGIN
1 tagttattaa tagtaatcaa ttacggggtc attagttcat agcccatata tggagttccg
61 cgttacataa cttacggtaa atggcccgcc tggctgaccg cccaacgacc cccgcccatt
121 gacgtcaata atgacgtatg ttcccatagt aacgccaata gggactttcc attgacgtca
181 atgggtggag tatttacggt aaactgccca cttggcagta catcaagtgt atcatatgcc
241 aagtacgccc cctattgacg tcaatgacgg taaatggccc gcctggcatt atgcccagta
301 catgacctta tgggactttc ctacttggca gtacatctac gtattagtca tcgctattac
361 catggtgatg cggttttggc agtacatcaa tgggcgtgga tagcggtttg actcacgggg
421 atttccaagt ctccacccca ttgacgtcaa tgggagtttg ttttggcacc aaaatcaacg
481 ggactttcca aaatgtcgta acaactccgc cccattgacg caaatgggcg gtaggcgtgt
541 acggtgggag gtctatataa gcagagctgg tttagtgaac cgtcagatcc gctagcgcta
601 ccggtcgcca ccatggtgag caagggcgag gagctgttca ccggggtggt gcccatcctg
661 gtcgagctgg acggcgacgt aaacggccac aagttcagcg tgtccggcga gggcgagggc
721 gatgccacct acggcaagct gaccctgaag ttcatctgca ccaccggcaa gctgcccgtg
781 ccctggccca ccctcgtgac caccctgacc tggggcgtgc agtgcttcag ccgctacccc
841 gaccacatga agcagcacga cttcttcaag tccgccatgc ccgaaggcta cgtccaggag
901 cgcaccatct tcttcaagga cgacggcaac tacaagaccc gcgccgaggt gaagttcgag
961 ggcgacaccc tggtgaaccg catcgagctg aagggcatcg acttcaagga ggacggcaac
1021 atcctggggc acaagctgga gtacaactac atcagccaca acgtctatat caccgccgac
1081 aagcagaaga acggcatcaa ggccaacttc aagatccgcc acaacatcga ggacggcagc
1141 gtgcagctcg ccgaccacta ccagcagaac acccccatcg gcgacggccc cgtgctgctg
1201 cccgacaacc actacctgag cacccagtcc gccctgagca aagaccccaa cgagaagcgc
1261 gatcacatgg tcctgctgga gttcgtgacc gccgccggga tcactctcgg catggacgag
1321 ctgtacaagt ccggactcag atctcgagct caagcttcga attctgcagt cgacggtacc
1381 gcgggcccgg gatccaccgg atctagataa ctgatcataa tcagccatac cacatttgta
1441 gaggttttac ttgctttaaa aaacctccca cacctccccc tgaacctgaa acataaaatg
1501 aatgcaattg ttgttgttaa cttgtttatt gcagcttata atggttacaa ataaagcaat
1561 agcatcacaa atttcacaaa taaagcattt ttttcactgc attctagttg tggtttgtcc
1621 aaactcatca atgtatctta aggcgtaaat tgtaagcgtt aatattttgt taaaattcgc
1681 gttaaatttt tgttaaatca gctcattttt taaccaatag gccgaaatcg gcaaaatccc
1741 ttataaatca aaagaataga ccgagatagg gttgagtgtt gttccagttt ggaacaagag
1801 tccactatta aagaacgtgg actccaacgt caaagggcga aaaaccgtct atcagggcga
1861 tggcccacta cgtgaaccat caccctaatc aagttttttg gggtcgaggt gccgtaaagc
1921 actaaatcgg aaccctaaag ggagcccccg atttagagct tgacggggaa agccggcgaa
1981 cgtggcgaga aaggaaggga agaaagcgaa aggagcgggc gctagggcgc tggcaagtgt
2041 agcggtcacg ctgcgcgtaa ccaccacacc cgccgcgctt aatgcgccgc tacagggcgc
2101 gtcaggtggc acttttcggg gaaatgtgcg cggaacccct atttgtttat ttttctaaat
2161 acattcaaat atgtatccgc tcatgagaca ataaccctga taaatgcttc aataatattg
2221 aaaaaggaag agtcctgagg cggaaagaac cagctgtgga atgtgtgtca gttagggtgt
2281 ggaaagtccc caggctcccc agcaggcaga agtatgcaaa gcatgcatct caattagtca
2341 gcaaccaggt gtggaaagtc cccaggctcc ccagcaggca gaagtatgca aagcatgcat
2401 ctcaattagt cagcaaccat agtcccgccc ctaactccgc ccatcccgcc cctaactccg
2461 cccagttccg cccattctcc gccccatggc tgactaattt tttttattta tgcagaggcc
2521 gaggccgcct cggcctctga gctattccag aagtagtgag gaggcttttt tggaggccta
2581 ggcttttgca aagatcgatc aagagacagg atgaggatcg tttcgcatga ttgaacaaga
2641 tggattgcac gcaggttctc cggccgcttg ggtggagagg ctattcggct atgactgggc
2701 acaacagaca atcggctgct ctgatgccgc cgtgttccgg ctgtcagcgc aggggcgccc
2761 ggttcttttt gtcaagaccg acctgtccgg tgccctgaat gaactgcaag acgaggcagc
2821 gcggctatcg tggctggcca cgacgggcgt tccttgcgca gctgtgctcg acgttgtcac
2881 tgaagcggga agggactggc tgctattggg cgaagtgccg gggcaggatc tcctgtcatc
2941 tcaccttgct cctgccgaga aagtatccat catggctgat gcaatgcggc ggctgcatac
3001 gcttgatccg gctacctgcc cattcgacca ccaagcgaaa catcgcatcg agcgagcacg
3061 tactcggatg gaagccggtc ttgtcgatca ggatgatctg gacgaagagc atcaggggct
3121 cgcgccagcc gaactgttcg ccaggctcaa ggcgagcatg cccgacggcg aggatctcgt
3181 cgtgacccat ggcgatgcct gcttgccgaa tatcatggtg gaaaatggcc gcttttctgg
3241 attcatcgac tgtggccggc tgggtgtggc ggaccgctat caggacatag cgttggctac
3301 ccgtgatatt gctgaagagc ttggcggcga atgggctgac cgcttcctcg tgctttacgg
3361 tatcgccgct cccgattcgc agcgcatcgc cttctatcgc cttcttgacg agttcttctg
3421 agcgggactc tggggttcga aatgaccgac caagcgacgc ccaacctgcc atcacgagat
3481 ttcgattcca ccgccgcctt ctatgaaagg ttgggcttcg gaatcgtttt ccgggacgcc
3541 ggctggatga tcctccagcg cggggatctc atgctggagt tcttcgccca ccctaggggg
3601 aggctaactg aaacacggaa ggagacaata ccggaaggaa cccgcgctat gacggcaata
3661 aaaagacaga ataaaacgca cggtgttggg tcgtttgttc ataaacgcgg ggttcggtcc
3721 cagggctggc actctgtcga taccccaccg agaccccatt ggggccaata cgcccgcgtt
3781 tcttcctttt ccccacccca ccccccaagt tcgggtgaag gcccagggct cgcagccaac
3841 gtcggggcgg caggccctgc catagcctca ggttactcat atatacttta gattgattta
3901 aaacttcatt tttaatttaa aaggatctag gtgaagatcc tttttgataa tctcatgacc
3961 aaaatccctt aacgtgagtt ttcgttccac tgagcgtcag accccgtaga aaagatcaaa
4021 ggatcttctt gagatccttt ttttctgcgc gtaatctgct gcttgcaaac aaaaaaacca
4081 ccgctaccag cggtggtttg tttgccggat caagagctac caactctttt tccgaaggta
4141 actggcttca gcagagcgca gataccaaat actgtccttc tagtgtagcc gtagttaggc
4201 caccacttca agaactctgt agcaccgcct acatacctcg ctctgctaat cctgttacca
4261 gtggctgctg ccagtggcga taagtcgtgt cttaccgggt tggactcaag acgatagtta
4321 ccggataagg cgcagcggtc gggctgaacg gggggttcgt gcacacagcc cagcttggag
4381 cgaacgacct acaccgaact gagataccta cagcgtgagc tatgagaaag cgccacgctt
4441 cccgaaggga gaaaggcgga caggtatccg gtaagcggca gggtcggaac aggagagcgc
4501 acgagggagc ttccaggggg aaacgcctgg tatctttata gtcctgtcgg gtttcgccac
4561 ctctgacttg agcgtcgatt tttgtgatgc tcgtcagggg ggcggagcct atggaaaaac
4621 gccagcaacg cggccttttt acggttcctg gccttttgct ggccttttgc tcacatgttc
4681 tttcctgcgt tatcccctga ttctgtggat aaccgtatta ccgccatgca t
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pECFP-C1哺乳荧光质粒
别称: pECFP-C1
| 启动子: | CMV |
|---|---|
| 复制子: | pUC |
| 终止子: | SV40 poly(A) signal |
| 质粒分类: | 哺乳细胞，荧光蛋白报告载体 |
| 质粒大小: | 4731bp |
| 原核抗性: | Kan |
| 筛选标记: | G418 |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
| 表达宿主: | 哺乳细胞 |
| 诱导方式: | 无须诱导，瞬时表达 |
| 5'测序引物: | CMV-F：CGCAAATGGGCGGTAGGCGTG |
| 3'测序引物: | Sv40-polyA-R：GAAATTTGTGATGCTATTGC |
质粒属性
| 载体宿主： | 哺乳细胞 |
|---|---|
| 载体用途： | 蛋白表达 |
| 基因种属： | 空载体 |
| 基因类型： | ORF |
| 原核抗性： | Kan |
| 真核抗性： | Neo/G418 |
| 荧光蛋白： | 青色 |
质粒简介
pECFP-C1 encodes an enhanced cyan fluorescent variant of the Aequorea victoria green fluorescent protein gene (GFP). The ECFP gene contains six amino acid substitutions. The Tyr-66 to Trp substitution gives ECFP fluorescence excitation (major peak at 433 nm and a minor peak at 453 nm) and emission (major peak at 475 nm and a minor peak at 501 nm) similar to other cyan emission variants (1–3). The other five substitutions (Phe-64 to Leu; Ser-65 to Thr; Asn-146 to Ile; Met-153 to Thr; and Val-163 to Ala) enhance the brightness and solubility of the protein, primarily due to improved protein-folding properties and efficiency of chromophore formation (2, 4, 5).
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 4731 bp ds-DNA circular SYN 01-SEP-2016
DEFINITION synthetic circular DNA
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS Untitled
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 4731)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported Thursday, September 1, 2016 from SnapGene Viewer 3.1.4
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..4731
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
enhancer 61..364
/note="CMV enhancer"
/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
promoter 365..568
/note="CMV promoter"
/note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early
promoter"
CDS 613..1329
/codon_start=1
/product="enhanced CFP"
/note="ECFP"
/note="mammalian codon-optimized"
/translation="MVSKGEELFTGVVPILVELDGDVNGHKFSVSGEGEGDATYGKLTL
KFICTTGKLPVPWPTLVTTLTWGVQCFSRYPDHMKQHDFFKSAMPEGYVQERTIFFKDD
GNYKTRAEVKFEGDTLVNRIELKGIDFKEDGNILGHKLEYNYISHNVYITADKQKNGIK
ANFKIRHNIEDGSVQLADHYQQNTPIGDGPVLLPDNHYLSTQSALSKDPNEKRDHMVLL
EFVTAAGITLGMDELYK"
misc_feature 1330..1395
/note="MCS"
/note="multiple cloning site"
polyA_signal 1519..1640
/note="SV40 poly(A) signal"
/note="SV40 polyadenylation signal"
rep_origin complement(1647..2102)
/direction=LEFT
/note="f1 ori"
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
promoter 2129..2233
/gene="bla"
/note="AmpR promoter"
promoter 2235..2592
/note="SV40 promoter"
/note="SV40 enhancer and early promoter"
rep_origin 2443..2578
/note="SV40 ori"
/note="SV40 origin of replication"
CDS 2627..3421
/codon_start=1
/gene="aph(3')-II (or nptII)"
/product="aminoglycoside phosphotransferase from Tn5"
/note="NeoR/KanR"
/note="confers resistance to neomycin, kanamycin, and G418
(Geneticin(R))"
/translation="MIEQDGLHAGSPAAWVERLFGYDWAQQTIGCSDAAVFRLSAQGRP
VLFVKTDLSGALNELQDEAARLSWLATTGVPCAAVLDVVTEAGRDWLLLGEVPGQDLLS
SHLAPAEKVSIMADAMRRLHTLDPAT-CPFDHQAKHRIERARTRMEAGLVDQDDLDEEHQ
GLAPAELFARLKASMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRYQDIA
LATRDIAEELGGEWADRFLVLYGIAAPDSQRIAFYRLLDEFF"
polyA_signal 3653..3700
/note="HSV TK poly(A) signal"
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polyadenylation signal (Cole and Stacy, 1985)"
rep_origin 4029..4617
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/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
ORIGIN
1 tagttattaa tagtaatcaa ttacggggtc attagttcat agcccatata tggagttccg
61 cgttacataa cttacggtaa atggcccgcc tggctgaccg cccaacgacc cccgcccatt
121 gacgtcaata atgacgtatg ttcccatagt aacgccaata gggactttcc attgacgtca
181 atgggtggag tatttacggt aaactgccca cttggcagta catcaagtgt atcatatgcc
241 aagtacgccc cctattgacg tcaatgacgg taaatggccc gcctggcatt atgcccagta
301 catgacctta tgggactttc ctacttggca gtacatctac gtattagtca tcgctattac
361 catggtgatg cggttttggc agtacatcaa tgggcgtgga tagcggtttg actcacgggg
421 atttccaagt ctccacccca ttgacgtcaa tgggagtttg ttttggcacc aaaatcaacg
481 ggactttcca aaatgtcgta acaactccgc cccattgacg caaatgggcg gtaggcgtgt
541 acggtgggag gtctatataa gcagagctgg tttagtgaac cgtcagatcc gctagcgcta
601 ccggtcgcca ccatggtgag caagggcgag gagctgttca ccggggtggt gcccatcctg
661 gtcgagctgg acggcgacgt aaacggccac aagttcagcg tgtccggcga gggcgagggc
721 gatgccacct acggcaagct gaccctgaag ttcatctgca ccaccggcaa gctgcccgtg
781 ccctggccca ccctcgtgac caccctgacc tggggcgtgc agtgcttcag ccgctacccc
841 gaccacatga agcagcacga cttcttcaag tccgccatgc ccgaaggcta cgtccaggag
901 cgcaccatct tcttcaagga cgacggcaac tacaagaccc gcgccgaggt gaagttcgag
961 ggcgacaccc tggtgaaccg catcgagctg aagggcatcg acttcaagga ggacggcaac
1021 atcctggggc acaagctgga gtacaactac atcagccaca acgtctatat caccgccgac
1081 aagcagaaga acggcatcaa ggccaacttc aagatccgcc acaacatcga ggacggcagc
1141 gtgcagctcg ccgaccacta ccagcagaac acccccatcg gcgacggccc cgtgctgctg
1201 cccgacaacc actacctgag cacccagtcc gccctgagca aagaccccaa cgagaagcgc
1261 gatcacatgg tcctgctgga gttcgtgacc gccgccggga tcactctcgg catggacgag
1321 ctgtacaagt ccggactcag atctcgagct caagcttcga attctgcagt cgacggtacc
1381 gcgggcccgg gatccaccgg atctagataa ctgatcataa tcagccatac cacatttgta
1441 gaggttttac ttgctttaaa aaacctccca cacctccccc tgaacctgaa acataaaatg
1501 aatgcaattg ttgttgttaa cttgtttatt gcagcttata atggttacaa ataaagcaat
1561 agcatcacaa atttcacaaa taaagcattt ttttcactgc attctagttg tggtttgtcc
1621 aaactcatca atgtatctta aggcgtaaat tgtaagcgtt aatattttgt taaaattcgc
1681 gttaaatttt tgttaaatca gctcattttt taaccaatag gccgaaatcg gcaaaatccc
1741 ttataaatca aaagaataga ccgagatagg gttgagtgtt gttccagttt ggaacaagag
1801 tccactatta aagaacgtgg actccaacgt caaagggcga aaaaccgtct atcagggcga
1861 tggcccacta cgtgaaccat caccctaatc aagttttttg gggtcgaggt gccgtaaagc
1921 actaaatcgg aaccctaaag ggagcccccg atttagagct tgacggggaa agccggcgaa
1981 cgtggcgaga aaggaaggga agaaagcgaa aggagcgggc gctagggcgc tggcaagtgt
2041 agcggtcacg ctgcgcgtaa ccaccacacc cgccgcgctt aatgcgccgc tacagggcgc
2101 gtcaggtggc acttttcggg gaaatgtgcg cggaacccct atttgtttat ttttctaaat
2161 acattcaaat atgtatccgc tcatgagaca ataaccctga taaatgcttc aataatattg
2221 aaaaaggaag agtcctgagg cggaaagaac cagctgtgga atgtgtgtca gttagggtgt
2281 ggaaagtccc caggctcccc agcaggcaga agtatgcaaa gcatgcatct caattagtca
2341 gcaaccaggt gtggaaagtc cccaggctcc ccagcaggca gaagtatgca aagcatgcat
2401 ctcaattagt cagcaaccat agtcccgccc ctaactccgc ccatcccgcc cctaactccg
2461 cccagttccg cccattctcc gccccatggc tgactaattt tttttattta tgcagaggcc
2521 gaggccgcct cggcctctga gctattccag aagtagtgag gaggcttttt tggaggccta
2581 ggcttttgca aagatcgatc aagagacagg atgaggatcg tttcgcatga ttgaacaaga
2641 tggattgcac gcaggttctc cggccgcttg ggtggagagg ctattcggct atgactgggc
2701 acaacagaca atcggctgct ctgatgccgc cgtgttccgg ctgtcagcgc aggggcgccc
2761 ggttcttttt gtcaagaccg acctgtccgg tgccctgaat gaactgcaag acgaggcagc
2821 gcggctatcg tggctggcca cgacgggcgt tccttgcgca gctgtgctcg acgttgtcac
2881 tgaagcggga agggactggc tgctattggg cgaagtgccg gggcaggatc tcctgtcatc
2941 tcaccttgct cctgccgaga aagtatccat catggctgat gcaatgcggc ggctgcatac
3001 gcttgatccg gctacctgcc cattcgacca ccaagcgaaa catcgcatcg agcgagcacg
3061 tactcggatg gaagccggtc ttgtcgatca ggatgatctg gacgaagagc atcaggggct
3121 cgcgccagcc gaactgttcg ccaggctcaa ggcgagcatg cccgacggcg aggatctcgt
3181 cgtgacccat ggcgatgcct gcttgccgaa tatcatggtg gaaaatggcc gcttttctgg
3241 attcatcgac tgtggccggc tgggtgtggc ggaccgctat caggacatag cgttggctac
3301 ccgtgatatt gctgaagagc ttggcggcga atgggctgac cgcttcctcg tgctttacgg
3361 tatcgccgct cccgattcgc agcgcatcgc cttctatcgc cttcttgacg agttcttctg
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3541 ggctggatga tcctccagcg cggggatctc atgctggagt tcttcgccca ccctaggggg
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4561 ctctgacttg agcgtcgatt tttgtgatgc tcgtcagggg ggcggagcct atggaaaaac
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质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P2743/pENTR223-RSRP1-A716G人源基因质粒 |
| P2744/pENTR223-IFI27L2人源基因质粒 |
| P2745/pENTR223-NT5C3A（136-996bp）人源基因质粒 |
| P2746/pENTR223-MT1M人源基因质粒 |
| P2747/pENTR223-SPIN3人源基因质粒 |
| P2748/pENTR223-APOC3人源基因质粒 |
| P2749/pENTR223-CSNK1G1（1269bp）人源基因质粒 |
| P2750/pENTR223-GIMAP1-GIMAP5（截短末端17bp突变）人源基因质粒 |
| P2751/pENTR223-C17orf76-AS1人源基因质粒 |
| P2752/pENTR223-NMNAT1人源基因质粒 |
| P2753/pENTR223-IFT20人源基因质粒 |
| P2754/pENTR223-NTAN1人源基因质粒 |
| P2755/pENTR223-SPRY2人源基因质粒 |
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文献和实验相关实验
. coli/mammals pECFP-C1 pECFPN1 表达 青色 荧光蛋白和目的基因的融合蛋白，目的基因位于N端 kan/neo 4.7kb E. coli/mammals pEYFP-C1 pEYFPC1 表达 黄色 荧光蛋白和目的基因的融合蛋白，目的基因位于C端 kan/neo 4.7kb E. coli/mammals 4)、哺乳动物/真核荧光素酶载体（研究启动子专用）来自荧火虫的化学发光剂，加入底物后发光，不适合追踪单个细胞。 PGL3-basic PGL
M13F/T7 M13R pCR3.1 T7 BGH pCS2 SP6 T7 pDonar M13F M13R pDONR221 M13F M13R pDrive T7 SP6 pDRIveR(KAN+) T7 SP6 pDsRED1-C1 pDsRED-ex-C1-F pEGFP-N-3’(距离很近,一般不用) pDsRED2-C1(KAN+) pDsRED-ex-C1-F pEGFP-N-3’ pDSRED-N1(KAN+) pEGFP-N-5’ PDSRED-N-R
-3pDEST26TREfor/CMV-ProforT7/M13forpDisplayT7/CMV-Proforc-mycrevpDNR-LIB(MCS_A)M13for,T7pSG5-3,M13RpDonarM13FM13RpDONR201PDONR-FPDONR-RpDONR207PDONR-FPDONR-RpDONR223M13FM13RpDriveT7/M13revSP6/M13forpDsRED1-C1(DsRed1-N-f)DsRed1-C-rpDsRed1-N1CMV-ProforRFP-Nrev,CMV-R
pECFP-C1哺乳荧光质粒
￥100 - 1000
