pCAGGS-Myc哺乳表达质粒

基本信息
名称：pCAGGS-Myc哺乳表达质粒
别称: pCAGGS-Myc

启动子:	CAG
复制子:	pUC
终止子:	β-globin poly(A) signal
质粒分类:	哺乳细胞质粒；哺乳表达质粒；pCAG系列质粒
质粒大小:	4809bp
质粒标签:	N-Myc
原核抗性:	Amp
克隆菌株:	DH5a
培养条件:	37度
表达宿主:	293T等哺乳细胞

质粒属性

载体宿主：	哺乳细胞
载体用途：	蛋白表达
基因种属：	空载体
基因类型：	ORF
原核抗性：	Amp
真核抗性：
荧光蛋白：

质粒简介
 pCAGGS-Myc质粒是一个哺乳细胞真核表达质粒，CAG启动子驱动Myc标签和目的基因融合表达。本质粒由武汉淼灵生物科技有限公司构建并分享至淼灵质粒平台。

质粒图谱


质粒序列
LOCUS       Exported                4809 bp ds-DNA     circular SYN 17-AUG-2017
DEFINITION  synthetic circular DNA
KEYWORDS    pCAGGS-Myc.dna
SOURCE      synthetic DNA construct
  ORGANISM  synthetic DNA construct
REFERENCE   1  (bases 1 to 4809)
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..4809
                     /organism="synthetic DNA construct"
                     /mol_type="other DNA"
     regulatory      1..10
                     /regulatory_class="other"
                     /note="vertebrate consensus sequence for strong initiation 
                     of translation (Kozak, 1987)"
     CDS             10..39
                     /codon_start=1
                     /product="Myc (human c-Myc oncogene) epitope tag"
                     /label=Myc
                     /translation="EQKLISEEDL"
     polyA_site      169..224
                     /label=-beta-globin poly(A) signal
                     /note="rabbit beta-globin polyadenylation signal"
     promoter        757..952
                     /label=SV40 promoter
                     /note="SV40 early promoter"
     rep_origin      803..938
                     /label=SV40 ori
                     /note="SV40 origin of replication"
     polyA_signal    958..1092
                     /label=SV40 poly(A) signal
                     /note="SV40 polyadenylation signal"
     rep_origin      complement(1330..1918)
                     /direction=LEFT
                     /label=ori
                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 
                     replication"
     CDS             complement(2089..2949)
                     /codon_start=1
                     /gene="bla"
                     /product="beta-lactamase"
                     /label=AmpR
                     /note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
                     related antibiotics"
                     /translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
                     ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
                     PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
                     EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
                     LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
                     LIKHW"
     promoter        complement(2950..3054)
                     /gene="bla"
                     /label=AmpR promoter
     enhancer        3085..3464
                     /label=CMV enhancer
                     /note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
     promoter        3466..3743
                     /label=chicken beta-actin promoter
     intron          3744..4761
                     /label=chimeric intron
                     /note="chimera between introns from chicken beta-actin and 
                     rabbit beta-globin"
ORIGIN
        1 gccaccatgg aacaaaaact catctcagaa gaggatctgg aattcgagct catcgatggt
       61 acccgggcat gcctcgagct agcagatctt aattaattaa ggatcttttt ccctctgcca
      121 aaaattatgg ggacatcatg aagccccttg agcatctgac ttctggctaa taaaggaaat
      181 ttattttcat tgcaatagtg tgttggaatt ttttgtgtct ctcactcgga aggacatatg
      241 ggagggcaaa tcatttaaaa catcagaatg agtatttggt ttagagtttg gcaacatatg
      301 cccatatgct ggctgccatg aacaaaggtt ggctataaag aggtcatcag tatatgaaac
      361 agccccctgc tgtccattcc ttattccata gaaaagcctt gacttgaggt tagatttttt
      421 ttatattttg ttttgtgtta tttttttctt taacatccct aaaattttcc ttacatgttt
      481 tactagccag atttttcctc ctctcctgac tactcccagt catagctgtc cctcttctct
      541 tatggagatc cctcgacctg cagcccaagc ttggcgtaat catggtcata gctgtttcct
      601 gtgtgaaatt gttatccgct cacaattcca cacaacatac gagccggaag cataaagtgt
      661 aaagcctggg tgcctaatga gtgagctaac tcacattaat tgcgttgcgc tcactgcccg
      721 ctttccagtc gggaaacctg tcgtgccagc ggatccgcat ctcaattagt cagcaaccat
      781 agtcccgccc ctaactccgc ccatcccgcc cctaactccg cccagttccg cccattctcc
      841 gccccatggc tgactaattt tttttattta tgcagaggcc gaggccgcct cggcctctga
      901 gctattccag aagtagtgag gaggcttttt tggaggccta ggcttttgca aaaagctaac
      961 ttgtttattg cagcttataa tggttacaaa taaagcaata gcatcacaaa tttcacaaat
     1021 aaagcatttt tttcactgca ttctagttgt ggtttgtcca aactcatcaa tgtatcttat
     1081 catgtctgga tccgctgcat taatgaatcg gccaacgcgc ggggagaggc ggtttgcgta
     1141 ttgggcgctc ttccgcttcc tcgctcactg actcgctgcg ctcggtcgtt cggctgcggc
     1201 gagcggtatc agctcactca aaggcggtaa tacggttatc cacagaatca gggataacgc
     1261 aggaaagaac atgtgagcaa aaggccagca aaaggccagg aaccgtaaaa aggccgcgtt
     1321 gctggcgttt ttccataggc tccgcccccc tgacgagcat cacaaaaatc gacgctcaag
     1381 tcagaggtgg cgaaacccga caggactata aagataccag gcgtttcccc ctggaagctc
     1441 cctcgtgcgc tctcctgttc cgaccctgcc gcttaccgga tacctgtccg cctttctccc
     1501 ttcgggaagc gtggcgcttt ctcatagctc acgctgtagg tatctcagtt cggtgtaggt
     1561 cgttcgctcc aagctgggct gtgtgcacga accccccgtt cagcccgacc gctgcgcctt
     1621 atccggtaac tatcgtcttg agtccaaccc ggtaagacac gacttatcgc cactggcagc
     1681 agccactggt aacaggatta gcagagcgag gtatgtaggc ggtgctacag agttcttgaa
     1741 gtggtggcct aactacggct acactagaag aacagtattt ggtatctgcg ctctgctgaa
     1801 gccagttacc ttcggaaaaa gagttggtag ctcttgatcc ggcaaacaaa ccaccgctgg
     1861 tagcggtggt ttttttgttt gcaagcagca gattacgcgc agaaaaaaag gatctcaaga
     1921 agatcctttg atcttttcta cggggtctga cgctcagtgg aacgaaaact cacgttaagg
     1981 gattttggtc atgagattat caaaaaggat cttcacctag atccttttaa attaaaaatg
     2041 aagttttaaa tcaatctaaa gtatatatga gtaaacttgg tctgacagtt accaatgctt
     2101 aatcagtgag gcacctatct cagcgatctg tctatttcgt tcatccatag ttgcctgact
     2161 ccccgtcgtg tagataacta cgatacggga gggcttacca tctggcccca gtgctgcaat
     2221 gataccgcga gacccacgct caccggctcc agatttatca gcaataaacc agccagccgg
     2281 aagggccgag cgcagaagtg gtcctgcaac tttatccgcc tccatccagt ctattaattg
     2341 ttgccgggaa gctagagtaa gtagttcgcc agttaatagt ttgcgcaacg ttgttgccat
     2401 tgctacaggc atcgtggtgt cacgctcgtc gtttggtatg gcttcattca gctccggttc
     2461 ccaacgatca aggcgagtta catgatcccc catgttgtgc aaaaaagcgg ttagctcctt
     2521 cggtcctccg atcgttgtca gaagtaagtt ggccgcagtg ttatcactca tggttatggc
     2581 agcactgcat aattctctta ctgtcatgcc atccgtaaga tgcttttctg tgactggtga
     2641 gtactcaacc aagtcattct gagaatagtg tatgcggcga ccgagttgct cttgcccggc
     2701 gtcaatacgg gataataccg cgccacatag cagaacttta aaagtgctca tcattggaaa
     2761 acgttcttcg gggcgaaaac tctcaaggat cttaccgctg ttgagatcca gttcgatgta
     2821 acccactcgt gcacccaact gatcttcagc atcttttact ttcaccagcg tttctgggtg
     2881 agcaaaaaca ggaaggcaaa atgccgcaaa aaagggaata agggcgacac ggaaatgttg
     2941 aatactcata ctcttccttt ttcaatatta ttgaagcatt tatcagggtt attgtctcat
     3001 gagcggatac atatttgaat gtatttagaa aaataaacaa ataggggttc cgcgcacatt
     3061 tccccgaaaa gtgccacctg ggtcgacatt gattattgac tagttattaa tagtaatcaa
     3121 ttacggggtc attagttcat agcccatata tggagttccg cgttacataa cttacggtaa
     3181 atggcccgcc tggctgaccg cccaacgacc cccgcccatt gacgtcaata atgacgtatg
     3241 ttcccatagt aacgccaata gggactttcc attgacgtca atgggtggag tatttacggt
     3301 aaactgccca cttggcagta catcaagtgt atcatatgcc aagtacgccc cctattgacg
     3361 tcaatgacgg taaatggccc gcctggcatt atgcccagta catgacctta tgggactttc
     3421 ctacttggca gtacatctac gtattagtca tcgctattac catggtcgag gtgagcccca
     3481 cgttctgctt cactctcccc atctcccccc cctccccacc cccaattttg tatttattta
     3541 ttttttaatt attttgtgca gcgatggggg cggggggggg gggggggccc cccccaggcg
     3601 gggcggggcg gggcgagggg cggggcgggg cgaggcggaa aggtgcggcg gcagccaatc
     3661 agagcggcgc gctccgaaag tttcctttta tggcgaggcg gcggcggcgg cggccctata
     3721 aaaagcgaag cgcgcggcgg gcgggagtcg ttgcgcgctg ccttcccccc gtgccccgct
     3781 ccgccgccgc ctcgcgccgc ccgccccggc tctgactgac cgcgttactc ccacaggtga
     3841 gcgggcggga cggcccttct cctccgggct gtaattagcg cttggtttaa tgacggcttg
     3901 tttcttttct gtggctgcgt gaaagccttg aggggctccg ggagggccct ttgtgcgggg
     3961 ggagcggctc ggggggtgcg tgcgtgtgtg tgtgcgtggg gagcgccgcg tgcggctccg
     4021 cgctgcccgg cggctgtgag cgctgcgggc gcggcgcggg gctttgtgcg ctccgcagtg
     4081 tgcgcgaggg gagcgcggcc gggggcggtg ccccgcggtg cggggggggc tgcgagggga
     4141 acaaaggctg cgtgcggggt gtgtgcgtgg gggggtgagc agggggtgtg ggcgcgtcgg
     4201 tcgggctgca accccccctg cacccccctc cccgagttgc tgagcacggc ccggcttcgg
     4261 gtgcggggct ccgtacgggg cgtggcgcgg ggctcgccgt gccgggcggg gggtggcggc
     4321 aggtgggggt gccgggcggg gcggggccgc ctcgggccgg ggagggctcg ggggaagggg
     4381 cgcggcggcc cccggagcgc cggcggctgt cgaggcgcgg cgagccgcag ccattgcctt
     4441 ttatggtaat cgtgcgagag ggcgcaggga cttcctttgt cccaaatctg tgcggagccg
     4501 aaatctggga ggcgccgccg caccccctct agcgggcgcg gggcgaagcg gtgcggcgcc
     4561 ggcaggaagg aaatgggcgg ggagggcctt cgtgcgtcgc cgcgccgccg tccccttctc
     4621 cctctccagc ctcggggctg tccgcggggg gacggctgcc ttcggggggg acggggcagg
     4681 gcggggttcg gcttctggcg tgtgaccggc ggctctagag cctctgctaa ccatgttcat
     4741 gccttcttct ttttcctaca gctcctgggc aacgtgctgg ttattgtgct gtctcatcat
     4801 tttggcaaa
//
 

质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
         收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
         1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              ①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
              ②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
              ③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
              ④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
              ⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
              ⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
        2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
              四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
        3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
        4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              直接挑取单菌落至液体培养基中。
        5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
              单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
        6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。

二、转化图片

P3482/pENTR223-HMOX1（2点突变）人源基因质粒

P3483/pENTR223-HYLS1（1点突变）人源基因质粒

P3484/pENTR223-GLIPR1人源基因质粒

P3485/pENTR223-LACTB2（1点突变）人源基因质粒

P3486/pENTR223-C20orf144（1点突变）人源基因质粒

P3487/pENTR223-WBSCR28人源基因质粒

P3488/pENTR223-AQP5人源基因质粒

P3489/pENTR223-UNC50人源基因质粒

P3491/pENTR223-NSA2人源基因质粒

P3492/pENTR223-ECSIT人源基因质粒

P3493/pENTR223-TSPAN5人源基因质粒