- ￥100 - 1000
- Xybio
- 上海
- P0435
- 2025年07月15日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
Plasmid#44249
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
名称：pdCas9-bacteria大肠敲除质粒
别称: Plasmid#44249
| 启动子: | Tet |
|---|---|
| 复制子: | P15A |
| 原核抗性: | Chl |
| 克隆菌株: | Stbl3 |
| 培养条件: | 37度 |
质粒属性
| 载体宿主： | 大肠杆菌 |
|---|---|
| 载体用途： | 干扰沉默 |
| 基因种属： | |
| 基因类型： | CRISPR,Cas9 |
| 原核抗性： | Chl |
| 真核抗性： | |
| 荧光蛋白： |
质粒简介
pdCas9-bacteria质粒由上海烜雅生物科技有限公司提供
质粒图谱
质粒序列：详询
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P0755/pBudCE4.1哺乳双框质粒 |
| P0168/pBudCE4.1-hrGFP哺乳双框质粒 |
| P0188/pSecTag2A哺乳分泌质粒 |
| P0172/pTRE2pur哺乳调控质粒 |
| P0173/pTet-On-Advanced哺乳调控质粒 |
| P0174/pTet-On哺乳调控质粒 |
| P0341/pTet-Off哺乳调控质粒 |
| P0210/pRevTRE哺乳调控质粒 |
| P0724/pTRE3G哺乳调控质粒 |
| P0725/pCMV-Tet3G哺乳调控质粒 |
| P0859/pTRE2hyg-Stuffer哺乳调控质粒 |
| P0360/pCHO1.0哺乳抗体质粒 |
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文献和实验min。注：平末端连接效率较低，在连接体系中添加 PEG4000 可以提高连接效率。在连接体系中添加 EcoRV 酶可以显著提高阳性率。四、 转化大肠杆菌感受态细胞及通过载体上的引物进行 PCR 鉴定阳性克隆挑选阳性克隆进行测序验证, 验证正确后, 提取质粒进行转染试验, 关于 sgRNA 是否有效。可以转染之后，直接提取 DNA，通过测序验证，如果在靶标位点附近开始出现杂乱的多峰说明是 sgRNA 有效，如果没有则该 sgRNA 无效。
蛋白质。其中Exo蛋白是一种核酸外切酶，结合在双链DNA的末端，从5'端向3'端降解DNA，产生3'突出端；Beta蛋白结合在单链DNA上，介导互补单链DNA退火，Gam蛋白可与RecBCD酶结合，抑制其降解外源DNA的活性。 ▲ Red 同源重组流程 Red同源重组技术具有同源序列短（40-60 bp）、重组效率高等特点。采用该转化体系时，可在宿主的任意靶位点进行基因敲除、敲入和点突变等操作，目前该方法在大肠杆菌中的应用已经十分成熟。 此外，还有RecA重组敲除系统（由RecA
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