pMCSG7大肠表达质粒

基本信息
名称：pMCSG7大肠表达质粒
别称: pMCSG7

启动子:	T7
复制子:	pBR322
原核抗性:	Amp
克隆菌株:	DH5a
培养条件:	37度

质粒属性

载体宿主：	大肠杆菌
载体用途：	蛋白表达
基因种属：	空载体
基因类型：	ORF
原核抗性：	Amp
真核抗性：
荧光蛋白：

质粒简介
 pMCSG7质粒由上海烜雅生物科技有限公司提供

质粒图谱


质粒序列
LOCUS       Exported                5286 bp ds-DNA     circular SYN 01-MAY-2017
DEFINITION  synthetic circular DNA
ACCESSION   .
VERSION     .
KEYWORDS    .
SOURCE      synthetic DNA construct
  ORGANISM  synthetic DNA construct
REFERENCE   1  (bases 1 to 5286)
  AUTHORS   .
  TITLE     Direct Submission
  JOURNAL   Exported Sep 28, 2017 from MiaoLingPlasmid
            http://www.miaolingbio.com
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..5286
                     /organism="synthetic DNA construct"
                     /mol_type="other DNA"
     terminator      26..73
                     /label=T7 terminator
                     /note="transcription terminator for bacteriophage T7 RNA 
                     polymerase"
     CDS             complement(140..157)
                     /codon_start=1
                     /product="6xHis affinity tag"
                     /label=6xHis
                     /translation="HHHHHH"
     CDS             complement(223..243)
                     /codon_start=1
                     /product="tobacco etch virus (TEV) protease recognition and
                     cleavage site"
                     /label=TEV site
                     /translation="ENLYFQS"
     CDS             complement(268..285)
                     /codon_start=1
                     /product="6xHis affinity tag"
                     /label=6xHis
                     /translation="HHHHHH"
     RBS             296..318
                     /note="efficient ribosome binding site from bacteriophage 
                     T7 gene 10 (Olins and Rangwala, 1989)"
     protein_bind    333..357
                     /label=lac operator
                     /bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
                     /note="The lac repressor binds to the lac operator to 
                     inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be 
                     relieved by adding lactose or 
                     isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
     promoter        complement(358..376)
                     /label=T7 promoter
                     /note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
     promoter        689..766
                     /gene="lacI"
                     /label=lacI promoter
     CDS             767..1849
                     /codon_start=1
                     /gene="lacI"
                     /product="lac repressor"
                     /label=lacI
                     /note="The lac repressor binds to the lac operator to 
                     inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be 
                     relieved by adding lactose or 
                     isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
                     /translation="MKPVTLYDVAEYAGVSYQTVSRVVNQASHVSAKTREKVEAAMAEL
                     NYIPNRVAQQLAGKQSLLIGVATSSLALHAPSQIVAAIKSRADQLGASVVVSMVERSGV
                     EACKAAVHNLLAQRVSGLIINYPLDDQDAIAVEAACTNVPALFLDVSDQTPINSIIFSH
                     EDGTRLGVEHLVALGHQQIALLAGPLSSVSARLRLAGWHKYLTRNQIQPIAEREGDWSA
                     MSGFQQTMQMLNEGIVPTAMLVANDQMALGAMRAITESGLRVGADISVVGYDDTEDSSC
                     YIPPLTTIKQDFRLLGQTSVDRLLQLSQGQAVKGNQLLPVSLVKRKTTLAPNTQTASPR
                     ALADSLMQLARQVSRLESGQ"
     CDS             2658..2849
                     /codon_start=1
                     /gene="rop"
                     /product="Rop protein, which maintains plasmids at low copy
                     number"
                     /label=rop
                     /translation="MTKQEKTALNMARFIRSQTLTLLEKLNELDADEQADICESLHDHA
                     DELYRSCLARFGDDGENL"
     misc_feature    2951..3093
                     /label=bom
                     /note="basis of mobility region from pBR322"
     rep_origin      complement(3279..3867)
                     /direction=LEFT
                     /label=ori
                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 
                     replication"
     CDS             complement(4038..4898)
                     /codon_start=1
                     /gene="bla"
                     /product="beta-lactamase"
                     /label=AmpR
                     /note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
                     related antibiotics"
                     /translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
                     ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
                     PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
                     EPELNEAIPNDERDTTMPAAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
                     LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
                     LIKHW"
     promoter        complement(4899..5002)
                     /gene="bla"
                     /label=AmpR promoter
ORIGIN
        1 atccggatat agttcctcct ttcagcaaaa aacccctcaa gacccgttta gaggccccaa
       61 ggggttatgc tagttattgc tcagcggtgg cagcagccaa ctcagcttcc tttcgggctt
      121 tgttagcagc cggatctcag tggtggtggt ggtggtgctc gagtgcggcc gcaagcttgt
      181 cgacggagct cgaattcgga tccgttatcc acttccaata ttggattgga agtacaggtt
      241 ctcggtaccc agatctacac cagaagaatg atgatgatga tggtgcatat gtatatctcc
      301 ttcttaaagt taaacaaaat tatttctaga ggggaattgt tatccgctca caattcccct
      361 atagtgagtc gtattaattt cgcgggatcg agatcgatct cgatcctcta cgccggacgc
      421 atcgtggccg gcatcaccgg cgccacaggt gcggttgctg gcgcctatat cgccgacatc
      481 accgatgggg aagatcgggc tcgccacttc gggctcatga gcgcttgttt cggcgtgggt
      541 atggtggcag gccccgtggc cgggggactg ttgggcgcca tctccttgca tgcaccattc
      601 cttgcggcgg cggtgctcaa cggcctcaac ctactactgg gctgcttcct aatgcaggag
      661 tcgcataagg gagagcgtcg agatcccgga caccatcgaa tggcgcaaaa cctttcgcgg
      721 tatggcatga tagcgcccgg aagagagtca attcagggtg gtgaatgtga aaccagtaac
      781 gttatacgat gtcgcagagt atgccggtgt ctcttatcag accgtttccc gcgtggtgaa
      841 ccaggccagc cacgtttctg cgaaaacgcg ggaaaaagtg gaagcggcga tggcggagct
      901 gaattacatt cccaaccgcg tggcacaaca actggcgggc aaacagtcgt tgctgattgg
      961 cgttgccacc tccagtctgg ccctgcacgc gccgtcgcaa attgtcgcgg cgattaaatc
     1021 tcgcgccgat caactgggtg ccagcgtggt ggtgtcgatg gtagaacgaa gcggcgtcga
     1081 agcctgtaaa gcggcggtgc acaatcttct cgcgcaacgc gtcagtgggc tgatcattaa
     1141 ctatccgctg gatgaccagg atgccattgc tgtggaagct gcctgcacta atgttccggc
     1201 gttatttctt gatgtctctg accagacacc catcaacagt attattttct cccatgaaga
     1261 cggtacgcga ctgggcgtgg agcatctggt cgcattgggt caccagcaaa tcgcgctgtt
     1321 agcgggccca ttaagttctg tctcggcgcg tctgcgtctg gctggctggc ataaatatct
     1381 cactcgcaat caaattcagc cgatagcgga acgggaaggc gactggagtg ccatgtccgg
     1441 ttttcaacaa accatgcaaa tgctgaatga gggcatcgtt cccactgcga tgctggttgc
     1501 caacgatcag atggcgctgg gcgcaatgcg cgccattacc gagtccgggc tgcgcgttgg
     1561 tgcggatatc tcggtagtgg gatacgacga taccgaagac agctcatgtt atatcccgcc
     1621 gttaaccacc atcaaacagg attttcgcct gctggggcaa accagcgtgg accgcttgct
     1681 gcaactctct cagggccagg cggtgaaggg caatcagctg ttgcccgtct cactggtgaa
     1741 aagaaaaacc accctggcgc ccaatacgca aaccgcctct ccccgcgcgt tggccgattc
     1801 attaatgcag ctggcacgac aggtttcccg actggaaagc gggcagtgag cgcaacgcaa
     1861 ttaatgtaag ttagctcact cattaggcac cgggatctcg accgatgccc ttgagagcct
     1921 tcaacccagt cagctccttc cggtgggcgc ggggcatgac tatcgtcgcc gcacttatga
     1981 ctgtcttctt tatcatgcaa ctcgtaggac aggtgccggc agcgctctgg gtcattttcg
     2041 gcgaggaccg ctttcgctgg agcgcgacga tgatcggcct gtcgcttgcg gtattcggaa
     2101 tcttgcacgc cctcgctcaa gccttcgtca ctggtcccgc caccaaacgt ttcggcgaga
     2161 agcaggccat tatcgccggc atggcggccc cacgggtgcg catgatcgtg ctcctgtcgt
     2221 tgaggacccg gctaggctgg cggggttgcc ttactggtta gcagaatgaa tcaccgatac
     2281 gcgagcgaac gtgaagcgac tgctgctgca aaacgtctgc gacctgagca acaacatgaa
     2341 tggtcttcgg tttccgtgtt tcgtaaagtc tggaaacgcg gaagtcagcg ccctgcacca
     2401 ttatgttccg gatctgcatc gcaggatgct gctggctacc ctgtggaaca cctacatctg
     2461 tattaacgaa gcgctggcat tgaccctgag tgatttttct ctggtcccgc cgcatccata
     2521 ccgccagttg tttaccctca caacgttcca gtaaccgggc atgttcatca tcagtaaccc
     2581 gtatcgtgag catcctctct cgtttcatcg gtatcattac ccccatgaac agaaatcccc
     2641 cttacacgga ggcatcagtg accaaacagg aaaaaaccgc ccttaacatg gcccgcttta
     2701 tcagaagcca gacattaacg cttctggaga aactcaacga gctggacgcg gatgaacagg
     2761 cagacatctg tgaatcgctt cacgaccacg ctgatgagct ttaccgcagc tgcctcgcgc
     2821 gtttcggtga tgacggtgaa aacctctgac acatgcagct cccggagacg gtcacagctt
     2881 gtctgtaagc ggatgccggg agcagacaag cccgtcaggg cgcgtcagcg ggtgttggcg
     2941 ggtgtcgggg cgcagccatg acccagtcac gtagcgatag cggagtgtat actggcttaa
     3001 ctatgcggca tcagagcaga ttgtactgag agtgcaccat atatgcggtg tgaaataccg
     3061 cacagatgcg taaggagaaa ataccgcatc aggcgctctt ccgcttcctc gctcactgac
     3121 tcgctgcgct cggtcgttcg gctgcggcga gcggtatcag ctcactcaaa ggcggtaata
     3181 cggttatcca cagaatcagg ggataacgca ggaaagaaca tgtgagcaaa aggccagcaa
     3241 aaggccagga accgtaaaaa ggccgcgttg ctggcgtttt tccataggct ccgcccccct
     3301 gacgagcatc acaaaaatcg acgctcaagt cagaggtggc gaaacccgac aggactataa
     3361 agataccagg cgtttccccc tggaagctcc ctcgtgcgct ctcctgttcc gaccctgccg
     3421 cttaccggat acctgtccgc ctttctccct tcgggaagcg tggcgctttc tcatagctca
     3481 cgctgtaggt atctcagttc ggtgtaggtc gttcgctcca agctgggctg tgtgcacgaa
     3541 ccccccgttc agcccgaccg ctgcgcctta tccggtaact atcgtcttga gtccaacccg
     3601 gtaagacacg acttatcgcc actggcagca gccactggta acaggattag cagagcgagg
     3661 tatgtaggcg gtgctacaga gttcttgaag tggtggccta actacggcta cactagaagg
     3721 acagtatttg gtatctgcgc tctgctgaag ccagttacct tcggaaaaag agttggtagc
     3781 tcttgatccg gcaaacaaac caccgctggt agcggtggtt tttttgtttg caagcagcag
     3841 attacgcgca gaaaaaaagg atctcaagaa gatcctttga tcttttctac ggggtctgac
     3901 gctcagtgga acgaaaactc acgttaaggg attttggtca tgagattatc aaaaaggatc
     3961 ttcacctaga tccttttaaa ttaaaaatga agttttaaat caatctaaag tatatatgag
     4021 taaacttggt ctgacagtta ccaatgctta atcagtgagg cacctatctc agcgatctgt
     4081 ctatttcgtt catccatagt tgcctgactc cccgtcgtgt agataactac gatacgggag
     4141 ggcttaccat ctggccccag tgctgcaatg ataccgcgag acccacgctc accggctcca
     4201 gatttatcag caataaacca gccagccgga agggccgagc gcagaagtgg tcctgcaact
     4261 ttatccgcct ccatccagtc tattaattgt tgccgggaag ctagagtaag tagttcgcca
     4321 gttaatagtt tgcgcaacgt tgttgccatt gctgcaggca tcgtggtgtc acgctcgtcg
     4381 tttggtatgg cttcattcag ctccggttcc caacgatcaa ggcgagttac atgatccccc
     4441 atgttgtgca aaaaagcggt tagctccttc ggtcctccga tcgttgtcag aagtaagttg
     4501 gccgcagtgt tatcactcat ggttatggca gcactgcata attctcttac tgtcatgcca
     4561 tccgtaagat gcttttctgt gactggtgag tactcaacca agtcattctg agaatagtgt
     4621 atgcggcgac cgagttgctc ttgcccggcg tcaatacggg ataataccgc gccacatagc
     4681 agaactttaa aagtgctcat cattggaaaa cgttcttcgg ggcgaaaact ctcaaggatc
     4741 ttaccgctgt tgagatccag ttcgatgtaa cccactcgtg cacccaactg atcttcagca
     4801 tcttttactt tcaccagcgt ttctgggtga gcaaaaacag gaaggcaaaa tgccgcaaaa
     4861 aagggaataa gggcgacacg gaaatgttga atactcatac tcttcctttt tcaaattatt
     4921 gaagcattta tcagggttat tgtctcatga gcggatacat atttgaatgt atttagaaaa
     4981 ataaacaaat aggggttccg cgcacatttc cccgaaaagt gccacctaaa ttgtaagcgt
     5041 taatgtgaac catcacccta atcaagtttt ttggggtcga ggtgccgtaa agcactaaat
     5101 cggaacccta aagggagccc ccgatttaga gcttgacggg gaaagccggc gaacgtggcg
     5161 agaaaggaag ggaagaaagc gaaaggagcg ggcgctaggg cgctggcaag tgtagcggtc
     5221 acgctgcgcg taaccaccac acccgccgcg cttaatgcgc cgctacaggg cgcgtcccat
     5281 tcgcca
//

质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
         收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
         1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              ①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
              ②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
              ③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
              ④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
              ⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
              ⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
        2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
              四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
        3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
        4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              直接挑取单菌落至液体培养基中。
        5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
              单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
        6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。

二、转化图片

P3137/pGL4.48[luc2P SBE Hygro]哺乳报告质粒

P3138/pGL4.49[luc2P TCF-LEF RE Hygro]哺乳报告质粒

P3139/pGL4.52[luc2P STAT5 RE Hygro]哺乳报告质粒

P1227/pGL4.70[hRluc]哺乳报告质粒

P0408/pGL4.73[hRluc /SV40]哺乳报告质粒

P0873/pGL4.74[hRluc-TK]哺乳报告质粒

P0211/pGL4.75[hRluc-CMV]哺乳报告质粒

P4940/pGL4.78[hRlucCP/Hygro] 哺乳报告质粒

P0209/pGL4.79[hRluc-Neo]哺乳报告质粒

P4365/pGL4.84[hRlucCP Puro]哺乳报告质粒