pBAD/His C大肠表达质粒

基本信息
名称：pBAD/His C大肠表达质粒
别称: pBAD-HisC

启动子:	araBAD
复制子:	pBR322
终止子:	rrnB T1 terminator
质粒分类:	大肠系列质粒；大肠表达质粒；pBAD系列质粒
质粒大小:	4100bp
质粒标签:	N-His, N-EK，N-xPress Epitope
原核抗性:	Amp
克隆菌株:	DH5a
培养条件:	37度
表达宿主:	LMG194等大肠杆菌
培养条件:	37℃，有氧，LB
诱导方式:	阿拉伯糖
5'测序引物:	PBAD30.F（AGATTAGCGGATCCTACCTG）
3'测序引物:	PBAD30.R（CACTTCTGAGTTCGGCATGG）

质粒属性

载体宿主：	大肠杆菌
载体用途：	蛋白表达
基因种属：	空载体
基因类型：	ORF
原核抗性：	Amp
真核抗性：
荧光蛋白：

质粒简介
  pBAD/His和PBAD/Myc-His载体质粒是衍生于pBR322载体。载体设计用来在大肠杆菌中进行可调节，剂量依赖性的表达和纯化重组目的蛋白。使用大肠杆菌araBAD启动子（pBAD）增强了大肠杆菌重组蛋白可溶性表达的水平。pBAD/His和pBAD/Myc His载体上的调节蛋白AraC能够调控pBad启动子。pBAD/Myc-His A 载体是阿拉伯糖调控载体；在无葡萄糖的培养基中，阿拉伯糖正向调控目的基因的表达；通过调节阿拉伯糖的浓度水平来优化目的蛋白的可溶性表达

质粒图谱


质粒序列
LOCUS       Exported                4100 bp ds-DNA     circular SYN 13-SEP-2016
DEFINITION  synthetic circular DNA
KEYWORDS    pBADHis-C
SOURCE      synthetic DNA construct
  ORGANISM  synthetic DNA construct
REFERENCE   1  (bases 1 to 4100)
  TITLE     Direct Submission
  JOURNAL   Exported Tuesday, September 13, 2016 from MiaoLingPlasmid
            http://www.miaolingbio.com
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..4100
                     /organism="synthetic DNA construct"
                     /mol_type="other DNA"
     promoter        120..285
                     /gene="araBAD"
                     /note="araBAD promoter"
                     /note="promoter of the L-arabinose operon of E. coli; the
                     araC regulatory gene is transcribed in the opposite
                     direction"
     CDS             331..348
                     /codon_start=1
                     /product="6xHis affinity tag"
                     /note="6xHis"
                     /translation="HHHHHH"
     CDS             352..384
                     /codon_start=1
                     /product="leader peptide from bacteriophage T7 gene 10"
                     /note="T7 tag (gene 10 leader)"
                     /note="promotes efficient translation in E. coli"
                     /translation="MASMTGGQQMG"
     CDS             388..411
                     /codon_start=1
                     /product="Xpress(TM) epitope tag, including an enterokinase
                     recognition and cleavage site"
                     /note="Xpress(TM) tag"
                     /translation="DLYDDDDK"
     terminator      671..757
                     /gene="Escherichia coli rrnB"
                     /note="rrnB T1 terminator"
                     /note="transcription terminator T1 from the E. coli rrnB
                     gene"
     terminator      849..876
                     /note="rrnB T2 terminator"
                     /note="transcription terminator T2 from the E. coli rrnB
                     gene"
     promoter        895..986
                     /gene="bla"
                     /note="AmpR promoter"
     CDS             987..1847
                     /codon_start=1
                     /gene="bla"
                     /product="beta-lactamase"
                     /note="AmpR"
                     /note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
                     related antibiotics"
                     /translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
                     ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRVDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
                     PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
                     EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
                     LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
                     LIKHW"
     rep_origin      2018..2606
                     /direction=RIGHT
                     /note="ori"
                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
                     replication"
     misc_feature    2792..2932
                     /note="bom"
                     /note="basis of mobility region from pBR322"
     CDS             complement(3196..4074)
                     /codon_start=1
                     /gene="araC"
                     /product="L-arabinose regulatory protein"
                     /note="araC"
                     /translation="MAEAQNDPLLPGYSFNAHLVAGLTPIEANGYLDFFIDRPLGMKGY
                     ILNLTIRGQGVVKNQGREFVCRPGDILLFPPGEIHHYGRHPEAREWYHQWVYFRPRAYW
                     HEWLNWPSIFANTGFFRPDEAHQPHFSDLFGQIINAGQGEGRYSELLAINLLEQLLLRR
                     MEAINESLHPPMDNRVREACQYISDHLADSNFDIASVAQHVCLSPSRLSHLFRQQLGIS
                     VLSWREDQRISQAKLLLSTTRMPIATVGRNVGFDDQLYFSRVFKKCTGASPSEFRAGCE
                     EKVNDVAVKLS"
ORIGIN
        1 aagaaaccaa ttgtccatat tgcatcagac attgccgtca ctgcgtcttt tactggctct
       61 tctcgctaac caaaccggta accccgctta ttaaaagcat tctgtaacaa agcgggacca
      121 aagccatgac aaaaacgcgt aacaaaagtg tctataatca cggcagaaaa gtccacattg
      181 attatttgca cggcgtcaca ctttgctatg ccatagcatt tttatccata agattagcgg
      241 atcctacctg acgcttttta tcgcaactct ctactgtttc tccatacccg ttttttgggc
      301 taacaggagg aattaaccat ggggggttct catcatcatc atcatcatgg tatggctagc
      361 atgactggtg gacagcaaat gggtcgggat ctgtacgacg atgacgataa ggatcgatgg
      421 atccgacctc gagatctgca gatggtacca tatgggaatt cgaagcttgg ctgttttggc
      481 ggatgagaga agattttcag cctgatacag attaaatcag aacgcagaag cggtctgata
      541 aaacagaatt tgcctggcgg cagtagcgcg gtggtcccac ctgaccccat gccgaactca
      601 gaagtgaaac gccgtagcgc cgatggtagt gtggggtctc cccatgcgag agtagggaac
      661 tgccaggcat caaataaaac gaaaggctca gtcgaaagac tgggcctttc gttttatctg
      721 ttgtttgtcg gtgaacgctc tcctgagtag gacaaatccg ccgggagcgg atttgaacgt
      781 tgcgaagcaa cggcccggag ggtggcgggc aggacgcccg ccataaactg ccaggcatca
      841 aattaagcag aaggccatcc tgacggatgg cctttttgcg tttctacaaa ctcttttgtt
      901 tatttttcta aatacattca aatatgtatc cgctcatgag acaataaccc tgataaatgc
      961 ttcaataata ttgaaaaagg aagagtatga gtattcaaca tttccgtgtc gcccttattc
     1021 ccttttttgc ggcattttgc cttcctgttt ttgctcaccc agaaacgctg gtgaaagtaa
     1081 aagatgctga agatcagttg ggtgcacgag tgggttacat cgaactggat ctcaacagcg
     1141 gtaagatcct tgagagtttt cgccccgaag aacgttttcc aatgatgagc acttttaaag
     1201 ttctgctatg tggcgcggta ttatcccgtg ttgacgccgg gcaagagcaa ctcggtcgcc
     1261 gcatacacta ttctcagaat gacttggttg agtactcacc agtcacagaa aagcatctta
     1321 cggatggcat gacagtaaga gaattatgca gtgctgccat aaccatgagt gataacactg
     1381 cggccaactt acttctgaca acgatcggag gaccgaagga gctaaccgct tttttgcaca
     1441 acatggggga tcatgtaact cgccttgatc gttgggaacc ggagctgaat gaagccatac
     1501 caaacgacga gcgtgacacc acgatgcctg tagcaatggc aacaacgttg cgcaaactat
     1561 taactggcga actacttact ctagcttccc ggcaacaatt aatagactgg atggaggcgg
     1621 ataaagttgc aggaccactt ctgcgctcgg cccttccggc tggctggttt attgctgata
     1681 aatctggagc cggtgagcgt gggtctcgcg gtatcattgc agcactgggg ccagatggta
     1741 agccctcccg tatcgtagtt atctacacga cggggagtca ggcaactatg gatgaacgaa
     1801 atagacagat cgctgagata ggtgcctcac tgattaagca ttggtaactg tcagaccaag
     1861 tttactcata tatactttag attgatttaa aacttcattt ttaatttaaa aggatctagg
     1921 tgaagatcct ttttgataat ctcatgacca aaatccctta acgtgagttt tcgttccact
     1981 gagcgtcaga ccccgtagaa aagatcaaag gatcttcttg agatcctttt tttctgcgcg
     2041 taatctgctg cttgcaaaca aaaaaaccac cgctaccagc ggtggtttgt ttgccggatc
     2101 aagagctacc aactcttttt ccgaaggtaa ctggcttcag cagagcgcag ataccaaata
     2161 ctgtccttct agtgtagccg tagttaggcc accacttcaa gaactctgta gcaccgccta
     2221 catacctcgc tctgctaatc ctgttaccag tggctgctgc cagtggcgat aagtcgtgtc
     2281 ttaccgggtt ggactcaaga cgatagttac cggataaggc gcagcggtcg ggctgaacgg
     2341 ggggttcgtg cacacagccc agcttggagc gaacgaccta caccgaactg agatacctac
     2401 agcgtgagct atgagaaagc gccacgcttc ccgaagggag aaaggcggac aggtatccgg
     2461 taagcggcag ggtcggaaca ggagagcgca cgagggagct tccaggggga aacgcctggt
     2521 atctttatag tcctgtcggg tttcgccacc tctgacttga gcgtcgattt ttgtgatgct
     2581 cgtcaggggg gcggagccta tggaaaaacg ccagcaacgc ggccttttta cggttcctgg
     2641 ccttttgctg gccttttgct cacatgttct ttcctgcgtt atcccctgat tctgtggata
     2701 accgtattac cgcctttgag tgagctgata ccgctcgccg cagccgaacg accgagcgca
     2761 gcgagtcagt gagcgaggaa gcggaagagc gcctgatgcg gtattttctc cttacgcatc
     2821 tgtgcggtat ttcacaccgc atatggtgca ctctcagtac aatctgctct gatgccgcat
     2881 agttaagcca gtatacactc cgctatcgct acgtgactgg gtcatggctg cgccccgaca
     2941 cccgccaaca cccgctgacg cgccctgacg ggcttgtctg ctcccggcat ccgcttacag
     3001 acaagctgtg accgtctccg ggagctgcat gtgtcagagg ttttcaccgt catcaccgaa
     3061 acgcgcgagg cagcagatca attcgcgcgc gaaggcgaag cggcatgcat aatgtgcctg
     3121 tcaaatggac gaagcaggga ttctgcaaac cctatgctac tccgtcaagc cgtcaattgt
     3181 ctgattcgtt accaattatg acaacttgac ggctacatca ttcacttttt cttcacaacc
     3241 ggcacggaac tcgctcgggc tggccccggt gcatttttta aatacccgcg agaaatagag
     3301 ttgatcgtca aaaccaacat tgcgaccgac ggtggcgata ggcatccggg tggtgctcaa
     3361 aagcagcttc gcctggctga tacgttggtc ctcgcgccag cttaagacgc taatccctaa
     3421 ctgctggcgg aaaagatgtg acagacgcga cggcgacaag caaacatgct gtgcgacgct
     3481 ggcgatatca aaattgctgt ctgccaggtg atcgctgatg tactgacaag cctcgcgtac
     3541 ccgattatcc atcggtggat ggagcgactc gttaatcgct tccatgcgcc gcagtaacaa
     3601 ttgctcaagc agatttatcg ccagcagctc cgaatagcgc ccttcccctt gcccggcgtt
     3661 aatgatttgc ccaaacaggt cgctgaaatg cggctggtgc gcttcatccg ggcgaaagaa
     3721 ccccgtattg gcaaatattg acggccagtt aagccattca tgccagtagg cgcgcggacg
     3781 aaagtaaacc cactggtgat accattcgcg agcctccgga tgacgaccgt agtgatgaat
     3841 ctctcctggc gggaacagca aaatatcacc cggtcggcaa acaaattctc gtccctgatt
     3901 tttcaccacc ccctgaccgc gaatggtgag attgagaata taacctttca ttcccagcgg
     3961 tcggtcgata aaaaaatcga gataaccgtt ggcctcaatc ggcgttaaac ccgccaccag
     4021 atgggcatta aacgagtatc ccggcagcag gggatcattt tgcgcttcag ccatactttt
     4081 catactcccg ccattcagag
//

质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
         收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
         1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              ①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
              ②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
              ③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
              ④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
              ⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
              ⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
        2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
              四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
        3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
        4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              直接挑取单菌落至液体培养基中。
        5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
              单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
        6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。

二、转化图片

P3664/pCMV-SPORT6-EFEMP2（1点突变）人源基因质粒

P3665/pCMV-SPORT6-LPL（点突变）人源基因质粒

P3666/pCMV-SPORT6-SPHK2人源基因质粒

P3667/pCMV-SPORT6-GDI1人源基因质粒

P3668/pCMV-SPORT6-SMARCC2人源基因质粒

P3669/pCMV-SPORT6-FXYD6人源基因质粒

P3670/pCMV-SPORT6-GFAP人源基因质粒

P3671/pCMV-SPORT6-HDAC6人源基因质粒

P3672/pCMV-SPORT6-NTRK3（1同义突变）人源基因质粒

P3673/pCMV-SPORT6-PAK4人源基因质粒

P3674/pCMV-SPORT6-PLK1人源基因质粒