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- 详细信息
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100
- 英文名：
pColdII
- 保质期：
一年
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
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-20
- 规格：
0.5ug
基本信息
名称：pCold II大肠表达质粒
别称: pColdII
质粒属性
质粒简介
当培养的大肠杆菌的温度充分降低，几乎暂时停止生长大部分的蛋白表达减少，而此时一组蛋白质称为“冷休克蛋白”被专门诱导表达。冷休克表达载体，pCold I-IV，是利用冷休克基因CSPA启动子设计高效率蛋白质表达载体。 CSPA的启动子的下游处，插入了lac操纵子，以便严格控制表达。此外，5'非翻译区（5'UTR），翻译增强元件（TEE），His标签序列，Xa因子切割位点和多克隆位点（MCS）位于在CSPA启动子的下游的。由于该产品采用了大肠杆菌的启动子，大多数大肠杆菌菌株可被用作表达宿主。有四种类型的 pCold载体，他们的下列原件的位置稍有不同，TEE，His标签序列和Factor XA酶切位点。
pColdII质粒是利用冷休克基因CSPA启动子设计高效率蛋白质表达载体。在E.COLI启动子下游处，插入了lac操纵子，以便严格控制表达。此外，5’非翻译区（5’UTR），翻译增强元件（TEE）,His标签序列，Xa因子切割位点和多克隆位点（MCS）位于CAPS启动子的下游。当培养温度切换到低温时，大肠杆菌暂时停止生长，大部分的大肠杆菌蛋白质表达减少，但是一类称为冷休克蛋白的蛋白质被特异性诱导表达。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 4392 bp ds-DNA circular SYN 13-SEP-2016
DEFINITION synthetic circular DNA
KEYWORDS Untitled 4
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 4392)
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported Tuesday, September 13, 2016 from MiaoLingPlasmid
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..4392
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
protein_bind 84..100
/bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
/note="lac operator"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
CDS 271..288
/codon_start=1
/product="6xHis affinity tag"
/note="6xHis"
/translation="HHHHHH"
rep_origin complement(696..1151)
/direction=LEFT
/note="f1 ori"
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
promoter 1251..1355
/gene="bla"
/note="AmpR promoter"
CDS 1356..2216
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/note="AmpR"
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
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/direction=RIGHT
/note="ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
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/codon_start=1
/gene="lacI"
/product="lac repressor"
/note="lacI"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
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NYIPNRVAQQLAGKQSLLIGVATSSLALHAPSQIVAAIKSRADQLGASVVVSMVERSGV
EACKAAVHNLLAQRVSGLIINYPLDDQDAIAVEAACTNVPALFLDVSDQTPINSIIFSH
EDGTRLGVEHLVALGHQQIALLAGPLSSVSARLRLAGWHKYLTRNQIQPIAEREGDWSA
MSGFQQTMQMLNEGIVPTAMLVANDQMALGAMRAITESGLRVGADISVVGYDDTEDSSC
YIPPLTTIKQDFRLLGQTSVDRLLQLSQGQAVKGNQLLPVSLVKRKTTLAPNTQTASPR
ALADSLMQLARQVSRLESGQ"
promoter complement(4230..4307)
/gene="lacI"
/note="lacI promoter"
ORIGIN
1 aaggaatggt gtggccgatt aatcataaat atgaaaaata attgttgcat cacccgccaa
61 tgcgtggctt aatgcacatc aaattgtgag cggataacaa tttgatgtgc tagcgcatat
121 ccagtgtagt aaggcaagtc ccttcaagag ttatcgttga tacccctcgt agtgcacatt
181 cctttaacgc ttcaaaatct gtaaagcacg ccatatcgcc gaaaggcaca cttaattatt
241 aagaggtaat acaccatgaa tcacaaagtg catcatcatc atcatcatat ggagctcggt
301 accctcgagg gatccgaatt caagcttgtc gacctgcagt ctagataggt aatctctgct
361 taaaagcaca gaatctaaga tccctgccat ttggcgggga tttttttatt tgttttcagg
421 aaataaataa tcgatcgcgt aataaaatct attattattt ttgtgaagaa taaatttggg
481 tgcaatgaga atgcgcaggc cctttcgtct cgcgcgtttc ggtgatgacg gtgaaaacct
541 ctgacacatg cagctcccgg agacggtcac agcttgtctg taagcggatg ccgggagcag
601 acaagcccgt cagggcgcgt cagcgggtgt tggcgggtgt cggggctggc ttaactatgc
661 ggcatcagag cagattgtac tgagagtgca ccataaaatt gtaaacgtta atattttgtt
721 aaaattcgcg ttaaattttt gttaaatcag ctcatttttt aaccaatagg ccgaaatcgg
781 caaaatccct tataaatcaa aagaatagcc cgagataggg ttgagtgttg ttccagtttg
841 gaacaagagt ccactattaa agaacgtgga ctccaacgtc aaagggcgaa aaaccgtcta
901 tcagggcgat ggcccactac gtgaaccatc acccaaatca agttttttgg ggtcgaggtg
961 ccgtaaagca ctaaatcgga accctaaagg gagcccccga tttagagctt gacggggaaa
1021 gccggcgaac gtggcgagaa aggaagggaa gaaagcgaaa ggagcgggcg ctagggcgct
1081 ggcaagtgta gcggtcacgc tgcgcgtaac caccacaccc gccgcgctta atgcgccgct
1141 acagggcgcg tactatggtt gctttgacgt atgcggtgtg aaataccgca cagatgcgta
1201 aggagaaaat accgcatcag gcgtcaggtg gcacttttcg gggaaatgtg cgcggaaccc
1261 ctatttgttt atttttctaa atacattcaa atatgtatcc gctcatgaga caataaccct
1321 gataaatgct tcaataatat tgaaaaagga agagtatgag tattcaacat ttccgtgtcg
1381 cccttattcc cttttttgcg gcattttgcc ttcctgtttt tgctcaccca gaaacgctgg
1441 tgaaagtaaa agatgctgaa gatcagttgg gtgcacgagt gggttacatc gaactggatc
1501 tcaacagcgg taagatcctt gagagttttc gccccgaaga acgttttcca atgatgagca
1561 cttttaaagt tctgctatgt ggcgcggtat tatcccgtat tgacgccggg caagagcaac
1621 tcggtcgccg catacactat tctcagaatg acttggttga gtactcacca gtcacagaaa
1681 agcatcttac ggatggcatg acagtaagag aattatgcag tgctgccata accatgagtg
1741 ataacactgc ggccaactta cttctgacaa cgatcggagg accgaaggag ctaaccgctt
1801 ttttgcacaa catgggggat catgtaactc gccttgatcg ttgggaaccg gagctgaatg
1861 aagccatacc aaacgacgag cgtgacacca cgatgcctgt agcaatggca acaacgttgc
1921 gcaaactatt aactggcgaa ctacttactc tagcttcccg gcaacaatta atagactgga
1981 tggaggcgga taaagttgca ggaccacttc tgcgctcggc ccttccggct ggctggttta
2041 ttgctgataa atctggagcc ggtgagcgtg ggtctcgcgg tatcattgca gcactggggc
2101 cagatggtaa gccctcccgt atcgtagtta tctacacgac ggggagtcag gcaactatgg
2161 atgaacgaaa tagacagatc gctgagatag gtgcctcact gattaagcat tggtaactgt
2221 cagaccaagt ttactcatat atactttaga ttgatttaaa acttcatttt taatttaaaa
2281 ggatctaggt gaagatcctt tttgataatc tcatgaccaa aatcccttaa cgtgagtttt
2341 cgttccactg agcgtcagac cccgtagaaa agatcaaagg atcttcttga gatccttttt
2401 ttctgcgcgt aatctgctgc ttgcaaacaa aaaaaccacc gctaccagcg gtggtttgtt
2461 tgccggatca agagctacca actctttttc cgaaggtaac tggcttcagc agagcgcaga
2521 taccaaatac tgttcttcta gtgtagccgt agttaggcca ccacttcaag aactctgtag
2581 caccgcctac atacctcgct ctgctaatcc tgttaccagt ggctgctgcc agtggcgata
2641 agtcgtgtct taccgggttg gactcaagac gatagttacc ggataaggcg cagcggtcgg
2701 gctgaacggg gggttcgtgc acacagccca gcttggagcg aacgacctac accgaactga
2761 gatacctaca gcgtgagcta tgagaaagcg ccacgcttcc cgaagggaga aaggcggaca
2821 ggtatccggt aagcggcagg gtcggaacag gagagcgcac gagggagctt ccagggggaa
2881 acgcctggta tctttatagt cctgtcgggt ttcgccacct ctgacttgag cgtcgatttt
2941 tgtgatgctc gtcagggggg cggagcctat ggaaaaacgc cagcaacgcg gcctttttac
3001 ggttcctggc cttttgctgg ccttttgctc acatagtcat gccccgcgcc caccggaagg
3061 agctgactgg gttgaaggct ctcaagggca tcggtcgaga tcccggtgcc taatgagtga
3121 gctaacttac attaattgcg ttgcgctcac tgcccgcttt ccagtcggga aacctgtcgt
3181 gccagctgca ttaatgaatc ggccaacgcg cggggagagg cggtttgcgt attgggcgcc
3241 agggtggttt ttcttttcac cagtgagacg ggcaacagct gattgccctt caccgcctgg
3301 ccctgagaga gttgcagcaa gcggtccacg ctggtttgcc ccagcaggcg aaaatcctgt
3361 ttgatggtgg ttaacggcgg gatataacat gagctgtctt cggtatcgtc gtatcccact
3421 accgagatat ccgcaccaac gcgcagcccg gactcggtaa tggcgcgcat tgcgcccagc
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4261 cgctatcatg ccataccgcg aaaggttttg cgccattcga tggtgtccgg gatctcgacg
4321 ctctccctta tgcgactcct gcattaggaa gcagcccagt agtaggttga ggccgttgag
4381 caccgccgcc gc
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pCold II大肠表达质粒
别称: pColdII
| 启动子: | CSPA |
|---|---|
| 复制子: | pBR322 |
| 质粒分类: | 大肠系列质粒；大肠表达质粒；pCold系列质粒 |
| 质粒大小: | 4392bp |
| 质粒标签: | N-His |
| 原核抗性: | Amp |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
| 表达宿主: | BL21等大肠杆菌 |
| 培养条件: | 37℃，有氧，LB |
| 诱导方式: | IPTG或乳糖及其类似物 |
| 5'测序引物: | pCold-F（ACGCCATATCGCCGAAAGG） |
| 3'测序引物: | pCold-R（GGCAGGGATCTTAGATTCTG） |
| 备注: | 冷休克蛋白表达载体 |
质粒属性
| 载体宿主： | 大肠杆菌 |
|---|---|
| 载体用途： | 蛋白表达 |
| 基因种属： | 空载体 |
| 基因类型： | ORF |
| 原核抗性： | Amp |
| 真核抗性： | |
| 荧光蛋白： |
质粒简介
当培养的大肠杆菌的温度充分降低，几乎暂时停止生长大部分的蛋白表达减少，而此时一组蛋白质称为“冷休克蛋白”被专门诱导表达。冷休克表达载体，pCold I-IV，是利用冷休克基因CSPA启动子设计高效率蛋白质表达载体。 CSPA的启动子的下游处，插入了lac操纵子，以便严格控制表达。此外，5'非翻译区（5'UTR），翻译增强元件（TEE），His标签序列，Xa因子切割位点和多克隆位点（MCS）位于在CSPA启动子的下游的。由于该产品采用了大肠杆菌的启动子，大多数大肠杆菌菌株可被用作表达宿主。有四种类型的 pCold载体，他们的下列原件的位置稍有不同，TEE，His标签序列和Factor XA酶切位点。
pColdII质粒是利用冷休克基因CSPA启动子设计高效率蛋白质表达载体。在E.COLI启动子下游处，插入了lac操纵子，以便严格控制表达。此外，5’非翻译区（5’UTR），翻译增强元件（TEE）,His标签序列，Xa因子切割位点和多克隆位点（MCS）位于CAPS启动子的下游。当培养温度切换到低温时，大肠杆菌暂时停止生长，大部分的大肠杆菌蛋白质表达减少，但是一类称为冷休克蛋白的蛋白质被特异性诱导表达。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 4392 bp ds-DNA circular SYN 13-SEP-2016
DEFINITION synthetic circular DNA
KEYWORDS Untitled 4
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 4392)
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported Tuesday, September 13, 2016 from MiaoLingPlasmid
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..4392
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
protein_bind 84..100
/bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
/note="lac operator"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
CDS 271..288
/codon_start=1
/product="6xHis affinity tag"
/note="6xHis"
/translation="HHHHHH"
rep_origin complement(696..1151)
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/note="f1 ori"
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
promoter 1251..1355
/gene="bla"
/note="AmpR promoter"
CDS 1356..2216
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/note="AmpR"
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
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EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
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replication"
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/gene="lacI"
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/note="lacI"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
/translation="MKPVTLYDVAEYAGVSYQTVSRVVNQASHVSAKTREKVEAAMAEL
NYIPNRVAQQLAGKQSLLIGVATSSLALHAPSQIVAAIKSRADQLGASVVVSMVERSGV
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promoter complement(4230..4307)
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ORIGIN
1 aaggaatggt gtggccgatt aatcataaat atgaaaaata attgttgcat cacccgccaa
61 tgcgtggctt aatgcacatc aaattgtgag cggataacaa tttgatgtgc tagcgcatat
121 ccagtgtagt aaggcaagtc ccttcaagag ttatcgttga tacccctcgt agtgcacatt
181 cctttaacgc ttcaaaatct gtaaagcacg ccatatcgcc gaaaggcaca cttaattatt
241 aagaggtaat acaccatgaa tcacaaagtg catcatcatc atcatcatat ggagctcggt
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601 acaagcccgt cagggcgcgt cagcgggtgt tggcgggtgt cggggctggc ttaactatgc
661 ggcatcagag cagattgtac tgagagtgca ccataaaatt gtaaacgtta atattttgtt
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781 caaaatccct tataaatcaa aagaatagcc cgagataggg ttgagtgttg ttccagtttg
841 gaacaagagt ccactattaa agaacgtgga ctccaacgtc aaagggcgaa aaaccgtcta
901 tcagggcgat ggcccactac gtgaaccatc acccaaatca agttttttgg ggtcgaggtg
961 ccgtaaagca ctaaatcgga accctaaagg gagcccccga tttagagctt gacggggaaa
1021 gccggcgaac gtggcgagaa aggaagggaa gaaagcgaaa ggagcgggcg ctagggcgct
1081 ggcaagtgta gcggtcacgc tgcgcgtaac caccacaccc gccgcgctta atgcgccgct
1141 acagggcgcg tactatggtt gctttgacgt atgcggtgtg aaataccgca cagatgcgta
1201 aggagaaaat accgcatcag gcgtcaggtg gcacttttcg gggaaatgtg cgcggaaccc
1261 ctatttgttt atttttctaa atacattcaa atatgtatcc gctcatgaga caataaccct
1321 gataaatgct tcaataatat tgaaaaagga agagtatgag tattcaacat ttccgtgtcg
1381 cccttattcc cttttttgcg gcattttgcc ttcctgtttt tgctcaccca gaaacgctgg
1441 tgaaagtaaa agatgctgaa gatcagttgg gtgcacgagt gggttacatc gaactggatc
1501 tcaacagcgg taagatcctt gagagttttc gccccgaaga acgttttcca atgatgagca
1561 cttttaaagt tctgctatgt ggcgcggtat tatcccgtat tgacgccggg caagagcaac
1621 tcggtcgccg catacactat tctcagaatg acttggttga gtactcacca gtcacagaaa
1681 agcatcttac ggatggcatg acagtaagag aattatgcag tgctgccata accatgagtg
1741 ataacactgc ggccaactta cttctgacaa cgatcggagg accgaaggag ctaaccgctt
1801 ttttgcacaa catgggggat catgtaactc gccttgatcg ttgggaaccg gagctgaatg
1861 aagccatacc aaacgacgag cgtgacacca cgatgcctgt agcaatggca acaacgttgc
1921 gcaaactatt aactggcgaa ctacttactc tagcttcccg gcaacaatta atagactgga
1981 tggaggcgga taaagttgca ggaccacttc tgcgctcggc ccttccggct ggctggttta
2041 ttgctgataa atctggagcc ggtgagcgtg ggtctcgcgg tatcattgca gcactggggc
2101 cagatggtaa gccctcccgt atcgtagtta tctacacgac ggggagtcag gcaactatgg
2161 atgaacgaaa tagacagatc gctgagatag gtgcctcact gattaagcat tggtaactgt
2221 cagaccaagt ttactcatat atactttaga ttgatttaaa acttcatttt taatttaaaa
2281 ggatctaggt gaagatcctt tttgataatc tcatgaccaa aatcccttaa cgtgagtttt
2341 cgttccactg agcgtcagac cccgtagaaa agatcaaagg atcttcttga gatccttttt
2401 ttctgcgcgt aatctgctgc ttgcaaacaa aaaaaccacc gctaccagcg gtggtttgtt
2461 tgccggatca agagctacca actctttttc cgaaggtaac tggcttcagc agagcgcaga
2521 taccaaatac tgttcttcta gtgtagccgt agttaggcca ccacttcaag aactctgtag
2581 caccgcctac atacctcgct ctgctaatcc tgttaccagt ggctgctgcc agtggcgata
2641 agtcgtgtct taccgggttg gactcaagac gatagttacc ggataaggcg cagcggtcgg
2701 gctgaacggg gggttcgtgc acacagccca gcttggagcg aacgacctac accgaactga
2761 gatacctaca gcgtgagcta tgagaaagcg ccacgcttcc cgaagggaga aaggcggaca
2821 ggtatccggt aagcggcagg gtcggaacag gagagcgcac gagggagctt ccagggggaa
2881 acgcctggta tctttatagt cctgtcgggt ttcgccacct ctgacttgag cgtcgatttt
2941 tgtgatgctc gtcagggggg cggagcctat ggaaaaacgc cagcaacgcg gcctttttac
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4201 gcgacatcgt ataacgttac tggtttcaca ttcaccaccc tgaattgact ctcttccggg
4261 cgctatcatg ccataccgcg aaaggttttg cgccattcga tggtgtccgg gatctcgacg
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质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
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文献和实验相关实验
-1,pBADHis, pBADHislacZ，pLLP ompA, pINIIIompA, pMBP-P ,pMBP-C 共表达质粒：pCDFduet-1 以及pCDNA3.1，pEGFP-N2等 大肠杆菌Rosetta（DE3），Rasettagame（DE3），Top10F', BL21(DE3)plySS 等 酵母表达质粒： pPICZαA, pGAPZαA, 酵母细胞 KM71, X33 yingzi
原核表达载体 pQE80L 大肠杆菌质粒 Amp pCold I 大肠杆菌质粒 Amp 冷启动表达载体，His标签 pCold II 大肠杆菌质粒 Amp 冷启动表达载体，His标签
菌体未被有效裂解。解决方法：注意将细菌悬浮充分。 （3）加 Solution III 后中和不充分。解决方法：如果细菌用量较多，请注意多翻转几次直至中和后的沉淀呈松散的豆腐花状(也可以稍用力混合直至沉淀呈松散的豆腐花状)。 （4）Solution II 出现沉淀。解决方法：如果实验室内温度低于 15℃，使用试剂盒前请注意观察 Solution II 中是否出现沉淀。如果出现沉淀，请于 37℃ 水浴溶解沉淀后再使用。 （5）Solution II 长时间暴露于空气中被 CO2 中和，导致菌体未能
pCold II大肠表达质粒
￥580 - 1280
