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- 上海
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
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100
- 英文名：
pQE80L
- 保质期：
一年
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 保存条件：
-20
- 规格：
0.5ug
基本信息
名称：pQE-80L大肠表达质粒
别称：pQE80L
质粒属性
荧光蛋白：
质粒简介
pQE-80L是一个大肠杆菌蛋白表达质粒。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported File 4751 bp ds-DNA circular SYN 01-2-2015
KEYWORDS Untitled 4
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 4751)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported 2015-2-1 from MLCC
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..4751
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
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/note="T5 promoter"
/note="bacteriophage T5 promoter for E. coli RNA
polymerase, with embedded lac operator"
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/bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
/note="lac operator"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
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/bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
/note="lac operator"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
CDS 127..144
/codon_start=1
/product="6xHis affinity tag"
/note="6xHis"
/translation="HHHHHH"
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/gene="
"
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/note="CmR"
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/gene="Escherichia coli rrnB"
/note="rrnB T1 terminator"
/note="transcription terminator T1 from the E. coli rrnB
gene"
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/codon_start=1
/gene="lacI"
/product="lac repressor"
/note="lacI"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
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YIPPLTTIKQDFRLLGQTSVDRLLQLSQGQAVKGNQLLPVSLVKRKTTLAPNTQTASPR
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/gene="lacI (mutant)"
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/note="In the lacIq allele, a single base change in the
promoter boosts expression of the lacI gene about 10-fold."
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/note="basis of mobility region from pBR322"
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replication"
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LIKHW"
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/gene="bla"
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ORIGIN
1 ctcgagaaat cataaaaaat ttatttgctt tgtgagcgga taacaattat aatagattca
61 attgtgagcg gataacaatt tcacacagaa ttcattaaag aggagaaatt aactatgaga
121 ggatcgcatc accatcacca tcacggatcc gcatgcgagc tcggtacccc gggtcgacct
181 gcagccaagc ttaattagct gagcttggac tcctgttgat agatccagta atgacctcag
241 aactccatct ggatttgttc agaacgctcg gttgccgccg ggcgtttttt attggtgaga
301 atccaagcta gcttggcgag attttcagga gctaaggaag ctaaaatgga gaaaaaaatc
361 actggatata ccaccgttga tatatcccaa tggcatcgta aagaacattt tgaggcattt
421 cagtcagttg ctcaatgtac ctataaccag accgttcagc tggatattac ggccttttta
481 aagaccgtaa agaaaaataa gcacaagttt tatccggcct ttattcacat tcttgcccgc
541 ctgatgaatg ctcatccgga atttcgtatg gcaatgaaag acggtgagct ggtgatatgg
601 gatagtgttc acccttgtta caccgttttc catgagcaaa ctgaaacgtt ttcatcgctc
661 tggagtgaat accacgacga tttccggcag tttctacaca tatattcgca agatgtggcg
721 tgttacggtg aaaacctggc ctatttccct aaagggttta ttgagaatat gtttttcgtc
781 tcagccaatc cctgggtgag tttcaccagt tttgatttaa acgtggccaa tatggacaac
841 ttcttcgccc ccgttttcac catgggcaaa tattatacgc aaggcgacaa ggtgctgatg
901 ccgctggcga ttcaggttca tcatgccgtt tgtgatggct tccatgtcgg cagaatgctt
961 aatgaattac aacagtactg cgatgagtgg cagggcgggg cgtaattttt ttaaggcagt
1021 tattggtgcc cttaaacgcc tggggtaatg actctctagc ttgaggcatc aaataaaacg
1081 aaaggctcag tcgaaagact gggcctttcg ttttatctgt tgtttgtcgg tgaacgctct
1141 cctgagtagg acaaatccgc cctctagatt acgtgcagtc gatgataagc tgtcaaacat
1201 gagaattgtg cctaatgagt gagctaactt acattaattg cgttgcgctc actgcccgct
1261 ttccagtcgg gaaacctgtc gtgccagctg cattaatgaa tcggccaacg cgcggggaga
1321 ggcggtttgc gtattgggcg ccagggtggt ttttcttttc accagtgaga cgggcaacag
1381 ctgattgccc ttcaccgcct ggccctgaga gagttgcagc aagcggtcca cgctggtttg
1441 ccccagcagg cgaaaatcct gtttgatggt ggttaacggc gggatataac atgagctgtc
1501 ttcggtatcg tcgtatccca ctaccgagat atccgcacca acgcgcagcc cggactcggt
1561 aatggcgcgc attgcgccca gcgccatctg atcgttggca accagcatcg cagtgggaac
1621 gatgccctca ttcagcattt gcatggtttg ttgaaaaccg gacatggcac tccagtcgcc
1681 ttcccgttcc gctatcggct gaatttgatt gcgagtgaga tatttatgcc agccagccag
1741 acgcagacgc gccgagacag aacttaatgg gcccgctaac agcgcgattt gctggtgacc
1801 caatgcgacc agatgctcca cgcccagtcg cgtaccgtct tcatgggaga aaataatact
1861 gttgatgggt gtctggtcag agacatcaag aaataacgcc ggaacattag tgcaggcagc
1921 ttccacagca atggcatcct ggtcatccag cggatagtta atgatcagcc cactgacgcg
1981 ttgcgcgaga agattgtgca ccgccgcttt acaggcttcg acgccgcttc gttctaccat
2041 cgacaccacc acgctggcac ccagttgatc ggcgcgagat ttaatcgccg cgacaatttg
2101 cgacggcgcg tgcagggcca gactggaggt ggcaacgcca atcagcaacg actgtttgcc
2161 cgccagttgt tgtgccacgc ggttgggaat gtaattcagc tccgccatcg ccgcttccac
2221 tttttcccgc gttttcgcag aaacgtggct ggcctggttc accacgcggg aaacggtctg
2281 ataagagaca ccggcatact ctgcgacatc gtataacgtt actggtttca cattcaccac
2341 cctgaattga ctctcttccg ggcgctatca tgccataccg cgaaaggttt tgcaccattc
2401 gatggtgtcg gaatttcggg cagcgttggg tcctggccac gggtgcgcat gatctagagc
2461 tgcctcgcgc gtttcggtga tgacggtgaa aacctctgac acatgcagct cccggagacg
2521 gtcacagctt gtctgtaagc ggatgccggg agcagacaag cccgtcaggg cgcgtcagcg
2581 ggtgttggcg ggtgtcgggg cgcagccatg acccagtcac gtagcgatag cggagtgtat
2641 actggcttaa ctatgcggca tcagagcaga ttgtactgag agtgcaccat atgcggtgtg
2701 aaataccgca cagatgcgta aggagaaaat accgcatcag gcgctcttcc gcttcctcgc
2761 tcactgactc gctgcgctcg gtcgttcggc tgcggcgagc ggtatcagct cactcaaagg
2821 cggtaatacg gttatccaca gaatcagggg ataacgcagg aaagaacatg tgagcaaaag
2881 gccagcaaaa ggccaggaac cgtaaaaagg ccgcgttgct ggcgtttttc cataggctcc
2941 gcccccctga cgagcatcac aaaaatcgac gctcaagtca gaggtggcga aacccgacag
3001 gactataaag ataccaggcg tttccccctg gaagctccct cgtgcgctct cctgttccga
3061 ccctgccgct taccggatac ctgtccgcct ttctcccttc gggaagcgtg gcgctttctc
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3181 tgcacgaacc ccccgttcag cccgaccgct gcgccttatc cggtaactat cgtcttgagt
3241 ccaacccggt aagacacgac ttatcgccac tggcagcagc cactggtaac aggattagca
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3361 ctagaaggac agtatttggt atctgcgctc tgctgaagcc agttaccttc ggaaaaagag
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4141 gtaagttggc cgcagtgtta tcactcatgg ttatggcagc actgcataat tctcttactg
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4741 ttcgtcttca c
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pQE-80L大肠表达质粒
别称：pQE80L
| 启动子: | T5 |
|---|---|
| 复制子: | pBR322 |
| 终止子: | Lambda t0 |
| 质粒分类: | 大肠杆菌载体；pQE系列表达质粒 |
| 质粒大小: | 4751bp |
| 质粒标签: | 6*His |
| 原核抗性: | Amp |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
| 表达宿主: | M15 |
| 培养条件: | 37℃，有氧，LB |
| 诱导方式: | 无需诱导 |
| 5'测序引物: | pQE30-F: AGCGGATAACAATTTCACACAG |
| 3'测序引物: | pQE30-R: TTCTGAGGTCATTACTGGATC |
质粒属性
| 载体宿主： | 大肠杆菌 |
|---|---|
| 载体用途： | 蛋白表达 |
| 基因种属： | 空载体 |
| 基因类型： | ORF |
| 原核抗性： | Amp |
| 真核抗性： | |
| 荧光蛋白： |
荧光蛋白：
质粒简介
pQE-80L是一个大肠杆菌蛋白表达质粒。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported File 4751 bp ds-DNA circular SYN 01-2-2015
KEYWORDS Untitled 4
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 4751)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported 2015-2-1 from MLCC
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..4751
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
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/bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
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/note="The lac repressor binds to the lac operator to
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LIKHW"
promoter complement(4547..4651)
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ORIGIN
1 ctcgagaaat cataaaaaat ttatttgctt tgtgagcgga taacaattat aatagattca
61 attgtgagcg gataacaatt tcacacagaa ttcattaaag aggagaaatt aactatgaga
121 ggatcgcatc accatcacca tcacggatcc gcatgcgagc tcggtacccc gggtcgacct
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1621 gatgccctca ttcagcattt gcatggtttg ttgaaaaccg gacatggcac tccagtcgcc
1681 ttcccgttcc gctatcggct gaatttgatt gcgagtgaga tatttatgcc agccagccag
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1861 gttgatgggt gtctggtcag agacatcaag aaataacgcc ggaacattag tgcaggcagc
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1981 ttgcgcgaga agattgtgca ccgccgcttt acaggcttcg acgccgcttc gttctaccat
2041 cgacaccacc acgctggcac ccagttgatc ggcgcgagat ttaatcgccg cgacaatttg
2101 cgacggcgcg tgcagggcca gactggaggt ggcaacgcca atcagcaacg actgtttgcc
2161 cgccagttgt tgtgccacgc ggttgggaat gtaattcagc tccgccatcg ccgcttccac
2221 tttttcccgc gttttcgcag aaacgtggct ggcctggttc accacgcggg aaacggtctg
2281 ataagagaca ccggcatact ctgcgacatc gtataacgtt actggtttca cattcaccac
2341 cctgaattga ctctcttccg ggcgctatca tgccataccg cgaaaggttt tgcaccattc
2401 gatggtgtcg gaatttcggg cagcgttggg tcctggccac gggtgcgcat gatctagagc
2461 tgcctcgcgc gtttcggtga tgacggtgaa aacctctgac acatgcagct cccggagacg
2521 gtcacagctt gtctgtaagc ggatgccggg agcagacaag cccgtcaggg cgcgtcagcg
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3661 tatatgagta aacttggtct gacagttacc aatgcttaat cagtgaggca cctatctcag
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3781 tacgggaggg cttaccatct ggccccagtg ctgcaatgat accgcgagac ccacgctcac
3841 cggctccaga tttatcagca ataaaccagc cagccggaag ggccgagcgc agaagtggtc
3901 ctgcaacttt atccgcctcc atccagtcta ttaattgttg ccgggaagct agagtaagta
3961 gttcgccagt taatagtttg cgcaacgttg ttgccattgc tacaggcatc gtggtgtcac
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4081 gatcccccat gttgtgcaaa aaagcggtta gctccttcgg tcctccgatc gttgtcagaa
4141 gtaagttggc cgcagtgtta tcactcatgg ttatggcagc actgcataat tctcttactg
4201 tcatgccatc cgtaagatgc ttttctgtga ctggtgagta ctcaaccaag tcattctgag
4261 aatagtgtat gcggcgaccg agttgctctt gcccggcgtc aatacgggat aataccgcgc
4321 cacatagcag aactttaaaa gtgctcatca ttggaaaacg ttcttcgggg cgaaaactct
4381 caaggatctt accgctgttg agatccagtt cgatgtaacc cactcgtgca cccaactgat
4441 cttcagcatc ttttactttc accagcgttt ctgggtgagc aaaaacagga aggcaaaatg
4501 ccgcaaaaaa gggaataagg gcgacacgga aatgttgaat actcatactc ttcctttttc
4561 aatattattg aagcatttat cagggttatt gtctcatgag cggatacata tttgaatgta
4621 tttagaaaaa taaacaaata ggggttccgc gcacatttcc ccgaaaagtg ccacctgacg
4681 tctaagaaac cattattatc atgacattaa cctataaaaa taggcgtatc acgaggccct
4741 ttcgtcttca c
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质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P3963/pCMV-SPORT6-PAIP1（1点突变）人源基因质粒 |
| P3964/pCMV-SPORT6-TRIM63（1-975bpA709G）人源基因质粒 |
| P3965/pCMV-SPORT6-GALT（1点突变）人源基因质粒 |
| P3966/pCMV-SPORT6-SPSB1人源基因质粒 |
| P3967/pCMV-SPORT6-ZNF408人源基因质粒 |
| P3968/pCMV-SPORT6-ARHGDIA人源基因质粒 |
| P3969/pCMV-SPORT6-NCAPH2（219-1818bp）人源基因质粒 |
| P3971/pCMV-SPORT6-C11orf74人源基因质粒 |
| P3972/pCMV-SPORT6-PBXIP1人源基因质粒 |
| P3973/pCMV-SPORT6-USP48人源基因质粒 |
| P3974/pCMV-SPORT6-ABCD1人源基因质粒 |
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文献和实验相关实验
蛋白是相当重要的；同时可以纯化出那些完整表达的蛋白，一些在翻译过程中容易造成“暂停”现象的蛋白就不用怕纯化产物里含有不完整的产物。融合了6×组氨酸标签的有pQE-60和pQE-70，融合了6×His-DHFR的有pQE-16。 顺式抑制载体 pQE系列的表达载体一般情况下需要在M15菌株中进行表达的，但是设计的pQE80L系列就没有这种约束，它可以在任意大肠杆菌株中进行表达。这与一般的pQE载体利用M15中质粒pREP4的反式lacI抑制子调控不同，它是利用顺式lacIq调控产生大量lac抑制
蛋白；如果是纯化过程中蛋白易降解，则可以在纯化试剂中加入甘油以及蛋白酶抑制剂，并且确保整个操作在4度完成。 2、如何在E. coli中表达高度毒性的蛋白？ 在E. coli中表达高度毒性的蛋白往往是很困难的。毒性基因表达‘泄漏’会杀死宿主菌，尤其在早期的生长或转化后，可以使含有突变的不表达质粒的细菌选择性生长。因此，要表达高毒性的蛋白，需要更高水平的lac 抑制蛋白。推荐同时使用QIAGEN公司的pQE-80L系列表达载体和M15[pREP4]宿主菌。pQE-80L系列表达载体带有lac抑制子基因，宿主
-16、pQE-40，使生成目标多肽与DHFR的融合蛋白；如果是纯化过程中蛋白易降解，则可以在纯化试剂中加入甘油以及蛋白酶抑制剂，并且确保整个操作在4度完成。 2、如何在E. coli中表达高度毒性的蛋白？ 在E. coli中表达高度毒性的蛋白往往是很困难的。毒性基因表达‘泄漏’会杀死宿主菌，尤其在早期的生长或转化后，可以使含有突变的不表达质粒的细菌选择性生 长。因此，要表达高毒性的蛋白，需要更高水平的lac 抑制蛋白。推荐同时使用QIAGEN公司的pQE-80L系列表达载体和M15
pQE-80L大肠表达质粒
￥580 - 1280
