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- 2026年01月13日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
100
- 英文名：
pMalc5E
- 保质期：
一年
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 保存条件：
-20
- 规格：
0.5ug
基本信息
名称：pMal-c5E大肠表达质粒
别称: pMalc5E
质粒属性
质粒简介
pMal-c5E是一个大肠杆菌pMal系列表达质粒。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 5680 bp ds-DNA circular SYN 22-OCT-2016
DEFINITION synthetic circular DNA
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..5680
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
promoter 3..80
/gene="lacI (mutant)"
/note="lacIq promoter"
/note="In the lacIq allele, a single base change in the
promoter boosts expression of the lacI gene about 10-fold."
CDS 81..1163
/codon_start=1
/gene="lacI"
/product="lac repressor"
/note="lacI"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
/translation="MKPVTLYDVAEYAGVSYQTVSRVVNQASHVSAKTREKVEAAMAEL
NYIPNRVAQQLAGKQSLLIGVATSSLALHAPSQIVAAIKSRADQLGASVVVSMVERSGV
EACKAAVHNLLAQRVSGLIINYPLDDQDAIAVEAACTNVPALFLDVSDQTPINSIIFSH
EDGTRLGVEHLVALGHQQIALLAGPLSSVSARLRLAGWHKYLTRNQIQPIAEREGDWSA
MSGFQQTMQMLNEGIVPTAMLVANDQMALGAMRAITESGLRVGADISVVGYDDTEDSSC
YIPPLTTIKQDFRLLGQTSVDRLLQLSQGQAVKGNQLLPVSLVKRKTTLAPNTQTASPR
ALADSLMQLARQVSRLESGQ"
misc_feature 1406..1434
/note="tac promoter"
/note="strong E. coli promoter; hybrid between the trp and
lac UV5 promoters"
protein_bind 1442..1458
/bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
/note="lac operator"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
CDS 1528..2628
/codon_start=1
/gene="malE (mutated)"
/product="maltose binding protein from E. coli"
/note="MBP"
/note="This version of the gene does not encode a signal
sequence, so MBP will remain in the cytosol."
/translation="MKIEEGKLVIWINGDKGYNGLAEVGKKFEKDTGIKVTVEHPDKLE
EKFPQVAATGDGPDIIFWAHDRFGGYAQSGLLAEITPDKAFQDKLYPFTWDAVRYNGKL
IAYPIAVEALSLIYNKDLLPNPPKTWEEIPALDKELKAKGKSALMFNLQEPYFTWPLIA
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TAMTINGPWAWSNIDTSKVNYGVTVLPTFKGQPSKPFVGVLSAGINAASPNKELAKEFL
ENYLLTDEGLEAVNKDKPLGAVALKSYEEELVKDPRIAATMENAQKGEIMPNIPQMSAF
WYAVRTAVINAASGRQTVDEALKDAQT"
CDS 2677..2691
/codon_start=1
/product="enterokinase recognition and cleavage site"
/note="enterokinase site"
/translation="DDDDK"
terminator 2766..2852
/gene="Escherichia coli rrnB"
/note="rrnB T1 terminator"
/note="transcription terminator T1 from the E. coli rrnB
gene"
terminator 2944..2971
/note="rrnB T2 terminator"
/note="transcription terminator T2 from the E. coli rrnB
gene"
promoter 2999..3089
/gene="bla"
/note="AmpR promoter"
CDS 3090..3950
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/note="AmpR"
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
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LIKHW"
rep_origin 4038..4626
/direction=RIGHT
/note="ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(4996..5187)
/codon_start=1
/gene="rop"
/product="Rop protein, which maintains plasmids at low copy
number"
/note="rop"
/translation="MTKQEKTALNMARFIRSQTLTLLEKLNELDADEQADICESLHDHA
DELYRSCLARFGDDGENL"
ORIGIN
1 ccgacaccat cgaatggtgc aaaacctttc gcggtatggc atgatagcgc ccggaagaga
61 gtcaattcag ggtggtgaat gtgaaaccag taacgttata cgatgtcgca gagtatgccg
121 gtgtctctta tcagaccgtt tcccgcgtgg tgaaccaggc cagccacgtt tctgcgaaaa
181 cgcgggaaaa agtggaagcg gcgatggcgg agctgaatta cattcccaac cgcgtggcac
241 aacaactggc gggcaaacag tcgttgctga ttggcgttgc cacctccagt ctggccctgc
301 acgcgccgtc gcaaattgtc gcggcgatta aatctcgcgc cgatcaactg ggtgccagcg
361 tggtggtgtc gatggtagaa cgaagcggcg tcgaagcctg taaagcggcg gtgcacaatc
421 ttctcgcgca acgcgtcagt gggctgatca ttaactatcc gctggatgac caggatgcca
481 ttgctgtgga agctgcctgc actaatgttc cggcgttatt tcttgatgtc tctgaccaga
541 cacccatcaa cagtattatt ttctcccatg aagacggtac gcgactgggc gtggagcatc
601 tggtcgcatt gggtcaccag caaatcgcgc tgttagcggg cccattaagt tctgtctcgg
661 cgcgtctgcg tctggctggc tggcataaat atctcactcg caatcaaatt cagccgatag
721 cggaacggga aggcgactgg agtgccatgt ccggttttca acaaaccatg caaatgctga
781 atgagggcat cgttcccact gcgatgctgg ttgccaacga tcagatggcg ctgggcgcaa
841 tgcgcgccat taccgagtcc gggctgcgcg ttggtgcgga tatttcggta gtgggatacg
901 acgataccga agacagctca tgttatatcc cgccgttaac caccatcaaa caggattttc
961 gcctgctggg gcaaaccagc gtggaccgct tgctgcaact ctctcagggc caggcggtga
1021 agggcaatca gctgttgccc gtctcactgg tgaaaagaaa aaccaccctg gcgcccaata
1081 cgcaaaccgc ctctccccgc gcgttggccg attcattaat gcagctggca cgacaggttt
1141 cccgactgga aagcgggcag tgagcgcaac gcaattaatg taagttagct cactcattag
1201 gcacaattct catgtttgac agcttatcat cgactgcacg gtgcaccaat gcttctggcg
1261 tcaggcagcc atcggaagct gtggtatggc tgtgcaggtc gtaaatcact gcataattcg
1321 tgtcgctcaa ggcgcactcc cgttctggat aatgtttttt gcgccgacat cataacggtt
1381 ctggcaaata ttctgaaatg agctgttgac aattaatcat cggctcgtat aatgtgtgga
1441 attgtgagcg gataacaatt tcacacagga aacagccagt ccgtttaggt gttttcacga
1501 gcaattgacc aacaaggacc atagattatg aaaatcgaag aaggtaaact ggtaatctgg
1561 attaacggcg ataaaggcta taacggtctc gctgaagtcg gtaagaaatt cgagaaagat
1621 accggaatta aagtcaccgt tgagcatccg gataaactgg aagagaaatt cccacaggtt
1681 gcggcaactg gcgatggccc tgacattatc ttctgggcac acgaccgctt tggtggctac
1741 gctcaatctg gcctgttggc tgaaatcacc ccggacaaag cgttccagga caagctgtat
1801 ccgtttacct gggatgccgt acgttacaac ggcaagctga ttgcttaccc gatcgctgtt
1861 gaagcgttat cgctgattta taacaaagat ctgctgccga acccgccaaa aacctgggaa
1921 gagatcccgg cgctggataa agaactgaaa gcgaaaggta agagcgcgct gatgttcaac
1981 ctgcaagaac cgtacttcac ctggccgctg attgctgctg acgggggtta tgcgttcaag
2041 tatgaaaacg gcaagtacga cattaaagac gtgggcgtgg ataacgctgg cgcgaaagcg
2101 ggtctgacct tcctggttga cctgattaaa aacaaacaca tgaatgcaga caccgattac
2161 tccatcgcag aagctgcctt taataaaggc gaaacagcga tgaccatcaa cggcccgtgg
2221 gcatggtcca acatcgacac cagcaaagtg aattatggtg taacggtact gccgaccttc
2281 aagggtcaac catccaaacc gttcgttggc gtgctgagcg caggtattaa cgccgccagt
2341 ccgaacaaag agctggcaaa agagttcctc gaaaactatc tgctgactga tgaaggtctg
2401 gaagcggtta ataaagacaa accgctgggt gccgtagcgc tgaagtctta cgaggaagag
2461 ttggtgaaag atccgcgtat tgccgccact atggaaaacg cccagaaagg tgaaatcatg
2521 ccgaacatcc cgcagatgtc cgctttctgg tatgccgtgc gtactgcggt gatcaacgcc
2581 gccagcggtc gtcagactgt cgatgaagcc ctgaaagacg cgcagactaa ttcgagctcg
2641 aacaacaaca acaataacaa taacaacaac ctcggggatg acgatgacaa ggtaccgcat
2701 atgtccatgg gcggccgcga tatcgtcgac ggatccgaat tccctgcagg taattaaata
2761 agcttcaaat aaaacgaaag gctcagtcga aagactgggc ctttcgtttt atctgttgtt
2821 tgtcggtgaa cgctctcctg agtaggacaa atccgccggg agcggatttg aacgttgcga
2881 agcaacggcc cggagggtgg cgggcaggac gcccgccata aactgccagg catcaaatta
2941 agcagaaggc catcctgacg gatggccttt ttgcgtttct acaaactctt tcggtccgtt
3001 gtttattttt ctaaatacat tcaaatatgt atccgctcat gagacaataa ccctgataaa
3061 tgcttcaata atattgaaaa aggaagagta tgagtattca acatttccgt gtcgccctta
3121 ttcccttttt tgcggcattt tgccttcctg tttttgctca cccagaaacg ctggtgaaag
3181 taaaagatgc tgaagatcag ttgggtgcac gagtgggtta catcgaactg gatctcaaca
3241 gcggtaagat ccttgagagt tttcgccccg aagaacgttt cccaatgatg agcactttta
3301 aagttctgct atgtggcgcg gtattatccc gtgttgacgc cgggcaagag caactcggtc
3361 gccgcataca ctattctcag aatgacttgg ttgagtactc accagtcaca gaaaagcatc
3421 ttacggatgg catgacagta agagaattat gcagtgctgc cataaccatg agtgataaca
3481 ctgcggccaa cttacttctg acaacgatcg gaggaccgaa ggagctaacc gcttttttgc
3541 acaacatggg ggatcatgta actcgccttg atcgttggga accggagctg aatgaagcca
3601 taccaaacga cgagcgtgac accacgatgc ctgtagcaat ggcaacaacg ttgcgcaaac
3661 tattaactgg cgaactactt actctagctt cccggcaaca attaatagac tggatggagg
3721 cggataaagt tgcaggacca cttctgcgct cggcccttcc ggctggctgg tttattgctg
3781 ataaatctgg agccggtgag cgtgggtctc gcggtatcat tgcagcactg gggccagatg
3841 gtaagccctc ccgtatcgta gttatctaca cgacggggag tcaggcaact atggatgaac
3901 gaaatagaca gatcgctgag ataggtgcct cactgattaa gcattggtaa ctgtcagacc
3961 aagtttactc atatatactt tagattgatt tccttaggac tgagcgtcaa ccccgtagaa
4021 aagatcaaag gatcttcttg agatcctttt tttctgcgcg taatctgctg cttgcaaaca
4081 aaaaaaccac cgctaccagc ggtggtttgt ttgccggatc aagagctacc aactcttttt
4141 ccgaaggtaa ctggcttcag cagagcgcag ataccaaata ctgtccttct agtgtagccg
4201 tagttaggcc accacttcaa gaactctgta gcaccgccta catacctcgc tctgctaatc
4261 ctgttaccag tggctgctgc cagtggcgat aagtcgtgtc ttaccgggtt ggactcaaga
4321 cgatagttac cggataaggc gcagcggtcg ggctgaacgg ggggttcgtg cacacagccc
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4681 cacatgttct ttcctgcgtt atcccctgat tctgtggata accgtattac cgcctttgag
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//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pMal-c5E大肠表达质粒
别称: pMalc5E
| 启动子: | Tac |
|---|---|
| 复制子: | pBR322 |
| 质粒分类: | 大肠杆菌载体；pMal系列表达质粒 |
| 原核抗性: | Amp |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
质粒属性
| 载体宿主： | 大肠杆菌 |
|---|---|
| 载体用途： | 蛋白表达 |
| 基因种属： | 空载体 |
| 基因类型： | ORF |
| 原核抗性： | Amp |
| 真核抗性： | |
| 荧光蛋白： |
pMal-c5E是一个大肠杆菌pMal系列表达质粒。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 5680 bp ds-DNA circular SYN 22-OCT-2016
DEFINITION synthetic circular DNA
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..5680
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/mol_type="other DNA"
promoter 3..80
/gene="lacI (mutant)"
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promoter boosts expression of the lacI gene about 10-fold."
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inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
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inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
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/gene="malE (mutated)"
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CDS 2677..2691
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terminator 2944..2971
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promoter 2999..3089
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related antibiotics"
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number"
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ORIGIN
1 ccgacaccat cgaatggtgc aaaacctttc gcggtatggc atgatagcgc ccggaagaga
61 gtcaattcag ggtggtgaat gtgaaaccag taacgttata cgatgtcgca gagtatgccg
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421 ttctcgcgca acgcgtcagt gggctgatca ttaactatcc gctggatgac caggatgcca
481 ttgctgtgga agctgcctgc actaatgttc cggcgttatt tcttgatgtc tctgaccaga
541 cacccatcaa cagtattatt ttctcccatg aagacggtac gcgactgggc gtggagcatc
601 tggtcgcatt gggtcaccag caaatcgcgc tgttagcggg cccattaagt tctgtctcgg
661 cgcgtctgcg tctggctggc tggcataaat atctcactcg caatcaaatt cagccgatag
721 cggaacggga aggcgactgg agtgccatgt ccggttttca acaaaccatg caaatgctga
781 atgagggcat cgttcccact gcgatgctgg ttgccaacga tcagatggcg ctgggcgcaa
841 tgcgcgccat taccgagtcc gggctgcgcg ttggtgcgga tatttcggta gtgggatacg
901 acgataccga agacagctca tgttatatcc cgccgttaac caccatcaaa caggattttc
961 gcctgctggg gcaaaccagc gtggaccgct tgctgcaact ctctcagggc caggcggtga
1021 agggcaatca gctgttgccc gtctcactgg tgaaaagaaa aaccaccctg gcgcccaata
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1321 tgtcgctcaa ggcgcactcc cgttctggat aatgtttttt gcgccgacat cataacggtt
1381 ctggcaaata ttctgaaatg agctgttgac aattaatcat cggctcgtat aatgtgtgga
1441 attgtgagcg gataacaatt tcacacagga aacagccagt ccgtttaggt gttttcacga
1501 gcaattgacc aacaaggacc atagattatg aaaatcgaag aaggtaaact ggtaatctgg
1561 attaacggcg ataaaggcta taacggtctc gctgaagtcg gtaagaaatt cgagaaagat
1621 accggaatta aagtcaccgt tgagcatccg gataaactgg aagagaaatt cccacaggtt
1681 gcggcaactg gcgatggccc tgacattatc ttctgggcac acgaccgctt tggtggctac
1741 gctcaatctg gcctgttggc tgaaatcacc ccggacaaag cgttccagga caagctgtat
1801 ccgtttacct gggatgccgt acgttacaac ggcaagctga ttgcttaccc gatcgctgtt
1861 gaagcgttat cgctgattta taacaaagat ctgctgccga acccgccaaa aacctgggaa
1921 gagatcccgg cgctggataa agaactgaaa gcgaaaggta agagcgcgct gatgttcaac
1981 ctgcaagaac cgtacttcac ctggccgctg attgctgctg acgggggtta tgcgttcaag
2041 tatgaaaacg gcaagtacga cattaaagac gtgggcgtgg ataacgctgg cgcgaaagcg
2101 ggtctgacct tcctggttga cctgattaaa aacaaacaca tgaatgcaga caccgattac
2161 tccatcgcag aagctgcctt taataaaggc gaaacagcga tgaccatcaa cggcccgtgg
2221 gcatggtcca acatcgacac cagcaaagtg aattatggtg taacggtact gccgaccttc
2281 aagggtcaac catccaaacc gttcgttggc gtgctgagcg caggtattaa cgccgccagt
2341 ccgaacaaag agctggcaaa agagttcctc gaaaactatc tgctgactga tgaaggtctg
2401 gaagcggtta ataaagacaa accgctgggt gccgtagcgc tgaagtctta cgaggaagag
2461 ttggtgaaag atccgcgtat tgccgccact atggaaaacg cccagaaagg tgaaatcatg
2521 ccgaacatcc cgcagatgtc cgctttctgg tatgccgtgc gtactgcggt gatcaacgcc
2581 gccagcggtc gtcagactgt cgatgaagcc ctgaaagacg cgcagactaa ttcgagctcg
2641 aacaacaaca acaataacaa taacaacaac ctcggggatg acgatgacaa ggtaccgcat
2701 atgtccatgg gcggccgcga tatcgtcgac ggatccgaat tccctgcagg taattaaata
2761 agcttcaaat aaaacgaaag gctcagtcga aagactgggc ctttcgtttt atctgttgtt
2821 tgtcggtgaa cgctctcctg agtaggacaa atccgccggg agcggatttg aacgttgcga
2881 agcaacggcc cggagggtgg cgggcaggac gcccgccata aactgccagg catcaaatta
2941 agcagaaggc catcctgacg gatggccttt ttgcgtttct acaaactctt tcggtccgtt
3001 gtttattttt ctaaatacat tcaaatatgt atccgctcat gagacaataa ccctgataaa
3061 tgcttcaata atattgaaaa aggaagagta tgagtattca acatttccgt gtcgccctta
3121 ttcccttttt tgcggcattt tgccttcctg tttttgctca cccagaaacg ctggtgaaag
3181 taaaagatgc tgaagatcag ttgggtgcac gagtgggtta catcgaactg gatctcaaca
3241 gcggtaagat ccttgagagt tttcgccccg aagaacgttt cccaatgatg agcactttta
3301 aagttctgct atgtggcgcg gtattatccc gtgttgacgc cgggcaagag caactcggtc
3361 gccgcataca ctattctcag aatgacttgg ttgagtactc accagtcaca gaaaagcatc
3421 ttacggatgg catgacagta agagaattat gcagtgctgc cataaccatg agtgataaca
3481 ctgcggccaa cttacttctg acaacgatcg gaggaccgaa ggagctaacc gcttttttgc
3541 acaacatggg ggatcatgta actcgccttg atcgttggga accggagctg aatgaagcca
3601 taccaaacga cgagcgtgac accacgatgc ctgtagcaat ggcaacaacg ttgcgcaaac
3661 tattaactgg cgaactactt actctagctt cccggcaaca attaatagac tggatggagg
3721 cggataaagt tgcaggacca cttctgcgct cggcccttcc ggctggctgg tttattgctg
3781 ataaatctgg agccggtgag cgtgggtctc gcggtatcat tgcagcactg gggccagatg
3841 gtaagccctc ccgtatcgta gttatctaca cgacggggag tcaggcaact atggatgaac
3901 gaaatagaca gatcgctgag ataggtgcct cactgattaa gcattggtaa ctgtcagacc
3961 aagtttactc atatatactt tagattgatt tccttaggac tgagcgtcaa ccccgtagaa
4021 aagatcaaag gatcttcttg agatcctttt tttctgcgcg taatctgctg cttgcaaaca
4081 aaaaaaccac cgctaccagc ggtggtttgt ttgccggatc aagagctacc aactcttttt
4141 ccgaaggtaa ctggcttcag cagagcgcag ataccaaata ctgtccttct agtgtagccg
4201 tagttaggcc accacttcaa gaactctgta gcaccgccta catacctcgc tctgctaatc
4261 ctgttaccag tggctgctgc cagtggcgat aagtcgtgtc ttaccgggtt ggactcaaga
4321 cgatagttac cggataaggc gcagcggtcg ggctgaacgg ggggttcgtg cacacagccc
4381 agcttggagc gaacgaccta caccgaactg agatacctac agcgtgagct atgagaaagc
4441 gccacgcttc ccgaagggag aaaggcggac aggtatccgg taagcggcag ggtcggaaca
4501 ggagagcgca cgagggagct tccaggggga aacgcctggt atctttatag tcctgtcggg
4561 tttcgccacc tctgacttga gcgtcgattt ttgtgatgct cgtcaggggg gcggagccta
4621 tggaaaaacg ccagcaacgc ggccttttta cggttcctgg ccttttgctg gccttttgct
4681 cacatgttct ttcctgcgtt atcccctgat tctgtggata accgtattac cgcctttgag
4741 tgagctgata ccgctcgccg cagccgaacg accgagcgca gcgagtcagt gagcgaggaa
4801 gcggaagagc gcctgatgcg gtattttctc cttacgcatc tgtgcggtat ttcacaccgc
4861 atataaggtg cactgtgact gggtcatggc tgcgccccga cacccgccaa cacccgctga
4921 cgcgccctga cgggcttgtc tgctcccggc atccgcttac agacaagctg tgaccgtctc
4981 cgggagctgc atgtgtcaga ggttttcacc gtcatcaccg aaacgcgcga ggcagctgcg
5041 gtaaagctca tcagcgtggt cgtgcagcga ttcacagatg tctgcctgtt catccgcgtc
5101 cagctcgttg agtttctcca gaagcgttaa tgtctggctt ctgataaagc gggccatgtt
5161 aagggcggtt ttttcctgtt tggtcactga tgcctccgtg taagggggat ttctgttcat
5221 gggggtaatg ataccgatga aacgagagag gatgctcacg atacgggtta ctgatgatga
5281 acatgcccgg ttactggaac gttgtgaggg taaacaactg gcggtatgga tgcggcggga
5341 ccagagaaaa atcactcagg gtcaatgcca gcgcttcgtt aatacagatg taggtgttcc
5401 acagggtagc cagcagcatc ctgcgatgca gatccggaac ataatggtgc agggcgctga
5461 cttccgcgtt tccagacttt acgaaacacg gaaaccgaag accattcatg ttgttgctca
5521 ggtcgcagac gttttgcagc agcagtcgct tcacgttcgc tcgcgtatcg gtgattcatt
5581 ctgctaacca gtaaggcaac cccgccagcc tagccgggtc ctcaacgaca ggagcacgat
5641 catgcgcacc cgtggccagg acccaacgct gcccgaaatt
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质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P3861/pCMV-SPORT6-PGAP3人源基因质粒 |
| P3862/pCMV-SPORT6-GAK人源基因质粒 |
| P3863/pCMV-SPORT6-SLC46A1人源基因质粒 |
| P3864/pCMV-SPORT6-SLU7人源基因质粒 |
| P3865/pCMV-SPORT6-AHCYL1人源基因质粒 |
| P3866/pCMV-SPORT6-C15orf39(1同义突变）人源基因质粒 |
| P4882/pCMV-SPORT6-ACAA1（点突变）人源基因质粒 |
| P3867/pCMV-SPORT6-CBS（1同义突变）人源基因质粒 |
| P3868/pCMV-SPORT6-VPS33A人源基因质粒 |
| P3869/pCMV-SPORT6-SLC38A1（1同义突变）人源基因质粒 |
| P3870/pCMV-SPORT6-SF3A3（1同义突变）人源基因质粒 |
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文献和实验相关实验
α基因,目的基因的插入导致其失活,通过X-gal平板可进行蓝白斑筛选.pMAL载体都含有一段编码蛋白酶识别位点的序列,融合蛋白纯化后,通过Factor Xa(X),Enterokinase (E)或 Genenase™ I (G)可将目的蛋白与MBP切割分离.如果不想在切割后留下任何外源氨基酸可以在设计引物时引入XmnⅠ或KpnⅠ或SnaBⅠ位点. MBP融合表达更能提高E.coli表达蛋白的可溶性,可是它在大肠杆菌的表达含量不如T7等系列高.形成包涵体的主要原因之一是其表达速度
Binding Protein,MBP）的大肠杆菌malE基因，其下游的多克隆位点便于目的基因插入，表达N端带有MBP的融合蛋白。此系统的pMAL载体除了含有氨苄霉素抗性，还含有LacZα基因，目的基因的插入导致其失活，通过X-gal平板可进行蓝白斑筛选。pMAL载体都含有一段编码蛋白酶识别位点的序列，融合蛋白纯化后，通过Factor Xa（X），Enterokinase (E)或 Genenase™ I (G)可将目的蛋白与MBP切割分离。如果不想在切割后留下任何外源氨基酸可以在设计引物时引入XmnⅠ
(2010). 「☆Site-specific chromosomal integration of large synthetic constructs.」 Nucleic Acids Res 38(6): e92. 这篇文献，介绍了一种大肠杆菌染色体整合的方法，文中介绍了三个质粒，是由作者自己改造了，如何查找到这三个质粒图谱了呢？ 首先在 PubMed 中搜索到该文献，如下图。 很多人找到文献仅仅将文献下载下来就 OK 了，其实还有很多有用的信息，比如文章的 supplementary
pMal-c5E大肠表达质粒
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