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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
100
- 英文名：
pET32c
- 保质期：
一年
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 保存条件：
-20
- 规格：
0.5ug
基本信息
名称：pET-32c大肠表达质粒
别称: pET32c
质粒属性
质粒简介
pET-32C质粒是一个大肠杆菌表达载体，T7启动子驱动TrxA促溶标签和目的蛋白融合表达。
The pET-32 series is designed for cloning and high-level expression of peptide sequences fused with the 109aa Trx•Tag thioredoxin protein . Cloning sites are available for producing fusion proteins also containing cleavable His•Tag and S•Tag sequences for detection and purification. Unique sites are shown on the circle map. Note that the sequence is numbered by the pBR322 convention, so the T7 expression region is reversed on the circle map. The cloning/expression region of the coding strand transcribed by T7 RNA polymerase is shown below. The f1 origin is oriented so that infection with helper phage will produce virions containing single-stranded DNA that corresponds to the coding strand. Therefore, single-stranded sequencing should be performed using the T7 terminator primer .
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 5901 bp ds-DNA circular SYN 30-AUG-2016
DEFINITION synthetic circular DNA
KEYWORDS pET-32c
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 5901)
TITLE Direct Submission
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..5901
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
terminator 26..73
/note="T7 terminator"
/note="transcription terminator for bacteriophage T7 RNA
polymerase"
CDS complement(140..157)
/codon_start=1
/product="6xHis affinity tag"
/note="6xHis"
/translation="HHHHHH"
CDS complement(220..234)
/codon_start=1
/product="enterokinase recognition and cleavage site"
/note="enterokinase site"
/translation="DDDDK"
CDS complement(250..294)
/codon_start=1
/product="affinity and epitope tag derived from pancreatic
ribonuclease A"
/note="S-Tag"
/translation="KETAAAKFERQHMDS"
CDS complement(301..318)
/codon_start=1
/product="thrombin recognition and cleavage site"
/note="thrombin site"
/translation="LVPRGS"
CDS complement(328..345)
/codon_start=1
/product="6xHis affinity tag"
/note="6xHis"
/translation="HHHHHH"
CDS complement(367..693)
/codon_start=1
/gene="trxA"
/product="E. coli thioredoxin"
/note="TrxA"
/translation="MSDKIIHLTDDSFDTDVLKADGAILVDFWAEWCGPCKMIAPILDE
IADEYQGKLTVAKLNIDQNPGTAPKYGIRGIPTLLLFKNGEVAATKVGALSKGQLKEFL
DANLA"
protein_bind 738..762
/bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
/note="lac operator"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
promoter complement(763..781)
/note="T7 promoter"
/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
promoter 1094..1171
/gene="lacI"
/note="lacI promoter"
CDS 1172..2254
/codon_start=1
/gene="lacI"
/product="lac repressor"
/note="lacI"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
/translation="MKPVTLYDVAEYAGVSYQTVSRVVNQASHVSAKTREKVEAAMAEL
NYIPNRVAQQLAGKQSLLIGVATSSLALHAPSQIVAAIKSRADQLGASVVVSMVERSGV
EACKAAVHNLLAQRVSGLIINYPLDDQDAIAVEAACTNVPALFLDVSDQTPINSIIFSH
EDGTRLGVEHLVALGHQQIALLAGPLSSVSARLRLAGWHKYLTRNQIQPIAEREGDWSA
MSGFQQTMQMLNEGIVPTAMLVANDQMALGAMRAITESGLRVGADISVVGYDDTEDSSC
YIPPLTTIKQDFRLLGQTSVDRLLQLSQGQAVKGNQLLPVSLVKRKTTLAPNTQTASPR
ALADSLMQLARQVSRLESGQ"
CDS 3063..3254
/codon_start=1
/gene="rop"
/product="Rop protein"
/note="rop"
/translation="MTKQEKTALNMARFIRSQTLTLLEKLNELDADEQADICESLHDHA
DELYRSCLARFGDDGENL"
rep_origin complement(3684..4272)
/direction=LEFT
/note="ori"
/note="high-copy-number colE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(4443..5303)
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/note="AmpR"
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPAAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
promoter complement(5304..5408)
/gene="bla"
/note="AmpR promoter"
rep_origin complement(5435..5890)
/direction=LEFT
/note="f1 ori"
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
ORIGIN
1 atccggatat agttcctcct ttcagcaaaa aacccctcaa gacccgttta gaggccccaa
61 ggggttatgc tagttattgc tcagcggtgg cagcagccaa ctcagcttcc tttcgggctt
121 tgttagcagc cggatctcag tggtggtggt ggtggtgctc gagtgcggcc gcaagcttgt
181 cgacggagct cgaattcgga tccacagata tcccatggcc ttgtcgtcgt cgtcggtacc
241 cagatctggg ctgtccatgt gctggcgttc gaatttagca gcagcggttt ctttcatacc
301 agaaccgcgt ggcaccagac cagaagaatg atgatgatga tggtgcatat ggccagaacc
361 agaaccggcc aggttagcgt cgaggaactc tttcaactga cctttagaca gtgcacccac
421 tttggttgcc gccacttcac cgtttttgaa cagcagcaga gtcgggatac cacggatgcc
481 atatttcggc gcagtgccag ggttttgatc gatgttcagt tttgcaacgg tcagtttgcc
541 ctgatattcg tcagcgattt catccagaat cggggcgatc attttgcacg gaccgcacca
601 ctctgcccag aaatcgacga ggatcgcccc gtccgctttg agtacatccg tgtcaaaact
661 gtcgtcagtc aggtgaataa ttttatcgct catatgtata tctccttctt aaagttaaac
721 aaaattattt ctagagggga attgttatcc gctcacaatt cccctatagt gagtcgtatt
781 aatttcgcgg gatcgagatc gatctcgatc ctctacgccg gacgcatcgt ggccggcatc
841 accggcgcca caggtgcggt tgctggcgcc tatatcgccg acatcaccga tggggaagat
901 cgggctcgcc acttcgggct catgagcgct tgtttcggcg tgggtatggt ggcaggcccc
961 gtggccgggg gactgttggg cgccatctcc ttgcatgcac cattccttgc ggcggcggtg
1021 ctcaacggcc tcaacctact actgggctgc ttcctaatgc aggagtcgca taagggagag
1081 cgtcgagatc ccggacacca tcgaatggcg caaaaccttt cgcggtatgg catgatagcg
1141 cccggaagag agtcaattca gggtggtgaa tgtgaaacca gtaacgttat acgatgtcgc
1201 agagtatgcc ggtgtctctt atcagaccgt ttcccgcgtg gtgaaccagg ccagccacgt
1261 ttctgcgaaa acgcgggaaa aagtggaagc ggcgatggcg gagctgaatt acattcccaa
1321 ccgcgtggca caacaactgg cgggcaaaca gtcgttgctg attggcgttg ccacctccag
1381 tctggccctg cacgcgccgt cgcaaattgt cgcggcgatt aaatctcgcg ccgatcaact
1441 gggtgccagc gtggtggtgt cgatggtaga acgaagcggc gtcgaagcct gtaaagcggc
1501 ggtgcacaat cttctcgcgc aacgcgtcag tgggctgatc attaactatc cgctggatga
1561 ccaggatgcc attgctgtgg aagctgcctg cactaatgtt ccggcgttat ttcttgatgt
1621 ctctgaccag acacccatca acagtattat tttctcccat gaagacggta cgcgactggg
1681 cgtggagcat ctggtcgcat tgggtcacca gcaaatcgcg ctgttagcgg gcccattaag
1741 ttctgtctcg gcgcgtctgc gtctggctgg ctggcataaa tatctcactc gcaatcaaat
1801 tcagccgata gcggaacggg aaggcgactg gagtgccatg tccggttttc aacaaaccat
1861 gcaaatgctg aatgagggca tcgttcccac tgcgatgctg gttgccaacg atcagatggc
1921 gctgggcgca atgcgcgcca ttaccgagtc cgggctgcgc gttggtgcgg acatctcggt
1981 agtgggatac gacgataccg aagacagctc atgttatatc ccgccgttaa ccaccatcaa
2041 acaggatttt cgcctgctgg ggcaaaccag cgtggaccgc ttgctgcaac tctctcaggg
2101 ccaggcggtg aagggcaatc agctgttgcc cgtctcactg gtgaaaagaa aaaccaccct
2161 ggcgcccaat acgcaaaccg cctctccccg cgcgttggcc gattcattaa tgcagctggc
2221 acgacaggtt tcccgactgg aaagcgggca gtgagcgcaa cgcaattaat gtaagttagc
2281 tcactcatta ggcaccggga tctcgaccga tgcccttgag agccttcaac ccagtcagct
2341 ccttccggtg ggcgcggggc atgactatcg tcgccgcact tatgactgtc ttctttatca
2401 tgcaactcgt aggacaggtg ccggcagcgc tctgggtcat tttcggcgag gaccgctttc
2461 gctggagcgc gacgatgatc ggcctgtcgc ttgcggtatt cggaatcttg cacgccctcg
2521 ctcaagcctt cgtcactggt cccgccacca aacgtttcgg cgagaagcag gccattatcg
2581 ccggcatggc ggccccacgg gtgcgcatga tcgtgctcct gtcgttgagg acccggctag
2641 gctggcgggg ttgccttact ggttagcaga atgaatcacc gatacgcgag cgaacgtgaa
2701 gcgactgctg ctgcaaaacg tctgcgacct gagcaacaac atgaatggtc ttcggtttcc
2761 gtgtttcgta aagtctggaa acgcggaagt cagcgccctg caccattatg ttccggatct
2821 gcatcgcagg atgctgctgg ctaccctgtg gaacacctac atctgtatta acgaagcgct
2881 ggcattgacc ctgagtgatt tttctctggt cccgccgcat ccataccgcc agttgtttac
2941 cctcacaacg ttccagtaac cgggcatgtt catcatcagt aacccgtatc gtgagcatcc
3001 tctctcgttt catcggtatc attaccccca tgaacagaaa tcccccttac acggaggcat
3061 cagtgaccaa acaggaaaaa accgccctta acatggcccg ctttatcaga agccagacat
3121 taacgcttct ggagaaactc aacgagctgg acgcggatga acaggcagac atctgtgaat
3181 cgcttcacga ccacgctgat gagctttacc gcagctgcct cgcgcgtttc ggtgatgacg
3241 gtgaaaacct ctgacacatg cagctcccgg agacggtcac agcttgtctg taagcggatg
3301 ccgggagcag acaagcccgt cagggcgcgt cagcgggtgt tggcgggtgt cggggcgcag
3361 ccatgaccca gtcacgtagc gatagcggag tgtatactgg cttaactatg cggcatcaga
3421 gcagattgta ctgagagtgc accatatatg cggtgtgaaa taccgcacag atgcgtaagg
3481 agaaaatacc gcatcaggcg ctcttccgct tcctcgctca ctgactcgct gcgctcggtc
3541 gttcggctgc ggcgagcggt atcagctcac tcaaaggcgg taatacggtt atccacagaa
3601 tcaggggata acgcaggaaa gaacatgtga gcaaaaggcc agcaaaaggc caggaaccgt
3661 aaaaaggccg cgttgctggc gtttttccat aggctccgcc cccctgacga gcatcacaaa
3721 aatcgacgct caagtcagag gtggcgaaac ccgacaggac tataaagata ccaggcgttt
3781 ccccctggaa gctccctcgt gcgctctcct gttccgaccc tgccgcttac cggatacctg
3841 tccgcctttc tcccttcggg aagcgtggcg ctttctcata gctcacgctg taggtatctc
3901 agttcggtgt aggtcgttcg ctccaagctg ggctgtgtgc acgaaccccc cgttcagccc
3961 gaccgctgcg ccttatccgg taactatcgt cttgagtcca acccggtaag acacgactta
4021 tcgccactgg cagcagccac tggtaacagg attagcagag cgaggtatgt aggcggtgct
4081 acagagttct tgaagtggtg gcctaactac ggctacacta gaaggacagt atttggtatc
4141 tgcgctctgc tgaagccagt taccttcgga aaaagagttg gtagctcttg atccggcaaa
4201 caaaccaccg ctggtagcgg tggttttttt gtttgcaagc agcagattac gcgcagaaaa
4261 aaaggatctc aagaagatcc tttgatcttt tctacggggt ctgacgctca gtggaacgaa
4321 aactcacgtt aagggatttt ggtcatgaga ttatcaaaaa ggatcttcac ctagatcctt
4381 ttaaattaaa aatgaagttt taaatcaatc taaagtatat atgagtaaac ttggtctgac
4441 agttaccaat gcttaatcag tgaggcacct atctcagcga tctgtctatt tcgttcatcc
4501 atagttgcct gactccccgt cgtgtagata actacgatac gggagggctt accatctggc
4561 cccagtgctg caatgatacc gcgagaccca cgctcaccgg ctccagattt atcagcaata
4621 aaccagccag ccggaagggc cgagcgcaga agtggtcctg caactttatc cgcctccatc
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4981 tctgtgactg gtgagtactc aaccaagtca ttctgagaat agtgtatgcg gcgaccgagt
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5701 cgtaaagcac taaatcggaa ccctaaaggg agcccccgat ttagagcttg acggggaaag
5761 ccggcgaacg tggcgagaaa ggaagggaag aaagcgaaag gagcgggcgc tagggcgctg
5821 gcaagtgtag cggtcacgct gcgcgtaacc accacacccg ccgcgcttaa tgcgccgcta
5881 cagggcgcgt cccattcgcc a
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pET-32c大肠表达质粒
别称: pET32c
| 启动子: | T7 |
|---|---|
| 复制子: | pBR322 |
| 终止子: | T7 terminator |
| 质粒分类: | 大肠杆菌载体；PET系列表达质粒 |
| 质粒大小: | 5901bp |
| 质粒标签: | N-Trx，N-6×His，N-thrombin，N-S，N-enterokinase，C-6×His |
| 原核抗性: | Amp |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
| 表达宿主: | 大肠杆菌BL21(DE3) |
| 培养条件: | 37℃，有氧，LB |
| 诱导方式: | IPTG或乳糖及其类似物 |
| 5'测序引物: | T7:TAATACGACTCACTATAGGG |
| 3'测序引物: | T7-ter:TGCTAGTTATTGCTCAGCGG |
质粒属性
| 载体宿主： | 大肠杆菌 |
|---|---|
| 载体用途： | 蛋白表达 |
| 基因种属： | 空载体 |
| 基因类型： | ORF |
| 原核抗性： | Amp |
| 真核抗性： | |
| 荧光蛋白： |
质粒简介
pET-32C质粒是一个大肠杆菌表达载体，T7启动子驱动TrxA促溶标签和目的蛋白融合表达。
The pET-32 series is designed for cloning and high-level expression of peptide sequences fused with the 109aa Trx•Tag thioredoxin protein . Cloning sites are available for producing fusion proteins also containing cleavable His•Tag and S•Tag sequences for detection and purification. Unique sites are shown on the circle map. Note that the sequence is numbered by the pBR322 convention, so the T7 expression region is reversed on the circle map. The cloning/expression region of the coding strand transcribed by T7 RNA polymerase is shown below. The f1 origin is oriented so that infection with helper phage will produce virions containing single-stranded DNA that corresponds to the coding strand. Therefore, single-stranded sequencing should be performed using the T7 terminator primer .
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 5901 bp ds-DNA circular SYN 30-AUG-2016
DEFINITION synthetic circular DNA
KEYWORDS pET-32c
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 5901)
TITLE Direct Submission
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..5901
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
terminator 26..73
/note="T7 terminator"
/note="transcription terminator for bacteriophage T7 RNA
polymerase"
CDS complement(140..157)
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/product="6xHis affinity tag"
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CDS complement(220..234)
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/translation="DDDDK"
CDS complement(250..294)
/codon_start=1
/product="affinity and epitope tag derived from pancreatic
ribonuclease A"
/note="S-Tag"
/translation="KETAAAKFERQHMDS"
CDS complement(301..318)
/codon_start=1
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/note="thrombin site"
/translation="LVPRGS"
CDS complement(328..345)
/codon_start=1
/product="6xHis affinity tag"
/note="6xHis"
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CDS complement(367..693)
/codon_start=1
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IADEYQGKLTVAKLNIDQNPGTAPKYGIRGIPTLLLFKNGEVAATKVGALSKGQLKEFL
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protein_bind 738..762
/bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
/note="lac operator"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
promoter complement(763..781)
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/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
promoter 1094..1171
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CDS 1172..2254
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inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
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LIKHW"
promoter complement(5304..5408)
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/note="AmpR promoter"
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/direction=LEFT
/note="f1 ori"
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
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ORIGIN
1 atccggatat agttcctcct ttcagcaaaa aacccctcaa gacccgttta gaggccccaa
61 ggggttatgc tagttattgc tcagcggtgg cagcagccaa ctcagcttcc tttcgggctt
121 tgttagcagc cggatctcag tggtggtggt ggtggtgctc gagtgcggcc gcaagcttgt
181 cgacggagct cgaattcgga tccacagata tcccatggcc ttgtcgtcgt cgtcggtacc
241 cagatctggg ctgtccatgt gctggcgttc gaatttagca gcagcggttt ctttcatacc
301 agaaccgcgt ggcaccagac cagaagaatg atgatgatga tggtgcatat ggccagaacc
361 agaaccggcc aggttagcgt cgaggaactc tttcaactga cctttagaca gtgcacccac
421 tttggttgcc gccacttcac cgtttttgaa cagcagcaga gtcgggatac cacggatgcc
481 atatttcggc gcagtgccag ggttttgatc gatgttcagt tttgcaacgg tcagtttgcc
541 ctgatattcg tcagcgattt catccagaat cggggcgatc attttgcacg gaccgcacca
601 ctctgcccag aaatcgacga ggatcgcccc gtccgctttg agtacatccg tgtcaaaact
661 gtcgtcagtc aggtgaataa ttttatcgct catatgtata tctccttctt aaagttaaac
721 aaaattattt ctagagggga attgttatcc gctcacaatt cccctatagt gagtcgtatt
781 aatttcgcgg gatcgagatc gatctcgatc ctctacgccg gacgcatcgt ggccggcatc
841 accggcgcca caggtgcggt tgctggcgcc tatatcgccg acatcaccga tggggaagat
901 cgggctcgcc acttcgggct catgagcgct tgtttcggcg tgggtatggt ggcaggcccc
961 gtggccgggg gactgttggg cgccatctcc ttgcatgcac cattccttgc ggcggcggtg
1021 ctcaacggcc tcaacctact actgggctgc ttcctaatgc aggagtcgca taagggagag
1081 cgtcgagatc ccggacacca tcgaatggcg caaaaccttt cgcggtatgg catgatagcg
1141 cccggaagag agtcaattca gggtggtgaa tgtgaaacca gtaacgttat acgatgtcgc
1201 agagtatgcc ggtgtctctt atcagaccgt ttcccgcgtg gtgaaccagg ccagccacgt
1261 ttctgcgaaa acgcgggaaa aagtggaagc ggcgatggcg gagctgaatt acattcccaa
1321 ccgcgtggca caacaactgg cgggcaaaca gtcgttgctg attggcgttg ccacctccag
1381 tctggccctg cacgcgccgt cgcaaattgt cgcggcgatt aaatctcgcg ccgatcaact
1441 gggtgccagc gtggtggtgt cgatggtaga acgaagcggc gtcgaagcct gtaaagcggc
1501 ggtgcacaat cttctcgcgc aacgcgtcag tgggctgatc attaactatc cgctggatga
1561 ccaggatgcc attgctgtgg aagctgcctg cactaatgtt ccggcgttat ttcttgatgt
1621 ctctgaccag acacccatca acagtattat tttctcccat gaagacggta cgcgactggg
1681 cgtggagcat ctggtcgcat tgggtcacca gcaaatcgcg ctgttagcgg gcccattaag
1741 ttctgtctcg gcgcgtctgc gtctggctgg ctggcataaa tatctcactc gcaatcaaat
1801 tcagccgata gcggaacggg aaggcgactg gagtgccatg tccggttttc aacaaaccat
1861 gcaaatgctg aatgagggca tcgttcccac tgcgatgctg gttgccaacg atcagatggc
1921 gctgggcgca atgcgcgcca ttaccgagtc cgggctgcgc gttggtgcgg acatctcggt
1981 agtgggatac gacgataccg aagacagctc atgttatatc ccgccgttaa ccaccatcaa
2041 acaggatttt cgcctgctgg ggcaaaccag cgtggaccgc ttgctgcaac tctctcaggg
2101 ccaggcggtg aagggcaatc agctgttgcc cgtctcactg gtgaaaagaa aaaccaccct
2161 ggcgcccaat acgcaaaccg cctctccccg cgcgttggcc gattcattaa tgcagctggc
2221 acgacaggtt tcccgactgg aaagcgggca gtgagcgcaa cgcaattaat gtaagttagc
2281 tcactcatta ggcaccggga tctcgaccga tgcccttgag agccttcaac ccagtcagct
2341 ccttccggtg ggcgcggggc atgactatcg tcgccgcact tatgactgtc ttctttatca
2401 tgcaactcgt aggacaggtg ccggcagcgc tctgggtcat tttcggcgag gaccgctttc
2461 gctggagcgc gacgatgatc ggcctgtcgc ttgcggtatt cggaatcttg cacgccctcg
2521 ctcaagcctt cgtcactggt cccgccacca aacgtttcgg cgagaagcag gccattatcg
2581 ccggcatggc ggccccacgg gtgcgcatga tcgtgctcct gtcgttgagg acccggctag
2641 gctggcgggg ttgccttact ggttagcaga atgaatcacc gatacgcgag cgaacgtgaa
2701 gcgactgctg ctgcaaaacg tctgcgacct gagcaacaac atgaatggtc ttcggtttcc
2761 gtgtttcgta aagtctggaa acgcggaagt cagcgccctg caccattatg ttccggatct
2821 gcatcgcagg atgctgctgg ctaccctgtg gaacacctac atctgtatta acgaagcgct
2881 ggcattgacc ctgagtgatt tttctctggt cccgccgcat ccataccgcc agttgtttac
2941 cctcacaacg ttccagtaac cgggcatgtt catcatcagt aacccgtatc gtgagcatcc
3001 tctctcgttt catcggtatc attaccccca tgaacagaaa tcccccttac acggaggcat
3061 cagtgaccaa acaggaaaaa accgccctta acatggcccg ctttatcaga agccagacat
3121 taacgcttct ggagaaactc aacgagctgg acgcggatga acaggcagac atctgtgaat
3181 cgcttcacga ccacgctgat gagctttacc gcagctgcct cgcgcgtttc ggtgatgacg
3241 gtgaaaacct ctgacacatg cagctcccgg agacggtcac agcttgtctg taagcggatg
3301 ccgggagcag acaagcccgt cagggcgcgt cagcgggtgt tggcgggtgt cggggcgcag
3361 ccatgaccca gtcacgtagc gatagcggag tgtatactgg cttaactatg cggcatcaga
3421 gcagattgta ctgagagtgc accatatatg cggtgtgaaa taccgcacag atgcgtaagg
3481 agaaaatacc gcatcaggcg ctcttccgct tcctcgctca ctgactcgct gcgctcggtc
3541 gttcggctgc ggcgagcggt atcagctcac tcaaaggcgg taatacggtt atccacagaa
3601 tcaggggata acgcaggaaa gaacatgtga gcaaaaggcc agcaaaaggc caggaaccgt
3661 aaaaaggccg cgttgctggc gtttttccat aggctccgcc cccctgacga gcatcacaaa
3721 aatcgacgct caagtcagag gtggcgaaac ccgacaggac tataaagata ccaggcgttt
3781 ccccctggaa gctccctcgt gcgctctcct gttccgaccc tgccgcttac cggatacctg
3841 tccgcctttc tcccttcggg aagcgtggcg ctttctcata gctcacgctg taggtatctc
3901 agttcggtgt aggtcgttcg ctccaagctg ggctgtgtgc acgaaccccc cgttcagccc
3961 gaccgctgcg ccttatccgg taactatcgt cttgagtcca acccggtaag acacgactta
4021 tcgccactgg cagcagccac tggtaacagg attagcagag cgaggtatgt aggcggtgct
4081 acagagttct tgaagtggtg gcctaactac ggctacacta gaaggacagt atttggtatc
4141 tgcgctctgc tgaagccagt taccttcgga aaaagagttg gtagctcttg atccggcaaa
4201 caaaccaccg ctggtagcgg tggttttttt gtttgcaagc agcagattac gcgcagaaaa
4261 aaaggatctc aagaagatcc tttgatcttt tctacggggt ctgacgctca gtggaacgaa
4321 aactcacgtt aagggatttt ggtcatgaga ttatcaaaaa ggatcttcac ctagatcctt
4381 ttaaattaaa aatgaagttt taaatcaatc taaagtatat atgagtaaac ttggtctgac
4441 agttaccaat gcttaatcag tgaggcacct atctcagcga tctgtctatt tcgttcatcc
4501 atagttgcct gactccccgt cgtgtagata actacgatac gggagggctt accatctggc
4561 cccagtgctg caatgatacc gcgagaccca cgctcaccgg ctccagattt atcagcaata
4621 aaccagccag ccggaagggc cgagcgcaga agtggtcctg caactttatc cgcctccatc
4681 cagtctatta attgttgccg ggaagctaga gtaagtagtt cgccagttaa tagtttgcgc
4741 aacgttgttg ccattgctgc aggcatcgtg gtgtcacgct cgtcgtttgg tatggcttca
4801 ttcagctccg gttcccaacg atcaaggcga gttacatgat cccccatgtt gtgcaaaaaa
4861 gcggttagct ccttcggtcc tccgatcgtt gtcagaagta agttggccgc agtgttatca
4921 ctcatggtta tggcagcact gcataattct cttactgtca tgccatccgt aagatgcttt
4981 tctgtgactg gtgagtactc aaccaagtca ttctgagaat agtgtatgcg gcgaccgagt
5041 tgctcttgcc cggcgtcaat acgggataat accgcgccac atagcagaac tttaaaagtg
5101 ctcatcattg gaaaacgttc ttcggggcga aaactctcaa ggatcttacc gctgttgaga
5161 tccagttcga tgtaacccac tcgtgcaccc aactgatctt cagcatcttt tactttcacc
5221 agcgtttctg ggtgagcaaa aacaggaagg caaaatgccg caaaaaaggg aataagggcg
5281 acacggaaat gttgaatact catactcttc ctttttcaat attattgaag catttatcag
5341 ggttattgtc tcatgagcgg atacatattt gaatgtattt agaaaaataa acaaataggg
5401 gttccgcgca catttccccg aaaagtgcca cctgaaattg taaacgttaa tattttgtta
5461 aaattcgcgt taaatttttg ttaaatcagc tcatttttta accaataggc cgaaatcggc
5521 aaaatccctt ataaatcaaa agaatagacc gagatagggt tgagtgttgt tccagtttgg
5581 aacaagagtc cactattaaa gaacgtggac tccaacgtca aagggcgaaa aaccgtctat
5641 cagggcgatg gcccactacg tgaaccatca ccctaatcaa gttttttggg gtcgaggtgc
5701 cgtaaagcac taaatcggaa ccctaaaggg agcccccgat ttagagcttg acggggaaag
5761 ccggcgaacg tggcgagaaa ggaagggaag aaagcgaaag gagcgggcgc tagggcgctg
5821 gcaagtgtag cggtcacgct gcgcgtaacc accacacccg ccgcgcttaa tgcgccgcta
5881 cagggcgcgt cccattcgcc a
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质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P1923/pLKO.1-EGFRshRNA2-p猪源干扰质粒 |
| P1924/pLKO.1-EGFRshRNA3-p猪源干扰质粒 |
| P2201/pLVX-S100A9shRNA1-p猪源干扰质粒 |
| P2202/pLVX-S100A9shRNA2-p猪源干扰质粒 |
| P2203/pLVX-S100A9shRNA3-p猪源干扰质粒 |
| P0601/pShuttle-Survium病毒基因质粒 |
| P0669/pUC18-TMV病毒基因质粒 |
| P1800/pET11a-Hiv-1-Protease病毒基因质粒 |
| P2271/PET22-TEV-REV病毒基因质粒 |
| P0536/pET21b-TMVU1CP-His6人源基因质粒 |
| P1178/HBV 1.3-mer WT replicon病毒基因质粒 |
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文献和实验相关实验
晚上每天都有人做报告，我觉得让我收获最大的是Bill Studier的报告。本来这个报告是后来才听到的，但是由于Burgess的模块是唯一的涉及大肠杆菌中表达蛋白的，我把这一段提前来说说。Studier这老哥是Brookhaven National Laboratory的，一生研究T7噬菌体，也是T7 RNA polymerase induction system（pET系列质粒）的发明者。 T7系统在大肠杆菌表达蛋白的应用实在太广泛了，但凡表达蛋白的兄弟姐妹们的不可能不知道这个系统
-1,pBADHis, pBADHislacZ，pLLP ompA, pINIIIompA, pMBP-P ,pMBP-C 共表达质粒：pCDFduet-1 以及pCDNA3.1，pEGFP-N2等 大肠杆菌Rosetta（DE3），Rasettagame（DE3），Top10F', BL21(DE3)plySS 等 酵母表达质粒： pPICZαA, pGAPZαA, 酵母细胞 KM71, X33 yingzi
http://www.embl-hamburg.de/~geer ... ET/pET-32a_seq.html pET-32b(+) Vector Sequence http://www.embl-hamburg.de/~geer ... ET/pET-32b_seq.html pET-32c(+) Vector Sequence http://www.embl-hamburg.de/~geer ... ET/pET-32c
pET-32c大肠表达质粒
￥580 - 1280
