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- 2025年07月14日
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- 详细信息
- 文献和实验
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-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
pET3b
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pET-3b大肠表达质粒
别称: pET3b
质粒属性
质粒简介
pET-3b质粒是一种原核表达载体，含有一个N端的T7标签和BamHI限制性内切酶位点。表达由宿主细胞提供的T7 RNA聚合酶诱导，目的基因被克隆到质粒载体上，受噬菌体强转录及翻译信号控制。pET系统是有史以来在大肠杆菌中表达重组蛋白的功能最强大的系统，也是现今原核表达方面使用最广泛的系统。该系列质粒能很容易的通过降低诱导物的浓度来削弱蛋白表达。
The pET-3a-d vectors carry an N-terminal T7•Tag® sequence and BamH I cloning site. These vectors are the precursors to many pET family vectors; the pET-23a-d(+) series corresponds to pET-3a-d but incorporates several additional features. Unique sites are shown on the circle map. Note that the sequence is numbered by the pBR322 convention, so the T7 expression region is reversed on the circular map.
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 4639 bp ds-DNA circular SYN 28-7-2015
DEFINITION synthetic circular DNA
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS Untitled 2
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 4639)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported 2015-7-28 from MLCC
http://www.miaolingbio.com/
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..4639
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
source 558..580
/organism="Enterobacteria phage T7"
/mol_type="genomic DNA"
/db_xref="taxon:10760"
promoter 10..38
/note="tet promoter"
/note="E. coli promoter for tetracycline efflux protein
gene"
terminator 404..451
/note="T7 terminator"
/note="transcription terminator for bacteriophage T7 RNA
polymerase"
CDS complement(518..550)
/codon_start=1
/product="leader peptide from bacteriophage T7 gene 10"
/note="T7 tag (gene 10 leader)"
/note="promotes efficient translation in E. coli"
/translation="MASMTGGQQMG"
RBS 558..580
/note="efficient ribosome binding site from bacteriophage
T7 gene 10 (Olins and Rangwala, 1989)"
promoter complement(612..630)
/note="T7 promoter"
/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
CDS 2191..2382
/codon_start=1
/gene="rop"
/product="Rop protein, which maintains plasmids at low copy
number"
/note="rop"
/translation="MTKQEKTALNMARFIRSQTLTLLEKLNELDADEQADICESLHDHA
DELYRSCLARFGDDGENL"
misc_feature 2484..2626
/note="bom"
/note="basis of mobility region from pBR322"
rep_origin complement(2812..3400)
/direction=LEFT
/note="ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(3571..4431)
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/note="AmpR"
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRVDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPAAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
promoter complement(4432..4536)
/gene="bla"
/note="AmpR promoter"
ORIGIN
1 ttctcatgtt tgacagctta tcatcgataa gctttaatgc ggtagtttat cacagttaaa
61 ttgctaacgc agtcaggcac cgtgtatgaa atctaacaat gcgctcatcg tcatcctcgg
121 caccgtcacc ctggatgctg taggcatagg cttggttatg ccggtactgc cgggcctctt
181 gcgggatatc gtccattccg acagcatcgc cagtcactat ggcgtgctgc tagcgctata
241 tgcgttgatg caatttctat gcgcacccgt tctcggagca ctgtccgacc gctttggccg
301 ccgcccagtc ctgctcgctt cgctacttgg agccactatc gactacgcga tcatggcgac
361 cacacccgtc ctgtggatat ccggatatag ttcctccttt cagcaaaaaa cccctcaaga
421 cccgtttaga ggccccaagg ggttatgcta gttattgctc agcggtggca gcagccaact
481 cagcttcctt tcgggctttg ttagcagccg gatcccgacc catttgctgt ccaccagtca
541 tgctagccat atgtatatct ccttcttaaa gttaaacaaa attatttcta gagggaaacc
601 gttgtggtct ccctatagtg agtcgtatta atttcgcggg atcgagatct cgatcctcta
661 cgccggacgc atcgtggccg gcatcaccgg cgccacaggt gcggttgctg gcgcctatat
721 cgccgacatc accgatgggg aagatcgggc tcgccacttc gggctcatga gcgcttgttt
781 cggcgtgggt atggtggcag gccccgtggc cgggggactg ttgggcgcca tctccttgca
841 tgcaccattc cttgcggcgg cggtgctcaa cggcctcaac ctactactgg gctgcttcct
901 aatgcaggag tcgcataagg gagagcgtcg accgatgccc ttgagagcct tcaacccagt
961 cagctccttc cggtgggcgc ggggcatgac tatcgtcgcc gcacttatga ctgtcttctt
1021 tatcatgcaa ctcgtaggac aggtgccggc agcgctctgg gtcattttcg gcgaggaccg
1081 ctttcgctgg agcgcgacga tgatcggcct gtcgcttgcg gtattcggaa tcttgcacgc
1141 cctcgctcaa gccttcgtca ctggtcccgc caccaaacgt ttcggcgaga agcaggccat
1201 tatcgccggc atggcggccg acgcgctggg ctacgtcttg ctggcgttcg cgacgcgagg
1261 ctggatggcc ttccccatta tgattcttct cgcttccggc ggcatcggga tgcccgcgtt
1321 gcaggccatg ctgtccaggc aggtagatga cgaccatcag ggacagcttc aaggatcgct
1381 cgcggctctt accagcctaa cttcgatcac tggaccgctg atcgtcacgg cgatttatgc
1441 cgcctcggcg agcacatgga acgggttggc atggattgta ggcgccgccc tataccttgt
1501 ctgcctcccc gcgttgcgtc gcggtgcatg gagccgggcc acctcgacct gaatggaagc
1561 cggcggcacc tcgctaacgg attcaccact ccaagaattg gagccaatca attcttgcgg
1621 agaactgtga atgcgcaaac caacccttgg cagaacatat ccatcgcgtc cgccatctcc
1681 agcagccgca cgcggcgcat ctcgggcagc gttgggtcct ggccacgggt gcgcatgatc
1741 gtgctcctgt cgttgaggac ccggctaggc tggcggggtt gccttactgg ttagcagaat
1801 gaatcaccga tacgcgagcg aacgtgaagc gactgctgct gcaaaacgtc tgcgacctga
1861 gcaacaacat gaatggtctt cggtttccgt gtttcgtaaa gtctggaaac gcggaagtca
1921 gcgccctgca ccattatgtt ccggatctgc atcgcaggat gctgctggct accctgtgga
1981 acacctacat ctgtattaac gaagcgctgg cattgaccct gagtgatttt tctctggtcc
2041 cgccgcatcc ataccgccag ttgtttaccc tcacaacgtt ccagtaaccg ggcatgttca
2101 tcatcagtaa cccgtatcgt gagcatcctc tctcgtttca tcggtatcat tacccccatg
2161 aacagaaatc ccccttacac ggaggcatca gtgaccaaac aggaaaaaac cgcccttaac
2221 atggcccgct ttatcagaag ccagacatta acgcttctgg agaaactcaa cgagctggac
2281 gcggatgaac aggcagacat ctgtgaatcg cttcacgacc acgctgatga gctttaccgc
2341 agctgcctcg cgcgtttcgg tgatgacggt gaaaacctct gacacatgca gctcccggag
2401 acggtcacag cttgtctgta agcggatgcc gggagcagac aagcccgtca gggcgcgtca
2461 gcgggtgttg gcgggtgtcg gggcgcagcc atgacccagt cacgtagcga tagcggagtg
2521 tatactggct taactatgcg gcatcagagc agattgtact gagagtgcac catatatgcg
2581 gtgtgaaata ccgcacagat gcgtaaggag aaaataccgc atcaggcgct cttccgcttc
2641 ctcgctcact gactcgctgc gctcggtcgt tcggctgcgg cgagcggtat cagctcactc
2701 aaaggcggta atacggttat ccacagaatc aggggataac gcaggaaaga acatgtgagc
2761 aaaaggccag caaaaggcca ggaaccgtaa aaaggccgcg ttgctggcgt ttttccatag
2821 gctccgcccc cctgacgagc atcacaaaaa tcgacgctca agtcagaggt ggcgaaaccc
2881 gacaggacta taaagatacc aggcgtttcc ccctggaagc tccctcgtgc gctctcctgt
2941 tccgaccctg ccgcttaccg gatacctgtc cgcctttctc ccttcgggaa gcgtggcgct
3001 ttctcatagc tcacgctgta ggtatctcag ttcggtgtag gtcgttcgct ccaagctggg
3061 ctgtgtgcac gaaccccccg ttcagcccga ccgctgcgcc ttatccggta actatcgtct
3121 tgagtccaac ccggtaagac acgacttatc gccactggca gcagccactg gtaacaggat
3181 tagcagagcg aggtatgtag gcggtgctac agagttcttg aagtggtggc ctaactacgg
3241 ctacactaga aggacagtat ttggtatctg cgctctgctg aagccagtta ccttcggaaa
3301 aagagttggt agctcttgat ccggcaaaca aaccaccgct ggtagcggtg gtttttttgt
3361 ttgcaagcag cagattacgc gcagaaaaaa aggatctcaa gaagatcctt tgatcttttc
3421 tacggggtct gacgctcagt ggaacgaaaa ctcacgttaa gggattttgg tcatgagatt
3481 atcaaaaagg atcttcacct agatcctttt aaattaaaaa tgaagtttta aatcaatcta
3541 aagtatatat gagtaaactt ggtctgacag ttaccaatgc ttaatcagtg aggcacctat
3601 ctcagcgatc tgtctatttc gttcatccat agttgcctga ctccccgtcg tgtagataac
3661 tacgatacgg gagggcttac catctggccc cagtgctgca atgataccgc gagacccacg
3721 ctcaccggct ccagatttat cagcaataaa ccagccagcc ggaagggccg agcgcagaag
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3841 aagtagttcg ccagttaata gtttgcgcaa cgttgttgcc attgctgcag gcatcgtggt
3901 gtcacgctcg tcgtttggta tggcttcatt cagctccggt tcccaacgat caaggcgagt
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4321 ctgatcttca gcatctttta ctttcaccag cgtttctggg tgagcaaaaa caggaaggca
4381 aaatgccgca aaaaagggaa taagggcgac acggaaatgt tgaatactca tactcttcct
4441 ttttcaatat tattgaagca tttatcaggg ttattgtctc atgagcggat acatatttga
4501 atgtatttag aaaaataaac aaataggggt tccgcgcaca tttccccgaa aagtgccacc
4561 tgacgtctaa gaaaccatta ttatcatgac attaacctat aaaaataggc gtatcacgag
4621 gccctttcgt cttcaagaa
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pET-3b大肠表达质粒
别称: pET3b
| 启动子: | T7 |
|---|---|
| 复制子: | pBR322 |
| 终止子: | T7 terminator |
| 质粒分类: | 大肠系列质粒；大肠表达质粒；pET系列质粒 |
| 质粒大小: | 4639bp |
| 质粒标签: | N-T7 |
| 原核抗性: | Amp |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
| 表达宿主: | BL21(DE3)等大肠杆菌 |
| 培养条件: | 37℃，有氧，LB |
| 诱导方式: | 无需诱导，组成型表达 |
| 5'测序引物: | T7（TAATACGACTCACTATAGGG） |
| 3'测序引物: | T7-ter（TGCTAGTTATTGCTCAGCGG） |
质粒属性
| 载体宿主： | 大肠杆菌 |
|---|---|
| 载体用途： | 蛋白表达 |
| 基因种属： | 空载体 |
| 基因类型： | ORF |
| 原核抗性： | Amp |
| 真核抗性： | |
| 荧光蛋白： |
质粒简介
pET-3b质粒是一种原核表达载体，含有一个N端的T7标签和BamHI限制性内切酶位点。表达由宿主细胞提供的T7 RNA聚合酶诱导，目的基因被克隆到质粒载体上，受噬菌体强转录及翻译信号控制。pET系统是有史以来在大肠杆菌中表达重组蛋白的功能最强大的系统，也是现今原核表达方面使用最广泛的系统。该系列质粒能很容易的通过降低诱导物的浓度来削弱蛋白表达。
The pET-3a-d vectors carry an N-terminal T7•Tag® sequence and BamH I cloning site. These vectors are the precursors to many pET family vectors; the pET-23a-d(+) series corresponds to pET-3a-d but incorporates several additional features. Unique sites are shown on the circle map. Note that the sequence is numbered by the pBR322 convention, so the T7 expression region is reversed on the circular map.
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 4639 bp ds-DNA circular SYN 28-7-2015
DEFINITION synthetic circular DNA
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS Untitled 2
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 4639)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported 2015-7-28 from MLCC
http://www.miaolingbio.com/
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..4639
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
source 558..580
/organism="Enterobacteria phage T7"
/mol_type="genomic DNA"
/db_xref="taxon:10760"
promoter 10..38
/note="tet promoter"
/note="E. coli promoter for tetracycline efflux protein
gene"
terminator 404..451
/note="T7 terminator"
/note="transcription terminator for bacteriophage T7 RNA
polymerase"
CDS complement(518..550)
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/product="leader peptide from bacteriophage T7 gene 10"
/note="T7 tag (gene 10 leader)"
/note="promotes efficient translation in E. coli"
/translation="MASMTGGQQMG"
RBS 558..580
/note="efficient ribosome binding site from bacteriophage
T7 gene 10 (Olins and Rangwala, 1989)"
promoter complement(612..630)
/note="T7 promoter"
/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
CDS 2191..2382
/codon_start=1
/gene="rop"
/product="Rop protein, which maintains plasmids at low copy
number"
/note="rop"
/translation="MTKQEKTALNMARFIRSQTLTLLEKLNELDADEQADICESLHDHA
DELYRSCLARFGDDGENL"
misc_feature 2484..2626
/note="bom"
/note="basis of mobility region from pBR322"
rep_origin complement(2812..3400)
/direction=LEFT
/note="ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(3571..4431)
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/note="AmpR"
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRVDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
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LIKHW"
promoter complement(4432..4536)
/gene="bla"
/note="AmpR promoter"
ORIGIN
1 ttctcatgtt tgacagctta tcatcgataa gctttaatgc ggtagtttat cacagttaaa
61 ttgctaacgc agtcaggcac cgtgtatgaa atctaacaat gcgctcatcg tcatcctcgg
121 caccgtcacc ctggatgctg taggcatagg cttggttatg ccggtactgc cgggcctctt
181 gcgggatatc gtccattccg acagcatcgc cagtcactat ggcgtgctgc tagcgctata
241 tgcgttgatg caatttctat gcgcacccgt tctcggagca ctgtccgacc gctttggccg
301 ccgcccagtc ctgctcgctt cgctacttgg agccactatc gactacgcga tcatggcgac
361 cacacccgtc ctgtggatat ccggatatag ttcctccttt cagcaaaaaa cccctcaaga
421 cccgtttaga ggccccaagg ggttatgcta gttattgctc agcggtggca gcagccaact
481 cagcttcctt tcgggctttg ttagcagccg gatcccgacc catttgctgt ccaccagtca
541 tgctagccat atgtatatct ccttcttaaa gttaaacaaa attatttcta gagggaaacc
601 gttgtggtct ccctatagtg agtcgtatta atttcgcggg atcgagatct cgatcctcta
661 cgccggacgc atcgtggccg gcatcaccgg cgccacaggt gcggttgctg gcgcctatat
721 cgccgacatc accgatgggg aagatcgggc tcgccacttc gggctcatga gcgcttgttt
781 cggcgtgggt atggtggcag gccccgtggc cgggggactg ttgggcgcca tctccttgca
841 tgcaccattc cttgcggcgg cggtgctcaa cggcctcaac ctactactgg gctgcttcct
901 aatgcaggag tcgcataagg gagagcgtcg accgatgccc ttgagagcct tcaacccagt
961 cagctccttc cggtgggcgc ggggcatgac tatcgtcgcc gcacttatga ctgtcttctt
1021 tatcatgcaa ctcgtaggac aggtgccggc agcgctctgg gtcattttcg gcgaggaccg
1081 ctttcgctgg agcgcgacga tgatcggcct gtcgcttgcg gtattcggaa tcttgcacgc
1141 cctcgctcaa gccttcgtca ctggtcccgc caccaaacgt ttcggcgaga agcaggccat
1201 tatcgccggc atggcggccg acgcgctggg ctacgtcttg ctggcgttcg cgacgcgagg
1261 ctggatggcc ttccccatta tgattcttct cgcttccggc ggcatcggga tgcccgcgtt
1321 gcaggccatg ctgtccaggc aggtagatga cgaccatcag ggacagcttc aaggatcgct
1381 cgcggctctt accagcctaa cttcgatcac tggaccgctg atcgtcacgg cgatttatgc
1441 cgcctcggcg agcacatgga acgggttggc atggattgta ggcgccgccc tataccttgt
1501 ctgcctcccc gcgttgcgtc gcggtgcatg gagccgggcc acctcgacct gaatggaagc
1561 cggcggcacc tcgctaacgg attcaccact ccaagaattg gagccaatca attcttgcgg
1621 agaactgtga atgcgcaaac caacccttgg cagaacatat ccatcgcgtc cgccatctcc
1681 agcagccgca cgcggcgcat ctcgggcagc gttgggtcct ggccacgggt gcgcatgatc
1741 gtgctcctgt cgttgaggac ccggctaggc tggcggggtt gccttactgg ttagcagaat
1801 gaatcaccga tacgcgagcg aacgtgaagc gactgctgct gcaaaacgtc tgcgacctga
1861 gcaacaacat gaatggtctt cggtttccgt gtttcgtaaa gtctggaaac gcggaagtca
1921 gcgccctgca ccattatgtt ccggatctgc atcgcaggat gctgctggct accctgtgga
1981 acacctacat ctgtattaac gaagcgctgg cattgaccct gagtgatttt tctctggtcc
2041 cgccgcatcc ataccgccag ttgtttaccc tcacaacgtt ccagtaaccg ggcatgttca
2101 tcatcagtaa cccgtatcgt gagcatcctc tctcgtttca tcggtatcat tacccccatg
2161 aacagaaatc ccccttacac ggaggcatca gtgaccaaac aggaaaaaac cgcccttaac
2221 atggcccgct ttatcagaag ccagacatta acgcttctgg agaaactcaa cgagctggac
2281 gcggatgaac aggcagacat ctgtgaatcg cttcacgacc acgctgatga gctttaccgc
2341 agctgcctcg cgcgtttcgg tgatgacggt gaaaacctct gacacatgca gctcccggag
2401 acggtcacag cttgtctgta agcggatgcc gggagcagac aagcccgtca gggcgcgtca
2461 gcgggtgttg gcgggtgtcg gggcgcagcc atgacccagt cacgtagcga tagcggagtg
2521 tatactggct taactatgcg gcatcagagc agattgtact gagagtgcac catatatgcg
2581 gtgtgaaata ccgcacagat gcgtaaggag aaaataccgc atcaggcgct cttccgcttc
2641 ctcgctcact gactcgctgc gctcggtcgt tcggctgcgg cgagcggtat cagctcactc
2701 aaaggcggta atacggttat ccacagaatc aggggataac gcaggaaaga acatgtgagc
2761 aaaaggccag caaaaggcca ggaaccgtaa aaaggccgcg ttgctggcgt ttttccatag
2821 gctccgcccc cctgacgagc atcacaaaaa tcgacgctca agtcagaggt ggcgaaaccc
2881 gacaggacta taaagatacc aggcgtttcc ccctggaagc tccctcgtgc gctctcctgt
2941 tccgaccctg ccgcttaccg gatacctgtc cgcctttctc ccttcgggaa gcgtggcgct
3001 ttctcatagc tcacgctgta ggtatctcag ttcggtgtag gtcgttcgct ccaagctggg
3061 ctgtgtgcac gaaccccccg ttcagcccga ccgctgcgcc ttatccggta actatcgtct
3121 tgagtccaac ccggtaagac acgacttatc gccactggca gcagccactg gtaacaggat
3181 tagcagagcg aggtatgtag gcggtgctac agagttcttg aagtggtggc ctaactacgg
3241 ctacactaga aggacagtat ttggtatctg cgctctgctg aagccagtta ccttcggaaa
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质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P2404/pENTR223-C5AR1人源基因质粒 |
| P2405/pENTR223-DFFA-C871T人源基因质粒 |
| P2406/pENTR223-LRFN4(934-1908bp)人源基因质粒 |
| P2408/pENTR223-DHRS1-T26C人源基因质粒 |
| P2409/pENTR223-JKAMP-T635C人源基因质粒 |
| P2410/pENTR223-CAPN3（1538-2465bp）人源基因质粒 |
| P2441/pENTR223-UBE2V1人源基因质粒 |
| P2442/pENTR223-USP47人源基因质粒 |
| P2443/pENTR223-MCFD2人源基因质粒 |
| P2444/pENTR223-PFDN2人源基因质粒 |
| P2445/pENTR223-HSP90AB1人源基因质粒 |
| P2446/pENTR223-AFAP1人源基因质粒 |
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文献和实验相关实验
晚上每天都有人做报告，我觉得让我收获最大的是Bill Studier的报告。本来这个报告是后来才听到的，但是由于Burgess的模块是唯一的涉及大肠杆菌中表达蛋白的，我把这一段提前来说说。Studier这老哥是Brookhaven National Laboratory的，一生研究T7噬菌体，也是T7 RNA polymerase induction system（pET系列质粒）的发明者。 T7系统在大肠杆菌表达蛋白的应用实在太广泛了，但凡表达蛋白的兄弟姐妹们的不可能不知道这个系统
-1,pBADHis, pBADHislacZ，pLLP ompA, pINIIIompA, pMBP-P ,pMBP-C 共表达质粒：pCDFduet-1 以及pCDNA3.1，pEGFP-N2等 大肠杆菌Rosetta（DE3），Rasettagame（DE3），Top10F', BL21(DE3)plySS 等 酵母表达质粒： pPICZαA, pGAPZαA, 酵母细胞 KM71, X33 yingzi
其分子间作用力呈显著下降趋势。 在计算机模拟和蛋白质分子设计的基础上，以野生型TFPI基因为模板，用PCR方法引入突变，构建表达质粒pET―28a(+)―TFPI―Mutl和pET―28a(+)―TFPI―Mut4。然后参照野生型TFPI的基因表达、蛋白质复性及纯化方式，用大肠杆菌制备重组的TFPI―Mutl和TFPI―Mut4。试验证实TFPI―Mutl和TFPI―Mut4保持了与TFPI基本相当的抗凝活性，而且半衰期较TFPl分别延长1．62和4．22倍。
pET-3b大肠表达质粒
￥100 - 1000
