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-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
Plasmid#63890
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pComb3XSS噬菌体展示质粒
别称: Plasmid#63890
质粒属性
质粒简介
pComb3XSS是一个噬菌体展示质粒。pComb3X is the newest of the pComb vectors. Improvements over pComb3 include increased stability and introduction of an asymmetric SfiI cassette for directional cloning of full Fab, scFv, peptide and other protein for phage display. 6xHis and HA tags allow for purification and detection. An amber stop codon was introduced to turn-off expression of the pIII fusion protein by switching to a non-supressor strain of E. coli allowing production of soluble protein without subcloning. Alternatively, the gene for phage protein pIII can be removed by SpeI/NheI digest. pComb3XSS is recommended for preparation of vector for library cloning. The “SS” refers to the double stuffer, a 1200bp stuffer in the Fab light chain cloning region bounded by SacI and XbaI restriction sites and a 300bp stuffer in Fab heavy chain cloning region bound by XhoI and SpeI restriction sites. Also, the 1600bp double stuffer (both stuffers plus the leader sequence between the Fab light chain and heavy chain cloning regions) can be removed by SfiI digest so that non-Fab genes of interest can be cloned. Also available on Addgene: pComb3XTT and pComb3XLambda are only needed at templates for the construction of chimeric Fab libraries as described in Phage Display: A Laboratory Manual. pComb3XTT can also be used as an Fab expression control. 3rd generation plasmid for phage display on modified geneIII, contains stuffer fragment.
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 4991 bp ds-DNA circular SYN 27-OCT-2017
DEFINITION synthetic circular DNA
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 4991)
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..4991
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
protein_bind 109..130
/label=CAP binding site
/bound_moiety="E. coli catabolite activator protein"
/note="CAP binding activates transcription in the presence
of cAMP."
promoter 145..175
/label=lac promoter
/note="promoter for the E. coli lac operon"
protein_bind 183..199
/label=lac operator
/bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
misc_feature 294..1470
/label=Light Chain
CDS complement(574..591)
/codon_start=1
/product="6xHis affinity tag"
/label=6xHis
/translation="HHHHHH"
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CDS 1584..1907
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/gene="trxA"
/product="E. coli thioredoxin"
/label=Heavy Chain
/translation="MSDKIIHLTDDSFDTDVLKADGAILVDFWAEWCGPCKMIAPILDE
IADEYQGKLTVAKLNIDQNPGTAPKYGIRGIPTLLLFKNGEVAATKVGALSKGQLKEFL
DANL"
CDS 1962..1979
/codon_start=1
/product="6xHis affinity tag"
/label=6xHis
/translation="HHHHHH"
CDS 1986..2012
/codon_start=1
/product="HA (human influenza hemagglutinin) epitope tag"
/label=HA
/translation="YPYDVPDYA"
CDS 2118..2552
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/label=geneIII
/translation="MANANKGAMTENADENVLQSDAKGKLDSVATDYGAAIDGFIGDVS
GLANGNGATGDFAGSNSQMAQVGDGDNSPLMNNFRQYLPSLPQSVECRPFVFGAGKPYE
FSIDCDKINLFRGVFAFLLYVATFMYVFSTFANILRNKES"
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/direction=LEFT
/label=f1 ori
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
promoter 3088..3192
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/label=AmpR promoter
CDS 3193..4053
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/product="beta-lactamase"
/label=AmpR
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
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/direction=RIGHT
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
ORIGIN
1 agagcgccca atacgcaaac cgcctctccc cgcgcgttgg ccgattcatt aatgcagctg
61 gcacgacagg tttcccgact ggaaagcggg cagtgagcgc aacgcaatta atgtgagtta
121 gctcactcat taggcacccc aggctttaca ctttatgctt ccggctcgta tgttgtgtgg
181 aattgtgagc ggataacaat tgaattcagg aggaatttaa aatgaaaaag acagctatcg
241 cgattgcagt ggcactggct ggtttcgcta ccgtggccca ggcggccgag ctcgccatgg
301 ctggttgggc agcgagtaat aacaatccag cggctgccgt aggcaatagg tatttcatta
361 tgactgtctc cttggcgact agctagttta gaattcgtaa tcatggtcat agctgtttcc
421 tgtgtgaaat tgttatccgc tcacaattcc acacaacata cgagccggaa gcataaagtg
481 taaagcctgg ggtgcctaat gagtgagcta actcacatta attgcgttgc gctcactgcc
541 cgctttccag tcgggaaacc tgtcgtgtta ctaatgatgg tgatggtgat ggctagtttt
601 gtcacaagat ttgggctcaa ctttcttgtc caccttggtg ttgctgggct tgtgattcac
661 gttgcagatg taggtctggg tgcccaagct gctggagggc acggtcacca cgctgctgag
721 ggagtagagt cctgaggact gtaggacagc cgggaaggtg tgcacgccgc tggtcagggc
781 gcctgagttc cacgacaccg tcgccggttc ggggaagtag tccttgacca ggcagcccag
841 ggccgctgtg cccccagagg tgctcttgga ggagggtgcc agggggaaga ccgatgggcc
901 cttggtggag gctgcggaga cggtgaccgt ggtaccagca gaaacctggc caggctccca
961 ggctcctcat ctatggtaca tccagcaggg ccactggcat cccagacagg ttcagtggca
1021 gtgggtctgg gacagacttc actctcacca tcagcagact ggagcctgaa gattttgcag
1081 tgtactactg tcagcagtat ggtggctcac cgtggttcgg ccaagggacc aaggtggaac
1141 tcaaacgaac tgtggctgca ccatctgtct tcatcttccc gccatctgat gagcagttga
1201 aatctggaac tgcctctgtt gtgtgcctgc tgaataactt ctatcccaga gaggccaaag
1261 tacagtggaa ggtggataac gccctccaat cgggtaactc ccaggagagt gtcacagagc
1321 aggacagcaa ggacagcacc tacagcctca gcagcaccct gacgctgagc aaagcagact
1381 acgagaaaca caaagtctac gcctgcgaag tcacccatca gggcctgagc ttgcccgtca
1441 caaagagctt caacagggga gagtgttagt tctagataat taattaggag gaatttaaaa
1501 tgaaatacct attgcctacg gcagccgctg gattgttatt actcgctgcc caaccagcca
1561 tggccgaggt gcagctgctc gagatgagcg ataaaattat tcacctgact gacgacagtt
1621 ttgacacgga tgtactcaaa gcggacgggg cgatcctcgt cgatttctgg gcagagtggt
1681 gcggtccgtg caaaatgatc gccccgattc tggatgaaat cgctgacgaa tatcagggca
1741 aactgaccgt tgcaaaactg aacatcgatc aaaaccctgg cactgcgccg aaatatggca
1801 tccgtggtat cccgactctg ctgctgttca aaaacggtga agtggcggca accaaagtgg
1861 gtgcactgtc taaaggtcag ttgaaagagt tcctcgacgc taacctggcg tacccgtacg
1921 acgttccgga ctacggttct actagtggcc aggccggcca gcaccatcac catcaccatg
1981 gcgcataccc gtacgacgtt ccggactacg cttcttagga gggtggtggc tctgagggtg
2041 gcggttctga gggtggcggc tctgagggag gcggttccgg tggtggctct ggttccggtg
2101 attttgatta tgaaaagatg gcaaacgcta ataagggggc tatgaccgaa aatgccgatg
2161 aaaacgtgct acagtctgac gctaaaggca aacttgattc tgtcgctact gattacggtg
2221 ctgctatcga tggtttcatt ggtgacgttt ccggccttgc taatggtaat ggtgctactg
2281 gtgattttgc tggctctaat tcccaaatgg ctcaagtcgg tgacggtgat aattcacctt
2341 taatgaataa tttccgtcaa tatttacctt ccctccctca atcggttgaa tgtcgccctt
2401 ttgtctttgg cgctggtaaa ccatatgaat tttctattga ttgtgacaaa ataaacttat
2461 tccgtggtgt ctttgcgttt cttttatatg ttgccacctt tatgtatgta ttttctacgt
2521 ttgctaacat actgcgtaat aaggagtctt aagctagcta attaatttaa gcggccgcag
2581 atctgctctc tgaggaggat ctgggaaatt gtaagcgtta atattttgtt aaaattcgcg
2641 ttaaattttt gttaaatcag ctcatttttt aaccaatagg ccgaaatcgg caaaatccct
2701 tataaatcaa aagaatagac cgagataggg ttgagtgttg ttccagtttg gaacaagagt
2761 ccactattaa agaacgtgga ctccaacgtc aaagggcgaa aaaccgtcta tcagggcgat
2821 ggcccactac gtgaaccatc accctaatca agttttttgg ggtcgaggtg ccgtaaagca
2881 ctaaatcgga accctaaagg gagcccccga tttagagctt gacggggaaa gccggcgaac
2941 gtggcgagaa aggaagggaa gaaagcgaaa ggagcgggcg ctagggcgct ggcaagtgta
3001 gcggtcacgc tgcgcgtaac caccacaccc gccgcgctta atgcgccgct acagggcgcg
3061 tcaggtggca cttttcgggg aaatgtgcgc ggaaccccta tttgtttatt tttctaaata
3121 cattcaaata tgtatccgct catgagacaa taaccctgat aaatgcttca ataatattga
3181 aaaaggaaga gtatgagtat tcaacatttc cgtgtcgccc ttattccctt ttttgcggca
3241 ttttgccttc ctgtttttgc tcacccagaa acgctggtga aagtaaaaga tgctgaagat
3301 cagttgggtg cacgagtggg ttacatcgaa ctggatctca acagcggtaa gatccttgag
3361 agttttcgcc ccgaagaacg ttttccaatg atgagcactt ttaaagttct gctatgtggc
3421 gcggtattat cccgtattga cgccgggcaa gagcaactcg gtcgccgcat acactattct
3481 cagaatgact tggttgagta ctcaccagtc acagaaaagc atcttacgga tggcatgaca
3541 gtaagagaat tatgcagtgc tgccataacc atgagtgata acactgcggc caacttactt
3601 ctgacaacga tcggaggacc gaaggagcta accgcttttt tgcacaacat gggggatcat
3661 gtaactcgcc ttgatcgttg ggaaccggag ctgaatgaag ccataccaaa cgacgagcgt
3721 gacaccacga tgcctgtagc aatggcaaca acgttgcgca aactattaac tggcgaacta
3781 cttactctag cttcccggca acaattaata gactggatgg aggcggataa agttgcagga
3841 ccacttctgc gctcggccct tccggctggc tggtttattg ctgataaatc tggagccggt
3901 gagcgtgggt ctcgcggtat cattgcagca ctggggccag atggtaagcc ctcccgtatc
3961 gtagttatct acacgacggg gagtcaggca actatggatg aacgaaatag acagatcgct
4021 gagataggtg cctcactgat taagcattgg taactgtcag accaagttta ctcatatata
4081 ctttagattg atttaaaact tcatttttaa tttaaaagga tctaggtgaa gatccttttt
4141 gataatctca tgaccaaaat cccttaacgt gagttttcgt tccactgagc gtcagacccc
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4921 tttgagtgag ctgataccgc tcgccgcagc cgaacgaccg agcgcagcga gtcagtgagc
4981 gaggaagcgg a
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pComb3XSS噬菌体展示质粒
别称: Plasmid#63890
| 启动子: | Lac/lac promoter |
|---|---|
| 复制子: | pUC |
| 质粒大小: | 4991bp |
| 质粒标签: | C-6×HIS，C-HA |
| 原核抗性: | Amp |
| 克隆菌株: | TG1 |
| 培养条件: | 37度 |
质粒属性
| 载体宿主： | 大肠杆菌,噬菌体 |
|---|---|
| 载体用途： | 蛋白表达,抗体表达 |
| 基因种属： | 空载体 |
| 基因类型： | ORF |
| 原核抗性： | Amp |
| 真核抗性： | |
| 荧光蛋白： |
质粒简介
pComb3XSS是一个噬菌体展示质粒。pComb3X is the newest of the pComb vectors. Improvements over pComb3 include increased stability and introduction of an asymmetric SfiI cassette for directional cloning of full Fab, scFv, peptide and other protein for phage display. 6xHis and HA tags allow for purification and detection. An amber stop codon was introduced to turn-off expression of the pIII fusion protein by switching to a non-supressor strain of E. coli allowing production of soluble protein without subcloning. Alternatively, the gene for phage protein pIII can be removed by SpeI/NheI digest. pComb3XSS is recommended for preparation of vector for library cloning. The “SS” refers to the double stuffer, a 1200bp stuffer in the Fab light chain cloning region bounded by SacI and XbaI restriction sites and a 300bp stuffer in Fab heavy chain cloning region bound by XhoI and SpeI restriction sites. Also, the 1600bp double stuffer (both stuffers plus the leader sequence between the Fab light chain and heavy chain cloning regions) can be removed by SfiI digest so that non-Fab genes of interest can be cloned. Also available on Addgene: pComb3XTT and pComb3XLambda are only needed at templates for the construction of chimeric Fab libraries as described in Phage Display: A Laboratory Manual. pComb3XTT can also be used as an Fab expression control. 3rd generation plasmid for phage display on modified geneIII, contains stuffer fragment.
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 4991 bp ds-DNA circular SYN 27-OCT-2017
DEFINITION synthetic circular DNA
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 4991)
http://www.miaolingbio.com
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source 1..4991
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of cAMP."
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inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
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/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
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promoter 3088..3192
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CDS 3193..4053
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related antibiotics"
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LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
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replication"
ORIGIN
1 agagcgccca atacgcaaac cgcctctccc cgcgcgttgg ccgattcatt aatgcagctg
61 gcacgacagg tttcccgact ggaaagcggg cagtgagcgc aacgcaatta atgtgagtta
121 gctcactcat taggcacccc aggctttaca ctttatgctt ccggctcgta tgttgtgtgg
181 aattgtgagc ggataacaat tgaattcagg aggaatttaa aatgaaaaag acagctatcg
241 cgattgcagt ggcactggct ggtttcgcta ccgtggccca ggcggccgag ctcgccatgg
301 ctggttgggc agcgagtaat aacaatccag cggctgccgt aggcaatagg tatttcatta
361 tgactgtctc cttggcgact agctagttta gaattcgtaa tcatggtcat agctgtttcc
421 tgtgtgaaat tgttatccgc tcacaattcc acacaacata cgagccggaa gcataaagtg
481 taaagcctgg ggtgcctaat gagtgagcta actcacatta attgcgttgc gctcactgcc
541 cgctttccag tcgggaaacc tgtcgtgtta ctaatgatgg tgatggtgat ggctagtttt
601 gtcacaagat ttgggctcaa ctttcttgtc caccttggtg ttgctgggct tgtgattcac
661 gttgcagatg taggtctggg tgcccaagct gctggagggc acggtcacca cgctgctgag
721 ggagtagagt cctgaggact gtaggacagc cgggaaggtg tgcacgccgc tggtcagggc
781 gcctgagttc cacgacaccg tcgccggttc ggggaagtag tccttgacca ggcagcccag
841 ggccgctgtg cccccagagg tgctcttgga ggagggtgcc agggggaaga ccgatgggcc
901 cttggtggag gctgcggaga cggtgaccgt ggtaccagca gaaacctggc caggctccca
961 ggctcctcat ctatggtaca tccagcaggg ccactggcat cccagacagg ttcagtggca
1021 gtgggtctgg gacagacttc actctcacca tcagcagact ggagcctgaa gattttgcag
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1201 aatctggaac tgcctctgtt gtgtgcctgc tgaataactt ctatcccaga gaggccaaag
1261 tacagtggaa ggtggataac gccctccaat cgggtaactc ccaggagagt gtcacagagc
1321 aggacagcaa ggacagcacc tacagcctca gcagcaccct gacgctgagc aaagcagact
1381 acgagaaaca caaagtctac gcctgcgaag tcacccatca gggcctgagc ttgcccgtca
1441 caaagagctt caacagggga gagtgttagt tctagataat taattaggag gaatttaaaa
1501 tgaaatacct attgcctacg gcagccgctg gattgttatt actcgctgcc caaccagcca
1561 tggccgaggt gcagctgctc gagatgagcg ataaaattat tcacctgact gacgacagtt
1621 ttgacacgga tgtactcaaa gcggacgggg cgatcctcgt cgatttctgg gcagagtggt
1681 gcggtccgtg caaaatgatc gccccgattc tggatgaaat cgctgacgaa tatcagggca
1741 aactgaccgt tgcaaaactg aacatcgatc aaaaccctgg cactgcgccg aaatatggca
1801 tccgtggtat cccgactctg ctgctgttca aaaacggtga agtggcggca accaaagtgg
1861 gtgcactgtc taaaggtcag ttgaaagagt tcctcgacgc taacctggcg tacccgtacg
1921 acgttccgga ctacggttct actagtggcc aggccggcca gcaccatcac catcaccatg
1981 gcgcataccc gtacgacgtt ccggactacg cttcttagga gggtggtggc tctgagggtg
2041 gcggttctga gggtggcggc tctgagggag gcggttccgg tggtggctct ggttccggtg
2101 attttgatta tgaaaagatg gcaaacgcta ataagggggc tatgaccgaa aatgccgatg
2161 aaaacgtgct acagtctgac gctaaaggca aacttgattc tgtcgctact gattacggtg
2221 ctgctatcga tggtttcatt ggtgacgttt ccggccttgc taatggtaat ggtgctactg
2281 gtgattttgc tggctctaat tcccaaatgg ctcaagtcgg tgacggtgat aattcacctt
2341 taatgaataa tttccgtcaa tatttacctt ccctccctca atcggttgaa tgtcgccctt
2401 ttgtctttgg cgctggtaaa ccatatgaat tttctattga ttgtgacaaa ataaacttat
2461 tccgtggtgt ctttgcgttt cttttatatg ttgccacctt tatgtatgta ttttctacgt
2521 ttgctaacat actgcgtaat aaggagtctt aagctagcta attaatttaa gcggccgcag
2581 atctgctctc tgaggaggat ctgggaaatt gtaagcgtta atattttgtt aaaattcgcg
2641 ttaaattttt gttaaatcag ctcatttttt aaccaatagg ccgaaatcgg caaaatccct
2701 tataaatcaa aagaatagac cgagataggg ttgagtgttg ttccagtttg gaacaagagt
2761 ccactattaa agaacgtgga ctccaacgtc aaagggcgaa aaaccgtcta tcagggcgat
2821 ggcccactac gtgaaccatc accctaatca agttttttgg ggtcgaggtg ccgtaaagca
2881 ctaaatcgga accctaaagg gagcccccga tttagagctt gacggggaaa gccggcgaac
2941 gtggcgagaa aggaagggaa gaaagcgaaa ggagcgggcg ctagggcgct ggcaagtgta
3001 gcggtcacgc tgcgcgtaac caccacaccc gccgcgctta atgcgccgct acagggcgcg
3061 tcaggtggca cttttcgggg aaatgtgcgc ggaaccccta tttgtttatt tttctaaata
3121 cattcaaata tgtatccgct catgagacaa taaccctgat aaatgcttca ataatattga
3181 aaaaggaaga gtatgagtat tcaacatttc cgtgtcgccc ttattccctt ttttgcggca
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3301 cagttgggtg cacgagtggg ttacatcgaa ctggatctca acagcggtaa gatccttgag
3361 agttttcgcc ccgaagaacg ttttccaatg atgagcactt ttaaagttct gctatgtggc
3421 gcggtattat cccgtattga cgccgggcaa gagcaactcg gtcgccgcat acactattct
3481 cagaatgact tggttgagta ctcaccagtc acagaaaagc atcttacgga tggcatgaca
3541 gtaagagaat tatgcagtgc tgccataacc atgagtgata acactgcggc caacttactt
3601 ctgacaacga tcggaggacc gaaggagcta accgcttttt tgcacaacat gggggatcat
3661 gtaactcgcc ttgatcgttg ggaaccggag ctgaatgaag ccataccaaa cgacgagcgt
3721 gacaccacga tgcctgtagc aatggcaaca acgttgcgca aactattaac tggcgaacta
3781 cttactctag cttcccggca acaattaata gactggatgg aggcggataa agttgcagga
3841 ccacttctgc gctcggccct tccggctggc tggtttattg ctgataaatc tggagccggt
3901 gagcgtgggt ctcgcggtat cattgcagca ctggggccag atggtaagcc ctcccgtatc
3961 gtagttatct acacgacggg gagtcaggca actatggatg aacgaaatag acagatcgct
4021 gagataggtg cctcactgat taagcattgg taactgtcag accaagttta ctcatatata
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4141 gataatctca tgaccaaaat cccttaacgt gagttttcgt tccactgagc gtcagacccc
4201 gtagaaaaga tcaaaggatc ttcttgagat cctttttttc tgcgcgtaat ctgctgcttg
4261 caaacaaaaa aaccaccgct accagcggtg gtttgtttgc cggatcaaga gctaccaact
4321 ctttttccga aggtaactgg cttcagcaga gcgcagatac caaatactgt ccttctagtg
4381 tagccgtagt taggccacca cttcaagaac tctgtagcac cgcctacata cctcgctctg
4441 ctaatcctgt taccagtggc tgctgccagt ggcgataagt cgtgtcttac cgggttggac
4501 tcaagacgat agttaccgga taaggcgcag cggtcgggct gaacgggggg ttcgtgcaca
4561 cagcccagct tggagcgaac gacctacacc gaactgagat acctacagcg tgagctatga
4621 gaaagcgcca cgcttcccga agggagaaag gcggacaggt atccggtaag cggcagggtc
4681 ggaacaggag agcgcacgag ggagcttcca gggggaaacg cctggtatct ttatagtcct
4741 gtcgggtttc gccacctctg acttgagcgt cgatttttgt gatgctcgtc aggggggcgg
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4861 tttgctcaca tgttctttcc tgcgttatcc cctgattctg tggataaccg tattaccgcc
4921 tttgagtgag ctgataccgc tcgccgcagc cgaacgaccg agcgcagcga gtcagtgagc
4981 gaggaagcgg a
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质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P1949/pENTR223-DPYD人源基因质粒 |
| P1950/pENTR223-ABHD4人源基因质粒 |
| P1951/pENTR223-SDHC-T491A-G499A人源基因质粒 |
| P1952/pENTR223-TRNAU1AP(331-864)人源基因质粒 |
| P1953/pENTR223-HMGN3-G221C人源基因质粒 |
| P1954/pENTR223-OCIAD2人源基因质粒 |
| P1955/pENTR223-MPC1人源基因质粒 |
| P1956/pENTR223-S100A16人源基因质粒 |
| P1957/pENTR223-LOC79015人源基因质粒 |
| P1959/pENTR223-MRPS33人源基因质粒 |
| P1960/pENTR223-GPR65人源基因质粒 |
| P1961/pENTR223-SSR3人源基因质粒 |
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文献和实验相关实验
蛋白的情况下完成组装，故D蛋白可作为外源序列融合的载体，而且展示的外源多肽在空间上是可以接近的。病毒颗粒的组装可以在体内也可以在体外，体外组装即是将D融合蛋白结合到λ；D-噬菌体表面，而体内组装是将含D融合基因的质粒转化入λ；D-溶源的大肠杆菌菌种中，从而补偿溶源菌所缺的D蛋白，通过热诱导而组装。该系统有一个很好的特点，噬菌体上融合蛋白和D蛋白的比例可以由宿主抑制tRNA活性加以控制，这对于展示那些对噬菌体装配造成损害的蛋白质特别有用。 噬菌体展示文库的用途 生产高效低价疫苗 用噬菌体展示
细胞的 cDNA, 用 PCR 的方法扩增出抗体基因，以分泌 scFv 或 Fab 的形式克隆到噬菌体载体中。5. DNA 结合蛋白研究噬菌体展示技术可以用于创造一个大的、具有识别不同 DNA 序列的锌指的多肽库。利用这个多肽库，可以研究有关氨基酸序列与 DNA 结合位点之间的识别规则，可以通过设计锌指多肽去控制基因的表达，比如抑制小鼠细胞系中的癌基因，也可以启动表达质粒的基因，或干扰病毒感染周期。6.信息传递研究从多肽库中可分离到与天然激素相似的，与受体结合的高亲和力的多肽，因此用完整细胞可以从多肽库中找到
整的噬菌体序列数目、位置等信息。3、详细结果界面（Details）显示噬菌体序列上基因编码的功能。4、GENOME VIEWER 选项卡可以直观查看噬菌体序列在微生物基因组上的数量及位置，点击圈图上相应的噬菌体，会显示更详细的区域展示，其中不同功能的基因以不同颜色标示。所有结果都可以下载。四、综合数据库 ACLAMEACLAME 是一个致力于收集和归类来自不同来源的 MGE 的综合数据库，收集了近 33 万条 MGE 序列，主要包括已知的噬菌体基因、质粒和其他病毒。可以进行在线分析，或者下载对应数据
pComb3XSS噬菌体展示质粒
￥100 - 1000
