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pComb3XLambda噬菌体展示质粒

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  • Xybio
  • 上海
  • P0830
  • 2025年07月15日
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    • 保存条件

      -20

    • 保质期

      2年

    • 英文名

      Plasmid#63892

    • 库存

      100

    • 供应商

      上海烜雅生物科技有限公司

    • 规格

      干粉/液体

    基本信息
    名称:pComb3XLambda噬菌体展示质粒
    别称: Plasmid#63892
    启动子: Lac/lac promoter
    复制子: pUC
    质粒大小: 4772bp
    质粒标签: C-6×His,C-HA
    原核抗性: Amp
    克隆菌株: TG1
    培养条件: 37度

    质粒属性
    载体宿主: 大肠杆菌,噬菌体
    载体用途: 蛋白表达,抗体表达
    基因种属: 空载体
    基因类型: ORF
    原核抗性: Amp
    真核抗性:  
    荧光蛋白:


    质粒简介
                Backbone pComb3X containing PCR template for human antibody lambda light chain constant region.
                pComb3X is the newest of the pComb vectors. Improvements over pComb3 include increased stability and introduction of an asymmetric SfiI cassette for directional cloning of full Fab, scFv, peptide and other protein for phage display. 6xHis and HA tags allow for purification and detection. An amber stop codon was introduced to turn-off expression of the pIII fusion protein by switching to a non-supressor strain of E. coli allowing production of soluble protein without subcloning. Alternatively, the gene for phage protein pIII can be removed by SpeI/NheI digest. pComb3XLambda can be used as a template to amplify the lambda light chain constant region for construction of chimeric antibody libraries as described in:
                Barbas, C. F., III; Burton, D. R.; Scott, J.K., Silverman, G.J. Eds. (2001) Phage Display: A Laboratory Manual; Cold Spring Harbor Laboratory Press: Cold Spring Harbor, New York
                Please note that there is a A246V mutation in heavy chain region; however, this vector is meant to be used as a PCR template for the light chain region from base# 613-1016.

               本质粒参考文献:Methods for the generation of chicken monoclonal antibody fragments by phage display.

    质粒图谱
    产品细节图片1

    质粒序列
    LOCUS       Exported                4772 bp ds-DNA     circular SYN 13-OCT-2017
    DEFINITION  synthetic circular DNA
    SOURCE      synthetic DNA construct
      ORGANISM  synthetic DNA construct
    REFERENCE   1  (bases 1 to 4772)
      AUTHORS   .
      TITLE     Direct Submission
                http://www.miaolingbio.com
    FEATURES             Location/Qualifiers
         source          1..4772
                         /organism="synthetic DNA construct"
                         /mol_type="other DNA"
         protein_bind    109..130
                         /label=CAP binding site
                         /bound_moiety="E. coli catabolite activator protein"
                         /note="CAP binding activates transcription in the presence 
                         of cAMP."
         promoter        145..175
                         /label=lac promoter
                         /note="promoter for the E. coli lac operon"
         protein_bind    183..199
                         /label=lac operator
                         /bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
                         /note="The lac repressor binds to the lac operator to 
                         inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be 
                         relieved by adding lactose or 
                         isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
         CDS             1743..1760
                         /codon_start=1
                         /product="6xHis affinity tag"
                         /label=6xHis
                         /translation="HHHHHH"
         CDS             1767..1793
                         /codon_start=1
                         /product="HA (human influenza hemagglutinin) epitope tag"
                         /label=HA
                         /translation="YPYDVPDYA"
         rep_origin      complement(2387..2842)
                         /direction=LEFT
                         /label=f1 ori
                         /note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow 
                         indicates direction of (+) strand synthesis"
         promoter        2869..2973
                         /gene="bla"
                         /label=AmpR promoter
         CDS             2974..3834
                         /codon_start=1
                         /gene="bla"
                         /product="beta-lactamase"
                         /label=AmpR
                         /note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
                         related antibiotics"
                         /translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
                         ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
                         PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
                         EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
                         LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
                         LIKHW"
         rep_origin      4005..4593
                         /direction=RIGHT
                         /label=ori
                         /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 
                         replication"
    ORIGIN
            1 agagcgccca atacgcaaac cgcctctccc cgcgcgttgg ccgattcatt aatgcagctg
           61 gcacgacagg tttcccgact ggaaagcggg cagtgagcgc aacgcaatta atgtgagtta
          121 gctcactcat taggcacccc aggctttaca ctttatgctt ccggctcgta tgttgtgtgg
          181 aattgtgagc ggataacaat tgaattcagg aggaatttaa aatgaaaaag acagctatcg
          241 cgattgcagt ggcactggct ggtttcgcta ccgtggccca ggcggccgag ctcgtgctga
          301 ctaacgccct cagtgtctgg ggccccaggg cagagggtca ccatctcctg cactgggagc
          361 agctccaacc tcggggcagc ttatgatgta cactggtacc accaggttcc aggaacggcc
          421 cccaaactcc tcctctatga taacatcaag cggccctcag gggtccctga ccgattctct
          481 ggctccaagt ctggcacctc agcctccctg gccatcactg ggctccaggc tgaggacgag
          541 gctgattatt actgcaacag agtaacagct ggcctcacac gttcggcgga gggaccaagc
          601 tgaccgtcct aagtcagccc aaggctgccc cctcggtcac tctgttcccg ccctcctctg
          661 aggagcttca agccaacaag gccacactgg tgtgtctcat aagtgacttc tacccgggag
          721 ccgtgacagt ggcctggaag gcagatggca gccccgtcaa ggcgggagtg gagaccacca
          781 caccctccaa acaaagcaac aacaagtacg cggccagcag ctatctgagc ctgacgcctg
          841 agcagtggaa gtcccacaga agctacagct gccaggtcac gcatgaaggg agcaccgtgg
          901 agaagacagt ggcccctaca gaatgttcat aattctagat aattaattag gaggaattta
          961 aaatgaaata cctattgcct acggcagccg ctggattgtt attactcgct gcccaaccag
         1021 ccatggccga ggtgcagctg ctcgagcagt ctggggctga ggtgaagaag cctgggtcct
         1081 cggtgaaggt ctcctgcagg gcttctggag gcaccttcaa caattatgcc atcagctggg
         1141 tgcgacaggc ccctggacaa gggcttgagt ggatgggagg gatcttccct ttccgtaata
         1201 cagcaaagta cgcacaacac ttccagggca gagtcaccat taccgcggac gaatccacgg
         1261 gcacagccta catggagctg agcagcctga gatctgagga cacggccata tattattgtg
         1321 cgagagggga tacgattttt ggagtgacca tgggatacta cgctatggac gtctggggcc
         1381 aagggaccac ggtcaccgtc tccgcagcct ccaccaaggg cccatcggtc ttccccctgg
         1441 caccctcctc caagagcacc tctgggggca cagcggccct gggctgcctg gtcaaggact
         1501 acttccccga accggtgacg gtgtcgtgga actcaggcgc cctgaccagc ggcgtgcaca
         1561 ccttcccggc tgtcctacag tcctcaggac tctactccct cagcagcgtg gtgaccgtgc
         1621 cctccagcag cttgggcacc cagacctaca tctgcaacgt gaatcacaag cccagcaaca
         1681 ccaaggtgga caagaaagtt gagcccaaat cttgtgacaa aactagtggc caggccggcc
         1741 agcaccatca ccatcaccat ggcgcatacc cgtacgacgt tccggactac gcttcttagg
         1801 agggtggtgg ctctgagggt ggcggttctg agggtggcgg ctctgaggga ggcggttccg
         1861 gtggtggctc tggttccggt gattttgatt atgaaaagat ggcaaacgct aataaggggg
         1921 ctatgaccga aaatgccgat gaaaacgtgc tacagtctga cgctaaaggc aaacttgatt
         1981 ctgtcgctac tgattacggt gctgctatcg atggtttcat tggtgacgtt tccggccttg
         2041 ctaatggtaa tggtgctact ggtgattttg ctggctctaa ttcccaaatg gctcaagtcg
         2101 gtgacggtga taattcacct ttaatgaata atttccgtca atatttacct tccctccctc
         2161 aatcggttga atgtcgccct tttgtctttg gcgctggtaa accatatgaa ttttctattg
         2221 attgtgacaa aataaactta ttccgtggtg tctttgcgtt tcttttatat gttgccacct
         2281 ttatgtatgt attttctacg tttgctaaca tactgcgtaa taaggagtct taagctagct
         2341 aattaattta agcggccgca gatctgctct ctgaggagga tctgggaaat tgtaagcgtt
         2401 aatattttgt taaaattcgc gttaaatttt tgttaaatca gctcattttt taaccaatag
         2461 gccgaaatcg gcaaaatccc ttataaatca aaagaataga ccgagatagg gttgagtgtt
         2521 gttccagttt ggaacaagag tccactatta aagaacgtgg actccaacgt caaagggcga
         2581 aaaaccgtct atcagggcga tggcccacta cgtgaaccat caccctaatc aagttttttg
         2641 gggtcgaggt gccgtaaagc actaaatcgg aaccctaaag ggagcccccg atttagagct
         2701 tgacggggaa agccggcgaa cgtggcgaga aaggaaggga agaaagcgaa aggagcgggc
         2761 gctagggcgc tggcaagtgt agcggtcacg ctgcgcgtaa ccaccacacc cgccgcgctt
         2821 aatgcgccgc tacagggcgc gtcaggtggc acttttcggg gaaatgtgcg cggaacccct
         2881 atttgtttat ttttctaaat acattcaaat atgtatccgc tcatgagaca ataaccctga
         2941 taaatgcttc aataatattg aaaaaggaag agtatgagta ttcaacattt ccgtgtcgcc
         3001 cttattccct tttttgcggc attttgcctt cctgtttttg ctcacccaga aacgctggtg
         3061 aaagtaaaag atgctgaaga tcagttgggt gcacgagtgg gttacatcga actggatctc
         3121 aacagcggta agatccttga gagttttcgc cccgaagaac gttttccaat gatgagcact
         3181 tttaaagttc tgctatgtgg cgcggtatta tcccgtattg acgccgggca agagcaactc
         3241 ggtcgccgca tacactattc tcagaatgac ttggttgagt actcaccagt cacagaaaag
         3301 catcttacgg atggcatgac agtaagagaa ttatgcagtg ctgccataac catgagtgat
         3361 aacactgcgg ccaacttact tctgacaacg atcggaggac cgaaggagct aaccgctttt
         3421 ttgcacaaca tgggggatca tgtaactcgc cttgatcgtt gggaaccgga gctgaatgaa
         3481 gccataccaa acgacgagcg tgacaccacg atgcctgtag caatggcaac aacgttgcgc
         3541 aaactattaa ctggcgaact acttactcta gcttcccggc aacaattaat agactggatg
         3601 gaggcggata aagttgcagg accacttctg cgctcggccc ttccggctgg ctggtttatt
         3661 gctgataaat ctggagccgg tgagcgtggg tctcgcggta tcattgcagc actggggcca
         3721 gatggtaagc cctcccgtat cgtagttatc tacacgacgg ggagtcaggc aactatggat
         3781 gaacgaaata gacagatcgc tgagataggt gcctcactga ttaagcattg gtaactgtca
         3841 gaccaagttt actcatatat actttagatt gatttaaaac ttcattttta atttaaaagg
         3901 atctaggtga agatcctttt tgataatctc atgaccaaaa tcccttaacg tgagttttcg
         3961 ttccactgag cgtcagaccc cgtagaaaag atcaaaggat cttcttgaga tccttttttt
         4021 ctgcgcgtaa tctgctgctt gcaaacaaaa aaaccaccgc taccagcggt ggtttgtttg
         4081 ccggatcaag agctaccaac tctttttccg aaggtaactg gcttcagcag agcgcagata
         4141 ccaaatactg tccttctagt gtagccgtag ttaggccacc acttcaagaa ctctgtagca
         4201 ccgcctacat acctcgctct gctaatcctg ttaccagtgg ctgctgccag tggcgataag
         4261 tcgtgtctta ccgggttgga ctcaagacga tagttaccgg ataaggcgca gcggtcgggc
         4321 tgaacggggg gttcgtgcac acagcccagc ttggagcgaa cgacctacac cgaactgaga
         4381 tacctacagc gtgagctatg agaaagcgcc acgcttcccg aagggagaaa ggcggacagg
         4441 tatccggtaa gcggcagggt cggaacagga gagcgcacga gggagcttcc agggggaaac
         4501 gcctggtatc tttatagtcc tgtcgggttt cgccacctct gacttgagcg tcgatttttg
         4561 tgatgctcgt caggggggcg gagcctatgg aaaaacgcca gcaacgcggc ctttttacgg
         4621 ttcctggcct tttgctggcc ttttgctcac atgttctttc ctgcgttatc ccctgattct
         4681 gtggataacc gtattaccgc ctttgagtga gctgataccg ctcgccgcag ccgaacgacc
         4741 gagcgcagcg agtcagtgag cgaggaagcg ga
    //

    质粒菌株产品操作说明书
    一、扩增流程
             收到产品后,请先根据产品管壁标签来判断产品形式,并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
             1、质粒干粉(常温运输,存于-20度,90天保质期,请务必转化挑单克隆培养,不要直接使用和测序)
                  收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒;
                  1100μl 感受态于冰上解冻10min,加入2μl质粒,再冰浴30min后,42热激60s,不要搅动,再冰浴2min;(从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作)
                  加入900μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡37培养45min
                  6000rpm离心5min,仅留100μl上清液重悬细菌沉淀,并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;(可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布,可以比传统涂布方法获得更多转化子)
                  将平板正向培养1h,再倒置37培养14h。如果要求是30度则培养20h
    (菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态,要先转克隆感受态,重提质粒后再导入表达感受态)
                  挑取单菌落至LB液体培养基中,加入对应抗生素,220rpm震荡培养14h,根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
            2、甘油菌种(冰袋运输,存于-80,保质期90天,请务必划线挑单克隆培养)
                  四区划线后挑单菌落培养,酵母菌需要先液体复苏再四区划线,再挑单菌落液体培养。
            3、穿刺菌种(冰袋运输,存于4,保质期7天)
                  穿刺接种,液体培养后四区划线,再挑单菌落液体培养。
            4、菌落平板(冰袋运输,存于4,保质期7天)
                  直接挑取单菌落至液体培养基中。
            5、液体质粒(冰袋运输,存于-20,保质期90天)
                  单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
            6、滤纸质粒(常温运输,存于-20度,90天保质期,请务必转化挑单克隆培养,不要直接使用和测序)
                  收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中,加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min,吸取5ul质粒转化,离心全涂。

    二、转化图片
    产品细节图片2
    产品细节图片3
    P1880/pENTR223-ICMT人源基因质粒
    P1895/pENTR223-PIP4K2B人源基因质粒
    P1896/pENTR223-LOC142937人源基因质粒
    P1897/pENTR223-INIP人源基因质粒
    P1898/pENTR223-SPCS1人源基因质粒
    P1899/pENTR223-ANAPC16人源基因质粒
    P1900/pENTR223-BLOC1S2人源基因质粒
    P1901/pENTR223-MGST1人源基因质粒
    P1925/pENTR223-GLIPR1L1人源基因质粒
    P1926/pENTR223-GINS4人源基因质粒
    P1927/pENTR223-DUSP19人源基因质粒
    P1928/pENTR223-PRDX1人源基因质粒

     

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