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![pGL4.19[luc2CP-Neo]哺乳报告质粒](https://img1.dxycdn.com/2021/1019/731/8008445083226030153-14.jpg!wh200)
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
pGEM-3Zf(+)
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pGEM-3Zf(+)体外转录质粒
别称: pGEM-3Zf(+)
质粒属性
质粒简介
pGEM-3Zf(+)可作为一般克隆载体和高效率RNA体外合成的模板，此载体含SP6和T7RNA聚合酶启动子，还含有lacZct-肽基因及单克隆位点，可在含IPTG和X Gal的平板上对重组子进行蓝/白筛选。此载体含有丝状噬菌体fl的复制起点，可诱导产生单链DNA。pGEM 3Zf(+)表示其fl是正方向的，pGEM-3Zf(+)特征图谱见图。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 3197 bp ds-DNA circular SYN 24-JUN-2015
DEFINITION Vector for standard cloning, efficient in vitro RNA synthesis, and
ssDNA production. Identical to pGEM(R)?3Zf(-) except for the
orientation of the f1 origin.
ACCESSION X65306
VERSION .
KEYWORDS pGEM-3Zf(+)
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 3197)
AUTHORS Promega
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported Thursday, September 1, 2016 from SnapGene Viewer 3.1.4
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..3197
/organism="synthetic DNA construct"
/lab_host="Escherichia coli"
/mol_type="other DNA"
misc_feature 5..61
/note="MCS"
/note="pUC18/19 multiple cloning site"
promoter complement(68..86)
/note="SP6 promoter"
/note="promoter for bacteriophage SP6 RNA polymerase"
primer_bind complement(104..120)
/note="M13 rev"
/note="common sequencing primer, one of multiple similar
variants"
protein_bind 128..144
/bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
/note="lac operator"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
promoter complement(152..182)
/note="lac promoter"
/note="promoter for the E. coli lac operon"
rep_origin complement(506..1094)
/direction=LEFT
/note="ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(1265..2125)
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/note="AmpR"
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
promoter complement(2126..2230)
/gene="bla"
/note="AmpR promoter"
rep_origin complement(2562..3017)
/direction=LEFT
/note="f1 ori"
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
CDS complement(2994..108)
/codon_start=1
/gene="lacZ fragment"
/product="LacZ-alpha fragment of beta-galactosidase"
/note="lacZ-alpha"
/translation="MTMITPSYLGDTIEYSSLHACRSTLEDPRVPSSNSPYSESYYNSL
AVVLQRRDWENPGVTQLNRLAAHPPFASWRNSEEARTDRPSQQLRSLNGEWTRPVAAH"
primer_bind 3158..3174
/note="M13 fwd"
/note="common sequencing primer, one of multiple similar
variants"
promoter 3181..2
/note="T7 promoter"
/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
ORIGIN
1 gggcgaattc gagctcggta cccggggatc ctctagagtc gacctgcagg catgcaagct
61 tgagtattct atagtgtcac ctaaatagct tggcgtaatc atggtcatag ctgtttcctg
121 tgtgaaattg ttatccgctc acaattccac acaacatacg agccggaagc ataaagtgta
181 aagcctgggg tgcctaatga gtgagctaac tcacattaat tgcgttgcgc tcactgcccg
241 ctttccagtc gggaaacctg tcgtgccagc tgcattaatg aatcggccaa cgcgcgggga
301 gaggcggttt gcgtattggg cgctcttccg cttcctcgct cactgactcg ctgcgctcgg
361 tcgttcggct gcggcgagcg gtatcagctc actcaaaggc ggtaatacgg ttatccacag
421 aatcagggga taacgcagga aagaacatgt gagcaaaagg ccagcaaaag gccaggaacc
481 gtaaaaaggc cgcgttgctg gcgtttttcc ataggctccg cccccctgac gagcatcaca
541 aaaatcgacg ctcaagtcag aggtggcgaa acccgacagg actataaaga taccaggcgt
601 ttccccctgg aagctccctc gtgcgctctc ctgttccgac cctgccgctt accggatacc
661 tgtccgcctt tctcccttcg ggaagcgtgg cgctttctca tagctcacgc tgtaggtatc
721 tcagttcggt gtaggtcgtt cgctccaagc tgggctgtgt gcacgaaccc cccgttcagc
781 ccgaccgctg cgccttatcc ggtaactatc gtcttgagtc caacccggta agacacgact
841 tatcgccact ggcagcagcc actggtaaca ggattagcag agcgaggtat gtaggcggtg
901 ctacagagtt cttgaagtgg tggcctaact acggctacac tagaagaaca gtatttggta
961 tctgcgctct gctgaagcca gttaccttcg gaaaaagagt tggtagctct tgatccggca
1021 aacaaaccac cgctggtagc ggtggttttt ttgtttgcaa gcagcagatt acgcgcagaa
1081 aaaaaggatc tcaagaagat cctttgatct tttctacggg gtctgacgct cagtggaacg
1141 aaaactcacg ttaagggatt ttggtcatga gattatcaaa aaggatcttc acctagatcc
1201 ttttaaatta aaaatgaagt tttaaatcaa tctaaagtat atatgagtaa acttggtctg
1261 acagttacca atgcttaatc agtgaggcac ctatctcagc gatctgtcta tttcgttcat
1321 ccatagttgc ctgactcccc gtcgtgtaga taactacgat acgggagggc ttaccatctg
1381 gccccagtgc tgcaatgata ccgcgagacc cacgctcacc ggctccagat ttatcagcaa
1441 taaaccagcc agccggaagg gccgagcgca gaagtggtcc tgcaacttta tccgcctcca
1501 tccagtctat taattgttgc cgggaagcta gagtaagtag ttcgccagtt aatagtttgc
1561 gcaacgttgt tgccattgct acaggcatcg tggtgtcacg ctcgtcgttt ggtatggctt
1621 cattcagctc cggttcccaa cgatcaaggc gagttacatg atcccccatg ttgtgcaaaa
1681 aagcggttag ctccttcggt cctccgatcg ttgtcagaag taagttggcc gcagtgttat
1741 cactcatggt tatggcagca ctgcataatt ctcttactgt catgccatcc gtaagatgct
1801 tttctgtgac tggtgagtac tcaaccaagt cattctgaga atagtgtatg cggcgaccga
1861 gttgctcttg cccggcgtca atacgggata ataccgcgcc acatagcaga actttaaaag
1921 tgctcatcat tggaaaacgt tcttcggggc gaaaactctc aaggatctta ccgctgttga
1981 gatccagttc gatgtaaccc actcgtgcac ccaactgatc ttcagcatct tttactttca
2041 ccagcgtttc tgggtgagca aaaacaggaa ggcaaaatgc cgcaaaaaag ggaataaggg
2101 cgacacggaa atgttgaata ctcatactct tcctttttca atattattga agcatttatc
2161 agggttattg tctcatgagc ggatacatat ttgaatgtat ttagaaaaat aaacaaatag
2221 gggttccgcg cacatttccc cgaaaagtgc cacctgacgt ctaagaaacc attattatca
2281 tgacattaac ctataaaaat aggcgtatca cgaggccctt tcgtctcgcg cgtttcggtg
2341 atgacggtga aaacctctga cacatgcagc tcccggagac ggtcacagct tgtctgtaag
2401 cggatgccgg gagcagacaa gcccgtcagg gcgcgtcagc gggtgttggc gggtgtcggg
2461 gctggcttaa ctatgcggca tcagagcaga ttgtactgag agtgcaccat atgcggtgtg
2521 aaataccgca cagatgcgta aggagaaaat accgcatcag gaaattgtaa gcgttaatat
2581 tttgttaaaa ttcgcgttaa atttttgtta aatcagctca ttttttaacc aataggccga
2641 aatcggcaaa atcccttata aatcaaaaga atagaccgag atagggttga gtgttgttcc
2701 agtttggaac aagagtccac tattaaagaa cgtggactcc aacgtcaaag ggcgaaaaac
2761 cgtctatcag ggcgatggcc cactacgtga accatcaccc taatcaagtt ttttggggtc
2821 gaggtgccgt aaagcactaa atcggaaccc taaagggagc ccccgattta gagcttgacg
2881 gggaaagccg gcgaacgtgg cgagaaagga agggaagaaa gcgaaaggag cgggcgctag
2941 ggcgctggca agtgtagcgg tcacgctgcg cgtaaccacc acacccgccg cgcttaatgc
3001 gccgctacag ggcgcgtcca ttcgccattc aggctgcgca actgttggga agggcgatcg
3061 gtgcgggcct cttcgctatt acgccagctg gcgaaagggg gatgtgctgc aaggcgatta
3121 agttgggtaa cgccagggtt ttcccagtca cgacgttgta aaacgacggc cagtgaattg
3181 taatacgact cactata
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pGEM-3Zf(+)体外转录质粒
别称: pGEM-3Zf(+)
| 启动子: | Lac/lac |
|---|---|
| 复制子: | pUC |
| 质粒分类: | 大肠杆菌载体；克隆质粒 |
| 质粒大小: | 3197bp |
| 质粒标签: | LacZ |
| 原核抗性: | Amp |
| 克隆菌株: | DH5a |
| 培养条件: | 37度 |
| 5'测序引物: | M13R:CAGGAAACAGCTATGACC |
| 3'测序引物: | M13F:TGTAAAACGACGGCCAGT |
| 备注: | 蓝白斑筛选 |
质粒属性
| 载体宿主： | 大肠杆菌 |
|---|---|
| 载体用途： | PCR模板 |
| 基因种属： | 空载体 |
| 基因类型： | cDNA |
| 原核抗性： | Amp |
| 真核抗性： | |
| 荧光蛋白： |
pGEM-3Zf(+)可作为一般克隆载体和高效率RNA体外合成的模板，此载体含SP6和T7RNA聚合酶启动子，还含有lacZct-肽基因及单克隆位点，可在含IPTG和X Gal的平板上对重组子进行蓝/白筛选。此载体含有丝状噬菌体fl的复制起点，可诱导产生单链DNA。pGEM 3Zf(+)表示其fl是正方向的，pGEM-3Zf(+)特征图谱见图。
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 3197 bp ds-DNA circular SYN 24-JUN-2015
DEFINITION Vector for standard cloning, efficient in vitro RNA synthesis, and
ssDNA production. Identical to pGEM(R)?3Zf(-) except for the
orientation of the f1 origin.
ACCESSION X65306
VERSION .
KEYWORDS pGEM-3Zf(+)
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 3197)
AUTHORS Promega
TITLE Direct Submission
JOURNAL Exported Thursday, September 1, 2016 from SnapGene Viewer 3.1.4
http://www.miaolingbio.com
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..3197
/organism="synthetic DNA construct"
/lab_host="Escherichia coli"
/mol_type="other DNA"
misc_feature 5..61
/note="MCS"
/note="pUC18/19 multiple cloning site"
promoter complement(68..86)
/note="SP6 promoter"
/note="promoter for bacteriophage SP6 RNA polymerase"
primer_bind complement(104..120)
/note="M13 rev"
/note="common sequencing primer, one of multiple similar
variants"
protein_bind 128..144
/bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
/note="lac operator"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
promoter complement(152..182)
/note="lac promoter"
/note="promoter for the E. coli lac operon"
rep_origin complement(506..1094)
/direction=LEFT
/note="ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(1265..2125)
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/note="AmpR"
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
promoter complement(2126..2230)
/gene="bla"
/note="AmpR promoter"
rep_origin complement(2562..3017)
/direction=LEFT
/note="f1 ori"
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
CDS complement(2994..108)
/codon_start=1
/gene="lacZ fragment"
/product="LacZ-alpha fragment of beta-galactosidase"
/note="lacZ-alpha"
/translation="MTMITPSYLGDTIEYSSLHACRSTLEDPRVPSSNSPYSESYYNSL
AVVLQRRDWENPGVTQLNRLAAHPPFASWRNSEEARTDRPSQQLRSLNGEWTRPVAAH"
primer_bind 3158..3174
/note="M13 fwd"
/note="common sequencing primer, one of multiple similar
variants"
promoter 3181..2
/note="T7 promoter"
/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
ORIGIN
1 gggcgaattc gagctcggta cccggggatc ctctagagtc gacctgcagg catgcaagct
61 tgagtattct atagtgtcac ctaaatagct tggcgtaatc atggtcatag ctgtttcctg
121 tgtgaaattg ttatccgctc acaattccac acaacatacg agccggaagc ataaagtgta
181 aagcctgggg tgcctaatga gtgagctaac tcacattaat tgcgttgcgc tcactgcccg
241 ctttccagtc gggaaacctg tcgtgccagc tgcattaatg aatcggccaa cgcgcgggga
301 gaggcggttt gcgtattggg cgctcttccg cttcctcgct cactgactcg ctgcgctcgg
361 tcgttcggct gcggcgagcg gtatcagctc actcaaaggc ggtaatacgg ttatccacag
421 aatcagggga taacgcagga aagaacatgt gagcaaaagg ccagcaaaag gccaggaacc
481 gtaaaaaggc cgcgttgctg gcgtttttcc ataggctccg cccccctgac gagcatcaca
541 aaaatcgacg ctcaagtcag aggtggcgaa acccgacagg actataaaga taccaggcgt
601 ttccccctgg aagctccctc gtgcgctctc ctgttccgac cctgccgctt accggatacc
661 tgtccgcctt tctcccttcg ggaagcgtgg cgctttctca tagctcacgc tgtaggtatc
721 tcagttcggt gtaggtcgtt cgctccaagc tgggctgtgt gcacgaaccc cccgttcagc
781 ccgaccgctg cgccttatcc ggtaactatc gtcttgagtc caacccggta agacacgact
841 tatcgccact ggcagcagcc actggtaaca ggattagcag agcgaggtat gtaggcggtg
901 ctacagagtt cttgaagtgg tggcctaact acggctacac tagaagaaca gtatttggta
961 tctgcgctct gctgaagcca gttaccttcg gaaaaagagt tggtagctct tgatccggca
1021 aacaaaccac cgctggtagc ggtggttttt ttgtttgcaa gcagcagatt acgcgcagaa
1081 aaaaaggatc tcaagaagat cctttgatct tttctacggg gtctgacgct cagtggaacg
1141 aaaactcacg ttaagggatt ttggtcatga gattatcaaa aaggatcttc acctagatcc
1201 ttttaaatta aaaatgaagt tttaaatcaa tctaaagtat atatgagtaa acttggtctg
1261 acagttacca atgcttaatc agtgaggcac ctatctcagc gatctgtcta tttcgttcat
1321 ccatagttgc ctgactcccc gtcgtgtaga taactacgat acgggagggc ttaccatctg
1381 gccccagtgc tgcaatgata ccgcgagacc cacgctcacc ggctccagat ttatcagcaa
1441 taaaccagcc agccggaagg gccgagcgca gaagtggtcc tgcaacttta tccgcctcca
1501 tccagtctat taattgttgc cgggaagcta gagtaagtag ttcgccagtt aatagtttgc
1561 gcaacgttgt tgccattgct acaggcatcg tggtgtcacg ctcgtcgttt ggtatggctt
1621 cattcagctc cggttcccaa cgatcaaggc gagttacatg atcccccatg ttgtgcaaaa
1681 aagcggttag ctccttcggt cctccgatcg ttgtcagaag taagttggcc gcagtgttat
1741 cactcatggt tatggcagca ctgcataatt ctcttactgt catgccatcc gtaagatgct
1801 tttctgtgac tggtgagtac tcaaccaagt cattctgaga atagtgtatg cggcgaccga
1861 gttgctcttg cccggcgtca atacgggata ataccgcgcc acatagcaga actttaaaag
1921 tgctcatcat tggaaaacgt tcttcggggc gaaaactctc aaggatctta ccgctgttga
1981 gatccagttc gatgtaaccc actcgtgcac ccaactgatc ttcagcatct tttactttca
2041 ccagcgtttc tgggtgagca aaaacaggaa ggcaaaatgc cgcaaaaaag ggaataaggg
2101 cgacacggaa atgttgaata ctcatactct tcctttttca atattattga agcatttatc
2161 agggttattg tctcatgagc ggatacatat ttgaatgtat ttagaaaaat aaacaaatag
2221 gggttccgcg cacatttccc cgaaaagtgc cacctgacgt ctaagaaacc attattatca
2281 tgacattaac ctataaaaat aggcgtatca cgaggccctt tcgtctcgcg cgtttcggtg
2341 atgacggtga aaacctctga cacatgcagc tcccggagac ggtcacagct tgtctgtaag
2401 cggatgccgg gagcagacaa gcccgtcagg gcgcgtcagc gggtgttggc gggtgtcggg
2461 gctggcttaa ctatgcggca tcagagcaga ttgtactgag agtgcaccat atgcggtgtg
2521 aaataccgca cagatgcgta aggagaaaat accgcatcag gaaattgtaa gcgttaatat
2581 tttgttaaaa ttcgcgttaa atttttgtta aatcagctca ttttttaacc aataggccga
2641 aatcggcaaa atcccttata aatcaaaaga atagaccgag atagggttga gtgttgttcc
2701 agtttggaac aagagtccac tattaaagaa cgtggactcc aacgtcaaag ggcgaaaaac
2761 cgtctatcag ggcgatggcc cactacgtga accatcaccc taatcaagtt ttttggggtc
2821 gaggtgccgt aaagcactaa atcggaaccc taaagggagc ccccgattta gagcttgacg
2881 gggaaagccg gcgaacgtgg cgagaaagga agggaagaaa gcgaaaggag cgggcgctag
2941 ggcgctggca agtgtagcgg tcacgctgcg cgtaaccacc acacccgccg cgcttaatgc
3001 gccgctacag ggcgcgtcca ttcgccattc aggctgcgca actgttggga agggcgatcg
3061 gtgcgggcct cttcgctatt acgccagctg gcgaaagggg gatgtgctgc aaggcgatta
3121 agttgggtaa cgccagggtt ttcccagtca cgacgttgta aaacgacggc cagtgaattg
3181 taatacgact cactata
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P3914/pCMV-SPORT6-SLC50A1人源基因质粒 |
| P3915/pCMV-SPORT6-GOPC人源基因质粒 |
| P3916/pCMV-SPORT6-TBRG4人源基因质粒 |
| P3917/pCMV-SPORT6-TRIM21人源基因质粒 |
| P3918/pCMV-SPORT6-PBLD（1同义突变）人源基因质粒 |
| P3919/pCMV-SPORT6-SRPRA人源基因质粒 |
| P3920/pCMV-SPORT6-FAM206A人源基因质粒 |
| P3921/pCMV-SPORT6-CLDN11人源基因质粒 |
| P3922/pCMV-SPORT6-CAST（52-2253bp）人源基因质粒 |
| P3923/pCMV-SPORT6-MFN2人源基因质粒 |
| P3924/pCMV-SPORT6-G0S2人源基因质粒 |
| P3925/pCMV-SPORT6-TUBG2人源基因质粒 |
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文献和实验相关实验
片段。 3.目的片段的克隆 纯化的片段连接到克隆载体pGEM-Tvector，转化导入宿主菌E.coliDH5α，通过蓝白斑筛选，PCR扩增鉴定后测序，获得的含所需要的目的片段的质粒。 （1）pGEM®-TEasy载体系统 I.描述 pGEM®-TEasy载体系统可用于PCR产物的克隆。这种载体是通过EcoRⅤ酶切pGEM®-5Zf(+)和pGEM®-TEasy载体，并在3’末端加入胸腺嘧啶构建的。插入位点3’-T突出端可提高PCR产物的连接效率，因为3’-T突出端可以防止载体的自身环化，并且为
冲液后，PCR扩增TFPI基因。 (二)TFPI基因的体外重组与测序 以EcoRI和BamHI双酶切扩增出的TFPI基因和pGEM-3Zf(-)质粒，在T4DNA连接酶的作用下，将TFPI基因与pGEM-3Zf(-)质粒重组获得pGEM-3Zf(-)-TFPI克隆质粒，转化大肠杆菌DH5α，涂LBA平板，挑阳性克隆。 为了保证所获基因的准确性，必须对其进行DNA序列测定。现有许多生物技术公司能够提供测序服务，其快捷、方便，且价格合理，为大多数实验室所采用。 (三)表达
zhangyuxianggx 各位大侠好！现有pcDNA3-mCherry和pGEM-hgene两个东西在滤纸上，老师就说让构建载体，具体是什么意思啊？我理解的是一个真核表达载体和构建好的pGEM质粒，但是不知下一步该怎么做？恳请各位好心的大侠指点一二。 shylook 直接插入cDNA吧 zhangyuxianggx 那个pGEM就是已经插入了DNA的载体。请问这两个东西溶下来以后
pGEM-3Zf(+)体外转录质粒
￥100 - 1000
