pGEN-MCS大肠克隆质粒

基本信息
名称：pGEN-MCS大肠克隆质粒
别称: pGEN-MCS
启动子：Tac
复制子: pBR322
终止子:  rrnB T1 terminator
质粒分类:  大肠杆菌载体；克隆质粒
质粒大小：5160bp
质粒标签：N-HA
原核抗性: Amp
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度

表达宿主:	BL21(DE3)
培养条件:	37℃，有氧，LB

质粒属性
载体宿主：大肠杆菌
载体用途：PCR模板
基因种属：空载体
基因类型：ORF
原核抗性：Amp
真核抗性：
荧光蛋白：

质粒简介
 pGEN-MCS是一个低拷贝质粒，大小为5160bp，含有Amp青霉素抗性基因，复制子为P15A ori。

质粒图谱


质粒序列
LOCUS       Exported                5160 bp ds-DNA     circular SYN 13-十月-2016
DEFINITION  synthetic circular DNA
KEYWORDS    pGEN-MCS
SOURCE      synthetic DNA construct
  ORGANISM  synthetic DNA construct
REFERENCE   1  (bases 1 to 5160)
  TITLE     Direct Submission
            http://www.miaolingbio.com
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..5160
                     /organism="synthetic DNA construct"
                     /mol_type="other DNA"
     rep_origin      complement(283..828)
                     /direction=LEFT
                     /note="p15A ori"
                     /note="Plasmids containing the medium-copy-number p15A 
                     origin of replication can be propagated in E. coli cells 
                     that contain a second plasmid with the ColE1 origin."
     terminator      903..930
                     /note="rrnB T2 terminator"
                     /note="transcription terminator T2 from the E. coli rrnB 
                     gene"
     terminator      1022..1108
                     /gene="Escherichia coli rrnB"
                     /note="rrnB T1 terminator"
                     /note="transcription terminator T1 from the E. coli rrnB 
                     gene"
     CDS             complement(1823..2683)
                     /codon_start=1
                     /gene="bla"
                     /product="beta-lactamase"
                     /note="AmpR"
                     /note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
                     related antibiotics"
                     /translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
                     ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRVDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
                     PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
                     EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
                     LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
                     LIKHW"
     promoter        complement(2684..2788)
                     /gene="bla"
                     /note="AmpR promoter"
ORIGIN
        1 gaattcctgc agggcatgcc ccgggcatat gaagcttggt accgggatcc gcggccgcgg
       61 gccccatgga tcgatagctg gtcgacacaa tctgcccttt cgaaagatcc caacgaaaag
      121 cgtgaccaca tggtccttct tgagtttgta actgctgctg ggattacaca tggcatggat
      181 gagctctaca aataatgagc tagcccgcct aatgagcggg cttttttttc tcggcctagg
      241 agatacttaa cagggaagtg agagggccgc ggcaaagccg tttttccata ggctccgccc
      301 ccctgacaag catcacgaaa tctgacgctc aaatcagtgg tggcgaaacc cgacaggact
      361 ataaagatac caggcgtttc cccctggcgg ctccctcgtg cgctctcctg ttcctgcctt
      421 tcggtttacc ggtgtcattc cgctgttatg gccgcgtttg tctcattcca cgcctgacac
      481 tcagttccgg gtaggcagtt cgctccaagc tggactgtat gcacgaaccc cccgttcagt
      541 ccgaccgctg cgccttatcc ggtaactatc gtcttgagtc caacccggaa agacatgcaa
      601 aagcaccact ggcagcagcc actggtaatt gatttagagg agttagtctt gaagtcatgc
      661 gccggttaag gctaaactga aaggacaagt tttggtgact gcgctcctcc aagccagtta
      721 cctcggttca aagagttggt agctcagaga accttcgaaa aaccgccctg caaggcggtt
      781 ttttcgtttt cagagcaaga gattacgcgc agaccaaaac gatctcaaga agatcatctt
      841 attaatcaga taaaatattt ctaggatcta aaacactagg cccaagagtt tgtagaaacg
      901 caaaaaggcc atccgtcagg atggccttct gcttaatttg atgcctggca gtttatggcg
      961 ggcgtcctgc ccgccaccct ccgggccgtt gcttcgcaac gttcaaatcc gctcccggcg
     1021 gatttgtcct actcaggaga gcgttcaccg acaaacaaca gataaaacga aaggcccagt
     1081 ctttcgactg agcctttcgt tttatttgat gcctggcagt tccctactct cgcatgggga
     1141 gaccccacac taccatcggc gctacggcgt ttcacttctg agttcggcat ggggtcaggt
     1201 gggaccaccg cgctactgcc gccaggcaaa ttctgtttta tcagaccgct tctgcgttct
     1261 gatttaatct gtatcaggct gaaaatcttc tctcatccgc caaaacagcc aagctggatc
     1321 tggcaaatcg ctgaatattc cttttgtctc cgaccatcag gcacctgagt cgctgtcttt
     1381 ttcgtgacat tcagttcgct gcgctcacgg ctctggcagt gaatgggggt aaatggcact
     1441 acaggcgcct tttatggatt catgcaagga aactacccat aatacaagaa aagcccgtca
     1501 cgggcttctc agggcgtttt atggcgggtc tgctatgtgg tgctatctga ctttttgctg
     1561 ttcagcagtt cctgccctct gattttccag tctgaccact tcggattatc ccgtgacagg
     1621 tcattcagac tggctaatgc acccagtaag gcagcggtat catcaacagg cttacccgtc
     1681 ttactgtcaa ccggatctaa aacactagtt aagggatttt ggtcatgaga ttatcaaaaa
     1741 ggatcttcac ctagatcctt ttaaattaaa aatgaagttt taaatcaatc taaagtatat
     1801 atgagtaaac ttggtctgac agttaccaat gcttaatcag tgaggcacct atctcagcga
     1861 tctgtctatt tcgttcatcc atagttgcct gactccccgt cgtgtagata actacgatac
     1921 gggagggctt accatctggc cccagtgctg caatgatacc gcgagaccca cgctcaccgg
     1981 ctccagattt atcagcaata aaccagccag ccggaagggc cgagcgcaga agtggtcctg
     2041 caactttatc cgcctccatc cagtctatta attgttgccg ggaagctaga gtaagtagtt
     2101 cgccagttaa tagtttgcgc aacgttgttg ccattgctac aggcatcgtg gtgtcacgct
     2161 cgtcgtttgg tatggcttca ttcagctccg gttcccaacg atcaaggcga gttacatgat
     2221 cccccatgtt gtgcaaaaaa gcggttagct ccttcggtcc tccgatcgtt gtcagaagta
     2281 agttggccgc agtgttatca ctcatggtta tggcagcact gcataattct cttactgtca
     2341 tgccatccgt aagatgcttt tctgtgactg gtgagtactc aaccaagtca ttctgagaat
     2401 agtgtatgcg gcgaccgagt tgctcttgcc cggcgtcaac acgggataat accgcgccac
     2461 atagcagaac tttaaaagtg ctcatcattg gaaaacgttc ttcggggcga aaactctcaa
     2521 ggatcttacc gctgttgaga tccagttcga tgtaacccac tcgtgcaccc aactgatctt
     2581 cagcatcttt tactttcacc agcgtttctg ggtgagcaaa aacaggaagg caaaatgccg
     2641 caaaaaaggg aataagggcg acacggaaat gttgaatact catactcttc ctttttcaat
     2701 attattgaag catttatcag ggttattgtc tcatgagcgg atacatattt gaatgtattt
     2761 agaaaaataa acaaataggg gttccgcgca catttccccg aaaagtgcca cctgacgtct
     2821 aagaaaccat tattatcatg acattaacct ataaaaatag gcgtatcacg aggccctttc
     2881 gtcttctaga caacatcagc aaggagaaag gggctaccgg cgaaccagca gcccctttat
     2941 aaaggcgctt cagtagtcag accagcatca gtcctgaaaa ggcgggcctg cgcccgcctc
     3001 caggttgcta cttaccggat tcgtaagcca tgaaagccgc cacctccctg tgtccgtctc
     3061 tgtaacgaat ctcgcacagc gattttcgtg tcagataagt gaatatcaac agtgtgagac
     3121 acacgatcaa cacacaccag acaagggaac ttcgtggtag tttcatggcc ttcttctcct
     3181 tgcgcaaagc gcggtaagag gctatcctga tgtggactag acatagggat gcctcgtggt
     3241 ggttaatgaa aattaactta ctacggggct atcttctttc tgccacacaa cacggcaaca
     3301 aaccaccttc acgtcatgag gcagaaagcc tcaagcgccg ggcacatcat agcccatata
     3361 cctgcacgct gaccacactc actttccctg aaaataatcc gctcattcag accgttcacg
     3421 ggaaatccgt gtgattgttg ccgcatcacg ctgcctcccg gagtttgtct cgagcacttt
     3481 tgttacccgc caaacaaaac ccaaaaacaa cccataccca acccaataaa acaccaaaac
     3541 aagacaaata atcattgatt gatggttgaa atggggtaaa cttgacaaac aaacccactt
     3601 aaaacccaaa acatacccaa acacacacca aaaaaacacc ataaggagtt ttataaatgt
     3661 tggtattcat tgatgacggt tcaacaaaca tcaaactaca gtggcaggaa agcgacggaa
     3721 caattaaaca gcacattagc ccgaacagct tcaaacgcga gtgggcagtc tcttttggtg
     3781 ataaaaaggt ctttaactac acactgaacg gcgaacagta ttcatttgat ccaatcagcc
     3841 cggatgctgt agtcacaacc aatatcgcat ggcaatacag cgacgttaat gtcgttgcag
     3901 tgcatcacgc cttactgacc agtggtctgc cggtaagcga agtggatatt gtttgcacac
     3961 ttcctctgac agagtattac gacagaaata accaacccaa tacggaaaat attgagcgta
     4021 agaaagcaaa cttccggaaa aaaattacat taaatggcgg ggatacattc acaataaaag
     4081 atgtaaaagt catgcctgaa tctataccgg caggttatga agttctacaa gaactggatg
     4141 agttagattc tttattaatt atagatctcg ggggcaccac attagatatt tctcaggtaa
     4201 tggggaaatt atcggggatc agtaaaatat acggagactc atctcttggt gtctctctgg
     4261 ttacatctgc agtaaaagat gccctttctc ttgcgagaac aaaaggaagt agctatcttg
     4321 ctgacgatat aatcattcac agaaaagata ataactatct gaagcaacga attaatgatg
     4381 agaacaaaat atcaatagtc accgaagcaa tgaatgaagc acttcgtaaa cttgagcaac
     4441 gtgtattaaa tacgctcaat gaattttctg gttatactca tgttatggtt ataggcggtg
     4501 gcgcagaatt aatatgcgat gcagtaaaaa aacacacaca gattcgtgat gaacgttttt
     4561 tcaaaaccaa taactctcaa tatgatttag ttaacggtat gtatctcata ggtaattaat
     4621 gatggacaag cgcagaacca ttgccttcaa actaaatcca gatgtaaatc aaacagataa
     4681 aattgtttgt gatacactgg acagtatccc gcaaggggaa cgaagccgcc ttaaccgggc
     4741 cgcactgacg gcaggtctgg ccttatacag acaagatccc cggacccctt tccttttatg
     4801 tgagctgctg acgaaagaaa ccacattttc agatatcgtg aatatattga gatcgctatt
     4861 tccaaaagag atggccgatt ttaattcttc aatagtcact caatcctctt cacaacaaga
     4921 gcaaaaaagt gatgaagaga ccaaaaaaaa tgcgatgaag ctaataaatt aattcaatta
     4981 ttattgagtt ccctttatcc actatcaggc tggataaagg gaactcaatc aagttatttt
     5041 cttaccagtc attacataat cgttattatg aaataatcgt ttgcactgtc tctgttattc
     5101 aggcaatttc aataaaggca cttgctcacg ctctgtcatt ttctgaaact cttcatgctg
//

质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
         收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
         1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              ①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
              ②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
              ③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
              ④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
              ⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
              ⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
        2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
              四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
        3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
        4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              直接挑取单菌落至液体培养基中。
        5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
              单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
        6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。

二、转化图片

P4241/pCMV-SPORT6-NECAB2人源基因质粒

P4242/pCMV-SPORT6-INPP1人源基因质粒

P4243/pCMV-SPORT6-UFSP2人源基因质粒

P4244/pCMV-SPORT6-BPGM人源基因质粒

P4245/pCMV-SPORT6-TRIM31（2同义突变1点突变）人源基因质粒

P4246/pCMV-SPORT6-HTATIP2人源基因质粒

P4247/pCMV-SPORT6-CALB2人源基因质粒

P4248/pCMV-SPORT6-CARD14人源基因质粒

P4249/pCMV-SPORT6-SLC17A5(1同义突变）人源基因质粒

P4250/pCMV-SPORT6-TRMT1人源基因质粒

P4251/pCMV-SPORT6-TMEM187人源基因质粒