pUC118大肠克隆质粒

基本信息
名称：pUC118大肠克隆质粒
别称: pUC-118
复制子: pUC
质粒分类:  大肠杆菌载体；克隆质粒
质粒大小：3162bp
质粒标签：LacZ
原核抗性: Amp
筛选标记：G418
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度

5'测序引物:	M13R:CAGGAAACAGCTATGACC
3'测序引物:	M13F:TGTAAAACGACGGCCAGT
备注:	蓝白斑筛选，产生单链DNA

质粒属性
载体宿主：大肠杆菌
载体用途：PCR模板
基因种属：空载体
基因类型：cDNA
原核抗性：Amp
真核抗性：
荧光蛋白：

质粒简介
     pUC118载体是利用pUC18载体的Nde I 酶切位点，插入含有M13 phage DNA Intergenic region (IG) 的HgiA I (5645) - DraI (5941) 片段构建而成的。由于在lacZ基因中含有多克隆位点，因此在含有IPTG、X-Gal 的平板培养基上可以很容易地通过蓝白筛选判断载体中有无DNA片段的插入。同时还可以通过载体上的lac promoter表达外源基因，使用M13系列的通用引物对插入载体中的DNA片段进行测序。使用Deletion Kit for Kilo-Sequence (Code No. : 6030) 可以对克隆得到的数千碱基的DNA片段进行测序。
       由于pUC118载体中插入了M13 phage DNA的Intergenic region (IG)，因此pUC118载体还可以在Helper phage M13K07的感染下产生单链DNA，包入Phage颗粒内后从菌体内放出，而不存在Helper phage单链DNA的污染。使用本制品时，可以稳定获得单链的长片段DNA (~7kb)，并且没有缺失。

质粒图谱


质粒序列
LOCUS       Exported File           3162 bp ds-DNA    circular SYN 25-11-2013
DEFINITION  Cloning vector with a phage origin for producing single-stranded
            DNA. The MCS is reversed in pUC119.
ACCESSION   U07649
VERSION     .
KEYWORDS    pUC118
SOURCE      synthetic DNA construct
  ORGANISM  synthetic DNA construct
REFERENCE   1  (bases 1 to 3162)
  AUTHORS   Vieira J, Messing J.
  TITLE     Production of single-stranded plasmid DNA.
  JOURNAL   Meth. Enzymol. 1987;153:3-11.
  PUBMED    3323803
REFERENCE   2  (bases 1 to 3162)
  AUTHORS   TaKaRa
  TITLE     Direct Submission
  JOURNAL   Exported 2015-5-18 from MLCC
            http://www.miaolingbio.com
COMMENT    
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..3162
                     /organism="synthetic DNA construct"
                     /lab_host="Escherichia coli"
                     /mol_type="other DNA"
     rep_origin      complement(187..642)
                     /direction=LEFT
                     /note="M13 ori"
                     /note="M13 bacteriophage origin of replication; arrow
                     indicates direction of (+) strand synthesis"
     CDS             complement(619..945)
                     /codon_start=1
                     /gene="lacZ fragment"
                     /product="LacZ-alpha fragment of?beta-galactosidase"
                     /note="lacZ-alpha"
                     /translation="MTMITNSSSVPGDPLESTCRHASLALAVVLQRRDWENPGVTQLNR
                     LAAHPPFASWRNSEEARTDRPSQQLRSLNGEWRLMRYFLLTHLCGISHRIRQSNHSTRP
                     VAAH"
     primer_bind     855..871
                     /note="M13 fwd"
                     /note="common sequencing primer, one of multiple similar
                     variants"
     misc_feature    875..931
                     /gene="
                     "
                     /note="MCS"
                     /note="pUC18/19 multiple cloning site"
     primer_bind     complement(941..957)
                     /note="M13 rev"
                     /note="common sequencing primer, one of multiple similar
                     variants"
     protein_bind    965..981
                     /bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
                     /note="lac operator"
                     /note="The lac repressor binds to the lac operator to
                     inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
                     relieved by adding lactose or
                     isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
     promoter        complement(989..1019)
                     /note="lac promoter"
                     /note="promoter for the E. coli lac operon"
     rep_origin      complement(1343..1931)
                     /direction=LEFT
                     /note="ori"
                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
                     replication"
     CDS             complement(2102..2962)
                     /codon_start=1
                     /gene="bla"
                     /product="beta-lactamase"
                     /note="AmpR"
                     /note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
                     related antibiotics"
                     /translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
                     ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
                     PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
                     EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
                     LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
                     LIKHW"
     promoter        complement(2963..3067)
                     /gene="bla"
                     /note="AmpR promoter"
ORIGIN
        1 tcgcgcgttt cggtgatgac ggtgaaaacc tctgacacat gcagctcccg gagacggtca
       61 cagcttgtct gtaagcggat gccgggagca gacaagcccg tcagggcgcg tcagcgggtg
      121 ttggcgggtg tcggggctgg cttaactatg cggcatcaga gcagattgta ctgagagtgc
      181 accataaaat tgtaaacgtt aatattttgt taaaattcgc gttaaatttt tgttaaatca
      241 gctcattttt taaccaatag gccgaaatcg gcaaaatccc ttataaatca aaagaatagc
      301 ccgagatagg gttgagtgtt gttccagttt ggaacaagag tccactatta aagaacgtgg
      361 actccaacgt caaagggcga aaaaccgtct atcagggcga tggcccacta cgtgaaccat
      421 cacccaaatc aagttttttg gggtcgaggt gccgtaaagc actaaatcgg aaccctaaag
      481 ggagcccccg atttagagct tgacggggaa agccggcgaa cgtggcgaga aaggaaggga
      541 agaaagcgaa aggagcgggc gctagggcgc tggcaagtgt agcggtcacg ctgcgcgtaa
      601 ccaccacacc cgccgcgctt aatgcgccgc tacagggcgc gtactatggt tgctttgacg
      661 tatgcggtgt gaaataccgc acagatgcgt aaggagaaaa taccgcatca ggcgccattc
      721 gccattcagg ctgcgcaact gttgggaagg gcgatcggtg cgggcctctt cgctattacg
      781 ccagctggcg aaagggggat gtgctgcaag gcgattaagt tgggtaacgc cagggttttc
      841 ccagtcacga cgttgtaaaa cgacggccag tgccaagctt gcatgcctgc aggtcgactc
      901 tagaggatcc ccgggtaccg agctcgaatt cgtaatcatg gtcatagctg tttcctgtgt
      961 gaaattgtta tccgctcaca attccacaca acatacgagc cggaagcata aagtgtaaag
     1021 cctggggtgc ctaatgagtg agctaactca cattaattgc gttgcgctca ctgcccgctt
     1081 tccagtcggg aaacctgtcg tgccagctgc attaatgaat cggccaacgc gcggggagag
     1141 gcggtttgcg tattgggcgc tcttccgctt cctcgctcac tgactcgctg cgctcggtcg
     1201 ttcggctgcg gcgagcggta tcagctcact caaaggcggt aatacggtta tccacagaat
     1261 caggggataa cgcaggaaag aacatgtgag caaaaggcca gcaaaaggcc aggaaccgta
     1321 aaaaggccgc gttgctggcg tttttccata ggctccgccc ccctgacgag catcacaaaa
     1381 atcgacgctc aagtcagagg tggcgaaacc cgacaggact ataaagatac caggcgtttc
     1441 cccctggaag ctccctcgtg cgctctcctg ttccgaccct gccgcttacc ggatacctgt
     1501 ccgcctttct cccttcggga agcgtggcgc tttctcatag ctcacgctgt aggtatctca
     1561 gttcggtgta ggtcgttcgc tccaagctgg gctgtgtgca cgaacccccc gttcagcccg
     1621 accgctgcgc cttatccggt aactatcgtc ttgagtccaa cccggtaaga cacgacttat
     1681 cgccactggc agcagccact ggtaacagga ttagcagagc gaggtatgta ggcggtgcta
     1741 cagagttctt gaagtggtgg cctaactacg gctacactag aagaacagta tttggtatct
     1801 gcgctctgct gaagccagtt accttcggaa aaagagttgg tagctcttga tccggcaaac
     1861 aaaccaccgc tggtagcggt ggtttttttg tttgcaagca gcagattacg cgcagaaaaa
     1921 aaggatctca agaagatcct ttgatctttt ctacggggtc tgacgctcag tggaacgaaa
     1981 actcacgtta agggattttg gtcatgagat tatcaaaaag gatcttcacc tagatccttt
     2041 taaattaaaa atgaagtttt aaatcaatct aaagtatata tgagtaaact tggtctgaca
     2101 gttaccaatg cttaatcagt gaggcaccta tctcagcgat ctgtctattt cgttcatcca
     2161 tagttgcctg actccccgtc gtgtagataa ctacgatacg ggagggctta ccatctggcc
     2221 ccagtgctgc aatgataccg cgagacccac gctcaccggc tccagattta tcagcaataa
     2281 accagccagc cggaagggcc gagcgcagaa gtggtcctgc aactttatcc gcctccatcc
     2341 agtctattaa ttgttgccgg gaagctagag taagtagttc gccagttaat agtttgcgca
     2401 acgttgttgc cattgctaca ggcatcgtgg tgtcacgctc gtcgtttggt atggcttcat
     2461 tcagctccgg ttcccaacga tcaaggcgag ttacatgatc ccccatgttg tgcaaaaaag
     2521 cggttagctc cttcggtcct ccgatcgttg tcagaagtaa gttggccgca gtgttatcac
     2581 tcatggttat ggcagcactg cataattctc ttactgtcat gccatccgta agatgctttt
     2641 ctgtgactgg tgagtactca accaagtcat tctgagaata gtgtatgcgg cgaccgagtt
     2701 gctcttgccc ggcgtcaata cgggataata ccgcgccaca tagcagaact ttaaaagtgc
     2761 tcatcattgg aaaacgttct tcggggcgaa aactctcaag gatcttaccg ctgttgagat
     2821 ccagttcgat gtaacccact cgtgcaccca actgatcttc agcatctttt actttcacca
     2881 gcgtttctgg gtgagcaaaa acaggaaggc aaaatgccgc aaaaaaggga ataagggcga
     2941 cacggaaatg ttgaatactc atactcttcc tttttcaata ttattgaagc atttatcagg
     3001 gttattgtct catgagcgga tacatatttg aatgtattta gaaaaataaa caaatagggg
     3061 ttccgcgcac atttccccga aaagtgccac ctgacgtcta agaaaccatt attatcatga
     3121 cattaaccta taaaaatagg cgtatcacga ggccctttcg tc
//

质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
         收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
         1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              ①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
              ②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
              ③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
              ④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
              ⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
              ⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
        2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
              四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
        3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
        4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              直接挑取单菌落至液体培养基中。
        5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
              单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
        6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。

二、转化图片

P1423/pUC57-CNGA1-FLAG人源基因质粒

P1632/pUC57s-GLO1人源基因质粒

P1767/pUC57s-N6AMT1人源基因质粒

P1851/pUC57s-NCF1-EGFP人源基因质粒

P2917/pCR4-TOPO-A2ML1人源基因质粒

P2918/pCR4-TOPO-GALNT9（3同义突变）人源基因质粒

P2935/pCR4-TOPO-BTBD11人源基因质粒

P2936/pCR4-TOPO-TMSB4X人源基因质粒

P2937/pCR-BluntII-TOPO-USP22人源基因质粒

P3075/pCR4-TOPO-C20orf96（2同义突变）人源基因质粒

P4826/pCR-BluntII-TOPO-CHRM3人源基因质粒

P4827/pCR4-TOPO-CHRM4人源基因质粒