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- 详细信息
- 技术资料
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-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
NM_008357.2
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pHG52d34.5-CMV-Mil-15-mCherry质粒
别称: NM_008357.2
启动子：CMV
复制子: pUC
原核抗性: Amp
筛选标记：mCherry
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
质粒属性
载体宿主：哺乳细胞
载体用途：蛋白表达
基因种属：小鼠
基因类型：ORF
原核抗性：Amp
真核抗性：
荧光蛋白：红色
质粒简介
pHG52d34.5-CMV-Mil-15-mCherry质粒
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 6905 bp ds-DNA circular SYN 06-JUL-2018
DEFINITION synthetic circular DNA
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS PHG52d34.5-CMV-Mil-15-mcherry
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 6905)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..6905
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
promoter complement(774..792)
/note="T7 promoter"
/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
rep_origin complement(1050..1638)
/direction=LEFT
/note="ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(1809..2669)
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/note="AmpR"
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
promoter complement(2670..2774)
/gene="bla"
/note="AmpR promoter"
promoter 3120..3138
/note="SP6 promoter"
/note="promoter for bacteriophage SP6 RNA polymerase"
misc_feature 3152..4457
/note="HSV2d34.5A"
enhancer 4526..4905
/note="CMV enhancer"
/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
promoter 4906..5109
/note="CMV promoter"
/note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early
promoter"
promoter 5154..5172
/note="T7 promoter"
/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
misc_feature 5317..5802
/note="mIL-15"
CDS 5803..5859
/codon_start=1
/product="2A peptide from porcine teschovirus-1
polyprotein"
/note="P2A"
/note="Eukaryotic ribosomes fail to insert a peptide bond
between the Gly and Pro residues, yielding separate
polypeptides."
/translation="ATNFSLLKQAGDVEENPGP"
CDS 5860..6570
/codon_start=1
/product="monomeric derivative of DsRed fluorescent protein
(Shaner et al., 2004)"
/note="mCherry"
/note="mammalian codon-optimized"
/translation="MVSKGEEDNMAIIKEFMRFKVHMEGSVNGHEFEIEGEGEGRPYEG
TQTAKLKVTKGGPLPFAWDILSPQFMYGSKAYVKHPADIPDYLKLSFPEGFKWERVMNF
EDGGVVTVTQDSSLQDGEFIYKVKLRGTNFPSDGPVMQKKTMGWEASSERMYPEDGALK
GEIKQRLKLKDGGHYDAEVKTTYKAKKPVQLPGAYNVNIKLDITSHNEDYTIVEQYERA
EGRHSTGGMDELYK"
promoter complement(6615..6633)
/note="SP6 promoter"
/note="promoter for bacteriophage SP6 RNA polymerase"
polyA_signal 6659..6883
/note="bGH poly(A) signal"
/note="bovine growth hormone polyadenylation signal"
ORIGIN
1 atccgtgtaa ccgccagtcc gtgcttgcct agcgaactca cccgtcccgg ctggcgtgcg
61 cagcccgggc cgtgttgcgg gccctcttaa ggggcggcgg caggacgggg actcccgccc
121 cgcctctttt cccccgggga gtcaaccccc ggggggggtg ttttttgggg gggggcgcga
181 aggcgggcgg cggcggcggg cgggcggcag ggcagccccg cgcgccccct tccccgtccc
241 tcccccggag ccggccgctc ccccgcgggc gccgcccctc cccccgcgcg ccgcggggct
301 gccttcccgc gggcgccccc gcgcggcttt tttcccgcgc ccgcccccgc gcggcaggac
361 ggggactagc aggctgtgcc gcagaccacc acacactccc aagctccccg cccccccgaa
421 gacgccagtc gcaccaccgc tcgccctcgc agaccagaca gttgcaccaa gcacccgccc
481 gcccgcacac ggttccccgc caccccctcc ctcccctcca tcccgccgag ctcgcggcag
541 cccctccccc ccgcgcgcca cggggctgcg gtcccgcggc cgcctccccc gcggccgcct
601 cccccgcgcc ccgccccggg ggcttccccc gcccctcccc ccgcgcccgc ggccccgagc
661 tcgcagcagc ccctccctcc cgcgccccgt gccttccctc ccgctcctgc gggggggctc
721 gggccacctg accttcgtaa cctgcactca ggtcagagag atctgccggt ctccctatag
781 tgagtcgtat taatttcgat aagccaggtt aacctgcatt aatgaatcgg ccaacgcgcg
841 gggagaggcg gtttgcgtat tgggcgctct tccgcttcct cgctcactga ctcgctgcgc
901 tcggtcgttc ggctgcggcg agcggtatca gctcactcaa aggcggtaat acggttatcc
961 acagaatcag gggataacgc aggaaagaac atgtgagcaa aaggccagca aaaggccagg
1021 aaccgtaaaa aggccgcgtt gctggcgttt ttccataggc tccgcccccc tgacgagcat
1081 cacaaaaatc gacgctcaag tcagaggtgg cgaaacccga caggactata aagataccag
1141 gcgtttcccc ctggaagctc cctcgtgcgc tctcctgttc cgaccctgcc gcttaccgga
1201 tacctgtccg cctttctccc ttcgggaagc gtggcgcttt ctcaatgctc acgctgtagg
1261 tatctcagtt cggtgtaggt cgttcgctcc aagctgggct gtgtgcacga accccccgtt
1321 cagcccgacc gctgcgcctt atccggtaac tatcgtcttg agtccaaccc ggtaagacac
1381 gacttatcgc cactggcagc agccactggt aacaggatta gcagagcgag gtatgtaggc
1441 ggtgctacag agttcttgaa gtggtggcct aactacggct acactagaag gacagtattt
1501 ggtatctgcg ctctgctgaa gccagttacc ttcggaaaaa gagttggtag ctcttgatcc
1561 ggcaaacaaa ccaccgctgg tagcggtggt ttttttgttt gcaagcagca gattacgcgc
1621 agaaaaaaag gatctcaaga agatcctttg atcttttcta cggggtctga cgctcagtgg
1681 aacgaaaact cacgttaagg gattttggtc atgagattat caaaaaggat cttcacctag
1741 atccttttaa attaaaaatg aagttttaaa tcaatctaaa gtatatatga gtaaacttgg
1801 tctgacagtt accaatgctt aatcagtgag gcacctatct cagcgatctg tctatttcgt
1861 tcatccatag ttgcctgact ccccgtcgtg tagataacta cgatacggga gggcttacca
1921 tctggcccca gtgctgcaat gataccgcga gacccacgct caccggctcc agatttatca
1981 gcaataaacc agccagccgg aagggccgag cgcagaagtg gtcctgcaac tttatccgcc
2041 tccatccagt ctattaattg ttgccgggaa gctagagtaa gtagttcgcc agttaatagt
2101 ttgcgcaacg ttgttgccat tgctacaggc atcgtggtgt cacgctcgtc gtttggtatg
2161 gcttcattca gctccggttc ccaacgatca aggcgagtta catgatcccc catgttgtgc
2221 aaaaaagcgg ttagctcctt cggtcctccg atcgttgtca gaagtaagtt ggccgcagtg
2281 ttatcactca tggttatggc agcactgcat aattctctta ctgtcatgcc atccgtaaga
2341 tgcttttctg tgactggtga gtactcaacc aagtcattct gagaatagtg tatgcggcga
2401 ccgagttgct cttgcccggc gtcaatacgg gataataccg cgccacatag cagaacttta
2461 aaagtgctca tcattggaaa acgttcttcg gggcgaaaac tctcaaggat cttaccgctg
2521 ttgagatcca gttcgatgta acccactcgt gcacccaact gatcttcagc atcttttact
2581 ttcaccagcg tttctgggtg agcaaaaaca ggaaggcaaa atgccgcaaa aaagggaata
2641 agggcgacac ggaaatgttg aatactcata ctcttccttt ttcaatatta ttgaagcatt
2701 tatcagggtt attgtctcat gagcggatac atatttgaat gtatttagaa aaataaacaa
2761 ataggggttc cgcgcacatt tccccgaaaa gtgccacctg acgtctaaga aaccattatt
2821 atcatgacat taacctataa aaataggcgt atcacgaggc cctttcgtct cgcgcgtttc
2881 ggtgatgacg gtgaaaacct ctgacacatg cagctcccgg agacggtcac agcttgtctg
2941 taagcggatg ccgggagcag acaagcccgt cagggcgcgt cagcgggtgt tggcgggtgt
3001 cggggctggc ttaactatgc ggcatcagag cagattgtac tgagagtgca ccatatggac
3061 atattgtcgt tagaacgcgg ctacaattaa tacataacct tatgtatcat acacatacga
3121 tttaggtgac actatagaac tcgagcagct gcggtgaagg tcgtcgtcag agattcccac
3181 ctcggtctcc tcctccgagt cgctgctggc gagccactgc atgtcgttga gcatccccca
3241 ggcgtgcggg gcggcgggct gcttgacaaa gcaacggggg ggatttagag ggcgcggggc
3301 gtgaggcggg acccccgcgc cgtgtccccc gtgtccctcc ctcaccccgg ccccccgccc
3361 gctgcttttt gttcggaagg gggggagaaa ggggtccgta accaaaggtg gtctgcgtcc
3421 tttggattcc gacccctcgt ctccccccct gtcccccgct ctcgggctcc tccctgcctc
3481 cctcgccccc ccagagggtc ggggggcggc gcacggccca cgggggtccc ccgaccgctt
3541 aagcgggccg ggggtcggcc ccgtcaagcg tccccgcccc cgagcccacc gcccgcgacc
3601 acccccaacc cgcagccggg tggtccgggg aaaagggggg gcctgagacc cgggggtcgc
3661 cctctcaccg tgccgggggt ctgccgcggc ggccgctcgg ggccggggtc cgcccgggag
3721 ctcgtgccgg gccggggttc catgagccgg ggtagggtag actcgagacg gcggcccgcg
3781 gtctctctct tgccgggttt tagtctctgt ctctccgggt ctcctcctcc cgccgggccg
3841 ccgctccgtc gctcgcagtg ccggggtgcg aatgcggccc gaccgtcaca cggggctgcc
3901 ttatacccgg cgcctatcca ctcccccaaa ggggcggcat ttacgattcc cccaatagcc
3961 gcgcgccccg gcgggggcgg agggagggaa tccccccctc tcggggcggc cccgtccccg
4021 gggaccaacc gggtgtactc caagaacccc attagcatgc gccgcccccc gccgacgcag
4081 atgggagtcc ccccggcgcc ccgccggcgc ggccctgagt ggtgcccgcc cccggggaaa
4141 aattcattag catactagga agcccagggg accaataggg gccgatcagc ccacccaccc
4201 ggcggcgcgc gaggctctgc gtgttctgcc aagaaagtaa tcagcataac ccggaacccc
4261 gagggagtaa ttacgcgggg agcgaggggc cgtccgaacg tttttaatta ccataagcgg
4321 gaatggcggc ccgttaaaag ctgctaatta ccgcgagcgg gaacgccggc ccattaaaag
4381 ttgctaatta ccatgcgcgg ggatggcggc cgggaccgcc tattaaaagt ttctaattac
4441 cataccggga agccggctct agaggatccc cgggtaccga gctcgaattc atcgatgatc
4501 gatgtacggg ccagatatac gcgttgacat tgattattga ctagttatta atagtaatca
4561 attacggggt cattagttca tagcccatat atggagttcc gcgttacata acttacggta
4621 aatggcccgc ctggctgacc gcccaacgac ccccgcccat tgacgtcaat aatgacgtat
4681 gttcccatag taacgccaat agggactttc cattgacgtc aatgggtgga ctatttacgg
4741 taaactgccc acttggcagt acatcaagtg tatcatatgc caagtacgcc ccctattgac
4801 gtcaatgacg gtaaatggcc cgcctggcat tatgcccagt acatgacctt atgggacttt
4861 cctacttggc agtacatcta cgtattagtc atcgctatta ccatggtgat gcggttttgg
4921 cagtacatca atgggcgtgg atagcggttt gactcacggg gatttccaag tctccacccc
4981 attgacgtca atgggagttt gttttggcac caaaatcaac gggactttcc aaaatgtcgt
5041 aacaactccg ccccattgac gcaaatgggc ggtaggcgtg tacggtggga ggtctatata
5101 agcagagctc tctggctaac tagagaaccc actgcttact ggcttatcga aattaatacg
5161 actcactata gggagaccca agcttggtac cgagctcgga tccactagta acggccgcca
5221 gtgtgctgga attctgcaga tatccatcac actggcggcc agcttcgaat tctgcagtcg
5281 acggtaccgc gggcccggga tccaccggtc gccaccatga aaattttgaa accatatatg
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6061 cctcagttca tgtacggctc caaggcctac gtgaagcacc ccgccgacat ccccgactac
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6241 aagctgcgcg gcaccaactt cccctccgac ggccccgtaa tgcagaagaa gaccatgggc
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6481 tcccacaacg aggactacac catcgtggaa cagtacgaac gcgccgaggg ccgccactcc
6541 accggcggca tggacgagct gtacaagtaa agcggccctg gcggccgctc gagcatgcat
6601 ctagagggcc ctattctata gtgtcaccta aatgctagag ctcgctgatc agcctcgact
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6721 gaaggtgcca ctcccactgt cctttcctaa taaaatgagg aaattgcatc gcattgtctg
6781 agtaggtgtc attctattct ggggggtggg gtggggcagg acagcaaggg ggaggattgg
6841 gaagacaata gcaggcatgc tggggatgcg gtgggctcta tggcttctga ggcggaaaga
6901 accag
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pHG52d34.5-CMV-Mil-15-mCherry质粒
别称: NM_008357.2
启动子：CMV
复制子: pUC
原核抗性: Amp
筛选标记：mCherry
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
质粒属性
载体宿主：哺乳细胞
载体用途：蛋白表达
基因种属：小鼠
基因类型：ORF
原核抗性：Amp
真核抗性：
荧光蛋白：红色
质粒简介
pHG52d34.5-CMV-Mil-15-mCherry质粒
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 6905 bp ds-DNA circular SYN 06-JUL-2018
DEFINITION synthetic circular DNA
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS PHG52d34.5-CMV-Mil-15-mcherry
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 6905)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..6905
/organism="synthetic DNA construct"
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rep_origin complement(1050..1638)
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replication"
CDS complement(1809..2669)
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related antibiotics"
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EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
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/note="AmpR promoter"
promoter 3120..3138
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misc_feature 3152..4457
/note="HSV2d34.5A"
enhancer 4526..4905
/note="CMV enhancer"
/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
promoter 4906..5109
/note="CMV promoter"
/note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early
promoter"
promoter 5154..5172
/note="T7 promoter"
/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
misc_feature 5317..5802
/note="mIL-15"
CDS 5803..5859
/codon_start=1
/product="2A peptide from porcine teschovirus-1
polyprotein"
/note="P2A"
/note="Eukaryotic ribosomes fail to insert a peptide bond
between the Gly and Pro residues, yielding separate
polypeptides."
/translation="ATNFSLLKQAGDVEENPGP"
CDS 5860..6570
/codon_start=1
/product="monomeric derivative of DsRed fluorescent protein
(Shaner et al., 2004)"
/note="mCherry"
/note="mammalian codon-optimized"
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TQTAKLKVTKGGPLPFAWDILSPQFMYGSKAYVKHPADIPDYLKLSFPEGFKWERVMNF
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GEIKQRLKLKDGGHYDAEVKTTYKAKKPVQLPGAYNVNIKLDITSHNEDYTIVEQYERA
EGRHSTGGMDELYK"
promoter complement(6615..6633)
/note="SP6 promoter"
/note="promoter for bacteriophage SP6 RNA polymerase"
polyA_signal 6659..6883
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/note="bovine growth hormone polyadenylation signal"
ORIGIN
1 atccgtgtaa ccgccagtcc gtgcttgcct agcgaactca cccgtcccgg ctggcgtgcg
61 cagcccgggc cgtgttgcgg gccctcttaa ggggcggcgg caggacgggg actcccgccc
121 cgcctctttt cccccgggga gtcaaccccc ggggggggtg ttttttgggg gggggcgcga
181 aggcgggcgg cggcggcggg cgggcggcag ggcagccccg cgcgccccct tccccgtccc
241 tcccccggag ccggccgctc ccccgcgggc gccgcccctc cccccgcgcg ccgcggggct
301 gccttcccgc gggcgccccc gcgcggcttt tttcccgcgc ccgcccccgc gcggcaggac
361 ggggactagc aggctgtgcc gcagaccacc acacactccc aagctccccg cccccccgaa
421 gacgccagtc gcaccaccgc tcgccctcgc agaccagaca gttgcaccaa gcacccgccc
481 gcccgcacac ggttccccgc caccccctcc ctcccctcca tcccgccgag ctcgcggcag
541 cccctccccc ccgcgcgcca cggggctgcg gtcccgcggc cgcctccccc gcggccgcct
601 cccccgcgcc ccgccccggg ggcttccccc gcccctcccc ccgcgcccgc ggccccgagc
661 tcgcagcagc ccctccctcc cgcgccccgt gccttccctc ccgctcctgc gggggggctc
721 gggccacctg accttcgtaa cctgcactca ggtcagagag atctgccggt ctccctatag
781 tgagtcgtat taatttcgat aagccaggtt aacctgcatt aatgaatcgg ccaacgcgcg
841 gggagaggcg gtttgcgtat tgggcgctct tccgcttcct cgctcactga ctcgctgcgc
901 tcggtcgttc ggctgcggcg agcggtatca gctcactcaa aggcggtaat acggttatcc
961 acagaatcag gggataacgc aggaaagaac atgtgagcaa aaggccagca aaaggccagg
1021 aaccgtaaaa aggccgcgtt gctggcgttt ttccataggc tccgcccccc tgacgagcat
1081 cacaaaaatc gacgctcaag tcagaggtgg cgaaacccga caggactata aagataccag
1141 gcgtttcccc ctggaagctc cctcgtgcgc tctcctgttc cgaccctgcc gcttaccgga
1201 tacctgtccg cctttctccc ttcgggaagc gtggcgcttt ctcaatgctc acgctgtagg
1261 tatctcagtt cggtgtaggt cgttcgctcc aagctgggct gtgtgcacga accccccgtt
1321 cagcccgacc gctgcgcctt atccggtaac tatcgtcttg agtccaaccc ggtaagacac
1381 gacttatcgc cactggcagc agccactggt aacaggatta gcagagcgag gtatgtaggc
1441 ggtgctacag agttcttgaa gtggtggcct aactacggct acactagaag gacagtattt
1501 ggtatctgcg ctctgctgaa gccagttacc ttcggaaaaa gagttggtag ctcttgatcc
1561 ggcaaacaaa ccaccgctgg tagcggtggt ttttttgttt gcaagcagca gattacgcgc
1621 agaaaaaaag gatctcaaga agatcctttg atcttttcta cggggtctga cgctcagtgg
1681 aacgaaaact cacgttaagg gattttggtc atgagattat caaaaaggat cttcacctag
1741 atccttttaa attaaaaatg aagttttaaa tcaatctaaa gtatatatga gtaaacttgg
1801 tctgacagtt accaatgctt aatcagtgag gcacctatct cagcgatctg tctatttcgt
1861 tcatccatag ttgcctgact ccccgtcgtg tagataacta cgatacggga gggcttacca
1921 tctggcccca gtgctgcaat gataccgcga gacccacgct caccggctcc agatttatca
1981 gcaataaacc agccagccgg aagggccgag cgcagaagtg gtcctgcaac tttatccgcc
2041 tccatccagt ctattaattg ttgccgggaa gctagagtaa gtagttcgcc agttaatagt
2101 ttgcgcaacg ttgttgccat tgctacaggc atcgtggtgt cacgctcgtc gtttggtatg
2161 gcttcattca gctccggttc ccaacgatca aggcgagtta catgatcccc catgttgtgc
2221 aaaaaagcgg ttagctcctt cggtcctccg atcgttgtca gaagtaagtt ggccgcagtg
2281 ttatcactca tggttatggc agcactgcat aattctctta ctgtcatgcc atccgtaaga
2341 tgcttttctg tgactggtga gtactcaacc aagtcattct gagaatagtg tatgcggcga
2401 ccgagttgct cttgcccggc gtcaatacgg gataataccg cgccacatag cagaacttta
2461 aaagtgctca tcattggaaa acgttcttcg gggcgaaaac tctcaaggat cttaccgctg
2521 ttgagatcca gttcgatgta acccactcgt gcacccaact gatcttcagc atcttttact
2581 ttcaccagcg tttctgggtg agcaaaaaca ggaaggcaaa atgccgcaaa aaagggaata
2641 agggcgacac ggaaatgttg aatactcata ctcttccttt ttcaatatta ttgaagcatt
2701 tatcagggtt attgtctcat gagcggatac atatttgaat gtatttagaa aaataaacaa
2761 ataggggttc cgcgcacatt tccccgaaaa gtgccacctg acgtctaaga aaccattatt
2821 atcatgacat taacctataa aaataggcgt atcacgaggc cctttcgtct cgcgcgtttc
2881 ggtgatgacg gtgaaaacct ctgacacatg cagctcccgg agacggtcac agcttgtctg
2941 taagcggatg ccgggagcag acaagcccgt cagggcgcgt cagcgggtgt tggcgggtgt
3001 cggggctggc ttaactatgc ggcatcagag cagattgtac tgagagtgca ccatatggac
3061 atattgtcgt tagaacgcgg ctacaattaa tacataacct tatgtatcat acacatacga
3121 tttaggtgac actatagaac tcgagcagct gcggtgaagg tcgtcgtcag agattcccac
3181 ctcggtctcc tcctccgagt cgctgctggc gagccactgc atgtcgttga gcatccccca
3241 ggcgtgcggg gcggcgggct gcttgacaaa gcaacggggg ggatttagag ggcgcggggc
3301 gtgaggcggg acccccgcgc cgtgtccccc gtgtccctcc ctcaccccgg ccccccgccc
3361 gctgcttttt gttcggaagg gggggagaaa ggggtccgta accaaaggtg gtctgcgtcc
3421 tttggattcc gacccctcgt ctccccccct gtcccccgct ctcgggctcc tccctgcctc
3481 cctcgccccc ccagagggtc ggggggcggc gcacggccca cgggggtccc ccgaccgctt
3541 aagcgggccg ggggtcggcc ccgtcaagcg tccccgcccc cgagcccacc gcccgcgacc
3601 acccccaacc cgcagccggg tggtccgggg aaaagggggg gcctgagacc cgggggtcgc
3661 cctctcaccg tgccgggggt ctgccgcggc ggccgctcgg ggccggggtc cgcccgggag
3721 ctcgtgccgg gccggggttc catgagccgg ggtagggtag actcgagacg gcggcccgcg
3781 gtctctctct tgccgggttt tagtctctgt ctctccgggt ctcctcctcc cgccgggccg
3841 ccgctccgtc gctcgcagtg ccggggtgcg aatgcggccc gaccgtcaca cggggctgcc
3901 ttatacccgg cgcctatcca ctcccccaaa ggggcggcat ttacgattcc cccaatagcc
3961 gcgcgccccg gcgggggcgg agggagggaa tccccccctc tcggggcggc cccgtccccg
4021 gggaccaacc gggtgtactc caagaacccc attagcatgc gccgcccccc gccgacgcag
4081 atgggagtcc ccccggcgcc ccgccggcgc ggccctgagt ggtgcccgcc cccggggaaa
4141 aattcattag catactagga agcccagggg accaataggg gccgatcagc ccacccaccc
4201 ggcggcgcgc gaggctctgc gtgttctgcc aagaaagtaa tcagcataac ccggaacccc
4261 gagggagtaa ttacgcgggg agcgaggggc cgtccgaacg tttttaatta ccataagcgg
4321 gaatggcggc ccgttaaaag ctgctaatta ccgcgagcgg gaacgccggc ccattaaaag
4381 ttgctaatta ccatgcgcgg ggatggcggc cgggaccgcc tattaaaagt ttctaattac
4441 cataccggga agccggctct agaggatccc cgggtaccga gctcgaattc atcgatgatc
4501 gatgtacggg ccagatatac gcgttgacat tgattattga ctagttatta atagtaatca
4561 attacggggt cattagttca tagcccatat atggagttcc gcgttacata acttacggta
4621 aatggcccgc ctggctgacc gcccaacgac ccccgcccat tgacgtcaat aatgacgtat
4681 gttcccatag taacgccaat agggactttc cattgacgtc aatgggtgga ctatttacgg
4741 taaactgccc acttggcagt acatcaagtg tatcatatgc caagtacgcc ccctattgac
4801 gtcaatgacg gtaaatggcc cgcctggcat tatgcccagt acatgacctt atgggacttt
4861 cctacttggc agtacatcta cgtattagtc atcgctatta ccatggtgat gcggttttgg
4921 cagtacatca atgggcgtgg atagcggttt gactcacggg gatttccaag tctccacccc
4981 attgacgtca atgggagttt gttttggcac caaaatcaac gggactttcc aaaatgtcgt
5041 aacaactccg ccccattgac gcaaatgggc ggtaggcgtg tacggtggga ggtctatata
5101 agcagagctc tctggctaac tagagaaccc actgcttact ggcttatcga aattaatacg
5161 actcactata gggagaccca agcttggtac cgagctcgga tccactagta acggccgcca
5221 gtgtgctgga attctgcaga tatccatcac actggcggcc agcttcgaat tctgcagtcg
5281 acggtaccgc gggcccggga tccaccggtc gccaccatga aaattttgaa accatatatg
5341 aggaatacat ccatctcgtg ctacttgtgt ttccttctaa acagtcactt tttaactgag
5401 gctggcattc atgtcttcat tttgggctgt gtcagtgtag gtctccctaa aacagaggcc
5461 aactggatag atgtaagata tgacctggag aaaattgaaa gccttattca atctattcat
5521 attgacacca ctttatacac tgacagtgac tttcatccca gttgcaaagt tactgcaatg
5581 aactgctttc tcctggaatt gcaggttatt ttacatgagt acagtaacat gactcttaat
5641 gaaacagtaa gaaacgtgct ctaccttgca aacagcactc tgtcttctaa caagaatgta
5701 gcagaatctg gctgcaagga atgtgaggag ctggaggaga aaaccttcac agagtttttg
5761 caaagcttta tacgcattgt ccaaatgttc atcaacacgt ccgccacgaa cttctctctg
5821 ttaaagcaag caggagacgt ggaagaaaac cccggtccta tggtgagcaa gggcgaggag
5881 gataacatgg ccatcatcaa ggagttcatg cgcttcaagg tgcacatgga gggctccgtg
5941 aacggccacg agttcgagat cgagggcgag ggcgagggcc gcccctacga gggcacccag
6001 accgccaagc tgaaggtgac caagggtggc cccctgccct tcgcctggga catcctgtcc
6061 cctcagttca tgtacggctc caaggcctac gtgaagcacc ccgccgacat ccccgactac
6121 ttgaagctgt ccttccccga gggcttcaag tgggagcgcg tgatgaactt cgaggacggc
6181 ggcgtggtga ccgtgaccca ggactcctcc ctgcaggacg gcgagttcat ctacaaggtg
6241 aagctgcgcg gcaccaactt cccctccgac ggccccgtaa tgcagaagaa gaccatgggc
6301 tgggaggcct cctccgagcg gatgtacccc gaggacggcg ccctgaaggg cgagatcaag
6361 cagaggctga agctgaagga cggcggccac tacgacgctg aggtcaagac cacctacaag
6421 gccaagaagc ccgtgcagct gcccggcgcc tacaacgtca acatcaagtt ggacatcacc
6481 tcccacaacg aggactacac catcgtggaa cagtacgaac gcgccgaggg ccgccactcc
6541 accggcggca tggacgagct gtacaagtaa agcggccctg gcggccgctc gagcatgcat
6601 ctagagggcc ctattctata gtgtcaccta aatgctagag ctcgctgatc agcctcgact
6661 gtgccttcta gttgccagcc atctgttgtt tgcccctccc ccgtgccttc cttgaccctg
6721 gaaggtgcca ctcccactgt cctttcctaa taaaatgagg aaattgcatc gcattgtctg
6781 agtaggtgtc attctattct ggggggtggg gtggggcagg acagcaaggg ggaggattgg
6841 gaagacaata gcaggcatgc tggggatgcg gtgggctcta tggcttctga ggcggaaaga
6901 accag
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质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P4009/pCMV-SPORT6-MKRN2（1同义突变）人源基因质粒 |
| P4010/pCMV-SPORT6-UCN2人源基因质粒 |
| P4011/pCMV-SPORT6-MOB3A人源基因质粒 |
| P4012/pCMV-SPORT6-MAP7D1（827-2523bp）人源基因质粒 |
| P4013/pCMV-SPORT6-H3F3B人源基因质粒 |
| P4014/pCMV-SPORT6-C14orf80人源基因质粒 |
| P4015/pCMV-SPORT6-NABP1人源基因质粒 |
| P4016/pCMV-SPORT6-SLC16A5（1同义突变）人源基因质粒 |
| P4017/pCMV-SPORT6-SLBP人源基因质粒 |
| P4018/pCMV-SPORT6-TM9SF1人源基因质粒 |
| P4019/pCMV-SPORT6-SNAP29（1同义突变）人源基因质粒 |
| P4020/pCMV-SPORT6-BCOR人源基因质粒 |
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pHG52d34.5-CMV-Mil-15-mCherry质粒
￥100 - 1000
