Pveg枯草启动子质粒

基本信息
名称：Pveg枯草启动子质粒
别称: Plasmid#55173
启动子：veg
复制子: pUC
原核抗性: Chl
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度

质粒属性
载体宿主：大肠杆菌
载体用途：蛋白表达
基因种属：人
基因类型：Promoter
原核抗性：Chl
真核抗性：
荧光蛋白：

质粒简介
 Pveg枯草启动子质粒

质粒图谱


质粒序列
LOCUS       Exported                2307 bp ds-DNA     circular SYN 10-JUL-2018
DEFINITION  synthetic circular DNA
ACCESSION   .
VERSION     .
KEYWORDS    Pveg
SOURCE      synthetic DNA construct
  ORGANISM  synthetic DNA construct
REFERENCE   1  (bases 1 to 2307)
  AUTHORS   .
  TITLE     Direct Submission
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..2307
                     /organism="synthetic DNA construct"
                     /mol_type="other DNA"
     terminator      2..59
                     /note="his operon terminator"
                     /note="This putative transcriptin terminator from the E. 
                     coli his operon has a 2-bp deletion introduced during 
                     synthesis. Its efficiency has not been determined."
     rep_origin      complement(254..842)
                     /direction=LEFT
                     /note="ori"
                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 
                     replication"
     terminator      1025..1119
                     /note="lambda t0 terminator"
                     /note="transcription terminator from phage lambda"
     CDS             complement(1140..1799)
                     /codon_start=1
                     /gene="cat"
                     /product="chloramphenicol acetyltransferase"
                     /note="Chl"
                     /note="confers resistance to chloramphenicol"
                     /translation="MEKKITGYTTVDISQWHRKEHFEAFQSVAQCTYNQTVQLDITAFL
                     KTVKKNKHKFYPAFIHILARLMNAHPEFRMAMKDGELVIWDSVHPCYTVFHEQTETFSS
                     LWSEYHDDFRQFLHIYSQDVACYGENLAYFPKGFIENMFFVSANPWVSFTSFDLNVANM
                     DNFFAPVFTMGKYYTQGDKVLMPLAIQVHHAVCDGFHVGRMLNELQQYCDEWQGGA"
     terminator      1983..2026
                     /note="bacterial terminator"
                     /note="putative bacterial transcription terminator"
     misc_feature    2029..2050
                     /note="BioBrick prefix"
                     /note="BioBrick prefix for parts that do not start with 
                     ""ATG"""
     misc_feature    2051..2302
                     /note="veg promoter"
ORIGIN
        1 gtccggcaaa aaagggcaag gtgtcaccac cctgcccttt ttctttaaaa ccgaaaagat
       61 tacttcgcgt tatgcaggct tcctcgctca ctgactcgct gcgctcggtc gttcggctgc
      121 ggcgagcggt atcagctcac tcaaaggcgg taatacggtt atccacagaa tcaggggata
      181 acgcaggaaa gaacatgtga gcaaaaggcc agcaaaaggc caggaaccgt aaaaaggccg
      241 cgttgctggc gtttttccac aggctccgcc cccctgacga gcatcacaaa aatcgacgct
      301 caagtcagag gtggcgaaac ccgacaggac tataaagata ccaggcgttt ccccctggaa
      361 gctccctcgt gcgctctcct gttccgaccc tgccgcttac cggatacctg tccgcctttc
      421 tcccttcggg aagcgtggcg ctttctcata gctcacgctg taggtatctc agttcggtgt
      481 aggtcgttcg ctccaagctg ggctgtgtgc acgaaccccc cgttcagccc gaccgctgcg
      541 ccttatccgg taactatcgt cttgagtcca acccggtaag acacgactta tcgccactgg
      601 cagcagccac tggtaacagg attagcagag cgaggtatgt aggcggtgct acagagttct
      661 tgaagtggtg gcctaactac ggctacacta gaagaacagt atttggtatc tgcgctctgc
      721 tgaagccagt taccttcgga aaaagagttg gtagctcttg atccggcaaa caaaccaccg
      781 ctggtagcgg tggttttttt gtttgcaagc agcagattac gcgcagaaaa aaaggatctc
      841 aagaagatcc tttgatcttt tctacggggt ctgacgctca gtggaacgaa aactcacgtt
      901 aagggatttt ggtcatgaga ttatcaaaaa ggatcttcac ctagatcctt ttaaattaaa
      961 aatgaagttt taaatcaatc taaagtatat atgagtaaac ttggtctgac agctcgaggc
     1021 ttggattctc accaataaaa aacgcccggc ggcaaccgag cgttctgaac aaatccagat
     1081 ggagttctga ggtcattact ggatctatca acaggagtcc aagcgagctc gatatcaaat
     1141 tacgccccgc cctgccactc atcgcagtac tgttgtaatt cattaagcat tctgccgaca
     1201 tggaagccat cacaaacggc atgatgaacc tgaatcgcca gcggcatcag caccttgtcg
     1261 ccttgcgtat aatatttgcc catggtgaaa acgggggcga agaagttgtc catattggcc
     1321 acgtttaaat caaaactggt gaaactcacc cagggattgg ctgagacgaa aaacatattc
     1381 tcaataaacc ctttagggaa ataggccagg ttttcaccgt aacacgccac atcttgcgaa
     1441 tatatgtgta gaaactgccg gaaatcgtcg tggtattcac tccagagcga tgaaaacgtt
     1501 tcagtttgct catggaaaac ggtgtaacaa gggtgaacac tatcccatat caccagctca
     1561 ccgtctttca ttgccatacg aaattccgga tgagcattca tcaggcgggc aagaatgtga
     1621 ataaaggccg gataaaactt gtgcttattt ttctttacgg tctttaaaaa ggccgtaata
     1681 tccagctgaa cggtctggtt ataggtacat tgagcaactg actgaaatgc ctcaaaatgt
     1741 tctttacgat gccattggga tatatcaacg gtggtatatc cagtgatttt tttctccatt
     1801 ttagcttcct tagctcctga aaatctcgat aactcaaaaa atacgcccgg tagtgatctt
     1861 atttcattat ggtgaaagtt ggaacctctt acgtgcccga tcaactcgag tgccacctga
     1921 cgtctaagaa accattatta tcatgacatt aacctataaa aataggcgta tcacgaggca
     1981 gaatttcaga taaaaaaaat ccttagcttt cgctaaggat gatttctgga attcgcggcc
     2041 gcttctagag ggagttctga gaattggtat gccttataag tccaattaac agttgaaaac
     2101 ctgcatagga gagctatgcg ggttttttat tttacataat gatacataat ttaccgaaac
     2161 ttgcggaaca taattgagga atcatagaat tttgtcaaaa taattttatt gacaacgtct
     2221 tattaacgtt gatataattt aaattttatt tgacaaaaat gggctcgtgt tgtacaataa
     2281 atgtagttac tagtagcggc cgctgca
//

质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
         收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
         1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              ①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
              ②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
              ③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
              ④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
              ⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
              ⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
        2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
              四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
        3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
        4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              直接挑取单菌落至液体培养基中。
        5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
              单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
        6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。

二、转化图片

P4882/pCMV-SPORT6-ACAA1（点突变）人源基因质粒

P3867/pCMV-SPORT6-CBS（1同义突变）人源基因质粒

P3868/pCMV-SPORT6-VPS33A人源基因质粒

P3869/pCMV-SPORT6-SLC38A1（1同义突变）人源基因质粒

P3870/pCMV-SPORT6-SF3A3（1同义突变）人源基因质粒

P3871/pCMV-SPORT6-NCAPD3人源基因质粒

P3872/pCMV-SPORT6-ORC1人源基因质粒

P3873/pCMV-SPORT6-PTPN4人源基因质粒

P3874/pCMV-SPORT6-MAP3K11（1同义突变）人源基因质粒

P3875/pCMV-SPORT6-MED24（2同义突变）人源基因质粒

P3876/pCMV-SPORT6-GPT人源基因质粒