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- Xybio
- 上海
- P2205
- 2025年07月07日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
pTEM1-E166N-Mem
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
名称：pTEM1-E166N-Mem基因质粒
别称: pTEM1-E166N-Mem
原核抗性: Kan
筛选标记：G418
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
质粒属性
载体宿主：哺乳细胞
载体用途：蛋白表达
基因种属：
基因类型：ORF
原核抗性：Kan
真核抗性：Neo/G418
荧光蛋白：
质粒简介
pTEM1-E166N-Mem质粒由上海烜雅生物科技有限公司提供
质粒图谱
质粒序列：详询
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P4105/pCDNA3.1-HA-STAT2-Myc人源基因质粒 |
| P4106/pLVX-IRES-Puro-MEN1人源基因质粒 |
| P1235/pCDH-puro-Bcl-XL人源基因质粒 |
| P1745/pActin-EGFP-beta-Actin (Homo)人源基因质粒 |
| P1246/pECMV-3×FLAG-DRD2人源基因质粒 |
| P1247/pECMV-3×FLAG-DRD3人源基因质粒 |
| P1248/pECMV-3×FLAG-PCSK9人源基因质粒 |
| P1249/pECMV-3×FLAG-CD20人源基因质粒 |
| P1250/pECMV-3×FLAG-SGLT1人源基因质粒 |
| P1251/pECMV-3×FLAG-SIRT4人源基因质粒 |
| P1281/pECMV-3×FLAG-LONP2人源基因质粒 |
| P1563/pECMV-3×FLAG-Survium人源基因质粒 |
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文献和实验的例子是溶血素基因，该基因曾被用于构建分泌的杂交蛋白[162，163]；第二种方法依赖于有限渗透的诱导而导致蛋白质的分泌。例如应用pelB[164]、ompA[165]和A蛋白引导序列[153，166]；与细菌素释放蛋白的共表达[167]；丝裂霉素诱导的细菌素释放蛋白和在培养基中添加甘氨酸[168]以及与kil基因共表达而进行膜穿透[169]。但通常情况下，外泌蛋白质的产量是中等的。有文献报道[170]，在大肠杆菌表达系统中，金黄色葡萄球菌A蛋白的信号肽能引导带有E结构域的A蛋白片段或融合产物从细胞
演示：首先我们从 NCBI 上下载 TP53 基因序列，将其粘贴到相应选项框内，并转换为氨基酸序列，如下图：同时我们也会看到多出来的选项 5，如果我们要进行点突变，则需要勾选 5 后面的灰色圆圈在下面这个框选中我们要突变的目的氨基酸，如红色圆圈标出所示：同时在下面选框勾选出我们想要突变成的氨基酸，这个就表示我们将 N29 突变为 I（N29I），S33 突变为 K (S33K)，L35 突变为 E (L35E)，E55 突变为 C (E55C)该网站可以同时设计针对 7 个氨基酸的突变引物, 接下
作物。在燕麦中，至今尚无 RNA 沉默的研究报道。RNAi 作为一种研究植物功能基因组的工具，确切地说，第一次大规模地使用是在拟南芥和玉米研究中，超过 100 个目的基因被沉默[41]。研究的关键一直集中在设计和构建可用的质粒载体，以便引发 RNAi 的外源基因能稳定地整合到染色体组中。本章将介绍目前在大麦和小麦中，下调基因表达所使用的 RNAi 和 VIGS 等多种方法。相对而言，虽然 RNA 基因沉默已是一项广泛应用的技术，但是，在植物研究中对其进行优化的报道相对较少。一段给定的序列能否产生 RNA
