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- Xybio
- 上海
- P1826
- 2025年06月21日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
Plasmid#63730
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
基本信息
名称：pCDNA3.1(-)FLIPQTV3.0 100micro谷氨酰胺传感器质粒
别称: Plasmid#63730
启动子：CMV
复制子: pUC
原核抗性: Amp
筛选标记：G418
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
质粒属性
载体宿主：哺乳细胞
载体用途：蛋白表达
基因种属：
基因类型：ORF
原核抗性：Amp
真核抗性：Neo/G418
荧光蛋白：
质粒简介
FLIPQTV3.0 glutamine sensor with D157N mutation
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 7527 bp ds-DNA circular SYN 21-JAN-2018
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..7527
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
enhancer 235..614
/label=CMV enhancer
/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
promoter 615..818
/label=CMV promoter
/note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early
promoter"
promoter 863..881
/label=T7 promoter
/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
CDS 990..1769
/codon_start=1
/label=mTFP1
/translation="MAGSKLVVATDTAFVPFEFKQAPMVSKGEETTMGVIKPDMKIKLK
MEGNVNGHAFVIEGEGEGKPYDGTNTINLEVKEGAPLPFSYDILTTAFAYGNRAFTKYP
DDIPNYFKQSFPEGYSWERTMTFEDKGIVKVKSDISMEEDSFIYEIHLKGENFPPNGPV
MQKKTTGWDASTERMYVRDGVLKGDVKHKLLLEGGGHHRVDFKTIYRAKKAVKLPDYHF
VDHRIEILNHDKDYNKVTVYESAVPATPPTAWTSCTR"
misc_feature 1748..2839
/label=glnH-2
CDS 2840..3091
/codon_start=1
/product="C-terminal fragment of mVenus for use in
bimolecular fluorescence complementation (BiFC) (Kodama and
Hu, 2010)"
/label=VC155
/translation="DKQKNGIKANFKIRHNIEDGGVQLADHYQQNTPIGDGPVLLPDNH
YLSYQSALSKDPNEKRDHMVLLEFVTAAGITLGMDELYK"
polyA_signal 3127..3351
/label=bGH poly(A) signal
/note="bovine growth hormone polyadenylation signal"
rep_origin 3397..3825
/direction=RIGHT
/label=f1 ori
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
promoter 3839..4168
/label=SV40 promoter
/note="SV40 enhancer and early promoter"
CDS 4235..5029
/codon_start=1
/gene="aph(3')-II (or nptII)"
/product="aminoglycoside phosphotransferase from Tn5"
/label=Neo
/note="confers resistance to neomycin, kanamycin, and G418
(Geneticin(R))"
/translation="MIEQDGLHAGSPAAWVERLFGYDWAQQTIGCSDAAVFRLSAQGRP
VLFVKTDLSGALNELQDEAARLSWLATTGVPCAAVLDVVTEAGRDWLLLGEVPGQDLLS
SHLAPAEKVSIMADAMRRLHTLDPAT-CPFDHQAKHRIERARTRMEAGLVDQDDLDEEHQ
GLAPAELFARLKARMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRYQDIA
LATRDIAEELGGEWADRFLVLYGIAAPDSQRIAFYRLLDEFF"
polyA_signal 5203..5324
/label=SV40 poly(A) signal
/note="SV40 polyadenylation signal"
rep_origin complement(5775..6360)
/direction=LEFT
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(6531..7391)
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/label=AmpR
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
promoter complement(7392..7496)
/gene="bla"
/label=AmpR promoter
ORIGIN
1 gacggatcgg gagatctccc gatcccctat ggtgcactct cagtacaatc tgctctgatg
61 ccgcatagtt aagccagtat ctgctccctg cttgtgtgtt ggaggtcgct gagtagtgcg
121 cgagcaaaat ttaagctaca acaaggcaag gcttgaccga caattgcatg aagaatctgc
181 ttagggttag gcgttttgcg ctgcttcgcg atgtacgggc cagatatacg cgttgacatt
241 gattattgac tagttattaa tagtaatcaa ttacggggtc attagttcat agcccatata
301 tggagttccg cgttacataa cttacggtaa atggcccgcc tggctgaccg cccaacgacc
361 cccgcccatt gacgtcaata atgacgtatg ttcccatagt aacgccaata gggactttcc
421 attgacgtca atgggtggag tatttacggt aaactgccca cttggcagta catcaagtgt
481 atcatatgcc aagtacgccc cctattgacg tcaatgacgg taaatggccc gcctggcatt
541 atgcccagta catgacctta tgggactttc ctacttggca gtacatctac gtattagtca
601 tcgctattac catggtgatg cggttttggc agtacatcaa tgggcgtgga tagcggtttg
661 actcacgggg atttccaagt ctccacccca ttgacgtcaa tgggagtttg ttttggcacc
721 aaaatcaacg ggactttcca aaatgtcgta acaactccgc cccattgacg caaatgggcg
781 gtaggcgtgt acggtgggag gtctatataa gcagagctct ctggctaact agagaaccca
841 ctgcttactg gcttatcgaa attaatacga ctcactatag ggagacccaa gctggctagc
901 gtttaaacgg gccctctaga ctcgagcggc cgccactgtg ctggatatct gcagaattcc
961 accacactgg actagtggat ccactcgaga tggcaggctc gaaattagtt gtcgcgacgg
1021 ataccgcctt cgttccgttc gaatttaaac aggccccaat ggtgagcaag ggcgaggaga
1081 ccacaatggg cgtaatcaag cccgacatga agatcaagct gaagatggag ggcaacgtga
1141 atggccacgc cttcgtgatc gagggcgagg gcgagggcaa gccctacgac ggcaccaaca
1201 ccatcaacct ggaggtgaag gagggagccc ccctgccctt ctcctacgac attctgacca
1261 ccgcgttcgc ctacggcaac agggccttca ccaagtaccc cgacgacatc cccaactact
1321 tcaagcagtc cttccccgag ggctactctt gggagcgcac catgaccttc gaggacaagg
1381 gcatcgtgaa ggtgaagtcc gacatctcca tggaggagga ctccttcatc tacgagatac
1441 acctcaaggg cgagaacttc ccccccaacg gccccgtgat gcagaagaag accaccggct
1501 gggacgcctc caccgagagg atgtacgtgc gcgacggcgt gctgaagggc gacgttaagc
1561 acaagctgct gctggagggc ggcggccacc accgcgttga cttcaagacc atctacaggg
1621 ccaagaaggc ggtgaagctg cccgactatc actttgtgga ccaccgcatc gagatcctga
1681 accacgacaa ggactacaac aaggtgaccg tttacgagag cgccgtaccc gcaactccac
1741 cgacggcatg gacgagctgt acaaggtgag cgccaaatat gtgggctttg acgtcgatct
1801 gtgggctgcc atcgctaaag agctgaagct ggattacgaa ctgaagccga tggatttcag
1861 tgggatcatt ccggcactgc aaaccaaaaa cgtcgatctg gcgctggcgg gcattaccat
1921 caccgacgag cgtaaaaaag cgatcgattt ctctgacggc tactacaaaa gcggcctgtt
1981 agtgatggtg aaagctaaca ataacgatgt gaaaagcgtg aaagatctcg acgggaaagt
2041 ggttgctgtg aagagcggta ctggctccgt tgattacgcg aaagcaaaca tcaaaactaa
2101 agatctgcgt cagttcccga acatcgataa cgcctatatg gaactgggca ccaaccgcgc
2161 agacgccgtt ctgcacaaca cgccaaacat tctgtacttc atcaaaaccg ccggtaacgg
2221 tcagttcaaa gcggtaggtg actctctgga agcgcagcaa tacggtattg cgttcccgaa
2281 aggtagcgac gagctgcgtg acaaagtcaa cggcgcgttg aaaaccctgc gcgagaacgg
2341 aacttacaac gaaatctaca aaaaatggtt cggtactgaa ccgaaaggcg ctgagctgtt
2401 caccggggtg gtgcccatcc tggtcgagct ggacggcgac gtaaacggcc acaagttcag
2461 cgtgtccggc gagggcgagg gcgatgccac ctacggcaag ctgaccctga agctgatctg
2521 caccaccggc aagctgcccg tgccctggcc caccctcgtg accaccctgg gctacggcct
2581 gcagtgcttc gcccgctacc ccgaccacat gaagcagcac gacttcttca agtccgccat
2641 gcccgaaggc tacgtccagg agcgcaccat cttcttcaag gacgacggca actacaagac
2701 ccgcgccgag gtgaagttcg agggcgacac cctggtgaac cgcatcgagc tgaagggcat
2761 cgacttcaag gaggacggca acatcctggg gcacaagctg gagtacaact acaacagcca
2821 caacgtctat atcaccgccg acaagcagaa gaacggcatc aaggccaact tcaagatccg
2881 ccacaacatc gaggacggcg gcgtgcagct cgccgaccac taccagcaga acacccccat
2941 cggcgacggc cccgtgctgc tgcccgacaa tcactacctg agctaccagt ccgccctgag
3001 caaagacccc aacgagaagc gcgatcacat ggtcctgctg gagttcgtga ccgccgccgg
3061 gatcactctc ggcatggacg agctgtacaa gtaaaagctt aagtttaaac cgctgatcag
3121 cctcgactgt gccttctagt tgccagccat ctgttgtttg cccctccccc gtgccttcct
3181 tgaccctgga aggtgccact cccactgtcc tttcctaata aaatgaggaa attgcatcgc
3241 attgtctgag taggtgtcat tctattctgg ggggtggggt ggggcaggac agcaaggggg
3301 aggattggga agacaatagc aggcatgctg gggatgcggt gggctctatg gcttctgagg
3361 cggaaagaac cagctggggc tctagggggt atccccacgc gccctgtagc ggcgcattaa
3421 gcgcggcggg tgtggtggtt acgcgcagcg tgaccgctac acttgccagc gccctagcgc
3481 ccgctccttt cgctttcttc ccttcctttc tcgccacgtt cgccggcttt ccccgtcaag
3541 ctctaaatcg ggggctccct ttagggttcc gatttagtgc tttacggcac ctcgacccca
3601 aaaaacttga ttagggtgat ggttcacgta gtgggccatc gccctgatag acggtttttc
3661 gccctttgac gttggagtcc acgttcttta atagtggact cttgttccaa actggaacaa
3721 cactcaaccc tatctcggtc tattcttttg atttataagg gattttgccg atttcggcct
3781 attggttaaa aaatgagctg atttaacaaa aatttaacgc gaattaattc tgtggaatgt
3841 gtgtcagtta gggtgtggaa agtccccagg ctccccagca ggcagaagta tgcaaagcat
3901 gcatctcaat tagtcagcaa ccaggtgtgg aaagtcccca ggctccccag caggcagaag
3961 tatgcaaagc atgcatctca attagtcagc aaccatagtc ccgcccctaa ctccgcccat
4021 cccgccccta actccgccca gttccgccca ttctccgccc catggctgac taattttttt
4081 tatttatgca gaggccgagg ccgcctctgc ctctgagcta ttccagaagt agtgaggagg
4141 cttttttgga ggcctaggct tttgcaaaaa gctcccggga gcttgtatat ccattttcgg
4201 atctgatcaa gagacaggat gaggatcgtt tcgcatgatt gaacaagatg gattgcacgc
4261 aggttctccg gccgcttggg tggagaggct attcggctat gactgggcac aacagacaat
4321 cggctgctct gatgccgccg tgttccggct gtcagcgcag gggcgcccgg ttctttttgt
4381 caagaccgac ctgtccggtg ccctgaatga actgcaggac gaggcagcgc ggctatcgtg
4441 gctggccacg acgggcgttc cttgcgcagc tgtgctcgac gttgtcactg aagcgggaag
4501 ggactggctg ctattgggcg aagtgccggg gcaggatctc ctgtcatctc accttgctcc
4561 tgccgagaaa gtatccatca tggctgatgc aatgcggcgg ctgcatacgc ttgatccggc
4621 tacctgccca ttcgaccacc aagcgaaaca tcgcatcgag cgagcacgta ctcggatgga
4681 agccggtctt gtcgatcagg atgatctgga cgaagagcat caggggctcg cgccagccga
4741 actgttcgcc aggctcaagg cgcgcatgcc cgacggcgag gatctcgtcg tgacccatgg
4801 cgatgcctgc ttgccgaata tcatggtgga aaatggccgc ttttctggat tcatcgactg
4861 tggccggctg ggtgtggcgg accgctatca ggacatagcg ttggctaccc gtgatattgc
4921 tgaagagctt ggcggcgaat gggctgaccg cttcctcgtg ctttacggta tcgccgctcc
4981 cgattcgcag cgcatcgcct tctatcgcct tcttgacgag ttcttctgag cgggactctg
5041 gggttcgaaa tgaccgacca agcgacgccc aacctgccat cacgagattt cgattccacc
5101 gccgccttct atgaaaggtt gggcttcgga atcgttttcc gggacgccgg ctggatgatc
5161 ctccagcgcg gggatctcat gctggagttc ttcgcccacc ccaacttgtt tattgcagct
5221 tataatggtt acaaataaag caatagcatc acaaatttca caaataaagc atttttttca
5281 ctgcattcta gttgtggttt gtccaaactc atcaatgtat cttatcatgt ctgtataccg
5341 tcgacctcta gctagagctt ggcgtaatca tggtcatagc tgtttcctgt gtgaaattgt
5401 tatccgctca caattccaca caacatacga gccggaagca taaagtgtaa agcctggggt
5461 gcctaatgag tgagctaact cacattaatt gcgttgcgct cactgcccgc tttccagtcg
5521 ggaaacctgt cgtgccagct gcattaatga atcggccaac gcgcggggag aggcggtttg
5581 cgtattgggc gctcttccgc ttcctcgctc actgactcgc tgcgctcggt cgttcggctg
5641 cggcgagcgg tatcagctca ctcaaaggcg gtaatacggt tatccacaga atcaggggat
5701 aacgcaggaa agaacatgtg agcaaaaggc cagcaaaagg ccaggaaccg taaaaaggcc
5761 gcgttgctgg cgtttttcca taggctccgc ccccctgacg agcatcacaa aaatcgacgc
5821 tcaagtcaga ggtggcgaaa cccgacagga ctataaagat accaggcgtt tccccctgga
5881 agctccctcg tgcgctctcc tgttccgacc ctgccgctta ccggatacct gtccgccttt
5941 ctcccttcgg gaagcgtggc gctttctcat agctcacgct gtaggtatct cagttcggtg
6001 taggtcgttc gctccaagct gggctgtgtg cacgaacccc ccgttcagcc cgaccgctgc
6061 gccttatccg gtaactatcg tcttgagtcc aacccggtaa gacacgactt atcgccactg
6121 gcagcagcca ctggtaacag gattagcaga gcgaggtatg taggcggtgc tacagagttc
6181 ttgaagtggt ggcctaacta cggctacact agaagaacag tatttggtat ctgcgctctg
6241 ctgaagccag ttaccttcgg aaaaagagtt ggtagctctt gatccggcaa acaaaccacc
6301 gctggtagcg gtttttttgt ttgcaagcag cagattacgc gcagaaaaaa aggatctcaa
6361 gaagatcctt tgatcttttc tacggggtct gacgctcagt ggaacgaaaa ctcacgttaa
6421 gggattttgg tcatgagatt atcaaaaagg atcttcacct agatcctttt aaattaaaaa
6481 tgaagtttta aatcaatcta aagtatatat gagtaaactt ggtctgacag ttaccaatgc
6541 ttaatcagtg aggcacctat ctcagcgatc tgtctatttc gttcatccat agttgcctga
6601 ctccccgtcg tgtagataac tacgatacgg gagggcttac catctggccc cagtgctgca
6661 atgataccgc gagacccacg ctcaccggct ccagatttat cagcaataaa ccagccagcc
6721 ggaagggccg agcgcagaag tggtcctgca actttatccg cctccatcca gtctattaat
6781 tgttgccggg aagctagagt aagtagttcg ccagttaata gtttgcgcaa cgttgttgcc
6841 attgctacag gcatcgtggt gtcacgctcg tcgtttggta tggcttcatt cagctccggt
6901 tcccaacgat caaggcgagt tacatgatcc cccatgttgt gcaaaaaagc ggttagctcc
6961 ttcggtcctc cgatcgttgt cagaagtaag ttggccgcag tgttatcact catggttatg
7021 gcagcactgc ataattctct tactgtcatg ccatccgtaa gatgcttttc tgtgactggt
7081 gagtactcaa ccaagtcatt ctgagaatag tgtatgcggc gaccgagttg ctcttgcccg
7141 gcgtcaatac gggataatac cgcgccacat agcagaactt taaaagtgct catcattgga
7201 aaacgttctt cggggcgaaa actctcaagg atcttaccgc tgttgagatc cagttcgatg
7261 taacccactc gtgcacccaa ctgatcttca gcatctttta ctttcaccag cgtttctggg
7321 tgagcaaaaa caggaaggca aaatgccgca aaaaagggaa taagggcgac acggaaatgt
7381 tgaatactca tactcttcct ttttcaatat tattgaagca tttatcaggg ttattgtctc
7441 atgagcggat acatatttga atgtatttag aaaaataaac aaataggggt tccgcgcaca
7501 tttccccgaa aagtgccacc tgacgtc
//
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
名称：pCDNA3.1(-)FLIPQTV3.0 100micro谷氨酰胺传感器质粒
别称: Plasmid#63730
启动子：CMV
复制子: pUC
原核抗性: Amp
筛选标记：G418
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
质粒属性
载体宿主：哺乳细胞
载体用途：蛋白表达
基因种属：
基因类型：ORF
原核抗性：Amp
真核抗性：Neo/G418
荧光蛋白：
质粒简介
FLIPQTV3.0 glutamine sensor with D157N mutation
质粒图谱
质粒序列
LOCUS Exported 7527 bp ds-DNA circular SYN 21-JAN-2018
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..7527
/organism="synthetic DNA construct"
/mol_type="other DNA"
enhancer 235..614
/label=CMV enhancer
/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
promoter 615..818
/label=CMV promoter
/note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early
promoter"
promoter 863..881
/label=T7 promoter
/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
CDS 990..1769
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/label=mTFP1
/translation="MAGSKLVVATDTAFVPFEFKQAPMVSKGEETTMGVIKPDMKIKLK
MEGNVNGHAFVIEGEGEGKPYDGTNTINLEVKEGAPLPFSYDILTTAFAYGNRAFTKYP
DDIPNYFKQSFPEGYSWERTMTFEDKGIVKVKSDISMEEDSFIYEIHLKGENFPPNGPV
MQKKTTGWDASTERMYVRDGVLKGDVKHKLLLEGGGHHRVDFKTIYRAKKAVKLPDYHF
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misc_feature 1748..2839
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CDS 2840..3091
/codon_start=1
/product="C-terminal fragment of mVenus for use in
bimolecular fluorescence complementation (BiFC) (Kodama and
Hu, 2010)"
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YLSYQSALSKDPNEKRDHMVLLEFVTAAGITLGMDELYK"
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/label=bGH poly(A) signal
/note="bovine growth hormone polyadenylation signal"
rep_origin 3397..3825
/direction=RIGHT
/label=f1 ori
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
promoter 3839..4168
/label=SV40 promoter
/note="SV40 enhancer and early promoter"
CDS 4235..5029
/codon_start=1
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/product="aminoglycoside phosphotransferase from Tn5"
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(Geneticin(R))"
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VLFVKTDLSGALNELQDEAARLSWLATTGVPCAAVLDVVTEAGRDWLLLGEVPGQDLLS
SHLAPAEKVSIMADAMRRLHTLDPAT-CPFDHQAKHRIERARTRMEAGLVDQDDLDEEHQ
GLAPAELFARLKARMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRYQDIA
LATRDIAEELGGEWADRFLVLYGIAAPDSQRIAFYRLLDEFF"
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/label=SV40 poly(A) signal
/note="SV40 polyadenylation signal"
rep_origin complement(5775..6360)
/direction=LEFT
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(6531..7391)
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/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
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/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
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PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
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promoter complement(7392..7496)
/gene="bla"
/label=AmpR promoter
ORIGIN
1 gacggatcgg gagatctccc gatcccctat ggtgcactct cagtacaatc tgctctgatg
61 ccgcatagtt aagccagtat ctgctccctg cttgtgtgtt ggaggtcgct gagtagtgcg
121 cgagcaaaat ttaagctaca acaaggcaag gcttgaccga caattgcatg aagaatctgc
181 ttagggttag gcgttttgcg ctgcttcgcg atgtacgggc cagatatacg cgttgacatt
241 gattattgac tagttattaa tagtaatcaa ttacggggtc attagttcat agcccatata
301 tggagttccg cgttacataa cttacggtaa atggcccgcc tggctgaccg cccaacgacc
361 cccgcccatt gacgtcaata atgacgtatg ttcccatagt aacgccaata gggactttcc
421 attgacgtca atgggtggag tatttacggt aaactgccca cttggcagta catcaagtgt
481 atcatatgcc aagtacgccc cctattgacg tcaatgacgg taaatggccc gcctggcatt
541 atgcccagta catgacctta tgggactttc ctacttggca gtacatctac gtattagtca
601 tcgctattac catggtgatg cggttttggc agtacatcaa tgggcgtgga tagcggtttg
661 actcacgggg atttccaagt ctccacccca ttgacgtcaa tgggagtttg ttttggcacc
721 aaaatcaacg ggactttcca aaatgtcgta acaactccgc cccattgacg caaatgggcg
781 gtaggcgtgt acggtgggag gtctatataa gcagagctct ctggctaact agagaaccca
841 ctgcttactg gcttatcgaa attaatacga ctcactatag ggagacccaa gctggctagc
901 gtttaaacgg gccctctaga ctcgagcggc cgccactgtg ctggatatct gcagaattcc
961 accacactgg actagtggat ccactcgaga tggcaggctc gaaattagtt gtcgcgacgg
1021 ataccgcctt cgttccgttc gaatttaaac aggccccaat ggtgagcaag ggcgaggaga
1081 ccacaatggg cgtaatcaag cccgacatga agatcaagct gaagatggag ggcaacgtga
1141 atggccacgc cttcgtgatc gagggcgagg gcgagggcaa gccctacgac ggcaccaaca
1201 ccatcaacct ggaggtgaag gagggagccc ccctgccctt ctcctacgac attctgacca
1261 ccgcgttcgc ctacggcaac agggccttca ccaagtaccc cgacgacatc cccaactact
1321 tcaagcagtc cttccccgag ggctactctt gggagcgcac catgaccttc gaggacaagg
1381 gcatcgtgaa ggtgaagtcc gacatctcca tggaggagga ctccttcatc tacgagatac
1441 acctcaaggg cgagaacttc ccccccaacg gccccgtgat gcagaagaag accaccggct
1501 gggacgcctc caccgagagg atgtacgtgc gcgacggcgt gctgaagggc gacgttaagc
1561 acaagctgct gctggagggc ggcggccacc accgcgttga cttcaagacc atctacaggg
1621 ccaagaaggc ggtgaagctg cccgactatc actttgtgga ccaccgcatc gagatcctga
1681 accacgacaa ggactacaac aaggtgaccg tttacgagag cgccgtaccc gcaactccac
1741 cgacggcatg gacgagctgt acaaggtgag cgccaaatat gtgggctttg acgtcgatct
1801 gtgggctgcc atcgctaaag agctgaagct ggattacgaa ctgaagccga tggatttcag
1861 tgggatcatt ccggcactgc aaaccaaaaa cgtcgatctg gcgctggcgg gcattaccat
1921 caccgacgag cgtaaaaaag cgatcgattt ctctgacggc tactacaaaa gcggcctgtt
1981 agtgatggtg aaagctaaca ataacgatgt gaaaagcgtg aaagatctcg acgggaaagt
2041 ggttgctgtg aagagcggta ctggctccgt tgattacgcg aaagcaaaca tcaaaactaa
2101 agatctgcgt cagttcccga acatcgataa cgcctatatg gaactgggca ccaaccgcgc
2161 agacgccgtt ctgcacaaca cgccaaacat tctgtacttc atcaaaaccg ccggtaacgg
2221 tcagttcaaa gcggtaggtg actctctgga agcgcagcaa tacggtattg cgttcccgaa
2281 aggtagcgac gagctgcgtg acaaagtcaa cggcgcgttg aaaaccctgc gcgagaacgg
2341 aacttacaac gaaatctaca aaaaatggtt cggtactgaa ccgaaaggcg ctgagctgtt
2401 caccggggtg gtgcccatcc tggtcgagct ggacggcgac gtaaacggcc acaagttcag
2461 cgtgtccggc gagggcgagg gcgatgccac ctacggcaag ctgaccctga agctgatctg
2521 caccaccggc aagctgcccg tgccctggcc caccctcgtg accaccctgg gctacggcct
2581 gcagtgcttc gcccgctacc ccgaccacat gaagcagcac gacttcttca agtccgccat
2641 gcccgaaggc tacgtccagg agcgcaccat cttcttcaag gacgacggca actacaagac
2701 ccgcgccgag gtgaagttcg agggcgacac cctggtgaac cgcatcgagc tgaagggcat
2761 cgacttcaag gaggacggca acatcctggg gcacaagctg gagtacaact acaacagcca
2821 caacgtctat atcaccgccg acaagcagaa gaacggcatc aaggccaact tcaagatccg
2881 ccacaacatc gaggacggcg gcgtgcagct cgccgaccac taccagcaga acacccccat
2941 cggcgacggc cccgtgctgc tgcccgacaa tcactacctg agctaccagt ccgccctgag
3001 caaagacccc aacgagaagc gcgatcacat ggtcctgctg gagttcgtga ccgccgccgg
3061 gatcactctc ggcatggacg agctgtacaa gtaaaagctt aagtttaaac cgctgatcag
3121 cctcgactgt gccttctagt tgccagccat ctgttgtttg cccctccccc gtgccttcct
3181 tgaccctgga aggtgccact cccactgtcc tttcctaata aaatgaggaa attgcatcgc
3241 attgtctgag taggtgtcat tctattctgg ggggtggggt ggggcaggac agcaaggggg
3301 aggattggga agacaatagc aggcatgctg gggatgcggt gggctctatg gcttctgagg
3361 cggaaagaac cagctggggc tctagggggt atccccacgc gccctgtagc ggcgcattaa
3421 gcgcggcggg tgtggtggtt acgcgcagcg tgaccgctac acttgccagc gccctagcgc
3481 ccgctccttt cgctttcttc ccttcctttc tcgccacgtt cgccggcttt ccccgtcaag
3541 ctctaaatcg ggggctccct ttagggttcc gatttagtgc tttacggcac ctcgacccca
3601 aaaaacttga ttagggtgat ggttcacgta gtgggccatc gccctgatag acggtttttc
3661 gccctttgac gttggagtcc acgttcttta atagtggact cttgttccaa actggaacaa
3721 cactcaaccc tatctcggtc tattcttttg atttataagg gattttgccg atttcggcct
3781 attggttaaa aaatgagctg atttaacaaa aatttaacgc gaattaattc tgtggaatgt
3841 gtgtcagtta gggtgtggaa agtccccagg ctccccagca ggcagaagta tgcaaagcat
3901 gcatctcaat tagtcagcaa ccaggtgtgg aaagtcccca ggctccccag caggcagaag
3961 tatgcaaagc atgcatctca attagtcagc aaccatagtc ccgcccctaa ctccgcccat
4021 cccgccccta actccgccca gttccgccca ttctccgccc catggctgac taattttttt
4081 tatttatgca gaggccgagg ccgcctctgc ctctgagcta ttccagaagt agtgaggagg
4141 cttttttgga ggcctaggct tttgcaaaaa gctcccggga gcttgtatat ccattttcgg
4201 atctgatcaa gagacaggat gaggatcgtt tcgcatgatt gaacaagatg gattgcacgc
4261 aggttctccg gccgcttggg tggagaggct attcggctat gactgggcac aacagacaat
4321 cggctgctct gatgccgccg tgttccggct gtcagcgcag gggcgcccgg ttctttttgt
4381 caagaccgac ctgtccggtg ccctgaatga actgcaggac gaggcagcgc ggctatcgtg
4441 gctggccacg acgggcgttc cttgcgcagc tgtgctcgac gttgtcactg aagcgggaag
4501 ggactggctg ctattgggcg aagtgccggg gcaggatctc ctgtcatctc accttgctcc
4561 tgccgagaaa gtatccatca tggctgatgc aatgcggcgg ctgcatacgc ttgatccggc
4621 tacctgccca ttcgaccacc aagcgaaaca tcgcatcgag cgagcacgta ctcggatgga
4681 agccggtctt gtcgatcagg atgatctgga cgaagagcat caggggctcg cgccagccga
4741 actgttcgcc aggctcaagg cgcgcatgcc cgacggcgag gatctcgtcg tgacccatgg
4801 cgatgcctgc ttgccgaata tcatggtgga aaatggccgc ttttctggat tcatcgactg
4861 tggccggctg ggtgtggcgg accgctatca ggacatagcg ttggctaccc gtgatattgc
4921 tgaagagctt ggcggcgaat gggctgaccg cttcctcgtg ctttacggta tcgccgctcc
4981 cgattcgcag cgcatcgcct tctatcgcct tcttgacgag ttcttctgag cgggactctg
5041 gggttcgaaa tgaccgacca agcgacgccc aacctgccat cacgagattt cgattccacc
5101 gccgccttct atgaaaggtt gggcttcgga atcgttttcc gggacgccgg ctggatgatc
5161 ctccagcgcg gggatctcat gctggagttc ttcgcccacc ccaacttgtt tattgcagct
5221 tataatggtt acaaataaag caatagcatc acaaatttca caaataaagc atttttttca
5281 ctgcattcta gttgtggttt gtccaaactc atcaatgtat cttatcatgt ctgtataccg
5341 tcgacctcta gctagagctt ggcgtaatca tggtcatagc tgtttcctgt gtgaaattgt
5401 tatccgctca caattccaca caacatacga gccggaagca taaagtgtaa agcctggggt
5461 gcctaatgag tgagctaact cacattaatt gcgttgcgct cactgcccgc tttccagtcg
5521 ggaaacctgt cgtgccagct gcattaatga atcggccaac gcgcggggag aggcggtttg
5581 cgtattgggc gctcttccgc ttcctcgctc actgactcgc tgcgctcggt cgttcggctg
5641 cggcgagcgg tatcagctca ctcaaaggcg gtaatacggt tatccacaga atcaggggat
5701 aacgcaggaa agaacatgtg agcaaaaggc cagcaaaagg ccaggaaccg taaaaaggcc
5761 gcgttgctgg cgtttttcca taggctccgc ccccctgacg agcatcacaa aaatcgacgc
5821 tcaagtcaga ggtggcgaaa cccgacagga ctataaagat accaggcgtt tccccctgga
5881 agctccctcg tgcgctctcc tgttccgacc ctgccgctta ccggatacct gtccgccttt
5941 ctcccttcgg gaagcgtggc gctttctcat agctcacgct gtaggtatct cagttcggtg
6001 taggtcgttc gctccaagct gggctgtgtg cacgaacccc ccgttcagcc cgaccgctgc
6061 gccttatccg gtaactatcg tcttgagtcc aacccggtaa gacacgactt atcgccactg
6121 gcagcagcca ctggtaacag gattagcaga gcgaggtatg taggcggtgc tacagagttc
6181 ttgaagtggt ggcctaacta cggctacact agaagaacag tatttggtat ctgcgctctg
6241 ctgaagccag ttaccttcgg aaaaagagtt ggtagctctt gatccggcaa acaaaccacc
6301 gctggtagcg gtttttttgt ttgcaagcag cagattacgc gcagaaaaaa aggatctcaa
6361 gaagatcctt tgatcttttc tacggggtct gacgctcagt ggaacgaaaa ctcacgttaa
6421 gggattttgg tcatgagatt atcaaaaagg atcttcacct agatcctttt aaattaaaaa
6481 tgaagtttta aatcaatcta aagtatatat gagtaaactt ggtctgacag ttaccaatgc
6541 ttaatcagtg aggcacctat ctcagcgatc tgtctatttc gttcatccat agttgcctga
6601 ctccccgtcg tgtagataac tacgatacgg gagggcttac catctggccc cagtgctgca
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6901 tcccaacgat caaggcgagt tacatgatcc cccatgttgt gcaaaaaagc ggttagctcc
6961 ttcggtcctc cgatcgttgt cagaagtaag ttggccgcag tgttatcact catggttatg
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7261 taacccactc gtgcacccaa ctgatcttca gcatctttta ctttcaccag cgtttctggg
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7381 tgaatactca tactcttcct ttttcaatat tattgaagca tttatcaggg ttattgtctc
7441 atgagcggat acatatttga atgtatttag aaaaataaac aaataggggt tccgcgcaca
7501 tttccccgaa aagtgccacc tgacgtc
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质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P1058/pCAX APP Swe Ind人源基因质粒 |
| P1085/pEGFP-RPL26人源基因质粒 |
| P1086/pcDNA3-HA-FLAG-RBP2人源基因质粒 |
| P1087/pCDNA3-Ash2L人源基因质粒 |
| P1088/pECE-FLAG-SIRT1-H363Y人源基因质粒 |
| P1097/pCDNA3.1-CD40L人源基因质粒 |
| P1106/pCDNA3.1-3×HA-TERT人源基因质粒 |
| P1107/pFUPI-UbC-TRIM5-CypA人源基因质粒 |
| P1124/HA-HIF1alpha-wt-pBabe-puro人源基因质粒 |
| P2939/pCDH-CMV-MCS-EF1-Puro-FLAG-HIF2α人源基因质粒 |
| P1125/pECMV-3×FLAG-SET人源基因质粒 |
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