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- Xybio
- 上海
- P1991
- 2026年04月17日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
pdnaKp-EGFP
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
名称：pdnaKp-EGFP大肠启动子质粒
别称: pdnaKp-EGFP
启动子：DnaK
复制子: pBR322
原核抗性: Kan
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
质粒属性
载体宿主：大肠杆菌
载体用途：蛋白表达
基因种属：
基因类型：ORF
原核抗性：Kan
真核抗性：
荧光蛋白：绿色
质粒简介
pdnaKp-EGFP质粒由上海烜雅生物科技有限公司提供
质粒图谱
质粒序列：详询
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P3797/pCMV-SPORT6-PPP2R3B人源基因质粒 |
| P3798/pCMV-SPORT6-SETD3人源基因质粒 |
| P4883/pCMV-SPORT6-LMBR1人源基因质粒 |
| P3799/pCMV-SPORT6-TEFM人源基因质粒 |
| P3800/pCMV-SPORT6-PRPSAP1人源基因质粒 |
| P3801/pCMV-SPORT6-JPH3人源基因质粒 |
| P3803/pCMV-SPORT6-CAPZB人源基因质粒 |
| P3804/pCMV-SPORT6-C1QB人源基因质粒 |
| P3805/pCMV-SPORT6-SRD5A1（1同义突变）人源基因质粒 |
| P3806/pCMV-SPORT6-ZNF85人源基因质粒 |
| P3807/pCMV-SPORT6-SFRP2（1点突变1同义突变）人源基因质粒 |
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文献和实验-GFP 等）以及其他应用的质粒。根据质粒的拷贝数不同，又可以分为高拷贝质粒（质粒可以在细胞内复制成几百个拷贝）和低拷贝质粒（质粒在细胞内只有＜20 个拷贝）。质粒的拷贝数通常受到复制子的调控。 质粒上通常会带有多种元件，例如，复制起始位点（ORI），抗性基因，多克隆位点，启动子，终止子，标签序列等等。质粒上至少要带有复制位点（ORI），否则无法进行复制；除了一些特殊质粒（如 minicircle plasmid）之外，绝大多数质粒都带有抗性基因，用于抗生素筛选。多克隆位点可以通过酶切，酶连或者同源
-MEM、DMEM培养基和M-MLV逆转录酶；小牛血清；G418；DIG High PrimeDNA Labeling and Detection Starter Kit I1。 质粒 pGL3-promoter；含EBVR的质粒p220.2。 重组质粒载体pcDNA3-EGFP-EBVR的构建 采用StuI和XbaI消化p220.2，获得长4.7 kb的EBVR，包括EBV核抗原1(EBNA1)和OriP，克隆至pGL3-promotor的SV40启动子下游Hind Ill
就可以了。 如果我找到个质粒，将这个基因连上去之后，怎么才能鉴别/筛选目的基因正反向的问题 你可以根据质粒图谱看，定向将启动子CMV后 将基因定向克隆进去，利用酶切反应及连接的特异性。 ps： 感觉你对自己的实验目的都不是很清楚，这很危险！宁可不做，就怕费力不讨好！ bigbang_0_0 用pEGFP质粒，很适合GFP标签的蛋白的表达； 如果做稳定转染，需要用G418筛选标记 (neo r)
