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- Xybio
- 上海
- P2380
- 2025年07月10日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20
- 保质期：
2年
- 英文名：
NM_013494.4 CPH;Cph-1;Cph1;fat;NF-al
- 库存：
100
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
干粉/液体
名称：pSV40-Cpe-m小鼠基因质粒
别称: NM_013494.4 CPH;Cph-1;Cph1;fat;NF-al
复制子: pUC
原核抗性: Amp
克隆菌株: DH5a
培养条件: 37度
质粒属性
载体宿主：大肠杆菌
载体用途：PCR模板
基因种属：小鼠
基因类型：cDNA
原核抗性：Amp
真核抗性：
荧光蛋白：
质粒简介
pSV40-Cpe-m质粒由上海烜雅生物科技有限公司提供
质粒图谱
质粒序列：详询
质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。
二、转化图片
| P1887/pCAG-GBP1-10gly-lexADBD基因质粒 |
| P1888/pCAG-GBP6-10gly-VPminx4基因质粒 |
| P1906/pSXneo 270(T2AG3)基因质粒 |
| P2204/pTEM1-Mem基因质粒 |
| P2205/pTEM1-E166N-Mem基因质粒 |
| P1907/pUPRT-DHFR-D虫类基因质粒 |
| P2288/pECMV-3×FLAG-MCAM(Macaca fascicularis)猴源基因质粒 |
| P2124/pY3质粒 |
| P2125/pTD103aiiA(Cm)质粒 |
| P2126/pZSm45 ndhII质粒 |
| P2141/GPD-roGFP质粒 |
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文献和实验I 限制性内切酶；4. 质粒回收相关试剂；5. 细胞培养、转染相关试剂；6. TBS：10mM Tris, 0.9% NaCl，pH8.1；7. 40% CsCl：28.45 g CsCl 溶于42.7 ml 的TBS 中，4 度保存；8. 15% CsCl：9.085 g CsCl 溶于47.69 ml 的TBS 中，4 度保存；9. Beckman 离心管：14*89 mm，SW41 转头；10. Polybrene (sigma)，10 mg/ml；11. 透析袋：Spectrum Co. （成
2.5×1010个细胞/ml）。分装，-80℃或液氮保存待用。 2、病毒骨架质粒转化大肠杆菌，扩增，纯化。 3、将1-5ul （约1ug） 线性化的穿梭质粒及1ul（约100ng/ul）病毒骨架质粒（如pAdEasy-1）加入至含约40ul BJ5183电转感受态的EP管中混匀，冰上冷却。 4、将混合物加入电转杯，电击（1250-1500V/mm,5ms）。 5、电击结束取出样品，加入1ml SOC或LB培养液，37℃低速振荡40min。 6、取适当体积的电击转化细胞液涂于数个卡那霉素抗性
细胞系等，该细胞有一定自发转化倾向，一般在转染前一天接种细胞，接种密度为2×104 /cm2 ,用含10%胎牛血清的DMEM液，37℃、5%CO2 培养，待细胞占50～70%瓶底面积时，用于转染试验。 (3)DNA-磷酸钙沉淀物的制备 ①将供体细胞DNA和PSV2-neo质粒载体DNA用TE配制成40mg/L的DNA溶液，同时向供体细胞DNA液200μl中加入带基因neo质粒DNA液(20mg/L)220μl和2×HBS 250μl(PSV2-neo为1～2mg/L的使用量)。 ②取500μl上述
